Đồ án tốt nghiệp khả năng sử dụng một số vi khuẩn lab phân lập trong khoang miệng ức chế sự tạo thành màng sinh học của lactobacillus fermentum

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ VI KHUẨN LAB PHÂN LẬP TRONG KHOANG MIỆNG ỨC CHẾ SỰ TẠO THÀNH MÀNG SINH HỌC CỦA Lactobacillus fer[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ VI KHUẨN LAB PHÂN LẬP TRONG KHOANG MIỆNG ỨC CHẾ SỰ TẠO THÀNH MÀNG SINH HỌC CỦA Lactobacillus fermentum Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Hoài Hương Sinh viên thực hiện: Nguyễn Đặng Vân Anh MSSV: 1311100138 Lớp: 13DSH02 TP.Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Nguyễn Hồi Hương Giảng viên Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi trường trường Đại Học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết hồn tồn khơng chép từ nghiên cứu khoa học khác hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin chịu trách nhiệm tồn đồ án Tp.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án “Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum” suốt trình học tập, rèn luyện trau dồi kiến thức em gặp phải khơng lần khó khăn nhờ có quan tâm, giúp đỡ hướng dẫn tận tình TS Nguyễn Hồi Hương, Giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học - Thực phẩm Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM, kiến thức kỹ cần thiết Cô truyền dạy mà em đạt thành ngày hôm Em xin chân thành cảm ơn cô Bên cạnh đó, em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến Thầy Cô giảng viên Ban lãnh đạo Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM tạo điều kiện giúp em tiếp cận nhiều nguồn tài liệu để hoàn thành đồ án tốt nghiệp thời gian quy định Dù đồ án hoàn thành khơng tránh khỏi sai sót định khả hiểu biết hạn hẹp thông tin tài liệu khơng khả quan để phục vụ q trình thực đồ án Kính mong nhận góp ý dạy Thầy Cô để em học hỏi thêm kinh nghiệm, tích lũy cho q trình học tập rèn luyện chuẩn bị hành trang bước sang mơi trường làm việc sau Ngồi ra, xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến ba mẹ, gia đình, người bên tạo điều kiện tốt cho trình thực đồ án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! TP.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn Lactic (LAB) 1.2 Tổng quan Probiotic 19 1.3 Màng sinh học 31 1.4 Sâu 37 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2 Thời gian thực 44 2.3 Vật liệu thiết bị 44 2.4 Phương pháp luận 45 2.5 Phương pháp thí nghiệm 47 iii Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 64 3.1 Kết thử nghiệm sinh lý 64 3.2 Kết thử nghiệm sinh hóa 67 3.3 Kết khả sinh enzyme 71 3.4 Kết khả kháng khuẩn 75 3.5 Kết khả kháng kháng sinh 77 3.6 Kết khảo sát khả ức chế màng sinh học vi khuẩn lactic sau qua xử lý nhiệt 81 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 84 Kết luận 84 Kiến nghị 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 94 iv Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG  Thành phần môi trường de Man, Rogosa, Sharpe agar (MRS