Ảnh hưởng của môi trường và chất điều hoà sinh trưởng đến khả năng tái sinh và nhân nhanh giống Hoàng lan thuộc chi lan Kiếm Cymbidium docx

ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG VÀ CHẤT ĐIỀU HOÀ SINH TRƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH GIỐNG HOÀNG LAN THUỘC CHI LAN KIẾM Cymbidium Lê Minh Nguyệt, Trần Thị Ngân, Vũ Văn Liết, Trần Duy Quý SUMMARY Research effect of medium and growth regulators on regeneration and propagation of species Hoang Lan belong to genus Cymbidium Propagate orchid by in vitro to satisfy the demand of customers is very need. The purpose of this study to find the best media and the rate of grow regulators, and also to explore the suitable of substrate to accept plantlets driven from in vitro for two varieties CD5 and CD9 belong to genus Cymbidium. Shoot of CD5 was put on media VW + 120 ml coconut milk + 10g saccarose + 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l Kinetin + 7 g agar + 1 g activated carbon and shoot of CD9 was put on media VW + 120ml coconut milk + 10 g saccarose + 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l Kinetin + 7 g agar + 1 g activated carbon. Media MS which was added 1 mg/l BAP and 0,3 mg/l NAA have multiple rate hightest for CD5, and 1 mg/l BAP and 0,5 mg/l NAA for CD9. The result indentified the basal medium MS supplemented activated carbon (1 g/l) and NAA (0,5 mg/l) gained number plantlet have root, number root/plantlet and length of root highest. Keywords: Orchid, propagation, asexual, culture, in vitro, media, shoot, protocorm. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nhân giống vô tính được áp dụng đối với nhiều loài cây trồng, nhất là cây ăn quả, hoa và cây cảnh (Chen Chang và cs., 2000). Cây phong lan có thể nhân giống bằng hạt hoặc nhân giống vô tính. Tuy nhiên, nhân giống bằng hạt đối với cây phong lan, đặc biệt chi Cymbidium dayanum gặp nhiều khó khăn và thời gian dài hơn so với nhân giống vô tính. Nhân giống vô tính in vitro cây phong lan có ý nghĩa quan trọng đối với sản xuất nhằm đáp ứng nhu cầu về số lượng và chất lượng cây giống; là một phương pháp tiến bộ hơn so với phương pháp truyền thống (Wickremesinhe và cs.,1994). II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu là 2 giống phong lan: Cymbidium iridioides var trangvietnam (CD5) và Cymbidium iridioides var timhot (CD9). Nội dung nghiên cứu gồm: (1) Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu, (2) Nghiên cứu lựa chọn môi trường phù hợp cho giai đoạn nhân nhanh trong in vitro, (3) Nghiên cứu phối hợp môi trường thích hợp cho giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh và (4) Nghiên cứu giá thể phù hợp cho giai đoạn ra cây vườn ươm. Phương pháp nghiên cứu: Các thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD), 4 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại ở giai đoạn nhân nhanh theo dõi trên 14 cá thể. Số cá thể theo dõi trên mỗi lần nhắc ở giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh (ra rễ) và nghiên cứu giá thể phù hợp là 30 cây. Số liệu được xử lý thống kê bằng các chương trình MS. Excel 2003 và IRRISTAT. III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 1. Giai đoạn nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu trong nhân giống vô tính in vitro có vai trò đặc biệt quan trọng đối với số lượng và chất lượng nhân giống; tạo ra cây đồng nhất và giảm chi phí cho quá trình nhân giống. Môi trường khởi động tốt nhất cho CD5 là môi trường VW có bổ sung 120 ml nước dừa, 2 mg/l BAP, 0,5 mg/l NAA, 7 g agar, 10 g đường và 1 g than hoạt tính; đạt hệ số nhân (HSN) là 3,67; đối với giống CD9 là môi trường VW bổ sung 120 ml nước dừa, 2 mg/l BAP, 0,7 mg/l NAA, 7 g agar, 10 g đường và 1 g than hoạt tính HSN đạt 3,15 sau 3 tháng thí nghiệm. 2. Giai đoạn nhân nhanh trong môi trường in vitro Các cụm chồi (protocorm) được tách thành từng chồi nhỏ rồi cho vào môi trường nhân nhanh. Các cụm chồi được cấy chuyển 12 tuần (3 tháng) 1 lần trên môi trường MS có bổ sung 30 g đường saccarose, 6,5 g agar, 1 g than hoạt tính và các chất điều hòa sinh trưởng ở các nồng độ khác nhau. Kết quả nghiên cứu về ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến HSN, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 được trình bày ở bảng 1. Bảng 1. Ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến hệ số nhân, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công thức Chất điều hòa sinh trưởng Nồng độ (ppm) CD5 CD9 Pr/chồi HSN Chất lượng chồi Pr/chồi HSN Chất lượng chồi 1 (Đ/C) BAP 0,0 1,30 3,04 + 1,44 3,39 + 2 0,5 1,50 10,36 + + + 1,93 11,5 + + + 3 1,0 2,00 12,54 + + + 1,77 14,43 + + + 4 1,5 2,27 9,46 + + 1,48 11,17 + + + 5 2,0 1,87 8,71 + + 1,77 9,89 + + LSD (0,05) 0,66 0,71 CV (%) 5,00 4,60 1 (Đ/C) Kinetin 0,0 1,41 2,93 + 2,46 3,46 + 2 0,1 1,37 4,14 + 1,39 7,68 + + + 3 0,3 1,25 6,68 + + 1,61 9,79 + + + 4 0,5 2,00 9,71 + + + 1,59 11,10 + + + 5 0,7 2,73 8,25 + + + 2,16 11,86 + + + 6 1,0 1,27 5,10 + + 1,51 12,79 + + + LSD (0,05) 0,39 0,63 CV (%) 4,2 4,5 Ghi chú: +: Chất lượng chồi kém; ++: Chất lượng chồi trung bình; ++: Chất lượng chồi tốt nhất. Môi trường thí nghiệm nhân nhanh thứ nhất phối hợp với chất điều hòa sinh trưởng BAP (6-benzylaminopurine) ở 4 nồng độ cho thấy, tất cả các công thức thí nghiệm có phối hợp với BAP đều cho hệ số nhân (HSN) cao hơn đối chứng ở mức có ý nghĩa. Nồng độ BAP 1,0 ppm cho HSN cao nhất và chất lượng chồi tốt đối với cả hai giống. Kết quả này phù hợp với kết quả của các nghiên cứu khác đã công bố trước đây (L.David Kuykendall và cs., 2003; Chen Chang và cs., 2005; Nguyễn Quang Thạch và cs., 2003). Hệ số nhân và chất lượng chồi giảm dần khi tăng nồng độ BAP lên 1,5 và 2 ppm (bảng 1). Môi trường thử nghiệm thứ hai nhằm tìm hiểu ảnh hưởng của Kinetin đến HSN và chất lượng chồi đã được tiến hành với 5 nồng độ Kinetin phối hợp với môi trường cơ bản MS (đối chứng là công thức không phối hợp Kinetin). Tất cả các công thức môi trường khi có phối hợp với Kinetin đều cho HSN cao