ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠ[.]
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO Chun ngàng: Hóa Phân tích Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS HỒNG THỌ TÍN Hà Nội - Năm 2011 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung 1.1.1 Giới thiệu kháng sinh 1.1.2 Giới thiệu cloramphenicol 1.1.2.1 Giới thiệu chung 1.1.2.2 Tính chất hóa lý 1.1.2.3 Dƣợc lý chế tác dụng 1.1.2.4 Sản xuất 10 1.2 Giới thiệu phƣơng pháp von-ampe 10 1.2.1 Giới thiệu chung 10 1.2.2 Các cực làm việc thƣờng dùng phƣơng pháp von-ampe 11 1.2.3 Các kỹ thuật ghi đƣờng von-ampe 13 1.2.3.1 Kỹ thuật von-ampe xung vi phân 13 1.2.3.2 Kỹ thuật von-ampe sóng vng 15 1.3 Một số phƣơng pháp xác định cloramphenicol 1.3.1 Phƣơng pháp sắc kí 16 16 1.3.1.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng 16 1.3.1.2 Phƣơng pháp sắc kí khí 18 1.3.2 Phƣơng pháp quang 18 1.3.3 Phƣơng pháp điện hóa 19 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 1.3.3.1 Cực phổ xung vi phân 19 1.3.3.2 Cực phổ sóng vng 20 1.3.3.3 Phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng đầu dò vi sợi cacbon 20 1.3.4 Một số phƣơng pháp khác Chƣơng 2: 21 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Nội dung nghiên cứu 22 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Tiến hành thí nghiệm theo phƣơng pháp von-ampe xung vi phân 23 2.2.2 Ghi đƣờng von-ampe 23 2.2.3 Các yếu tố đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 23 2.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 25 2.3.1 Thiết bị dụng cụ 25 2.3.2 Hóa chất 26 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát đáp ứng điện hóa cloramphenicol HMDE 28 28 3.2 Khảo sát tính chất điện hóa cloramphenicol số 30 3.3 Khảo sát ảnh hƣởng pH nồng độ dung dịch đệm 33 3.3.1 Ảnh hƣởng pH 33 3.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ dung dịch đệm 34 3.4 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ quét 35 3.5 Khảo sát ảnh hƣởng oxi 38 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng chất hữu 40 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 3.6.1 Ảnh hƣởng axit oxalic 40 3.6.2 Ảnh hƣởng axit citric 41 2.6.3 Ảnh hƣởng glucozơ 42 3.7 Ảnh hƣởng ion vô 43 3.7.1 Ảnh hƣởng ion Na+ (K+) 43 3.7.2 Ảnh hƣởng ion Ca2+ 44 3.7.3 Ảnh hƣởng ion Fe3+ 45 3.8 Khảo sát khoảng tuyến tính xây dựng đƣờng chuẩn 45 3.9 Sai số phép đo, độ lặp lại phép đo, độ 48 3.10 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 50 3.11 Ứng dụng xác định cloramphenicol mẫu thực tế 51 3.11.1 Kỹ thuật xử lý mẫu thực tế 51 3.11.2 Phƣơng pháp xử lý kết 51 3.11.3 Xác định cloramphenicol mẫu thực tế 51 3.11.3.1 Mẫu thuốc nhỏ mắt 51 3.11.3.2 Mẫu thuốc viên 250mg 53 3.11.3.3 Mẫu thuốc tiêm 54 2.12 So sánh kết đối chứng 55 KẾT LUẬN 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 „ Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc hóa học cloramphenicol Hình 1.2: (a) Sự biến thiên thời gian, (b) Dạng đƣờng von-ampe 14 kỹ thuật von-ampe xung vi phân Hình 1.3: (a) Sự biến thiên thời gian, (b) Dạng đƣờng von-ampe 16 kỹ thuật von-ampe sóng vng Hình 2.1: Thiết bị phân tích điện hóa 757VA Metrohm 26 Hình 3.1: Đƣờng qt von-ampe vịng cloramphenicol nồng độ 29 2,5ppm axetat 0,1M pH 5,5 Hình 3.2: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol nồng độ 2,5ppm 31 khác Hình 3.3: Đƣờng quét xung vi phân (a) đồ thị (b) biểu diễn ảnh 34 hƣởng pH đến giá trị chiều cao pic cloramphenicol đệm axetat Hình 3.4: Đƣờng quét von-ampe vòng cloramphenicol nồng độ 37 2,5ppm axetat tốc độ quét khác Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn mối quan hệ chiều cao pic 37 cloramphenicol tốc độ quét Hình 3.6: Đƣờng quét xung vi phân (a) cloramphenicol, oxi hỗn 38 hợp chúng (b) ảnh hƣởng thời gian xục khí Hỉnh 3.7: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 40 axit oxalic tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.8: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt axit citric tỷ lệ nồng độ khác 40 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Hình 3.9: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 42 glucozơ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.10: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 43 ion Na+ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.11: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 44 ion Ca2+ tỷ lệ nồng độ khác HÌnh 3.12: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 45 ion Fe3+ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.13: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol 11 mức nồng 46 độ khác Hình 3.14: Đồ thị xây dựng đƣờng chuẩn 11 mức nồng độ 47 Hình 3.15: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu 52 thuốc nhỏ mắt HÌnh 3.16: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu 53 thuốc viên nén Hình 3.17: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu thuốc tiêm 55 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Các tính chất vật lý hóa học cloramphenicol Bảng 3.1: Giá trị Ep Ip cloramphenicol 2,5ppm số 31 khác Bảng 3.2: Ảnh hƣởng pH đến chiều cao pic cloramphenicol 33 đệm axetat Bảng 3.3: Giá trị Ip cloramphenicol nồng độ đệm 35 axetat pH 5,5 khác Bảng 3.4: Giá trị Ipa Ipc thay đổi theo tốc độ quét 36 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng thời gian xục khí N2 39 Bảng 3.6: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt axit oxalic 40 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.7 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt axit citric 41 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.8 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt glucozơ 42 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.9: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Na+ 43 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.10 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Ca2+ 44 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.11: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Fe3+ 45 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.12: Giá trị Ip cloramphenicol 11 mức nồng độ 45 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Bảng 3.13: Giá trị b‟ kiểm tra hệ số phƣơng trình hồi quy 47 Bảng 3.14: Các giá trị liên quan đến hệ số b‟ 47 Bảng 3.15: Các giá trị dùng để khảo sát độ hệ số a 47 Bảng 3.16: Số liệu đánh giá sai số đƣờng chuẩn 48 Bảng 3.17: Các số liệu thống kê đánh giá độ phƣơng pháp 49 Bảng 3.18: Các giá trị thống kê độ xác phƣơng pháp 50 Bảng 3.19: Giá trị Ip 10 mẫu cloramphenicol 1,5ppm 50 Bảng 3.20: Số liệu thống kê giá trị Ip 