agar):  Tween 80 1ml  MgSO4.7H2O 0.2g  Cao thịt 10g  MgSO4.4H2O 0.2g  Pepton 5g  K2PO4 2g  Yest Extract 5g  Nước cất 1000ml  D-glucose 10g  Agar 2%  Diamonium Citrate 2g  Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường de Man, Rogosa, Sharpe broth (MRS broth):  Tween 80 1ml  Diamonium Citrate 2g  Cao thịt 10g  MgSO4.7H2O 0.2g  Pepton 5g  MgSO4.4H2O 0.2g  Yest Extract 5g  K2PO4 2g  D-glucose 10g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần nước muối sinh lí:  NaCl 9g  Nước cất 1000ml  Thành phần môi trường Glucose Phosphate broth (MR – VP broth):  Peptone 7g  Dextrose 5g  K2HPO4 5g  Nước cất 1000ml v Đồ án tốt nghiệp  Thành phần môi trường Simmon citrate agar (SCA)  MgSO4.7H2O 0,2g  NH4H2PO4 1g  K2HPO4 1g  Na3C6H5O7 2g  NaCl 5g  Bromothymol blue 0,08g  Agar 15g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 6.8 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường canh tryptone:  Tryptone 10g  NaCl 5g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 7.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Triple sugar iron agar (TSI):  Cao thịt 3g  NaCl 5g  Peptone 20g  Na2S2O3 0,3g  Yeast extract 3g  Phenol red 0,024g  Lactose 10g  Agar 15g  Sucrose 10g  Nước cất 1000ml  Dextrose 1g  Điều chỉnh pH = 7.0 ± 0.2  FeSO4 0,2g 25oC ii Đồ án tốt nghiệp  Thành phần môi trường Blood agar:  Beef heart infusion 500g  Tryptose 10g  NaCl 5g  Agar 15g  Máu cừu 50ml  Nước cất 950ml  Điều chỉnh pH = 7.3 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Skim milk agar:  Bột sữa gầy 28g  Casein enzymic hydrolysate 5g  Cao nấm men 2,5g  Dextrose 1g  Agar 15g  Điều chỉnh pH = 7.0 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Lactobacillus biofilm medium (LBM):  Peptone 5g  CH3COONa.H2O 2,5g  Cao nấm men 2,5g  MgSO4 0,05g  K2HPO4 3g  MnSO4 0,025g  (NH4)3C6H5O7 1g  CaCl2 0,1g  Dextrose 10g  Nước cất 1000ml  Cao thịt 5g  Tween 80 0,5g  Điều chỉnh pH = 7.0 ± 0.2 25oC ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT LAB Lactic acid bacteria /Lactobacillales MRS de Man, Rogosa and Sharpe SCA Simmon citrate agar SAS Statistical Analysis Systems TSI Triple sugar iron TN Thí nghiệm VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng Tổng hợp nghiên cứu khảo sát số chủng probiotic việc bảo vệ miệng Bảng 1.1 Đặc điểm sinh lý số chủng vi khuẩn lactic 11 Bảng 1.2 Khả đối kháng sản phẩm biến dưỡng vi khuẩn LAB 19 Bảng 2.1 Phân loại khả kháng kháng sinh dựa vào đường kính vịng kháng 62 Bảng 3.1 Kết thử nghiệm sinh lý 64 Bảng 3.2 Kết thử nghiệm sinh hóa 67 Bảng 3.3 Kết thử nghiệm lên men carbohydrate 69 Bảng 3.4 Kết khả sinh enzyme chủng lactic 71 Bảng 3.5 Tỉ lệ kháng khuẩn chủng lactic (%) 76 Bảng 3.6 Kết kháng kháng sinh chủng lactic 77 Bảng 3.7 Kết ức chế khả tạo màng sinh học vi khuẩn lactic sau xử lý nhiệt 82 iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Mô ̣t số vi khuẩ n lactic điể n hin ̀ h Hình 1.2 Sơ đồ đường lên men lactose vi khuẩn lactic 13 Hình 1.3 Cơ chế tác động Lactobacillus spp