hơn đối chứng ở mức có ý nghĩa 0,05. Nồng độ Kinetin cho HSN cao nhất đối với giống CD5 là 0,5 ppm và với giống CD9 là 1,0 ppm. Như vậy có sự khác nhau giữa các giống đối với nồng độ Kinetin khi phối hợp vào môi trường nhân nhanh. Đối với giống CD9 ở tất cả các công thức phối hợp Kinetin ở tất cả các nồng độ đều cho chất lượng chồi rất tốt; còn với giống CD5 chất lượng chồi chỉ tốt khi Kinetin ở nồng độ từ 0,5 đến 0,7 ppm. Kết quả nghiên cứu phối hợp BAP, NAA và Kinetin vào môi trường nhân nhanh in vitro hai giống lan CD5 và CD9 với các công thức: MS + BAP + NAA, MS + Kinetin + NAA và MS + BAP + NAA + Kinetin được trình bày ở bảng 2. Bảng 2. Ảnh hưởng của môi trường phối hợp AA, BAP và Kinetin đến HS, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công thức Phối hợp CĐTST Nồng độ NAA (ppm) CD5 CD9 Pr/chồi HSN Chất lượng chồi Pr/chồi HSN Chất lượng chồi 1 (Đ/C) NAA + BAP* 0,0 2,04 12,14 + + + 1,79 13,86 + + + 2 0,1 1,67 12,21 + + + 1,45 14,18 + + + 3 0,3 1,29 20,46 + + + 1,68 14,43 + + + 4 0,5 1,33 13,96 + + + 2,42 18,47 + + + 5 0,7 1,11 10,10 + + + 1,64 10,10 + + + LSD (0,05) 0,89 0,96 CV (%) 4,3 4,5 1 (Đ/C) NAA + Kinetin** 0,0 2,11 8,89 + + + 2,49 11,86 + + + 2 0,1 1,55 9,75 + + + 3,34 11,93 + + + 3 0,3 2,03 12,57 + + + 3,64 12,75 + + + 4 0,5 2,94 11,39 + + + 3,11 13,79 + + + 5 0,7 2,11 8,89 + + + 2,49 11,86 + + + LSD (0,05) 0,84 0,90 CV (%) 5,0 4,7 Nồng độ Kinetin 1 (Đ/C)*** BAP + NAA + Kinetin 0,0 1,28 19,50 + + + 2,22 17,50 + + + 2 0,1 1,79 10,68 + + + 5,14 11,18 + + + 3 0,3 2,15 9,11 + + + 6,05 9,57 + + + 4 0,5 2,01 8,39 + + + 1,80 7,89 + + 5 0,7 1,99 8,32 + + + 2,04 7,28 + + 6 1,0 3,93 7,39 + + 2,40 6,93 + + LSD (0,05) 0,76 0,68 CV (%) 4,8 4,6 * BAP = 1 mg/lít môi trường MS, ** Kinetin 0,5 ppm với giống CD5 và 1,0 ppm với giống CD9 *** Công thức đối chứng cho CD5 là MS + 1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA, cho CD9 là MS + 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA. Số liệu bảng 2 cho thấy: Môi trường MS + BAP phối hợp với AA. Trên cơ sở kết quả thí nghiệm môi trường MS + BAP đã xác định nồng độ BAP có tác dụng tăng HSN tốt nhất là 1 ppm. Nghiên cứu tiếp tục phối hợp bổ sung vào môi trường này (MS + BAP) chất điều hòa sinh trưởng NAA, với các nồng độ 0,1; 0,3; 0,5 và 0,7 ppm (đối chứng là môi trường MS + 1 mg/lít BAP). Kết quả thí nghiệm cho thấy, môi trường MS + 1 g/l BAP + NAA nồng độ 0,3 ppm cho HSN và chất lượng chồi cao nhất đối với giống CD5 (HSN = 20,46); đối với giống CD9, HSN đạt cao nhất (18,47) khi nồng độ NAA là 0,5 ppm. Môi trường MS + Kinetin phối hợp với AA. Kết quả thí nghiệm với môi trường MS + Kinetin (môi trường 2) cho thấy nồng độ Kinetin ở 0,5 ppm có tác dụng tốt trong nhân nhanh giống CD5 và 1,0 ppm đối với giống CD9. Nhằm nâng cao hiệu quả của môi trường này đã phối hợp với NAA ở 4 nồng độ: 0,1; 0,3; 0,5 và 0,7 ppm. Đối chứng là MS + Kinetin 0,5 ppm với giống CD5 và 1,0 ppm với giống CD9. Kết quả cho thấy khi phối hợp môi trường MS + Kinetin với NAA nồng độ 