Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin – ĐHTN http //lrc tnu edu vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PH[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN, TỈNH LẠNG SƠN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN, TỈNH LẠNG SƠN Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Các kết nghiên cứu trung thực, phần cơng bố Tạp chí Khoa học công nghệ - Đại học Thái Nguyên với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng năm 2019 Tác giả Trương Mạnh Tiến Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy, khoa Sinh học trường Đại học sư phạm Thái Nguyên người bảo, hướng dẫn em suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn cảm ơn sâu sắc tới thầy cô khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm - ĐH Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, truyền dạy kiến thức cho em suốt khóa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo, cô giáo Ban giám hiệu trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Nguyên, thầy, phịng ban chức tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian học tập trường Em xin chân thành cảm ơn đồng nghiệp ban giám hiệu trường THPT Số Bảo Thắng tạo điều kiện giúp đỡ thời gian học tập Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè gia đình ln quan tâm, động viên, ủng hộ giúp đỡ em Luận văn sản phẩm Nhiệm vụ quỹ GEN cấp Bộ có mã số B2018TNA-04-GEN PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Bộ môn Sinh học đại Giáo dục sinh học làm chủ nhiệm Thái Nguyên, tháng năm 2019 Tác giả Trương Mạnh Tiến Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Bảy hoa 1.1.1 Vị trí Bảy hoa hệ thống phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật học Bảy hoa 1.1.3 Giá trị y học Bảy hoa 1.1.4 Vấn đề bảo tồn Bảy hoa 1.2 Một số phương pháp định danh thực vật 1.2.1 Phương pháp so sánh hình thái, giải phẫu 1.2.2 Phương pháp phân loại học phân tử 12 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu 22 2.1.1 Vật liệu thực vật 22 2.1.2 Vật liệu nhân gen matK, ITS 22 2.1.3 Hóa chất thiết bị 23 2.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Nhóm phương pháp nghiên cứu hình thái, giải phẫu Bảy hoa 23 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 2.2.2 Phương pháp phân lập xác định trình tự nucleotide gen 24 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 25 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu Bảy hoa 26 3.1.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái 26 3.1.2 Kết nghiên cứu đặc điểm giải phẫu 27 3.2 Đặc điểm đoạn gen matK vùng gen ITS mẫu Bảy hoa 30 3.2.1 Đặc điểm đoạn gen matK 31 3.2.2 Đặc điểm vùng gen ITS 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BLAST : Basic Local Aligment Search Tool DNA : Deoxyribose nucleic acid đtg : Đồng tác giả ITS : Internal Transcribed Spacer kb : Kilobase matK : Maturase K NCBI : The National Center for Biotechnology Information PCR : Polymerase Chain Reaction rpoC1 : RNA polymerase beta' subunit Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng danh lục đỏ thuốc thuộc chi Paris Việt Nam Bảng 1.2 Một số thông tin gen matK chi Paris 14 Bảng 1.3 Một số thông tin vùng ITS chi Paris 16 Bảng 1.4 Một số nghiên cứu giới sử dụng vùng gen ITS phân loại thực vật 17 Bảng 1.5 Mã vạch DNA định danh Bảy hoa Thái Nguyên 20 Bảng 2.1 Trình tự nucleotide mồi matK, ITS sử dụng kỹ thuật PCR 22 Bảng 3.1 Độ tương đồng phân ly mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn dựa