lên vi khuẩn khoang miệng 28 Hình 1.4 Các dạng sản phẩm từ sữa có chứa probiotic 29 Hình 1.5 Các giai đoạn hình thành màng sinh học 32 Hình 1.6 Mạng lưới EPS tế bào vi khuẩn màng sinh học, hình thành đáy chai thủy tinh chụp kính hiển vi điện tử 32 Hình 1.7 Vi sinh vật, bùn đất bám đáy tàu thông qua hình thành màng sinh học 35 Hình 1.8 Vi khuẩn chịu nhiệt hình thành màng sinh học dày khoảng 20 mm hồ nước nóng Mickey, Oregon 36 Hình 1.9 Đốm trắng – dấu hiệu khử khoáng men 39 Hình 1.10 Răng bị tổn thương nghiêm trọng q trình khử khống 39 Hình 1.11 Giản đồ mơ tả lý thuyết ngun nhâu gây sâu 40 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 46 Hình 2.2 Bố trí thí nghiệm khảo sát khả ức chế màng sinh học sau vi khuẩn lactic bị xử lý nhiệt 63 Hình 3.1 Kết nhuộm bào tử Malachite green chủng lactic 66 Hình 3.2 Kết thử nghiệm sinh dưỡng kỵ khí Dưới đáy ống nghiệm có xuất sinh khối, chứng tỏ chủng tăng trưởng bình thường khơng có khí O2 67 Hình 3.3 Kết thử nghiệm Citrate (+: Salmonella typhimurium) 68 Hình 3.4 Kết thử nghiệm H2S 68 Hình 3.5 Kết thử nghiệm Indole (+:Escherichia coli) 69 Hình 3.6 Kết lên men carbohydrate chủng lactic 70 Hình 3.7 Kết thử nghiệm tan huyết chủng lactic 72 iv Đồ án tốt nghiệp Hình 3.8 Kết khả sinh enzyme thủy phân Casein 73 Hình 3.9 Kết khả sinh enzyme thủy phân Gelatin 73 Hình 3.10 Tất chủng chuyển sang màu vàng cho kết dương tính với thử nghiệm β- galactosidase 74 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn tỷ lệ kháng khuẩn chủng lactic 75 Hình 3.12 Kết kháng kháng sinh chủng lactic 80 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn tỷ lệ ức chế khả tạo màng sinh học vi khuẩn lactic sau xử lý nhiệt 81 v Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Song song với phát triển kinh tế, trị xã hội nghiên cứu khoa học thuộc lĩnh vực Công nghệ sinh học ngày phát triển Ngày người ứng dụng thành tựu khoa học công nghệ vào sống, từ công nghiệp, nông nghiệp, an ninh quốc phịng giải trí, v.v Các nhà khoa học với nhà nghiên cứu ứng dụng kiến thức từ tài liệu toàn giới áp dụng biện pháp kỹ thuật đời giống trồng, vật nuôi, vi sinh vật có tính ưu việt giống có Bên cạnh người ta cịn tạo loại thức ăn mới, nghiên cứu loại thuốc, kit xác định bệnh, nhân tố có giá trị phục vụ đời sống, phát triển kinh tế - xã hội bảo vệ môi trường Ngồi ra, có nhiều kết nghiên cứu khoa học áp dụng cho lĩnh vực công nghệ thực phẩm Từ nghiên cứu cho đời loại vi sinh vật dùng chế biến nhằm làm tăng giá trị dinh dưỡng, cảm quan bảo quản thực phẩm, làm cho thực phẩm không đơn giản bổ sung lượng mà cịn giúp người phòng chống số bệnh, tăng cường hệ miễn dịch thể Đi đôi với phát triển không ngừng xã hội, nhu cầu sử dụng chế phẩm, thực phẩm việc sinh hoạt lành mạnh để có sức khỏe tốt mục tiêu nhiều người hướng tới Thời gian gần đây, thường nghe nhiều khái niệm “Probiotics” mà hiểu Probiotics Probiotics thực tế vi khuẩn sống có lợi đường ruột, ăn vào đem lại lợi ích sức khoẻ người nhờ cải thiện hệ vi sinh đường ruột chức