SỞ LĐTB&XH TỈNH HÀ GIANG SỞ LĐTB&XH TỈNH HÀ GIANG TRƯỜNG TRUNG CẤP NGHỀ BẮC QUANG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập Tự do Hạnh phúc ĐỀ THI LÝ THUYẾT Đề số 02 Môn thi Vi nhân giống Mã môn học[.]
SỞ LĐTB&XH TỈNH HÀ GIANG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG TRUNG CẤP NGHỀ BẮC QUANG Độc lập - Tự - Hạnh phúc ĐỀ THI LÝ THUYẾT Đề số: 02 Mơn thi Mã mơn học Khóa/Lớp Ngày thi Thời gian làm : Vi nhân giống : MH 15 : LS_KIII-02 : ……/ / : 90 Phút ĐỀ BÀI Câu 1: (3 điểm) Anh (chị) trình bày khái niệm vi nhân giống? Phân tích sở khoa học hình thức nhân giống mơ chun hóa? Câu 2: (3 điểm) Anh (chị) trình bày trình tự bước ni cấy khởi đầu? Câu 3: (2 điểm) Anh (chị) nêu nội dung phương pháp nhân giống tái sinh chồi trực tiếp từ mô quan tách rời? Câu 4: (2 điểm) Anh (chị) cho biết tác dụng Cytokinin Gibberellin? Chú ý: Thí sinh khơng sử dụng tài liệu, Cán coi thi khơng giải thích thêm Đề số: 02 KHOA NƠNG LÂM NGHIỆP THỦY SẢN VÀ CHẾ BIẾN (Ký ghi rõ họ tên) Người đề ( Ký ghi rõ họ tên ) Dương Thị Thủy SỞ LĐTB&XH TỈNH HÀ GIANG TRƯỜNG TRUNG CẤP NGHỀ BẮC QUANG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc ĐÁP ÁN ĐỀ THI LÝ THUYẾT Đáp án đề số: 02 Mơn thi Mã mơn học Khóa/Lớp Ngày thi Thời gian làm : Vi nhân giống : MH15 : LS_KIII-02 : ……/ / : 90 Phút STT NỘI DUNG Câu 1: Anh (chị) trình bày khái niệm vi nhân giống? Phân tích sở khoa học hình thức nhân giống mơ chun hóa? Đáp án Khái niệm vi nhân giống Nhân giống in vitro hay vi nhân giống (Micropropagation) phương pháp sử dụng phát triển nhân tạo để nhân mô nuôi cấy (mô phân sinh, đỉnh sinh trưởng quan sinh dưỡng cây) trở thành hoàn chỉnh Kết phương pháp tạo dịng vơ tính lồi mong muốn với số lượng lớn cá thể Cơ sở khoa học hình thức nhân giống mơ chun hóa a, Tính tồn tế bào - Tế bào thể sinh vật mang tồn lượng thơng tin di truyền (ADN) cần thiết đủ sinh vật Khi gặp điều kiện thích hợp, tế bào phát triển thành thể hồn chỉnh - Tính tồn tế bào sở lý luận phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật b, Sự trẻ hóa - Ni cấy phận non trẻ chồi, rễ tốt phận trưởng thành Vì việc trẻ hóa biện pháp quan trọng nhân giống sinh dưỡng ĐIỂM 3,0 0,75 0,5 0,5 - Quá trình phát sinh hình thái ni cấy thực vật in vitro thực chất kết phân hóa phản phân hóa tế bào c, Sự phân hóa phản phân hóa tế bào Sự phân hóa tế bào: - Cơ thể thực vật trưởng thành chỉnh thể thống bao gồm nhiều quan chức khác nhau, có nhiều loại tế bào khác thực chức cụ thể khác Tuy nhiên tất loại tế bào bắt nguồn từ tế bào phôi sinh - Phân hóa tế bào chuyển tế bào phơi sinh thành tế bào mơ chuyển hóa, đảm nhận chức khác - Quá trình phân hóa tế bào: Tế bào