TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3 2022 53 NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM BƯỚC ĐẦU ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI ĐIỂM HỖ TRỢ PHÔI THOÁT MÀNG BẰNG LASER TỚI KẾT QUẢ THỤ TINH ỐNG NGHIỆM CỦA CHUYỂN PHÔI TRỮ NGÀY 3 Nguyễn Thị L[.]
TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM BƯỚC ĐẦU: ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI ĐIỂM HỖ TRỢ PHƠI THỐT MÀNG BẰNG LASER TỚI KẾT QUẢ THỤ TINH ỐNG NGHIỆM CỦA CHUYỂN PHÔI TRỮ NGÀY Nguyễn Thị Liên Hương1, Trần Mai Hương1 An Mạnh Cường1, Vũ Đình Hợp1, Lê Hồng1 Tóm tắt Mục tiêu: So sánh tỷ lệ có thai tỷ lệ phôi tốt phôi rã đông ngày nuôi qua đêm thực kỹ thuật hỗ trợ phôi thoát màng (assisted hatching AH) hai thời điểm: Tiến hành sau rã đông trước chuyển phôi Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên Bệnh viện Đa khoa Tâm Anh, từ tháng 10/2020 - 10/2021, 154 bệnh nhân (BN) có chu kỳ chuyển phơi trữ ngày 3, phân bố ngẫu nhiên vào hai nhóm: Nhóm AH trước (AH sau rã đơng) nhóm AH sau (AH sau nuôi qua đêm, trước chuyển phôi) Kết quả: Tỷ lệ có thai nhóm chuyển phơi trữ ngày nhóm AH trước AH sau 61% 58,4%, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Tỷ lệ phôi tốt (độ I II) nhóm AH trước nhóm AH sau 79,2% 83,8%, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Kết luận: Thời điểm hỗ trợ phơi màng ngày rã đơng khơng ảnh hưởng tới tỷ lệ có thai tỷ lệ phơi tốt ni qua đêm * Từ khố: Hỗ trợ phơi màng; Chuyển phơi trữ; Kết có thai A PILOT STUDY: THE IMPACT OF LASER-ASSISTED HATCHING TIMING ON THE CLINICAL OUTCOME OF DAY THAWED EMBRYO TRANSFER Summary Objectives: To compare the pregnancy rate and the good embryo rate on day thawed embryo, cultured overnight and performed assisted hatching (assisted hatching - AH) at two-time points: Immediately after thawing and before embryo transfer Subjects and methods: Randomized clinical trial study at Tam Anh Hospital, Trung tâm Hỗ trợ sinh sản, Bệnh viện Đa khoa Tâm Anh Người phản hồi: Lê Hoàng (lehoang@tamanhhospital.vn) Ngày nhận bài: 25/02/2022 Ngày chấp nhận đăng: 01/3/2022 53 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 from October 2020 to October 2021, on 154 cycles of embryo transfer on day 3, randomly distributed into two groups: group “AH before” (AH immediately after thawing) and group “AH after” (AH after overnight culture, just before embryo transfer) Results: The pregnancy rate in the group “AH before” and “AH after” was 61% and 58.4%, respectively, the difference was not statistically significant (p > 0.05) The percentage of good embryos (Grade I and II) of the group AH before and group AH after were 79.2% and 83.8%, respectively, the difference was not statistically significant (p > 0.05) Conclusion: The time to perform assisted hatching of day frozen-thawed embryos might not affect the pregnancy rate and the good embryo rate when cultured overnight * Keywords: Assisted hatching; Frozen embryo transfer; Clinical outcome ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, tần suất chuyển phơi trữ (FET) tăng mạnh địi hỏi phải có quy trình trữ, rã đơng an tồn hiệu Việc rã đông phôi ngày 