trình tự đoạn gen matK 33 Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn dựa trình tự vùng gen ITS 35 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh quan Bảy hoa Hình 1.2 Một số hình thái Bảy hoa Việt Nam Hình 1.3 Cấu trúc đoạn DNA mang vùng gen ITS 15 Hình 2.1 Mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn 22 Hình 3.1 Hình thái mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn trồng vườn trường Đại học Sư phạm 26 Hình 3.2 Hình ảnh giải phẫu cuống mẫu Bảy hoa 28 Hình 3.3 Hình ảnh giải phẫu thân Bảy hoa 29 Hình 3.4 Hình ảnh giải phẫu rễ Bảy hoa 30 Hình 3.5 Hình ảnh kết tách chiết DNA tổng số gel agarose 1% 31 Hình 3.6 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen matK từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 31 Hình 3.7 Kết phân tích gen matK BLAST NCBI 32 Hình 3.8 Trình tự đoạn gen matK mẫu thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 32 Hình 3.9 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa đoạn gen matK mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 33 Hình 3.10 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen ITS từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 34 Hình 3.11 Kết phân tích BLAST trình tự nucleotide vùng gen ITS NCBI 34 Hình 3.12 Trình tự vùng gen ITS mẫu thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 35 Hình 3.13 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa vùng gen ITS mẫu nghiên cứu 36 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Bảy hoa tên gọi chung thơng dụng Việt Nam nhiều lồi thuộc chi Paris Bảy hoa gọi củ rắn cắn, hưu túc nhiều lá, hưu túc vân nam, trọng lâu hải nam … thuộc loại dược liệu quý có nguy tuyệt chủng cần bảo vệ Việt Nam Theo Nguyễn Tâp (2004, 2007), nhiều loài thuộc chi Paris nằm sách đỏ Việt Nam cấp độ đánh giá theo IUCN (International Union for Conservation of Nature) mức nguy cấp (tiếng Anh: Endangered, viết tắt EN) nguy cấp (tiếng Anh: Vulnerable, viết tắt VU) [20], [21] Cây Bảy hoa có khả chữa trị nhiều bệnh từ bệnh thông thường sốt nóng, sốt rét, mụn nhọt, chữa ho…đến bệnh nan y như: rắn độc cắn, ung thư… Vì vậy, Bảy hoa đối tượng nghiên cứu nhiều nhà khoa học Trên giới, chi Paris có 22 lồi nhiều thứ [56] Ở Việt Nam tìm thấy chủ yếu vùng núi phía Bắc, số tỉnh: Lào Cai, Hà Giang, Lai Châu, Cao Bằng, Hịa Bình Cây sống điều kiện núi cao, nhiệt độ lạnh, sống tán rừng Mỗi năm hoa lần vào khoảng tháng -6, tạo vào khoảng tháng 7-11 sau lụi đi, thời gian ủ đơng lâu Các loài chi Paris đa dạng có tương đồng cao hình thái Năm 2016, Nguyen Quynh Nga đtg thiết lập khóa phân loại việc mơ tả hình thái, giải phẫu loài (species) thứ (varieties) Việt Nam [43] Có thể nhận diện thực vật nhiều phương pháp khác Các phương pháp thường dùng nghiên cứu so sánh đặc điểm hình thái, giải phẫu, sinh lý, hóa sinh hướng nghiên cứu thành công số đối tượng trồng Hà thủ ô đỏ [9], Sóng rắn [28], Phong lữ thảo [6]… Tuy nhiên, phương pháp nhận diện hiệu khơng cịn ngun vẹn Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Công nghệ sinh học đại phát triển bổ sung vào hệ thống phân loại phương pháp nhận diện dựa vào thị phân tử Trong đó, mã vạch DNA lựa chọn phương tiện nhận biết Một số mã vạch DNA nghiên cứu ứng dụng có hiệu phân loại dược liệu matK, rpoC1, trnH-psbA, ITS, rbcL… Theo đó, gen matK nằm lục lạp xác định mang lại thành tựu định nhận diện trồng [37],… Vùng gen ITS nằm nhân tế bào, bao gồm trình tự ITS15.8S-ITS2 đối tượng nghiên cứu nhiều định danh thực