phơi sinh → Tế bào giãn → Tế bào phân hóa chức Sự phản phân hóa tế bào - Tế bào phân hóa thành mơ chức khơng hồn tồn khả phân chia Trong trường hợp cần thiết, điều kiện thích hợp, chúng lại trở dạng tế bào phôi sinh lại phân chia mạnh mẽ (sự phản phân hóa tế bào) - Trong ni cấy mô - tế bào thực vật, mẫu mô nuôi cấy tế bào phân hóa chức bị phản phân hóa (phản biệt hóa) tạo thành tế bào mơ sẹo (callus), sau tế bào mô sẹo tái sinh tạo thành chồi hay phôi soma từ tái sinh tạo thành hồn chỉnh - Q trình phản phân hóa: Tế bào phân hóa chức → Tế bào giãn → Tế bào mô sẹo Câu 2: Anh (chị) trình bày trình tự bước ni cấy khởi đầu? Đáp án Trình tự bước nuôi cấy khởi đầu Công tác chuẩn bị - Vật liệu (mẫu) cấy Mẫu cấy lấy đủ tiêu chuẩn, không bị dập nát - Môi trường dinh dưỡng + Được chuẩn bị với nguyên tắc: Môi trường nuôi cấy khởi đầu phải đảm bảo cung cấp đầy đủ chất dinh dưỡng cần thiết (khoáng đa lượng, khoáng vi lượng, vitamin, chất hữu cơ, nguồn Cacbon) số loại chất điều hoà sinh trưởng giúp cho 0,5 0,75 3,0 1,5 mẫu cấy tái sinh chồi để tạo chồi nhân ban đầu + Các chất kích thích sinh trưởng sử dụng chủ yếu thuộc nhóm cytokinin Auxin - Hố chất khử trùng Dùng để khử trùng bề mặt mẫu vật: Bao gồm HgCl 0,1%, nước Oxygià, Canxi hypochlorit, Natri hypochlorit, Javen, cồn 70% …, nước cất vô trùng khử trùng - Dụng cụ, thiết bị Kéo cắt mẫu, bình đựng mẫu để khử trùng, panh cấy, đĩa cấy, cốc đựng nước thải sau khử trùng, đèn cồn, khăn lau box cấy, giấy thấm … Tất dụng cụ khử trùng, sấy khô - Bảo hộ lao động Găng tay cao su, trang khử trùng Các bước tiến hành - Cắt mẫu Mẫu cắt với kích thước thích hợp trước đem nuôi cấy - Khử trùng mẫu + Nguyên tắc khử trùng: Dùng dung dịch sát khuẩn để lắc, rửa mẫu, sau tráng lại nhiều lần nước cất vơ trùng mẫu hồn tồn + Phải khử trùng dung dịch khử trùng Các dung dịch khử trùng thường dùng hypochlorit calcium, hypochlorit sodium, chlorua thủy ngân, oxi già, giaven… - Cấy mẫu vào môi trường dinh dưỡng + Thấm khô mẫu vật khử trùng giấy thấm vô trùng Sau cắt mẫu thành đoạn dài khoảng – cm có mang mắt ngủ, cấy vào môi trường tạo chồi + Nếu mẫu vật phơi tách lấy hạt phôi hạt đặt lên môi trường tạo thể chồi chồi + Môi trường nhân chồi giai đoạn cấy khởi đầu thường có nồng độ chất kích thích sinh trưởng tương đối thấp tuỳ đối tượng Câu 3: Anh (chị) nêu nội dung phương pháp nhân giống tái sinh chồi trực tiếp từ mô quan tách rời? Đáp án - Nguyên liệu sử dụng khối mô quan tách rời như: 1,5 2,0 0,25 Mảnh lá, chồi, đoạn thân, rễ, nhánh củ, phận hoa - Các bước tiến hành nhân giống : + Chọn mẹ để lấy mẫu mô quan ni cấy thích hợp + Chọn mẫu thích hợp: Lá bánh tẻ, cành bánh