3, nuôi cấy qua đêm chu kỳ FET mang lại kết lâm sàng tốt so với thời gian nuôi cấy ngắn [1] Tuy nhiên, màng suốt phơi trữ thường có xu hướng bị cứng lại, cản trở phơi màng, giảm khả làm tổ [2] Do AH đời, ứng dụng để làm mỏng tạo lỗ thủng màng suốt phơi, qua tạo điều kiện cho phơi màng Hiệu kỹ thuật AH chu kỳ chuyển phôi trữ chứng minh làm tăng rõ rệt tỷ lệ làm tổ, tỷ lệ có thai [3] Thời điểm AH đa dạng tùy thuộc vào quy trình mục đích AH trung tâm Hiện hai chiến lược AH cho phôi rã đông ngày nuôi qua đêm áp dụng phổ biến 54 trung tâm IVF: AH sau rã đông AH trước chuyển phôi AH sau rã đông phôi rã đông, thực AH, nuôi qua đêm để chuyển phôi AH trước chuyển phôi phôi rã đông xong nuôi qua đêm, thực AH trước chuyển phôi từ 1,5 - Việc nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng thời điểm AH phôi sau rã đông tới kết lâm sàng cịn hạn chế Hiện nay, chưa tìm thấy nghiên cứu đầy đủ có hệ thống đến trường hợp phôi ngày rã đông nuôi cấy qua đêm để chuyển phơi, chưa có qui trình hay khuyến cáo thời điểm AH cho trường hợp Vì vậy, nghiên cứu chúng tơi tiến hành nhằm: So sánh tỷ lệ phôi tốt phôi rã đông ngày nuôi qua đêm, thực AH hai thời điểm so sánh tỷ lệ có thai hai nhóm chuyển phơi trữ ngày mà phôi rã đông nuôi qua đêm AH hai thời điểm: AH sau rã đông AH trước chuyển phơi TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 154 BN có định chuyển phơi trữ ngày 3, chuẩn bị nội mạc tử cung hỗ trợ hoàng thể cách sử dụng nội tiết ngoại sinh, phối hợp estradiol đường uống progesterone đường âm đạo Trung tâm Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện Đa khoa Tâm Anh, Hà Nội từ tháng 10/2020 - 10/2021 * Tiêu chuẩn lựa chọn: BN có tuổi ≤ 38; độ dày niêm mạc tử cung 12 mm; số lần chuyển phơi thất bại có thai < lần; tiền sử sảy/lưu thai ≤ lần; có phơi sau rã có chất lượng từ tốt trở lên; chuyển phôi; chuyển phôi dễ * Tiêu chuẩn loại trừ: Xin cho nỗn/phơi Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, so sánh ảnh hưởng thời điểm AH chuyển phôi trữ ngày 3, phân bố ngẫu nhiên vào hai nhóm can thiệp: - Nhóm AH sau: Phơi ngày rã đơng ni qua đêm, ngày chuyển phôi, AH trước chuyển phôi 30 phút - Nhóm AH trước: Phơi ngày rã đông AH ngay, nuôi qua đêm, ngày chuyển phơi Kết thai lâm sàng Cỡ mẫu tính theo cơng thức tính cỡ mẫu cho nghiên cứu có so sánh tỷ lệ [4] Tỷ lệ có thai nhóm AH sau, ước tính 0,71% (theo D Hui CS [1]); tỷ lệ có thai nhóm AH trước, ước tính 0,47% (theo V Holschbach CS [5]) Như vậy, số BN cần thiết nhóm với α = 0,05 β = 0,20 (power = 80%) 77 người * Phương pháp tiến hành: - Chuẩn bị hồ sơ BN có định rã đơng phơi ngày để chuyển, áp dụng tiêu chuẩn lựa chọn BN không đủ điều kiện bị loại khỏi nghiên cứu - Rã đông phôi thực theo quy trình rã đơng phơi Bệnh viện Đa khoa Tâm Anh - Phôi rã đánh giá chất lượng sau rã đông theo tiêu chuẩn độ Lab IVF Tâm Anh Các trường hợp chọn phân bố ngẫu nhiên vào hai nhóm phơi thực kỹ thuật AH hai thời điểm khác - Tiến hành kỹ thuật AH phôi rã đông ngày 3, hai chuyên viên phôi thực trước chuyển phôi (khoảng 30 phút), thực sau rã đông, sử dụng phương pháp laser Màng suốt bắn thủng laser lỗ có đường kính khoảng 30 µm Vị trí bắn nơi có