ruột Hai lồi vi khuẩn probiotics thơng dụng Bifidobacteria Lactobacillus Vi khuẩn probiotic giúp tăng cường hệ miễn dịch, ngăn ngừa ung thư Ngoài ra, việc phát lồi vi khuẩn có khả ức chế tạo thành màng sinh học vi khuẩn có hại khoang miệng để hạn chế khả gây sâu đồng thời mang Đồ án tốt nghiệp tính an tồn chủng vi khuẩn Probiotic nhiều nhà khoa học quan tâm lý em em chọn thực đề tài Em muốn tìm hiểu cụ thể loại vi khuẩn hy vọng vận dụng điều biết vào thực tế, cụ thể làm việc sau Tình hình nghiên cứu Trong nhiều năm qua, có nhiều nghiên cứu in vivo in vitro nhằm tìm tác động vi khuẩn lactic khoang miệng Các nhà khoa học mong muốn vi khuẩn lactic sử dụng dạng probiotic có khả tồn thời gian định nước bọt Năm 2006, Haukioja cộng tìm số chủng probiotic có khả [43], khiến cho việc sử dụng vi khuẩn lactic nói chung probiotic nói riêng để bảo vệ miệng trở nên khả quan Bussher cộng xác định L acidophilus L casei có sữa chua làm giảm tỷ lệ Lactobacillus spp khác Streptococcus mutans nước bọt mảng bám đối tượng nghiên cứu xuống sau tuần sử dụng [48] Ahola cộng khảo sát tương tự sản phẩm lên men mát, LGG Lactobacillus rhamnosus LC 705 có mát làm giảm tỷ lệ sâu trẻ nhỏ [49] Hallstrom cộng chứng minh việc sử dụng chủng probiotic L reuteri ATCC 55730 ATCC PTA 5289 khơng góp phần hình thành mảng bám khoang miệng [44] Hầu hết nghiên cứu lâm sàng probiotic việc bảo vệ miệng thông qua việc định lượng tổng vi khuẩn mutans streptococci (MS) khoang miệng Các thành nghiên cứu năm gần tổng hợp bảng Đồ án tốt nghiệp Bảng Tổng hợp nghiên cứu khảo sát số chủng probiotic việc bảo vệ miệng [50] Tác giả Nase cs, 2001 Ahola cs, 2002 Nikawa cs, 2004 Montalto cs, 2004 Caglar cs, 2005 Caglar cs, 2006 Caglar cs, 2007 Caglar cs, 2008 Caglar cs, 2009 Cildir cs, 2009 Stecksen-Blicks cs, 2009 Lexner cs, 2010 Singh cs, 2011 Jindal cs, 2011 Marttinen cs, 2012 Chuang cs, 2011 Cildir cs, 2012 Petersson cs, 2011 Taipale cs, 2012 7m 3w 2w 45 d Độ tuổi – số đối tượng nghiên cứu 1–6, 594 18–35, 74 20, 40 23–37, 35 2w 21–24, 21  - 2w 3w 10 d 21–25, 120 21–24, 80 20–24, 40    - 10 d 20, 20  - 2w 12–16, 24  - 21 m 1–5, 174   2w 12–15, 20  - 10 d 12–14, 40  - 14 d 7–14, 150  - 2w 20–30, 13  - 2w 20–26, 70  - 25 d 4–12, 19  - 15 m 58–84, 160 tháng tuổi đến tuổi, 106 12-15, 40 10-12, 40       - Thời gian nghiên cứu Chủng probiotic L rhamnosus GG Lactobacillus spp L reuteri ATCC 55730 Lactobacillus spp Bifidobacterium animalis ssp lactis DN-173010 L reuteri ATCC 55730 L reuteri ATCC 55730 Bifidobacterium lactis BB-12 L reuteri ATCC 55730, L reuteri ATCC PTA 5289 Bifidobacterium animalis ssp lactis DN-173010 L rhamnosus LB21 L rhamnosus LB21 L acidophilus La5 Bifidobacterium lactis Bb-12 L rhamnosus, Bifidobacterium longum, Saccharomyces cerevisae L rhamnosus GG, L reuteri SD2112, L reuteri PTA 5289 L paracasei GMNL- 33 L reuteri ATCC PTA 5289, L reuteri DSM 17938 L rhamnosus LB21 Bifidobacterium animalis BB-12 15 m Juneja Kakade, 2012 Sudhir cs, 2012 L rhamnosus hct 70 