Microsoft Word 14 doc vai trß cña hãcm«n leptin trong nu«i cÊy ph«i trong èng nghiÖm NguyÔn V¨n Lý Bé m«n CÊy truyÒn ph«i 1 §Æt vÊn ®Ò Leptin lµ mét m¹ch peptide gåm 167 axit amin vµ cã träng l−îng ph[.]
vai trò hócmôn leptin nuôi cấy phôi ống nghiệm Nguyễn Văn Lý Bộ môn Cấy truyền phôi Đặt vấn đề Leptin mạch peptide gồm 167 axit amin có trọng lợng phân tử 16 kD Leptin hócmôn mô mỡ tiết Zhang cs phát năm 1994 Khi đợc phát hiện, hócmôn leptin đợc coi có ảnh hởng đến cân lợng cách tác động lên thần kinh trung ơng để ức chế lợng thức ăn thu nhận Receptor hocmôn leptin đợc tìm thấy nAo, tuyến yên, buồng trứng, thai nh mô mỡ Leptin ảnh hởng lên trao đổi lợng cách tăng mức tiêu thụ ôxy, tăng vận động tăng nhiệt độ thể Leptin đợc chứng minh có nhiều vai trò sinh sản Điều trị leptin phục hồi sinh sản chuột Leptin đợc coi làm tăng chức sinh sản, thành thục sinh dục sớm chuột Trong trình chửa ngời, leptin đợc chứng minh có liên quan vào điều khiển phát triển thai, thai sinh tổng hợp hócmôn lợn, leptin thai nhiều thai phát triển bình thờng leptin lợn chậm phát triển Dựa phát đây, giả thiÕt r»ng leptin cã thĨ cã vai trß sù phát triển phôi nuôi cấy ống nghiệm Để kiểm tra giả thuyết này, đA tiến hành nghiên cứu ảnh hởng nồng độ leptin khác lên phát triển phôi ống nghiệm Ngoài nghiên cứu ảnh hởng mùa vụ thu phôi lên phát triển phôi ống nghiệm Vật liệu phơng pháp nghiên cứu 2.1 Phôi Phôi hai tế bào đợc thu ngày thứ sau phối giốngbằng phơng pháp phẫu thuật 2.2 Nuôi cấy phôi ống nghiệm Chuẩn bị môi trờng dịch ống dẫn trứng tổng hợp (mSOF) có thay đổi theo công thức Tervit cs (1972) Đầu tiên phôi đợc nuôi cấy mSOF có bổ xung axit amin kh«ng thay thÕ 48 giê Sau phôi đợc chuyển sang môi trờng mSOF có bổ xung axit amin kh«ng thay thÕ, axit amin thay thÕ Albumin huyết bò thêm ngày Độ pH môi trờng đợc điều chỉnh để đạt tới 7,4 áp xuất thẩm thấu đợc trì 270-300 mOsmol Thành phần chi tiết môi trờng đợc trình bày bảng Bảng Thành phần môi trờng mSOF Thành phần NaCL KCL KH2PO4 MgCL2.H2O Na Lactate Glucose Penicillin Streptomicin NaHCO3 Phenol Red Pyruvate CaCL2.2H2O Gluthamine Axit Amin kh«ng thay thÕ Axit Amin thay thÕ Albumin huyÕt bß g/100ml 5.830 0.534 0.162 0.100 0.616 0.270 0,060 0.050 2.102 0.010 0.360 2.520 1.460 1.0 ml 2.0 ml 0.8 Sau phân loại, hợp tử đợc rửa lần mSOF trớc đặt vào đĩa nuôi cấy Mỗi nhóm 5-10 phôi đợc nuôi cấy 50àl môi trờng khác (mSOF, SOF+1,0ng/ml leptin, mSOF+10,0ng/ml leptin mSOF+100,0ng/ml leptin) phủ dầu khoáng Phôi đợc nuôi cấy tủ nuôi cấy có 5% CO2, 5%O2 90%N2 ngày 38,80C Tất môi trờng đợc để cân đĩa nuôi cấy 5% CO2, 5%O2 90%N2 đêm trớc đợc đa dùng 2.3 Đánh giá chất lợng phôi Sau ngày nuôi cấy, phôi đợc đánh giá theo hình thái chất lợng theo phơng pháp Lindner Wright (1983) Phôi đợc phân loại theo giai đoạn phát triển gồm tế bào, phôi dâu, phôi nang phôi nang thoát màng 2.4 Sử lý số liệu Số liệu đợc sử lý theo chơng trình thống kê REG, Version 90.12 cđa Gilmour 1990 KÕt qu¶ 3.1 ¶nh hëng mùa vụ thu phôi ảnh hởng mùa thu phôi lên phát triển phôi nuôi cấy ống nghiệm đợc trình bày bảng Bảng ảnh hởng mùa thu phôi lên phát triển cđa ph«i nu«i cÊy èng nghiƯm Tû lƯ ph«i phát triển đến giai đoạn nuôi cấy(%) Mùa N tế bào Phôi dâu Phôi nang Phôi thoát màng Mïa xu©n 47 94,6b 62,2 43,2 8,1 Mïa thu 51 96,2a 47,1 27,5 5,9 ab: Các chữ khác khác có nghĩa, p0,05).Tuy nhiên có sai khác có ý nghĩa tỷ lệ phôi phát triển nhóm so víi ph«i nu«i cÊy m«i trêng cã bỉ xung 100ng/ml leptin (100% so với 77,8%, P0,05) Cã thĨ kÕt ln r»ng, mïa vơ thu ph«i không ảnh hởng đến phát triển phôi ống nghiệm Bổ xung 10ng/ml leptin vào môi trờng nuôi cấy (mSOF) làm tăng tỷ lệ phát triển phôi èng nghiƯm Ngỵc lai, bỉ xung 100ng/ml leptin øc chế phát triển phôi ống nghiệm, bổ xung 1ng/ml leptin ảnh hởng đến phát triĨn cđa ph«i Abstract Ovine 2-cell embryos collected surgically were cultured in mSOF (control); mSOF+1,0ng/ml leptin, mSOF+10,0ng/ml leptin and mSOF+100,0 ng/ml leptin at 5% CO2, 5%O2 and 90% N2 in incubator for days at 38,80C After days culture, embryos were evaluated by the morphology and the stage of development The results show that leptin level in culture medium affected development of embryos in-vitro There was a dramatic decline in development of embryos in-vitro from 8cell stage to hatched stage (from 95.5% to 0.8%, P< 0.05) The highest percentage of embryos that development to stage three (8-cell, morula and blastocyst) were found in 10ng/ml treatment group At the 8-cell stage, the development of embryos in control, 1ng/ml and 10ng/ml treatments did not differ significantly (P>0.05) However, there was a significant difference in the proportion of embryos developing between these treatment groups and the 100ng/ml treatment (100% versus 77.8%, P