10 mẫu cloramphenicol 50 1,5ppm Bảng 3.21: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt 52 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.22: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt 52 Bảng 3.23: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc viên nén 53 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.24: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc viên nén 54 Bảng 3.25 Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc tiêm 54 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.26: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc tiêm 55 Bảng 3.27: Tổng hợp so sánh kết phân tích mẫu 56 MỞ ĐẦU Ngày nay, sống đại đòi hỏi ngƣời phải lao động cƣờng độ cao Thêm vào đó, mơi trƣờng sống nhiễm nguyên nhân khiến tỉ lệ mắc bệnh nấm khuẩn ngƣời ngày tăng Việc nghiên cứu thuốc chữa trị loại bệnh đƣợc quan tâm ý Kháng sinh chất có khả ức chế tiêu diệt số loài nấm, vi khuẩn gây bệnh cho ngƣời sinh vật Vì loại thuốc kháng sinh đóng vai trò quan trọng việc bảo vệ nâng cao sức khỏe sinh vật nói chung ngƣời nói riêng Hoạt động kiểm sốt hàm lƣợng thuốc kháng sinh đƣa vào thể cho phù hợp với mức độ nhiễm khuẩn đóng vai trị định pháp đồ điều trị bệnh Do đó, việc xác định đƣợc xác hàm lƣợng thuốc điều cần thiết Hiện nay, có nhiều phƣơng pháp đƣợc dùng để xác định hàm lƣợng kháng sinh Trong số đó, phƣơng pháp cực phổ đƣợc đánh giá phƣơng pháp có nhiều thuận lợi, đặc biệt chất kháng sinh có tính điện hoạt nhƣ cloramphenicol Việc nghiên cứu xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol đƣợc nghiên cứu nhiều giới nhƣ nƣớc Tuy nhiên phƣơng pháp chủ yếu đƣợc nghiên cứu phƣơng pháp sắc ký phƣơng pháp quang Trong luận văn này, tiến hành nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp cực phổ với kỹ thuật đo xung vi phân để xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol số loại dƣợc phẩm khác nhau, dạng dung dịch nhƣ dạng bột Sóng cực phổ cloramphenicol sóng cực phố anot, xuất pic nằm xung quanh vị trí 0V, bị ảnh hƣởng hóa chất khác Việc sử dụng phƣơng pháp cực phổ lần khẳng định tính ƣu việt phƣơng pháp phân tích điện hóa, cho phép xác định nhanh hàm lƣợng chất, việc xử lý mẫu trƣớc tiến hành đo đơn giản tránh làm chất q trình phân tích Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung 1.1.1 Giới thiệu kháng sinh Kháng sinh chất có khả ức chế tiêu diệt số loài nấm, vi khuẩn gây bệnh cho ngƣời sinh vật Thuốc kháng sinh thƣờng đƣợc chiết suất từ môi trƣờng nuôi cấy vi sinh vật (nấm, vi khuẩn) Ngày với cơng nghệ phát triển, thuốc kháng sinh cịn đƣợc tổng hợp phƣơng pháp hóa học [8] Phân loại: Hiện có khoảng 12000 chủng loại kháng sinh khác [8], chúng đƣợc chia thành 10 nhóm [29] - Nhóm phenicol: cloramphenicol, Thiaphenicol, Florphenicol, Florfenicol amin… - Nhóm sulfonamide: Sulfadimethoxine, Sulfamethoxipyridine, Sulfamoxole, Sulfisoxazole, Sulfixomidine, Sulfamethazine, Sulfamethoxazole… - Nhóm β-lactam: Peneciline, Amoxilline, Cloxacilline, Penicilline G, Cephalosporin, Cètazidime… - Nhóm quinolone: Nalidixic acid, Danofloxacin, oxonilic acid, Ciprofloxacin, Norfloxacine…N - Nhóm Tetracyline: Tetracyline, Oxy Tetracyline, Clortetracyline… - Nhóm amino Glycoside: Gentamicin, Gentamicin C, Spectinomycin, Hygromycin B, Treptomicin, Dihydrotreptomicin… - Nhóm