0,3 ppm tốt nhất với giống CD5 (HSN đạt cao nhất 12,57) và 0,5 ppm tốt nhất với giống CD9 (HSN đạt 13,79), cao hơn đối chứng và các nồng độ khác ở mức có ý nghĩa 0,05. Môi trường MS + BAP + AA phối hợp bổ sung Kinetin. Các thí nghiệm môi trường cơ bản MS có bổ sung các chất điều hòa đơn lẻ BAP, NAA và Kinetin đã có tác dụng rất tốt trong nuôi cây in vitro giai đoạn nhân nhanh là tăng HSN và chất lượng chồi. Nhằm tìm hiểu khả năng phối hợp cả 4 chất điều hòa sinh trưởng này vào môi trường nuôi cấy, thí nghiệm đã thực hiện trên môi trường MS + BAP + NAA phối hợp với Kinetin ở các nồng độ khác nhau (bảng 2). Đối chứng với giống CD5 là MS + 1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA; với giống CD9 là MS + 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA. Kết quả thí nghiệm cho thấy môi trường MS + BAP + NAA phối hợp thêm Kinetin không có tác dụng tăng HSN, ngược lại có tác dụng làm giảm HSN (mặc dù không ảnh hưởng đến chất lượng chồi). Đối với giống lan CD5 HSN ở công thức đối chứng (không có Kinetin) cao nhất đạt 19,50; khi bổ sung Kinetin nồng độ 0,1 ppm HSN chỉ còn 10,68. Nồng độ Kinetin càng cao, HSN càng giảm. Khi nồng độ Kinetin tăng lên 1,0 ppm HSN chỉ còn 7,39. Bức tranh tương tự cũng nhận được đối với giống lan CD9 (đối chứng đạt HSN cao nhất 17,50, khi bổ sung Kinetin 0,1 ppm HSN chỉ đạt 11,18 và HSN đạt thấp nhất khi tăng nồng độ Kinetin lên 1,0 ppm). Kết quả thử nghiệm phối hợp môi trường MS + BAP + NAA với IBA (nồng độ 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 và 0,5 ppm) cho thấy ở tất cả 5 mức nồng độ IBA đều cho HSN thấp hơn so với công thức đối chứng không có IBA (công thức đối chứng cho CD5 là MS + 1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA, cho CD9 là MS + 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA). Ở công thức đối chứng HSN của giống CD5 là 19,50, khi phối hợp thêm IBA HSN giảm đi ở mức có ý nghĩa 0,05. HSN của của giống CD9 là 17,14 ở công thức đối chứng, trong các công thức phối hợp với IBA HSN giảm, giảm xuống thấp nhất khi IBA ở nồng độ 0,1 ppm (HSN = 11,21 với giống CD5 và 13,46 với giống CD9). Khi nồng độ IBA càng tăng thì hệ số nhân càng giảm. Đối với môi trường MS + Kinetin + NAA bổ sung IBA ở 5 nồng độ như phối hợp với MS + BAP + NAA cũng cho kết quả tương tự. Tất cả các môi trường có phối hợp với IBA đều cho HSN thấp hơn đối chứng không có IBA. Kết quả thí nghiệm cho thấy, ảnh hưởng của các công thức phối hợp trên đến HSN không có ý nghĩa đối với cả hai giống Hoàng lan. Nghiên cứu bổ sung các chất kích thích tự nhiên sẵn có ở Việt Nam vào môi trường nhân in vitro cây hoa lan có ý nghĩa quan trọng, nhằm giảm giá thành cây giống. Kết quả nghiên cứu thăm dò hai loại chất kích thích tự nhiên có trong nước dừa và chuối xanh với lượng bổ sung khác nhau vào môi trường nuôi cấy được trình bày ở bảng 3. Bảng 3. Ảnh hưởng của chuối xanh và nước dừa phối hợp trong môi trường nuôi cấy tới HS, chất lượng chồi của hai giống lan CD5 và CD9 Công thức Liều