vật Các nghiên cứu xác định mối quan hệ lồi thực vật dựa trình tự vùng gen ITS gỗ Sưa, gỗ Trắc, gỗ Cẩm lai [18], hay các chi Erica [45], Scrophularia [48], Potamogeto [55] nhiều thực vật khác minh chứng cho vai trò vùng gen ITS nhận diện trồng [34], [53]… Huyện Bắc Sơn huyện miền núi tỉnh Lạng Sơn, thuộc vùng Đông Bắc Việt Nam Phía Tây huyện Bắc Sơn giáp huyện Võ Nhai tỉnh Thái Nguyên Ở có nhiều núi cao từ 500 m đến 1000 m so với mặt nước biển, phát có có mặt Bảy hoa [57], [59] Xuất phát từ lý trên, lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn” Mục tiêu nghiên cứu Mơ tả đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn Nội dung nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 3.2 Nghiên cứu đặc điểm trình tự vùng ITS, đoạn gen matK từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Bảy hoa 1.1.1 Vị trí Bảy hoa hệ thống phân loại Paris tên gọi chung chi thực vật có hoa, mơ tả Linnaeus từ năm 1753 [12] Đến nay, việc phân loại chi Paris chưa có thống Dưới dây cách phân loại sử dụng: (1) Theo hệ thống phân loại Takhtajan (1987), vị trí phân loại chi Paris thuộc phân giới thực vật bậc cao; ngành Ngọc lan (Magnoliophyta); lớp Hành (Liliopsida); phân lớp Loa kèn (Lilidae); Củ nâu (Dioscoreales); họ Bảy hoa (Trọng lâu) (Trilliaceae), chi Bảy hoa, Tảo hưu (Paris) [4] (2) Thực vật chí Trung Quốc (năm 2000) mơ tả hình thái xếp chi Paris vào họ Loa kèn (Liliaceae) với 22 loài (species) 16 thứ (variety-var.) có 12 lồi đặc hữu [40] (3) Theo hệ thống phân loại APG III - Angiosperm Phylogeny Group - (năm 2009) dựa dẫn liệu sinh học phân tử, chi Paris (chi Trọng lâu) xếp vào họ Hắc dược hoa (Melanthiaceae) với tổng số 26 loài 13 thứ [56] Chi Paris phân bố chủ yếu châu Âu châu Á, đặc biệt tập trung nhiều Trung Quốc Theo tạp chí “Flora of China” (2000), chi Paris mơ tả gồm 22 lồi với nhiều thứ khác Trong chi Paris, Paris polyphylla Smith lồi tìm thấy sớm (năm 1813) Lồi cơng bố chi tiết có tới 10 thứ [40] Mười thứ (variety) thuộc chi Paris gồm: 1) Paris polyphylla var polyphylla (tên tương ứng Daiwa polyphylla Sm.); 2) Paris polyphylla var yunanensis; 3) Paris polyphylla var chinensis; 4) Paris polyphylla var nana; Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 5) Paris polyphylla var alba; 6) Paris polyphylla var stenophylla; 7) Paris polyphylla var minor; 8) Paris polyphylla var latifolia; 9) Paris polyphylla var pseudothibetica; 10) Paris polyphylla var kwantungensis 1.1.2 Đặc điểm thực vật học Bảy hoa Bảy hoa thân cỏ năm Một Bảy hoa hoàn chỉnh gồm phần: rễ, thân củ, thân thảo, lá, hoa/quả [12], [21], [40], [43] Một số quan Bảy hoa mơ tả hình 1.1 d Quả hạt a Hoa b Lá e Thân củ f Rễ c Thân cỏ Hình 1.1 Hình ảnh quan Bảy hoa (Hình ảnh sản phẩm nhiệm vụ quỹ GEN cấp Bộ GD-ĐT giai đoạn 2016-2019) Thân cỏ phần thân nằm mặt đất, thường lụi vào cuối thu Kiểu thân cỏ khơng có cấu tạo thứ cấp [17] Thân cỏ Bảy hoa cao hàng chục cm đến hàng trăm cm (Paris dunniana cao 1,5-3 m) Thân cỏ thon dài, trơn nhẵn, mọng nước, khơng có cành, phía gốc có số thối hố thành vẩy, bao lấy thân Giữa thân có tầng mọc vịng khoảng đến 12 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn lá, đa số lồi có từ đến Cuống dài 2-3 cm, màu tím Phiến hình mác, hình trứng, bầu dục… dài 20-23 cm, rộng 6-7 cm Đầu phiến nhọn, mặt màu xanh đậm, mặt màu nhạt [40] Mỗi có hoa mọc đỉnh Mỗi hoa có cuống dài hàng chục cm Hoa có đầy đủ phần đài, tràng, nhị, nhụy Quả Bảy hoa đơn, có mầu Vỏ màu xanh, chín vỏ có màu xám- đen Quả