Đang tải... (xem toàn văn)
ĐỘT BIẾN GEN BETA GLOBIN Ở BỆNH NHI BETA THALASSEMIA MIỀN BẮC VIỆT NAM Nguyễn Hoàng Nam, Dương Bá Trực Bệnh viện Nhi trung ương HNNKTQ TpHCM 30/11 1/12 18 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 2 • Beta thalassemia là bệnh di[.]
ĐỘT BIẾN GEN BETA-GLOBIN Ở BỆNH NHI BETA-THALASSEMIA MIỀN BẮC VIỆT NAM Nguyễn Hoàng Nam, Dương Bá Trực Bệnh viện Nhi trung ương HNNKTQ TpHCM 30/11-1/12-18 ĐẶT VẤN ĐỀ • Beta-thalassemia bệnh di truyền phổ biến Việt Nam, giảm hay không tổng hợp mạch beta globin Hb, đột biến gen beta-globin • Nghiên cứu đột biến gen beta-globin gây betathalassemia giúp ích cho việc tư vấn di truyền, chẩn đoán trước sinh • Mục tiêu nghiên cứu: “ Nghiên cứu số đặc điểm đột biến gen beta-globin bệnh nhân beta-thalassemia phía bắc Việt Nam ” ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu • 104 bệnh nhân đủ tiêu chuẩn chẩn đoán : 55 betathalassemia, 49 beta-thalassemia / HbE vào Bệnh viện Nhi trung ương • Tuổi - Dưới tuổi : 89 (85,6%), < tuổi 50 (44,4%) - Từ 5-10 tuổi : 12 (11,5%) - Từ 10-15 tuổi : ( 2,9%) • Giới : • Dân tộc Nam / Nữ : 59/45 (1,3/1) - Kinh : 71 (68,3%), - Ít người gồm Thái, Tày, Mường, Nùng, Sán Dìu, Dao, Bố Y : 33 (31,7%) • Địa phương : Hà Nội 28 tỉnh thành miền bắc Phương pháp nghiên cứu • Nghiên cứu tiến cứu, mơ tả, phân tích, cắt ngang kỹ thuật lâm sàng xét nghiệm, BVNTƯ • Phát đột biến gen Khoa Sinh học phân tử, BVNTƯ : - Tách DNA từ máu ngoại biên với kít QIA gen DNA Đức - Sử dụng kỹ thuật Multiplex ARMS-PCR phát đột biến điểm thường gặp Châu Á CD41/42, CD17, IVS1-1, -28, IVS2-654, CD71/72, IVS1-5, CD95, CD26 (HbE) - Giải trình tự gen khơng thấy đột biến với Multiplex ARMS-PCR - Sử dụng kỹ thuật GAP-PCR để phát đột biến xóa đoạn cần Sơ đồ quy trình phát đột biến gen β-globin Bệnh nhân β-thalassemia Thu thập mẫu máu tách DNA Phát đột biến gen Multiplex PCR ARMS-PCR Có đột biến gen Xác định kiểu gen đột biến: Dị hợp tử, đồng hợp tử Không thấy đột biến gen Giải trình tự gen Có đột biến gen Phát đột biến xóa đoạn GAP- PCR Một số đột biến gen -globin phát kỹ thuật ARMS Nội kiểm -28 17 654 Nội kiểm 43 71-72 Panel 1: 1-6 1: Dị hợp tử -28 2: Dị hợp tử kép -28/71-72 3: Dị hợp tử Codon 17 4: Dị hợp tử Codon 43 5: Thang DNA 100 bp 6: Mẫu nội kiểm không DNA Panel 2: 7-8 7: Di hợp tử IVS 2-654 8: Mẫu nội kiểm khơng DNA Phân tích đột biến gen theo chức vị trí ĐỘT BIẾN SAO MÃ (Kiểu hình β+- thalassemia) - Vùng khởi động (promotor) - Vị trị 5’UTR (5’ - Vùng không phiên mã) ĐỘT BIẾN HỒN THIỆN RNA (Kiểu hình β+ hay β0-thalassemia) - Vị trí nối (splice junction) - Vị trí nối địng thuận (consensus splice site) - Exon - Intron - Vị trí 3’UTR ĐỘT BIẾN DỊCH MÃ RNA (Kiểu hình β0-thalassemia) - Codon khởi đầu (Initiation Codon) - Codon vô nghĩa (Nonsense Codon) - Dịch khung (Frameshift) KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘT BIẾN GEN β-GLOBIN GÂY BETA-THALASSEMIA Đã phát 208 alen đột biến gen 104 bệnh nhân β-thalasemia Đột biến gen β – globin β – thalassemia CD 41/42 (-TCTT) CD 17 (AA – TAG) CD 26 (GAG – AAG) CD 71/72 (+ A) IVS -654 (C – T) - 28 (A – G) - 88 (C – T) CD95 (TAC – TAA) IVS – (G – T) IVS 1- (G – C) Các đột biến gặp c-140 (C – T) c-441-c442 ins AC 2.3kb – deletion Tổng Kiểu hình β0 β0 HbE β0 β+ β+ β++ β0 β0 β0 β+ Số alen đột biến 63 62 49 10 6 2 1 208 Tỷ lệ % 30,3 30,0 23,5 4,8 2,9 2,9 1,4 1,0 1,0 1,0 1,4 0,5 0,5 0,5 100 35 30 25 20 15 10 Các đột biến gen β -globin phát 104 bệnh nhân Phân bố đột biến gen beta-globin theo dân tộc Khác Đột biến gen β – globin CD41/42 CD17 CD26 CD71/72 IVS 2-654 - 28 - 88 CD95 IVS 1-1 I VS 1-5 Đột biến gặp Cộng Kinh n 43 41 33 3 2 1 142 % 30,3 29,9 23,2 5,6 3,5 2,1 5,6 1,4 1,4 0,7 0,7 100 Tày n 10 1 0 0 20 (Mường, Nùng, Sán Dìu, Dao, Bổ Y) Thái % 50 30 5 5 100 n 6 12 0 0 0 0 24 % 25 25 50 100 n 1 0 1 22 % 18,2 40,9 13,7 4,5 4,5 9,1 4,5 4,5 100 ...ĐẶT VẤN ĐỀ • Beta- thalassemia bệnh di truyền phổ biến Việt Nam, giảm hay không tổng hợp mạch beta globin Hb, đột biến gen beta- globin • Nghiên cứu đột biến gen beta- globin gây betathalassemia... điểm đột biến gen beta- globin bệnh nhân beta- thalassemia phía bắc Việt Nam ” ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu • 104 bệnh nhân đủ tiêu chuẩn chẩn đoán : 55 betathalassemia, 49 beta- thalassemia. .. DNA Phát đột biến gen Multiplex PCR ARMS-PCR Có đột biến gen Xác định kiểu gen đột biến: Dị hợp tử, đồng hợp tử Không thấy đột biến gen Giải trình tự gen Có đột biến gen Phát đột biến xóa đoạn GAP-