khoang quang phơi - PVS rộng nơi có nhiều mảnh vỡ Phôi sau thực kỹ thuật AH chuyển giọt môi trường để nuôi cấy tiếp chuyển phôi - Phôi ngày đánh giá trước chuyển theo tiêu chuẩn độ 55 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 - Chuyển phôi: Chuyên viên phôi tiến hành nạp phôi vào catheter đưa catheter chứa phôi cho bác sĩ lâm sàng, trường hợp không đủ phôi chuyển bị loại khỏi nghiên cứu - Theo dõi kết có thai BN: Định lượng βhCG 14 ngày sau chuyển phôi Nếu có thai siêu âm xác định túi thai tuần sau chuyển phôi Xác định số túi thai hoạt động tim thai * Các tiêu chuẩn đánh giá phôi nghiên cứu: - Đánh giá phôi ngày 3: Đánh giá phôi ngày dựa theo tiêu chuẩn đánh giá Laura Rienzi, có cải tiến [6] Trong đó, phơi tốt (độ I II) đánh giá phơi có tế bào nhau, phôi bào nén chặt, phôi bào nén tỷ lệ mảnh vỡ < 10%; phơi có từ - 16 phôi bào, phôi bào nén, nén phần, tỷ lệ mảnh vỡ 10 - 25% - Đánh giá phôi ngày (đánh giá trước chuyển): Được chia làm độ theo tiêu chuẩn đánh giá Deanne Feil [7] Phôi đánh giá tốt (phôi độ I độ II) thoả mãn tiêu chí sau: Phơi cavitating (phơi tạo khoang), phơi bào nén chặt, tỷ lệ mảnh vỡ < 10%; phơi bào nén chặt, phơi bào nén, phơi có nhiều tế bào có phôi bào phân chia tiếp, kèm với bất thường sau: Tỷ lệ mảnh vỡ > 10%, bất thường phân chia tế bào, phơi có nén lại phần, tỷ lệ phơi bào thối hố < 25% 56 - Đánh giá phôi sau rã đông: Dựa vào phân độ phôi hai giai đoạn phơi sau rã đơng cịn ngun vẹn Các phơi thối hóa đánh giá dựa vào phần trăm thối hố: Thối hóa độ 1: Thối hóa < 25%; Thối hóa độ 2: Thối hóa 25 - 50%; Thối hóa độ 3: Thối hóa > 50%; Thối hóa độ 4: Thối hóa hồn tồn * Phương pháp xử lý số liệu: Xử lý số liệu phần mềm SPSS ver 26.0 Các biến định lượng so sánh phép kiểm Mann-Whitney U-test T-test Mối liên quan biến định tính phân tích test Chi-square Fisher’s exact test Các biến mô tả trung vị (IQR) số lượng (%) Các yếu tố có liên quan đến thai lâm sàng đưa vào mơ hình hồi quy đa biến KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đặc điểm chung BN nhóm nghiên cứu Từ tháng 10/2020 - 10/2021, Trung tâm Hỗ trợ Sinh sản, Bệnh viện Đa khoa Tâm Anh, Hà Nội, tiến hành thu thập số liệu 154 BN có định chuyển phơi trữ ngày đủ tiêu chuẩn đưa vào đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu chia thành hai nhóm: Nhóm AH sau gồm 77 BN chuyển phơi trữ ngày nuôi qua đêm AH, nhóm AH trước gồm 77 BN chuyển phơi trữ ngày AH sau rã nuôi qua đêm TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 Bảng 1: Đặc điểm chung BN tham gia nghiên cứu Chỉ tiêu Nhóm AH sau Nhóm AH trước p 30,94 ± 4,25 30,29 ± 4,11 0,337 20,70 (19 - 22) 21,3 (19,5 - 22,83) 0,15 (2 - 5) 3,5 (2,25 - 6) 0,382 Nguyên phát 70,1 (54) 88,3 (68) Thứ phát 29,9 (23) 11,7 (9) 55,8 (43) 53,2 (41) 13 ( 10) 6,5 ( 5) 9,1 ( 7) 11,7 ( 9) 22,1 ( 17) 28,6 ( 22) 48,1 (37) 46,8 (36) 36,4 (28) 36,4 (28) 15,5 (12) 16,8 (13) lần 67,53 (52) 75,32 (58) lần 23,37 (18) 16,88 (13) lần 9,10 (7) 7,80 (6) 9,42 ± 1,07 9,69 ± 1,03 Tuổi Chỉ số BMI Thời gian vô sinh Loại vô sinh (n = 77); % (n) Nguyên nhân vô sinh (n = 77); % (n) Do vợ Do chồng Do hai vợ chồng Không rõ nguyên nhân Số lần chuyển phôi (n = 77); % (n) lần