lượng CD5 CD9 Pr/chồi HSN Chất lượng chồi Pr/chồi HSN Chất lượng chồi 1 (Đ/C) Chuối xanh (gam) 0 0,88 3,21 + 0,98 3,04 + 2 25 1,65 5,86 + + 1,16 6,86 + + 3 50 1,80 6,50 + + 1,07 4,43 + + 4 75 2,02 4,43 + + 1,95 4,32 + + 5 100 1,74 4,11 + + 1,13 4,18 + + LSD (0,05) 0,31 0,26 CV (%) 4,2 3,8 1 (Đ/C) Nước dừa (ml/l) 0 3,00 4,00 + 2,17 3,39 + 2 25 2,71 4,11 + + 4,50 5,89 + + + 3 50 2,89 4,86 ++ 4,00 4,11 + + 4 75 3,66 6,32 + + + 1,94 3,69 + + LSD (0,05) 0,31 0,29 CV (%) 4,1 4,4 Dịch chiết chuối xanh bổ sung vào môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng tích cực đến chất lượng chồi và HSN. Trong tất cả các công thức có bổ sung dịch chiết chuối xanh đều có HSN cao hơn công thức đối chứng, với giống CD5 đạt HSN cao nhất (6,50 ở công thức bổ sung 50 g chuối), với CD9 HSN cao nhất đạt 6,86 khi bổ sung 25 g chuối xanh. Tỷ lệ tạo chồi và protocorm tương đương nhau (với CD5 là 1,65, CD9 là 1,16). Các chồi phát triển ở mức trung bình. Nước dừa là một hợp chất tự nhiên, giàu cytokinins, trước đây đã được dùng rộng rãi trong lĩnh vực nuôi cấy mô và nhân giống in vitro hoa lan (Nguyễn Quang Thạch và cs., 2004). HSN ở tất cả các công thức có bổ sung nước dừa từ 50 - 150 ml đều cao hơn so với công thức đối chứng (với giống CD5 HSN cao nhất đạt 6,32 khi thêm 150 ml nước dừa, công thức đối chứng đạt 3,00; còn với giống CD9 HSN cao nhất đạt 5,89, đối chứng 3,39). Tuy nhiên, tỷ lệ tạo chồi ở các công thức có HSN cao nhất so với tỷ lệ tạo protocorm rất thấp, được thể hiện qua tỷ lệ protocorm/chồi của CD5 và CD9 tương ứng là 3,66 và 4,5 (bảng 3). Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh là giai đoạn cuối cùng của quá trình nhân nhanh giống. Các chồi được kích thích ra rễ để chúng có thể sống, phát triển tốt khi chuyển trồng ra ngoài đất. Nhiều tác giả đã khẳng định vai trò của than hoạt tính trong việc xúc tiến quá trình ra rễ của nhiều loại cây trồng. Jacques và Homes (1963) đã phát hiện ra than hoạt tính có tác dụng tăng tỷ lệ cây ra rễ trên môi trường nuôi cấy Cymbidium. Kết quả nghiên cứu vai trò của than hoạt tính trong môi trường ra rễ của hai giống hoa lan bằng cách bổ sung 0,5-2 g than hoạt tính vào môi trường ra rễ, được trình bày ở bảng 4. Bảng 4. Ảnh hưởng của than hoạt tính đến khả năng ra rễ, chất lượng rễ của 2 giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công thức THT (g) CD5 CD9 Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây Độ dài rễ TB Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây Độ dài rễ TB 1 (Đ/C) 0 45,00 1,20 0,97 60,83 1,01 1,03 2 0,5 54,17 1,45 1,29 73,83 1,63 1,35 3 1,0 95,83 2,65 2,21 99,17 2,92 2,42 4 1,5 86,67 2,41 1,95 100,00 2,85 2,32 5 2,0 85,83 2,19 1,81 100,00 2,67 2,24 LSD (0,05) 0,09 0,08 CV (%) 3,71 2,81 Số liệu bảng 4 cho thấy than hoạt tính có ảnh hưởng tích cực đến sự hình thành rễ của 2 giống Hoàng lan CD5 và CD9. Ở cả 2 giống, khi bổ sung 1 g/l than hoạt tính vào môi trường tạo cây hoàn chỉnh đều cho số rễ/cây và độ dài rễ cao nhất. Đối với giống CD5 