L acidophilus 9w 3w Tổng MS khoang miệng Tình trạng sâu      - (d, ngày; w, tuần; m, tháng;, giảm;  , khơng thay đổi; -, âm tính) Mục tiêu nghiên cứu Sử dụng chủng vi khuẩn lactic phân lập từ khoang miệng Mục tiêu cuối sau thực thử nghiệm khảo sát xác định xem chúng có khả Đồ án tốt nghiệp ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum khơng có đủ an tồn để bổ sung vào sản phẩm sử dụng cho người động vật không Nhiệm vụ nghiên cứu _ Tiến hành thử nghiệm sinh lý, sinh hóa _ Khảo sát khả kháng khuẩn _ Khảo sát khả kháng kháng sinh _ Xác định độ an toàn khả ức chế màng sinh học Lactobacillus fermentum Phương pháp nghiên cứu a) Phương pháp luận _ Tiến hành thử nghiệm sinh lý: khả chịu nhiệt 10oC, 45oC, 60oC; khả chịu mặn: 3,5% NaCl 6,5% NaCl; khả sinh bào tử; khả sinh dưỡng điều kiện kỵ khí _ Tiến hành thử nghiệm sinh hóa: khả lên men carbohydrate; thử nghiệm MR – VP; thử nghiệm Citrate; Thử nghiệm Indole; khả sinh H2S _ Khảo sát khả sinh enzyme: enzyme thủy phân Gelatin; enzyme thủy phân Casein; thử nghiệm tan huyết; thử nghiệm 𝛽 – Galactosesidase _ Khảo sát khả kháng khuẩn phương pháp đo độ đục _ Khả kháng kháng sinh phương pháp khuếch tán đĩa thạch (Agar Diffusion Test) _ Khả ức chế tạo màng sinh học Lactobacillus fermentum sử dụng vi khuẩn lactic sau xử lý nhiệt b) Phương pháp xử lý số liệu - Sử dụng phần mềm excel để vẽ đồ thị - Sử dụng phần mềm SAS 9.4 để xử lý số liệu. Đồ án tốt nghiệp Các kết đạt _ Chọn chủng vi khuẩn lactic an tồn ứng dụng để ức chế hình thành màng sinh học Lactocbacillus fermentum Kết cấu đồ án Mở đầu Chương 1: Tổng quan tài liệu – nội dung chương đề cập đến nội dung liên quan đến tài liệu nghiên cứu Chương 2: Vật liệu phương pháp nghiên cứu – nội dung chương đề cập đến dụng cụ, thiết bị phương pháp nghiên cứu đồ án Chương 3: Kết biện luận – nội dung chương đưa kết mà đề tài thực đưa biện luận cho kết thu Chương 4: Kết luận kiến nghị – nội dung chương tóm lại kết mà đề tài đạt đề nghị cho hướng cải thiện thêm đề tài Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn Lactic (LAB) 1.1.1 Giới thiệu chung Vi khuẩn lactic (LAB) có vai trò quan trọng sống Chúng tạo thực phẩm lên men bảo quản thực phẩm khỏi bị hư hỏng Từ đầu kỷ 20, Elie Metchnikoff (1845-1916) đề xuất sử dụng LAB cho mục đích chữa bệnh Từ đó, lĩnh vực nghiên cứu probiotic đời phát triển Đến nay, nghiên cứu probiotic không ngừng cung cấp chứng có tính khoa học hiệu thực probiotic sức khỏe người Từ lâu vi khuẩn lactic người ứng dụng rộng rãi để chế biến loại thực phẩm lên men (sữa chua, muối dưa, muối cà, ), ủ chua thức ăn cho gia súc để sản xuất acid lactic loại muối acid lactic Từ năm 1780, lần nhà hóa học người Thụy Điển Scheele tách acid lactic từ sữa bò lên men chua Năm 1875, L Pasteur chứng minh việc làm sữa chua kết hoạt động nhóm vi sinh vật đặc biệt gọi vi khuẩn lactic 21 năm sau (1878), Lister phân lập vi khuẩn lactic đặt tên Bacterium lactic (ngày gọi Streptococcus lactic) đến năm 1881 ngành công nghiệp lên men nhờ vi