ionorphore polyether: Semduramicin, Monensin, Salinomycine, Narasine… - Nhóm Macrolide: Erythromycine A, Cladonose, Spiramicin, Neospiramycin, Tylosine… - Nhóm Nitrofuran: Furazolidone, Nitrofurazone, Furaltadone,… Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 - Nhóm Miscellaneous: N-acylamico dilactone, 4-butyrolactiones, Antimycin A… 1.1.2 Giới thiệu cloramphenicol 1.1.2.1 Giới thiệu chung [1,2,11,12,13] Cloramphenicol kháng sinh thuộc nhóm phenicol, ban đầu đƣợc phân lập từ Streptomyces venezuelae vào năm 1947, đƣợc sản xuất phƣơng pháp tổng hợp Cloramphenicol thƣờng có tác dụng kìm khuẩn, nhƣng diệt khuẩn nồng độ cao vi khuẩn nhạy cảm cao Tên quốc tế cloramphenicol 2,2-dichloro-N-[1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide Cloramphenicol có cơng thức hóa học cấu trúc nhƣ sau Hình 1.1 Cấu trúc hóa học cloramphenicol [12] Cloramphenicol đƣợc tìm thấy vào năm 1948 chống lại bệnh sốt phát ban có hiệu trở thành kháng sinh trải qua quy mô sản xuất lớn Đến năm 1950, cộng đồng y khoa nhận thức đƣợc thuốc gây thiếu máu bất sản nghiêm trọng có khả gây tử vong, nhanh chóng bị ghét bỏ Cloramphenicol đƣợc sử dụng Hoa Kỳ chỉ để chống lại nhiễm trùng nghiêm trọng mà kháng sinh khác hiệu bị chống định Cloramphenicol đƣợc liệt kê Báo cáo thường niên lần thứ chất gây ung thư vào năm 1980 nhƣ chất gây ung thƣ cho ngƣời (NTP 1980) Danh sách dựa báo cáo nghiên cứu trƣờng hợp thiếu máu bất sản ngƣời sử dụng cloramphenicol kéo theo phát triển bệnh bạch cầu Cloramphenicol đƣợc sửa lại kể từ Báo cáo thường niên lần thứ hai chất gây Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 ung thư vào năm 1981 dựa đánh giá lại Cơ quan Nghiên cứu Ung thƣ Quốc tế (IARC) thuốc IARC kết luận liệu gây ung thƣ cloramphenicol ngƣời không đủ sức mạnh để làm chứng khơng có liệu thực nghiệm động vật (IARC 1976) IARC xem xét cloramphenicol lần vào năm 1987 vào năm 1990 kết luận có chứng định để kết luận chất gây ung thƣ động vật thực nghiệm nhƣng khả ngƣời hạn chế Trong tổng thể đánh giá, IARC lƣu ý cloramphenicol gây bệnh thiếu máu bất sản điều điều kiện liên quan đến xuất bệnh bạch cầu Đánh giá tổng thể IARC, cloramphenicol chất gây ung thƣ cho ngƣời thuộc Nhóm 2A (1987 IARC, 1990) [13] 1.1.2.2 Tính chất hóa lý Cloramphenicol tồn nhƣ tinh thể hình kim kéo dài, nhìn mắt thƣờng dạng bột mịn màu trắng xám, trắng vàng trắng, với nhiệt độ nóng chảy vào khoảng 150,5oC đến 151.5oC Nó thăng hoa chân khơng cao nhạy cảm với ánh sáng Các nhóm nitro dễ dàng khử thành nhóm amin Tính chất điện hóa cloramphenicol đƣợc thể cách rõ ràng vị trí cấu trúc này: → Trong chất đồng phân lập thể, có dạng αR, βR (hay cịn gọi dạng D) có hoạt tính (IARC 1990) Các thuộc tính vật lý hóa học cloramphenicol đƣợc liệt kê Bảng 1.1.[13] Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Bảng 1.1: Các tính chất vật lý hóa học cloramphenicol Tính chất Khối lƣợng phân tử Màu sắc Vị Trạng thái vật lý Nhiệt độ nóng chảy Thơng tin Tài liệu tham khảo Budavari et al 1996, Chemfinder 323,1322 g/mol 2000 Trắng xám trắng Budavari et al 1996, CRC 1998, vàng Chemfinder 2000 Đắng HSDB 1995 Tinh thể hình kim Budavari et al 1996, Chemfinder kéo dài, bột tinh thể 2000 150,5oC - 151.5oC Budavari et al 1996, HSDB 1995 Trung tính giấy pH quỳ HSDB 1995 1,73.10-12 