số rễ/cây là 2,65 và 2,92 là số rễ/cây của giống CD9. Độ dài rễ trung bình của giống CD5 là 2,21 và của giống CD9 là 2,42. Công thức đối chứng có số rễ/cây và độ dài rễ trung bình thấp nhất . Khi bổ sung NAA vào môi trường ra rễ + than hoạt tính cho thấy, ở nồng độ 0,5 ppm NAA có tác dụng tăng tỷ lệ ra rễ, số rễ trên cây và chiều dài rễ của cả hai giống Hoàng lan CD5 và CD9. Tỷ lệ ra rễ đạt 100%, số rễ trên cây 3,82 rễ, chiều dài rễ 3,15 cm đối với giống CD5; đối với giống CD9 tỷ lệ ra rễ đạt 100%, số rễ trên cây 4,73 rễ và chiều dài rễ 3,89 cm. Bảng 5. Ảnh hưởng của than hoạt tính và AA đến khả năng ra rễ, chất lượng rễ của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công thức NAA (ppm) CD5 CD9 Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây Độ dài rễ TB (cm) Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây Độ dài rễ TB (cm) 1 (ĐC) 0 97,50 2,47 2,12 98,33 2,85 2,37 2 0,1 100,00 2,95 2,32 100,00 3,48 2,94 3 0,3 100,00 3,25 2,86 100,00 4,14 3,37 4 0,5 100,00 3,82 3,15 100,00 4,73 3,89 5 0,7 100,00 3,16 2,64 100,00 4,24 3,58 6 1,0 100,00 2,96 2,27 100,00 3,73 3,16 LSD (0,05) 0,08 0,10 CV (%) 2,1 2,2 (Công thức đối chứng là MS + 1 g than hoạt tính cho cả 2 giống hoàng lan CD5 và CD9). Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của ba loại giá thể tiếp nhận đến tỷ lệ sống của cây con in vitro được trình bày ở bảng 6. Cây con tiêu chuNn ưc to ra t giai on to cây hoàn chnh có t 3 - 4 r tr lên ưc chuyn trng vào giá th  ánh giá kh năng tip nhn ca giá th i vi cây con in vitro. Ba loi giá th s dng trong thí nghim là rong bin, xơ da và 1/2 rong bin + 1/2 xơ da. Bảng 6. Ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của 2 giống hoàng lan CD5 và CD9 (sau 1 tháng theo dõi) Giá thể Tỷ lệ sống CD5 CD9 Rong biển 95,00 92,5 Xơ dừa 66,67 58,33 1/2 rong biển + 1/2 xơ dừa 83,33 70,83 T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 8 S liu bng 6 cho thy các giá th khác nhau có nh hưng rõ rt ti t l sng ca c hai ging Hoàng lan CD5 và CD9. Sau 1 tháng trng trên giá th  tt c các công thc u có cây con bị chết. Nguyên nhân chết là do cây mới được đưa ra khỏi bình nuôi cấy, chúng phải trải qua giai đoạn thích nghi, bộ rễ chưa ổn định nên dễ bị tổn thương và bị chết. Tỷ lệ chết cao nhất của giống CD5 và CD9 là ở giá thể xơ dừa, lần lượt là 33,33% và 41,67%. Do xơ da gi Nm kém hơn các giá th còn li nên cây con thưng b khô, d cht. Giá th rong bin có kh năng gi Nm tt nên cây con d thích nghi, b r nhanh chóng ưc n nh và phát trin. T l sng cao nht  ging CD5 t 95% và  CD9 t 92,5%. Bưc u kt lun giá th tip nhn cây con ca hai ging lan t nuôi cy in vitro tt nht là rong bin do kh năng gi Nm ca loi giá th này tt hơn xơ da. IV. KT LUN Môi trưng nhân nhanh b sung các cht iu hòa sinh trưng thuc nhóm Auxin và Cytokinins có tác dng tt tăng HSN và cht lưng chi i vi hai ging lan CD5 và CD9. Môi trưng cho HSN và cht lưng chi cao nht vi ging CD5 là môi trưng cơ bn MS b sung 1 mg/l BAP và 0,3 mg/l N AA. Môi trưng tt nht i vi ging