khuẩn lactic hình thành Vi khuẩn lên men lactic gọi vi khuẩn lactic, chúng cơng nhận an tồn sinh học (generally recognized as safe - GRAS), sử dụng thường xuyên thực phẩm có đóng góp hệ vi sinh vật có ích người Một đặc tính quan trọng khác vi khuẩn lactic chúng có khả tạo bacteriocin (chất kháng khuẩn) lactacin, brevicin, lacticin, helveticin, sakacin, plantacin, có tác dụng ức chế số vi sinh vật gây bệnh, ngăn chặn phát triển nguồn bệnh thực phẩm [2] [3] Đồ án tốt nghiệp Vi khuẩn lactic có hoạt tính kháng khuẩn diện rộng có khả sản xuất chất ức chế: số acid hữu cơ, hydrogen peroxide, diacetyl, chất có khối lượng phân tử thấp bacteriocin chất có khả ức chế vi khuẩn gram (+) vi khuẩn gram (-) Các chủng vi khuẩn lactic có khả sản sinh acid hữu cơ, đặc biệt acid lactic trình sinh trưởng phát triển Đối với hydroxy peroxide khả kháng khuẩn việc tạo chất oxy hóa mạnh oxygen nguyên tử, gốc tự superoxide gốc tự hydroxyl Đối với bacteriocin, chế kháng khuẩn vi khuẩn lactic tổng hợp nghiên cứu nisin, bacteriocin gram (+) [4] 1.1.2 Đă ̣c điểm hình thái của vi khuẩ n lactic Các tế bào có hình dáng đa dạng: từ hình que dài, mảnh đến hình que ngắn uốn cong, thường tạo thành chuỗi Khơng có khả di động (ngoại trừ số chủng có tiên mao lơng roi bề mặt thể), không sinh bào tử, gram dương Một số chủng thể tính lưỡng cực, xuất chấm nhỏ đường kẻ dọc (quan sát qua kính hiển vi) nhuộm vi khuẩn với thuốc nhuộm gram methylene blue [51] Khuẩn lạc vi khuẩn lactic tròn nhỏ, bề mă ̣t bóng, màu trắng đục màu vàng kem, khuẩn lạc có kính thước to trịn lồi trắng đục Đặc biệt khuẩn lạc tỏa mùi chua acid Về kích thước tế bào dạng cầu khuẩn từ 0.5 – 1.5μm Các tế bào hình cầu xếp thành cặp hình chuỗi có chiều dài khác Cịn với trực khuẩn từ - 8μm Trực khuẩn đứng riêng lẻ kết thành chuỗi  Đặc điểm hình thái giống vi khuẩ n lactic điể n hin ̀ h: Trong số các vi khuẩ n lactic, giố ng Lactobacillus đươ ̣c xem là đa ̣i diê ̣n cho chủng vi khuẩ n này Đồ án tốt nghiệp Tùy thuộc vào hình thái tế bào mà người ta chia vi khuẩn lactic thành dạng : hình cầu hình que Kích thước chúng thay đổi tùy theo loài _ Giống Lactobacillus  Giới : Vi khuẩn  Ngành : Firmicutes  Lớp: Bacilli  Bộ: Lactobacillales  Họ: Lactobacillacea  Giống: Lactobacillus a) c) d) b) Hình 1.1 Mơ ̣t số vi khuẩ n lactic điể n hình a) Lactobacillus casei b) Latobacillus brevis c) Lactobacillus bulgaricus d) Lactobacillus plantarum ... CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án ? ?Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum? ?? suốt trình học tập, rèn luyện trau dồi kiến thức em gặp phải... thư Ngồi ra, vi? ??c phát lồi vi khuẩn có khả ức chế tạo thành màng sinh học vi khuẩn có hại khoang miệng để hạn chế khả gây sâu đồng thời mang Đồ án tốt nghiệp tính an toàn chủng vi khuẩn Probiotic... cứu _ Tiến hành thử nghiệm sinh lý, sinh hóa _ Khảo sát khả kháng khuẩn _ Khảo sát khả kháng kháng sinh _ Xác định độ an toàn khả ức chế màng sinh học Lactobacillus fermentum Phương pháp nghiên