mmHg HSDB 1995 1,6 – 4,6 HSDB 1995 Nƣớc 25oC Tan ít, 2,5 mg/mL Chemfinder 2000, HSDB 1995 Propylen 150,8 mg/mL HSDB 1995 5% HSDB 1995 50% acetamit Tan HSDB 1995 Clorofom Tan tốt HSDB 1995 Methanol Tan tốt HSDB 1995 Áp suất bay Thời gian bán hủy thể ngƣời Tính tan glycol Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Etanol Tan tốt HSDB 1995 Butanol Tan tốt HSDB 1995 Etyl acetat Tan tốt HSDB 1995 Axeton Tan HSDB 1995 Ete Không tan HSDB 1995 Benzen Không tan HSDB 1995 Ete dầu hỏa Không tan HSDB 1995 Dầu thực vật 1.1.2.3 Dược lý chế tác dụng[1,2,11] Cloramphenicol thƣờng có tác dụng kìm khuẩn, nhƣng diệt khuẩn nồng độ cao vi khuẩn nhạy cảm cao Vì cloramphenicol loại kháng sinh chế tác dụng khơng nawmg ngồi quy luật chung kháng sinh khác nên trƣớc hết cần tìm hiểu chế tác động chung kháng sinh, cụ thể nhƣ sau: • Ức chế q trình tổng hợp vách vi khuẩn (vỏ) vi khuẩn Các nhóm kháng sinh gồm có penicillin, bacitracin, vancomycin Do tác động lên trình tổng hợp vách nên làm cho vi khuẩn dễ bị đại thực bào phá vỡ thay đổi áp suất thẩm thấu • Ức chế chức màng tế bào Các nhóm kháng sinh gồm có : colistin, polymyxin, gentamicin, amphoterricin Cơ chế làm chức màng làm cho phân tử có khối lƣợng lớn ion bị ngồi • Ức chế q trình sinh tổng hợp protein - Nhóm aminoglycosid gắn với receptor tiểu phân 30S ribosome làm cho q trình dịch mã khơng xác Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 - Nhóm chloramphenicol gắn với tiểu phân 50S ribosome ức chế enzyme peptidyltransferase ngăn cản việc gắn acid amin vào chuỗi polypeptide - Nhóm macrolides lincoxinamid gắn với tiểu phân 50S ribosome làm ngăn cản trình dịch mã acid amin chuỗi polypeptide • Ức chế q trình tổng hợp acid nucleic - Nhóm refampin gắn với enzyme RNA polymerase ngăn cản q trình mã tạo thành mRNA (RNA thơng tin) - Nhóm quinolone ức chế tác dụng enzyme DNA gyrase làm cho hai mạch đơn DNA duỗi xoắn làm ngăn cản q trình nhân đơi DNA - Nhóm sulfamide có cấu trúc giống PABA (p aminobenzonic acid) có tác dụng cạnh tranh PABA ngăn cản q trình tổng hợp acid nucleotid - Nhóm trimethoprim tác động vào enzyme xúc tác cho trình tạo nhân purin làm ức chế trình tạo acid nucleic Đối với Cloramphenicol, chế kháng khuẩn đƣợc cụ thể hóa qua việc ức chế sinh tổng hợp protein vi khuẩn nhạy cảm cách gắn vào tiểu thể 50S ribosom Thuốc có vị trí tác dụng với erythromycin, clindamycin, lincomycin, oleandomycin troleandomycin Cloramphenicol ức chế tổng hợp protein tế bào tăng sinh nhanh động vật có vú Cloramphenicol gây ức chế tủy xƣơng khơng hồi phục đƣợc Cloramphenicol có hoạt tính ức chế miễn dịch cho dùng tồn thân trƣớc kháng ngun kích thích thể Tuy vậy, đáp ứng kháng thể không bị ảnh hƣởng đáng kể dùng cloramphenicol sau kháng nguyên Nhiều vi khuẩn có kháng thuốc cao với cloramphenicol Việt Nam thuốc gần nhƣ khơng có tác dụng Escherichia coli, Shigella flexneri, Enterobacter spp., Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, Streptococcus Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 pneumoniae có tác dụng Streptococcus pyogenes Cloramphenicol khơng có tác dụng nấm Nói chung, cloramphenicol ức chế in vitro vi khuẩn nhạy cảm nồng độ 0,1 - 20 microgam/ml Kháng thuốc Tỷ lệ kháng thuốc cloramphenicol, thử nghiệm in vitro Việt Nam năm 1998: Shigella flexneri (85%), Escherichia coli (83%), Enterobacter spp (80%), Staphylococcus aureus (64%), Salmonella typhi (81%), Streptococcus pneumoniae (42%), Streptococcus pyogenes (36%),Haemophilus influenzae (28%) Thử nghiệm in vitro cho thấy kháng thuốc cloramphenicol tăng dần bƣớc Sự kháng thuốc sử dụng mức đƣợc lan truyền qua plasmid Sự kháng thuốc số thuốc kháng khuẩn khác, nhƣ aminoglycosid, sulfonamid, tetracyclin, đƣợc lan truyền plasmid Dƣợc động học Cloramphenicol đƣợc hấp thu nhanh qua đƣờng tiêu hóa Cloramphenicol palmitat thủy phân đƣờng tiêu hóa đƣợc hấp thu dƣới dạng cloramphenicol tự Ở ngƣời lớn khỏe mạnh, sau uống liều g cloramphenicol, nồng độ đỉnh cloramphenicol huyết tƣơng trung bình đạt khoảng 11 microgam/ml vịng - Ở ngƣời lớn khỏe mạnh uống liều g cloramphenicol bazơ, lần, tổng cộng liều, nồng độ đỉnh huyết tƣơng trung bình đạt khoảng 18 microgam/ml sau liều thứ trung bình đạt - 14 microgam /ml 48 Sau tiêm tĩnh mạch cloramphenicol natri sucinat, có khác đáng kể cá thể nồng độ cloramphenicol huyết tƣơng, tùy theo độ thải thận Khi tiêm tĩnh mạch liều g cloramphenicol natri sucinat cho ngƣời lớn khoẻ mạnh, nồng độ cloramphenicol huyết tƣơng xê dịch khoảng 4,9 - 12 microgam/ml sau giờ, - 5,9 microgam/ml sau Sau dùng chỗ mắt, cloramphenicol đƣợc hấp thu vào thủy dịch Những nghiên cứu ngƣời bệnh đục thể thủy tinh cho thấy mức độ hấp thu thay đổi Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 theo dạng thuốc số lần dùng thuốc Nồng độ thuốc thủy dịch cao dùng thuốc mỡ tra mắt cloramphenicol nhiều lần ngày Cloramphenicol phân bố rộng khắp phần lớn mô thể dịch, kể nƣớc bọt, dịch cổ trƣớng, dịch màng phổi, hoạt dịch, thủy dịch dịch kính Nồng độ thuốc cao gan thận Nồng độ dịch não - tủy 21 - 50% nồng độ huyết tƣơng ngƣời bệnh không bị viêm màng não 45 - 89% ngƣời bệnh bị viêm màng não Cloramphenicol gắn kết khoảng 60% với protein huyết tƣơng Nửa đời huyết tƣơng cloramphenicol ngƣời lớn có chức gan thận bình thƣờng 1,5 - 4,1 Vì trẻ đẻ non trẻ sơ sinh có chế liên hợp glucuronid thải trừ thận chƣa trƣởng thành, nên liều cloramphenicol thƣờng dùng thích hợp với trẻ lớn lại gây nồng độ thuốc huyết tƣơng cao kéo dài trẻ sơ sinh Nửa đời huyết tƣơng 24 dài trẻ nhỏ - ngày tuổi, khoảng 10 trẻ nhỏ 10 - 16 ngày tuổi Nửa đời huyết tƣơng cloramphenicol kéo dài ngƣời bệnh có chức gan suy giảm Ở ngƣời bệnh có chức thận suy giảm, nửa đời huyết tƣơng cloramphenicol kéo dài không đáng kể Cloramphenicol bị khử hoạt chủ yếu gan glucuronyl transferase Ở ngƣời lớn có chức gan thận bình thƣờng, khoảng 68 - 99% liều uống cloramphenicol thải trừ nƣớc tiểu ngày; - 15% liều thải trừ dƣới dạng không đổi nƣớc tiểu qua lọc cầu thận phần lại thải trừ qua ống thận, dƣới dạng chất chuyển hóa khơng hoạt tính ngƣời lớn có chức thận gan bình thƣờng, sau tiêm tĩnh mạch cloramphenicol natri sucinat, khoảng 30% liều tiết dƣới dạng không đổi nƣớc tiểu; vậy, tỷ lệ liều tiết dƣới dạng không đổi nƣớc tiểu biến thiên đáng kể, phạm vi - 80% trẻ sơ sinh trẻ em Một lƣợng nhỏ cloramphenicol dƣới dạng không đổi tiết mật phân sau uống thuốc Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Thẩm tách phúc mạc không ảnh hƣởng đến nồng độ cloramphenicol huyết tƣơng thẩm tách thận nhân tạo loại trừ lƣợng thuốc nhỏ 1.1.2.4 Sản xuất [11] Cloramphenicol đƣợc sản xuất cách tự nhiên từ Streptomyces venezuelae Hiện đƣợc sản xuất theo phƣơng thức tổng hợp hóa học Q trình lên men đƣợc mô tả không cần phân tách lập thể (IARC 1990) Năm 1948, cloramphenicol đƣợc sản xuất cách thƣơng mại hóa lần Hoa Kỳ Mỹ sản xuất cloramphenicol đƣợc ƣớc tính lớn 908 kg (2.002 lb) vào năm 1977 1979 Mỹ nhập cho năm đƣợc ƣớc tính khoảng 8.150 kg (£ 17.970) 8.200 kg (18.080 £), (HSDB 1995) Hiện mức độ sản xuất cho hai loại dùng thú y ngƣời không đƣợc công bố tài liệu 1.2 Giới thiệu phƣơng pháp von-ampe [3,4,5,6,7,10] 1.2.1 Giới thiệu chung Phƣơng pháp von–ampe nhóm phƣơng pháp phân tích dựa vào việc nghiên cứu đƣờng von–ampe hay gọi đƣờng phân cực, đƣờng biểu diễn phụ thuộc cƣờng độ dòng điện vào điện tiến hành điện phân dung dịch chất phân tích Q trình điện phân đƣợc thực bình điện phân đặc biệt gồm điện cực: + Cực làm việc: thƣờng cực giọt thuỷ ngân tĩnh, cực rắn đĩa hay cực màng (màng thủy ngân; màng vàng; màng bitmut; ) + Cực so sánh: cực khơng đổi thƣờng cực calomen cực bạc clorua có bề mặt lớn + Cực phù trợ glassy carbon Pt 10 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Nắp bình điện phân cịn có lỗ để dẫn luồng khí trơ vào với mục đích để đuổi khí oxy hồ tan dung dịch khỏi bình điện phân Để vẽ đƣợc đƣờng phân cực ngƣời ta liên tục theo dõi đo cƣờng độ dòng điện chạy qua mạch tăng dần điện đặt vào hai cực bình điện phân, sau vẽ đồ thị biễu diễn phụ thuộc I–E, I cƣờng độ dòng điện chạy qua mạch, E điện đặt vào hai cực bình điện phân Ta đƣợc đƣờng cong đƣờng cong von-ampe hoà tan 1.2.2 Các cực làm việc thường dùng phương pháp von-ampe a Cực giọt thủy ngân treo (HMDE) Cực HMDE loại cực đƣợc dùng phổ biến phƣơng pháp vonampe Nó giọt thủy ngân hình cầu kích thƣớc nhỏ đƣợc treo đầu cuối mao quản có đƣờng kính 0,15 † 0,50 mm Sau phép đo, giọt thủy ngân bị cƣỡng rơi khỏi mao quản đƣợc thay giọt tƣơng tự Một kiểu cực giống với cực HMDE thƣờng đƣợc dùng cực giọt thủy ngân tĩnh (SMDE) hãng PAR (USA) chế tạo Cực HMDE SMDE cho kết đo có độ xác độ lặp lại cao, có với hidro lớn khoảng -1,5 V mơi trƣờng kiềm trung tính, -1,2 V mơi trƣờng axit, nên cực có khoảng điện hoạt rộng, cho phép nghiên cứu đƣợc chất khoảng rộng Chúng đƣợc dùng rộng rãi để xác định hàng chục kim loại kim nhƣ Cd, Cu, Pb, Zn, In, Bi, Sb, Se, halogenua,… nhiều hợp chất hữu theo phƣơng pháp ASV CSV Điểm hạn chế cực HMDE SMDE khó chế tạo, khó tạo giọt thủy ngân có kích thƣớc lặp lại cách hoàn hảo Ngoài ra, chúng khơng cho phép xác định kim loại hòa tan dƣơng nhƣ Au, Ag,… b Cực màng thủy ngân (MFE) Cực MFE màng mỏng thủy ngân phủ bề mặt cực rắn trơ (thƣờng cực rắn đĩa quay) có đƣờng kính † mm làm loại vật liệu trơ nhƣ than thủy tinh (glassy carbon), graphit, than nhão (paste carbon), Cực MFE đƣợc 11 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON- AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO Chuyên... Các cực làm việc thường dùng phương pháp von- ampe a Cực giọt thủy ngân treo (HMDE) Cực HMDE loại cực đƣợc dùng phổ biến phƣơng pháp vonampe Nó giọt thủy ngân hình cầu kích thƣớc nhỏ đƣợc treo. .. nhiên phƣơng pháp chủ yếu đƣợc nghiên cứu phƣơng pháp sắc ký phƣơng pháp quang Trong luận văn này, tiến hành nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp cực phổ với kỹ thuật đo xung vi phân để xác định hàm lƣợng