chín tự mở vỏ hạt ngồi Hạt bảy hoa thuộc kiểu hạt có nội nhũ Hạt gồm có vỏ màu đỏ bao bọc phơi nội nhũ (hình 1.1 d) Về mặt lý thuyết, hạt kiểu này, phơi thường nhỏ, đơi cịn chưa có phân hóa hồn tồn [17] Thân củ phần nằm mặt đất Thân củ Bảy hoa có chứa chất dự trữ để sử dụng hoa, tạo quả, mọc chồi [17] Thân củ phình to, thường nằm ngang, năm có thêm đốt rõ ràng, màu xám đen Trên thân củ có mắt mang sẹo thối hóa, nách sẹo có chồi nách Cây Bảy hoa có kiểu rễ “cây có rễ phụ” [17] Rễ phụ mục từ thân củ Các rễ tương đối đồng kích thước, thường màu nâu có hình trụ Cây Bảy hoa thường mọc hoang khe núi ẩm ướt, có độ cao 600m ưa bóng, dọc theo bờ khe suối, đất ẩm nhiều mùn Trong tự nhiên, thường lớn có chiều dài thân rễ 5cm thấy có hoa, [30] 1.1.3 Giá trị y học Bảy hoa Theo y học cổ truyền, Bảy hoa có cơng dụng điều trị số bệnh nan y như: bệnh gan, ung thư phổi quản, ung thư biểu mô Thân rễ Bảy hoa có vị đắng, cay, tính lạnh, độc, có tác dụng lợi tiểu, tiêu đờm, nhiệt, giải độc, chữa sốt nóng, sốt rét, mụn nhọt, chữa ho… [23], [30] Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Ở Ấn Độ Nê-pan, thân rễ Bảy hoa trị giun sán cách uống bột thân rễ lần thìa cà phê, ngày lần, liền ngày Để trị mụn nhọt nhọt độc, ngày bôi bột nhão chế từ thân rễ Bảy hoa cách đặn Ngồi ra, thân rễ Bảy hoa cịn sử dụng để chống co thắt, dễ tiêu hóa dày, dùng làm thuốc long đờm, giải độc rắn cắn dùng để làm giảm ảnh hưởng thuốc mê [12] Một số thuốc quý tuyên truyền phổ biến dân gian để chữa bệnh Bảy hoa [58] * Chữa rắn độc cắn cách kết hợp thuốc uống đắp Theo đó, sử dụng thân rễ khoảng - g, Thanh mộc hương g, nhai sống uống với nước đun sơi để nguội Đắp ngồi cách dùng thuốc giã với dấm đắp lên vùng rắn cắn * Trị ung nhọt, áp xe vú, quai bị, lao hạch cổ: Dùng thân rễ 8g, Bồ công anh 40 g sắc lấy nước uống phần bã đắp bên ngồi vết thương * Trị viêm phế quản mạn tính: Dùng thân rễ nghiền thành bột, lần uống g với nước, ngày uống lần Kết nghiên cứu dược lý đại cho thấy thành phần Bảy hoa có Saponin dùng để hỗ trợ điều trị nhiều bệnh ung thư [38], [41], chống chất oxy hóa [49] Cơ chế chống ung thư dược chất Bảy hoa chưa rõ ràng, nhiên theo hướng saponin kích thích tế bào chết theo chương trình (apoptosis) [41] Bên cạnh saponin dược chất quan trọng, thân rễ Bảy hoa người ta phát thấy glucoside gọi paristaphin Khi thuỷ phân paristaphin cho glucose glucoside gọi paridin, thuỷ phân paridin, ta lại glucose chất nhựa gọi paridol [12] 1.1.4 Vấn đề bảo tồn Bảy hoa Cây Bảy hoa có địi hỏi riêng biệt điều kiện sống Theo đó, kết nghiên cứu cho thấy đa số loài phát mọc hoang Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn khe núi ẩm ướt, có độ cao so với mặt nước biển hàng trăm mét ưa bóng Ngồi ra, mọc dọc theo bờ khe suối, đất ẩm nhiều mùn, không chịu úng Phần thân mặt đất lụi hàng năm, thường vào cuối thu Thân rễ mang - chồi ngủ tồn qua mùa đông mọc lại vào mùa xuân năm sau Cây chưa trồng quy mô lớn mà phạm vi vườn thuốc số địa phương theo phương thức nhân giống hạt thân rễ Theo đó, hàng năm vào khoảng tháng 10 - 11, người ta thu chín, đem gieo vườn ươm phơi khơ để đến mùa xuân năm sau reo Mỗi có hoa, hoa có hạt nên hệ số nhân giống hạt không cao, nhiên hình thức để tái sinh tự nhiên Thân rễ Bảy hoa có nhiều đốt chứa mắt ngủ, tách đoạn để trồng Thời vụ trồng chủ yếu mùa xuân mùa thu [30] Ở Ấn độ, kế hoạch bảo tồn Paris polyphylla thiết lập Theo nhóm nghiên cứu Ấn Độ, lượng mưa yếu tố chi phối khu phân bố Paris polyphylla, nhiệt độ thích hợp