lần lần 0,005 0,457 0,974 Số lần sảy thai (n = 77); % (n) Trung bình độ dày NMTC (mm) 0,546 0,108 Các đặc điểm phân bố hai nhóm nghiên cứu tương đồng Nhóm AH trước có tỷ lệ vơ sinh nguyên phát 88,3%, cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm AH sau 57 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 So sánh tỷ lệ phôi tốt nuôi qua đêm hai nhóm thời điểm AH Bảng 2: Đặc điểm phơi sau ni qua đêm hai nhóm nghiên cứu Nhóm AH sau (n = 154); % (n) Nhóm AH trước (n = 154); % (n) p Tỷ lệ phôi tốt (độ I II) 79,2 (122) 83,8 (129) 0,304 Tỷ lệ phơi có dấu hiệu nén 81,2 (125) 88,3 (136) 0,081 Tỷ lệ phơi nén hồn tồn 38,3 (59) 33,1 (51) 0,341 Tỷ lệ phôi tốt sau nuôi qua đêm, tỷ lệ phơi có dấu hiệu nén tỷ lệ phơi nén hồn tồn tương đương hai nhóm thời điểm AH So sánh kết có thai hai nhóm thời điểm AH * Đặc điểm phơi chuyển hai nhóm nghiên cứu: Đặc điểm phơi chuyển hai nhóm thời điểm AH khác thể biểu đồ Biểu đồ 1: So sánh chất lượng phôi chuyển hai nhóm thời điểm AH Chất lượng phơi chuyển: Phơi độ II chiếm tỷ lệ lớn hai nhóm Tỷ lệ phơi chuyển độ II nhóm AH sau 40,9%, nhóm AH trước 50,6% Phơi chuyển độ I nhóm AH sau chiếm 38,3%, nhóm AH trước chiếm 33,1% Tỷ lệ phơi độ I, độ II, độ III hai nhóm thời điểm AH khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với p = 0,219 58 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2022 * So sánh kết có thai hai nhóm thời điểm AH: Bảng 3: So sánh kết có thai hai nhóm nghiên cứu Nhóm AH sau Nhóm AH trước % (n) % (n) Thai lâm sàng 58,4 (45/77) 61 (47/77) 0,742 Tỷ lệ βhCG (+) 63,6 (49/77) 64,9 (50/77) 0,866 39,61 (61/154) 44,16 (68/154) 0,506 53,4 (39/73) 56,8 (42/74) 0,685 5,2 (4/77) 3,9 (3/77) 0,7 Kết thai Tỷ lệ làm tổ Thai diễn tiến Tỷ lệ thai sinh hóa p Tỷ lệ thai lâm sàng nhóm AH trước có xu hướng cao so với nhóm AH sau (lần lượt 61% 58,4%), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Tỷ lệ βhCG (+), tỷ lệ làm tổ, tỷ lệ thai diễn tiến, tỷ lệ thai sinh hóa hai nhóm thời điểm AH khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê * Các yếu tố ảnh hưởng tới kết có thai lâm sàng: Bảng 4: Phân tích hồi quy đa biến yếu tố ảnh hưởng tới kết cục thai lâm sàng Tỷ lệ thai lâm sàng (%) OR hiệu chỉnh 95%CI p Chỉ số BMI BMI < 18,5 18,5 ≤ BMI < 25 BMI ≥ 25 60 59,9 57,1 3,945 5,535 0,250 - 62,260 0,471 - 65,090 0,329 0,174 Loại vô sinh Nguyên phát Thứ phát 62,3 50 1,225 0,489 - 3,065 0,665 Nguyên nhân vô sinh Do vợ Do chồng Do vợ chồng Không rõ nguyên nhân 51,2 66,7 81,3 66,7 0,582 0,917 1,952 0,246 - 1,378 0,238 - 3,530 0,449 - 8,492 0,218 0,899 0,273 Các tiêu 59 ... Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, so sánh ảnh hưởng thời điểm AH chuyển phôi trữ ngày 3, phân bố ngẫu nhiên vào hai nhóm can thiệp: - Nhóm AH sau: Phơi ngày rã đơng... cứu đánh giá ảnh hưởng thời điểm AH phôi sau rã đông tới kết lâm sàng hạn chế Hiện nay, chưa tìm thấy nghiên cứu đầy đủ có hệ thống đến trường hợp phôi ngày rã đông ni cấy qua đêm để chuyển phơi,... điểm phơi chuyển hai nhóm nghiên cứu: Đặc điểm phơi chuyển hai nhóm thời điểm AH khác thể biểu đồ Biểu đồ 1: So sánh chất lượng phôi chuyển hai nhóm thời điểm AH Chất lượng phơi chuyển: Phôi độ