TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TPHCM KHOA SINH HỌC – CÔNG NGHỆ SINH HỌC VIỆN TẾ BÀO GỐC NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT: KĨ THUẬT VÀ ỨNG DỤNG BẢO QUẢN ĐÔNG LẠNH TẾ BÀO CRYOPRESERVATION Lê Thị Ngân Hà ltnha@hcmus.edu.vn TPHCM 03/2018 …"I want to live and live longer and I think that in the future they may find a cure for my cancer and wake me up," the 14-year-old wrote to a British judge before her recent death She said "being cryopreserved gives me a chance to be cured and woken up — even in hundreds of years' time.”… o Tái lưu thông máu o Thuốc hỗ trợ bảo vệ tế bào o Thay máu dịch lỏng thể chất chống đông o Giảm nhiệt với tốc độ 0,5/giờ đến nhiệt độ nito lỏng o Bảo quản tủ đơng hình trụ Lịch sử now 1987 Tạm dừng bảo quản trứng 1970s Phát triển nghiên cứu đông lạnh tinh trùng người 1959 Lovelock, Bishop: DMSO – red blood cell 1953 Sherman: đông lạnh tinh trùng người – rã đông 1949 Polge: glycerol – tinh trùng gà 1866 Mantagazza: ngân hàng tinh trùng cho tinh trùng người đông lạnh 1776 Spallanzani: tinh trùng người di chuyển gặp nhiệt độ thấp Bảo quản đơng lạnh gì? Bảo quản: quy trình sinh học nhằm đảm bảo •nh ổn định về mặt di truyền và cấu trúc nguyên vẹn củ a tế bào sống; đảm bảo thành phần nucleic acid và protein tế bào không thay đổi Bảo quản lạnh việc sử dụng nhiệt độ thấp để bảo vệ tế bào mơ sống cịn ngun vẹn thời gian dài Vì phải bảo quản đông lạnh tế bào? Thuận lợi bảo tồn gen Ngân hàng tế bào Giảm rủi ro nhiễm Tiết kiệm thời gian nguyên vật liệu Thuận lợi phân loại, tạo dòng Ngăn cản biệt hố / lão hố Dịng tế bào quý Thuận lợi vận chuyển Đáp ứng tế bào với stress đông lạnh Tác nhân stress Phản ứng tế bào Giảm nhiệt độ Biến đổi lớp màng lipid, khử polymer hoá xương tế bào Tăng nồng độ chất hoà tan Giảm áp suất thẩm thấu Tăng nồng độ ion Phản ứng trực tiếp màng bào gồm tính tan của màng protein Khử nước Mất ổn định lớp đôi phospholipid Kết tủa muối Không rõ Hình thành bọt khí Tổn thương học lên màng xương tế bào Thay đổi pH Biến tính protein Tế bào bị chèn xếp khít lại Tổn thương màng Tính nhớt mơi trường tăng Q trình khuếch tán/thẩm thấu bị hạn chế NGUYÊN TẮC Giảm thiểu hình thành tinh thể băng tế bào (1) Đông lạnh “chậm” (2) Sử dụng chất bảo quản đông lạnh (3) rữ tế bào mức nhiệt độ thấp để giảm thiểu tác động nồng độ muối cao lên biến đổi protein trong TB (4) tan băng nhanh chóng để giảm thiểu phát triển tinh thể băng (tái kết tinh) Nhiệt độ CPA Quy trình Tốc độ làm lạnh Yếu tố ảnh hưởng đến TB Tae Hoon Jang, Cryopreservation and its clinical applications, 2017 ... tế bào sống; đảm bảo thành phần nucleic acid và protein tế bào không thay đổi Bảo quản lạnh việc sử dụng nhiệt độ thấp để bảo vệ tế bào mơ sống cịn ngun vẹn thời gian dài Vì phải bảo quản. .. bào q Thuận lợi vận chuyển Đáp ứng tế bào với stress đông lạnh Tác nhân stress Phản ứng tế bào Giảm nhiệt độ Biến đổi lớp màng lipid, khử polymer hoá xương tế bào Tăng nồng độ chất hoà tan Giảm... hỗ trợ bảo vệ tế bào o Thay máu dịch lỏng thể chất chống đông o Giảm nhiệt với tốc độ 0,5/giờ đến nhiệt độ nito lỏng o Bảo quản tủ đơng hình trụ Lịch sử now 1987 Tạm dừng bảo quản trứng 1970s