với Paris polyphylla 19OC [42] Nghiên cứu Y Teerawatsakul đtg (2014) việc nuôi cấy chồi đỉnh Paris polyphylla chịu ảnh hưởng nhiệt độ, ni cấy chóp rễ với nhiệt độ thấp 14OC cao 18OC không làm biến đổi mẫu cấy Nhiệt độ thích hợp ni cấy chồi đỉnh (shoot tip) 14-160C, khoảng nhiệt độ sau 45 ngày nuôi cấy mẫu tăng 7,5 cm [54] Việc đánh giá phân hạng thuốc thuộc diện quý có nguy bị tuyệt chủng, cần bảo vệ Việt Nam Nguyễn Tập đề cập đến năm 2004, 2007 [20], [21] Theo đó, Việt Nam chi Paris thuộc họ Trọng lâu (Trilliaceae) có lồi danh lục đỏ cần bảo vệ trình bày bảng 1.1 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Bảng 1.1 Bảng danh lục đỏ thuốc thuộc chi Paris Việt Nam STT Tên khoa học Paris delavayi Franch Paris fargesii Franch (Paris petiolata Baker ex Wight var ramembnaceae Wight) Tên Việt Nam Trọng lâu dài Củ rắn cắn, Bảy hoa Paris hainanensis Merr Trọng lâu hải nam Paris polyphylla Smith Bảy hoa Paris yunnanensis Franch Trọng lâu vân nam Paris chinensis Franch A Trọng lâu tàu B A P fargesii [25]EB E F Phân hạng theo IUCN, 1994 C EN.A1c,d EN.A1c,d VU.B2a,b (ii,iii,v) EN.B2a,b (ii,iii,v) EN.B2a,b (ii,iii,v) VU.B2a,b (ii,iii,v) F vietnamensis [52]D P G Tài liệu tham khảo [20] [15] C G H Hình 1.2 Một số hình thái Bảy hoa Việt Nam (Hình ảnh thuộc sản phẩm nhóm nghiên cứu, nhiệm vụ quỹ GEN cấp giai đoạn 2016-2019) Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Cây Bảy hoa tìm thấy số tỉnh thành Việt Nam Sapa- Lào Cai, Cúc Phương- Ninh Bình, Đại Từ- Thái Nguyên, Tam Đảo - Phú Thọ xếp vào Sách Đỏ Việt Nam cấp độ đánh giá theo IUCN mức nguy cấp (tiếng Anh: Endangered, viết tắt EN) nguy cấp (tiếng Anh: Vulnerable, viết tắt VU) [4], [10], [12], [20], [21] Hiện số địa phương miền núi phía Bắc Lào Cai, Hà Giang, Lạng Sơn thành lập Ban đạo dự án sở phân tích điều kiện khí hậu, đối chiếu với đặc điểm sinh thái trồng nhằm đánh giá mức độ thích nghi số dược liệu điều kiện khí hậu Từ kết hợp với đánh giá tác động mơi trường phân tích chi phí lợi ích để đưa định hướng quy hoạch mở rộng diện tích số dược liệu vùng, có thảo dược Bảy hoa [2],[19], [57] 1.2 Một số phương pháp định danh thực vật 1.2.1 Phương pháp so sánh hình thái, giải phẫu Trong lịch sử phát triển thực vật học hình thái, giải phẫu thực vật phát triển tương đối sớm Từ năm 371-286 TCN, Theophraste gọi người sáng lập mơn thực vật học Ơng cơng bố dẫn liệu hình thái giải phẫu thể thực vật tác phẩm “Lịch sử thực vật”, “Nghiên cứu cỏ” [9] Phương pháp nghiên cứu chủ yếu thực vật quan sát, so sánh sở kiện ngồi thiên nhiên, sau tiến hành giải phẫu phịng thí nghiệm, so sánh mẫu thu thập khác lưu giữ, cuối phân tích, tổng hợp rút nhận xét Để phân biệt loại tế bào hay thành phần cấu tạo loại mô quan, thường lát cắt nhuộm màu tùy theo yêu cầu quan sát phần mà nhuộm màu cho phù hợp Trong phịng thí nghiệm thực vật, để nhận biết tế bào có vách celulose nhuộm đỏ carmin, tế bào có vách tẩm mộc tố nhuộm xanh với lục iod, nhân tế bào nhuộm hematoxylin…[17] Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Ở Việt Nam, thời Pháp hộ có cơng trình nghiên cứu giải phẫu gỗ H Lecomte sau miền Bắc giải phóng năm 1954 việc nghiên cứu giảng dạy hình thái giải phẫu ý nhiều trường phổ thông đại học Hiện ngày có nhiều cơng trình sâu tìm hiểu hình thái giải phẫu lồi thực vật, lồi thực vật có giá trị làm thuốc loài suy giảm nghiêm trọng số lượng, cần bảo tồn Năm 2015, “Nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu lồi Hà thủ ô đỏ (Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson) Việt Nam” Phạm Thanh Huyền đtg sử dụng phương pháp so sánh hình thái, đối chiếu khóa phân loại mơ tả thực vật chí để xác định tên khoa học mẫu Hà thủ đỏ [9] Theo đó, nghiên cứu 37 mẫu Hà thủ ô đỏ Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson thu 10 địa điểm thuộc tỉnh thành, nhóm nghiên cứu xác định Việt Nam có thứ loài Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson gồm: F multiflora var multiflora (Thunb.) Haraldson; F mutiflora var angulata (S.Y Liu) H J Yan, Z J Fang & S X Yu F multiflora var ciliinervis (Nakai) Yonek & H.Ohashi Nghiên cứu hình thái giúp tác giả xây dựng khóa phân loại cho thứ lồi Việt Nam Đã mơ tả chi tiết đặc điểm hình thái lồi Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson, thứ loài, với đặc điểm giải phẫu phận rễ, thân, Kết thu dẫn liệu bổ sung cho tài liệu nước loài Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson, đồng thời dẫn liệu khoa học phục vụ công tác bảo tồn, khai thác phát triển lồi Hà thủ đỏ - Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson để tạo nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc Việt Nam [9] Nghiên cứu đặc điểm thực vật Phong lữ thảo (Pelargonium hortorum L H Bailey) Tạ Lê Mai Hậu đtg (2016) lần mơ tả đầy đủ đặc điểm hình thái cấu tạo giải phẫu loài Phong lữ thảo Việt Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Nam, góp phần bổ sung thêm sở liệu lý lịch loài nghiên cứu, làm sở cho nghiên cứu ứng dụng từ lồi [6] Sóng rắn loài thuốc trồng mọc hoang dại nhiều nơi tỉnh Thái Nguyên Loài sử dụng vị thuốc y học dân gian để chữa số bệnh zona bệnh ngồi da phổ biến Với mục đích làm rõ đặc điểm nâng cao giá trị sử dụng loài này, nhóm nghiên cứu Nơng Thị Anh Thư đtg (2017) trường Đại học Y dược, Đại học Thái Nguyên thực đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng giảm đau, chống viêm dược liệu Sóng rắn thu hái Thái Nguyên” Nhóm nghiên cứu thu thập, xác định tên khoa học Sóng rắn thu Thái Nguyên Albizia myriophylla Benth., thuộc họ Trinh nữ (Mimosaceae), sở phân tích đặc điểm hình thái, giải phẫu thực vật Sóng rắn Thái Nguyên, giúp tránh việc nhầm lẫn thu hái loài làm dược liệu [28] Việc sử dụng phương pháp so sánh hình thái hỗ trợ nghiên cứu để định loài Trong nghiên cứu Đỗ Văn Hài đtg (2017) chi Bạch hạc (Rhinacanthus Nees) Việt Nam mô tả đặc điểm nhận biết chi, xây dựng khóa định loại lồi Rh calcaratus - Kiến cị móc Rh nastusus Kiến Nghiên cứu cung cấp thơng tin tóm tắt phân bố, sinh học sinh thái, mẫu nghiên cứu hình vẽ loài thuộc chi Việt Nam [5] Hay với nghiên cứu Bùi Hồng Quang đtg (2017) bổ sung thêm lồi vào khóa phân loại loài thuộc chi Ngân hoa (Silvianthus) Việt Nam Theo Phạm Hoàng Hộ (2000), Nguyễn Tiến Bân (2005), Việt Nam chi Silvianthus có lồi Silvianthus tonkinensis (Gagnep.) Ridsdale Trong trình nghiên cứu mẫu vật chi Việt Nam, loài Silvianthus bracteatus Hook f trước ghi nhận có Ấn Độ, Mianma, Trung Quốc (Vân Nam), nhóm nghiên cứu phát có phân bố Thanh Hóa (Khu BTTN Pù Hu), Nghệ An (VQG Pù Mát), Việt Nam Kết nghiên cứu xác định loài bổ sung thêm vào hệ thực vật Việt Nam [16] Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ... đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn Nội dung nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng. ..ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN,... mặt Bảy hoa [57], [59] Xuất phát từ lý trên, lựa chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn? ?? Mục tiêu nghiên cứu