tẻ, đầu rễ non + Khử trùng mẫu với chế độ khử trùng thích hợp loại mơ quan cụ thể + Cấy mẫu khử trùng vào mơi trường thích hợp loại mơ, quan loại cấy nuôi cấy Sau thời gian định từ mẫu mô quan ni cấy hình thành nên chồi cụm chồi + Nhân nhanh chồi hình thành mơi trường nhân nhanh chồi thích hợp loại + Cấy chồi cấy vào môi trường tạo rễ thích hợp để tạo hồn chỉnh - Nhu cầu dinh dưỡng nuôi cấy phận khác cấy khác thấy số yêu cầu chung nguồn cacbon dạng đường muối các tố đa lượng (nitơ, photpho, kali, canxi) vi lượng (Mg, Fe, Mn, Zn, Co ) Ngoài cần số chất vụ đặc biệt vitamin (B 1, B6, axit nicotinic) chất điều hồ sinh trưởng Muốn trì sinh trưởng phát triển quan nuôi cấy cần thường xuyên chuyển sang môi trường - Đối với ni cấy mơ, ngồi thành phần dinh dưỡng nuôi cấy quan tách rời, cần bổ sung thêm chất hữu chứa nitơ dạng axit amin, đường, rượu inositol Trong trường hợp ni cấy mơ, chất điều hồ sinh trưởng có vai trị quan trọng mơ tách rời khơng có khả tổng hợp chất Câu 4: Anh (chị) cho biết tác dụng Cytokinin Gibberellin? Đáp án Cytokinin + Các chất thuộc nhóm cytokinin thường sử dụng Kinetin, BAP, Zeatin + Cytokinin bổ sung vào môi trường chủ yếu để kích thích phân chia tế bào định phân hóa chồi bất định từ mơ sẹo 0,75 0,5 0,5 2,0 1,0 quan + Cytokinin tổng hợp rễ hạt phát triển, vận chuyển từ lên Cytokinin có khả kìm hãm hóa già quan nguyên vẹn Trong số trường hợp Cytokinin ảnh hưởng lên nảy mầm hạt củ, xử lý cytokinin phá trạng thái ngủ nghỉ hạt, củ, chồi Gibberellin + Loại gibberellin thông dụng nuôi cấy mơ GA 3, có tác dụng kích thích giãn tế bào, kéo dài lóng, đốt thân cành Bên cạnh GA3 có tác dụng phá ngủ chồi, ức chế tạo rễ phụ tạo chồi phụ + Kích thích nảy mầm hạt củ kích thích tổng hợp enzym amylase enzym thuỷ phân khác protease, photphatase + Gibberellin ức chế phát triển hoa kích thích phát triển hoa đực + Gibberellin kích thích mạnh mẽ sinh trưởng kéo dài thân, vươn dài lóng họ lúa Đáp án đề số: 02 KHOA NÔNG LÂM NGHIỆP THỦY SẢN VÀ CHẾ BIẾN (Ký ghi rõ họ tên) Người đề ( Ký ghi rõ họ tên ) Dương Thị Thủy 1,0 ... CẤP NGHỀ BẮC QUANG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc ĐÁP ÁN ĐỀ THI LÝ THUYẾT Đáp án đề số: 02 Môn thi Mã mơn học Khóa/Lớp Ngày thi Thời gian làm : Vi nhân giống : MH15... mẽ sinh trưởng kéo dài thân, vươn dài lóng họ lúa Đáp án đề số: 02 KHOA NÔNG LÂM NGHIỆP THỦY SẢN VÀ CHẾ BIẾN (Ký ghi rõ họ tên) Người đề ( Ký ghi rõ họ tên ) Dương Thị Thủy 1,0 ... cấy mô, chất điều hồ sinh trưởng có vai trị quan trọng mơ tách rời khơng có khả tổng hợp chất Câu 4: Anh (chị) cho biết tác dụng Cytokinin Gibberellin? Đáp án Cytokinin + Các chất thuộc nhóm cytokinin