CD9 là môi trưng cơ bn MS b sung 1 mg/l BAP và 0,5 mg/l N AA. Các cht iu hòa sinh trưng IBA, Kinetin b sung riêng r hay t hp vi các môi trưng MS + BAP + N AA u cho kt qu thp hơn khi b sung 2 cht BAP và N AA. Các cht iu hòa có trong các sn phNm t nhiên  nưc ta như chui xanh, nưc da có th b sung  tăng hiu qu môi trưng và tit kim chi phí khi nhân ging hoa lan. Môi trưng to cây hoàn chnh tt nht cho CD5 và CD9 là môi trưng MS b sung 1 g than hot tính và 0,5 mg/l N AA, to ra s r nhiu nht và cht lưng r tt nht. Giá th tt nht  ra cây con sau giai on in vitro là dn i vi c hai ging CD5 và CD9. Tuy nhiên, có th dùng hn hp rong bin và xơ da vi t l 1:1 vì t l sng ca giá th hn hp này cũng khá cao, nhm gim chi phí giá th trong nhân ging. TÀI LIU THAM KHO 1. guyễn Quang Thạch, guyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị ga, guyễn Xuân Trường, Đỗ Đăng Vịnh, 2003. N ghiên cu xây dng quy trình nhân ging và nuôi trng phong lan Phalaenopsis, Báo cáo ti Hi ngh sinh hc toàn quc. 2. guyễn Quang Thạch, Hoàng Thị ga, guyễn Thị Lý Anh, Vũ Thị Hoài, 2004. ng dng phương pháp nuôi cy lát mng t bào trong nhân nhanh in vitro mt s ging a lan có giá tr; vol. 5, Tp chí Khoa hc và Phát trin, i hc N ông nghip Hà N i. 3. guyễn Quang Thạch, guyễn Thị Lý Anh, guyễn Thị Lâm Hải, 2005. Lan H ip k thut chn to, nhân ging và nuôi trng, N XB. N ông nghip. 4. Chen Chang*, Ying Chun CHE and Hsin Fu YE, 2005. Protocorm or rhizome? The morphology of seed germination in Cymbidium dayanum Reichb., Bot. Bull. Acad. Sin. (2005) 46: 71-74, China. T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 9 5. Chen Chang, Chang - Tesrm Chen, Yu-Ching Tsai, Wei-Chin Chang, 2000. A tissue culture protocol for propagation of a rare plant, Lilium speciosum Thunb. Var. gloriosoides Baker, Bot.Bull. Acad. Sin 41: 139-142. 6. L. David Kuykendall, Tammy M. Stockett and Joseph W. Saunder, 2003. Rhizobium radiobacter conjugation and callus-independent shoot regeneration use to introduce the cercosprin export gene cfp from Cercospora into sugar beet (Beta culgaris L.), Biotecnology Letter 25: 739-744, Kluwer Acadimic Publisher. Printed in the Netherlands. 7. ICOGO, 2009. An Overview of ICOGO, International Commercial Orchid Growers Organization. 8. Sheena McKendrick, 2000. Orchid Propagation Techniques, Ceiba Foundation for Tropical Conservation. gười phản biện: guyễn Văn Vấn . ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG VÀ CHẤT ĐIỀU HOÀ SINH TRƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH GIỐNG HOÀNG LAN THUỘC CHI LAN KIẾM Cymbidium Lê Minh Nguyệt, Trần. đến HSN, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 được trình bày ở bảng 1. Bảng 1. Ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến hệ số nhân, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công. Kinetin + NAA và MS + BAP + NAA + Kinetin được trình bày ở bảng 2. Bảng 2. Ảnh hưởng của môi trường phối hợp AA, BAP và Kinetin đến HS, chất lượng chồi của hai giống Hoàng lan CD5 và CD9 Công