Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn nội sinh cây cà chua đối kháng với vi khuẩn ralstonia solanacearum

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MƠI TRƯỜNG ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI KHUẨN NỘI SINH CÂY CÀ CHUA ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM Kiều Đức Toàn Đà Nẵng, năm 2022 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MƠI TRƯỜNG ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI KHUẨN NỘI SINH CÂY CÀ CHUA ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM Ngành: Cơng nghệ sinh học Khóa: 2018-2022 Sinh viên: Kiều Đức Toàn Người hướng dẫn: TS Nguyễn Minh Lý Đà Nẵng, năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan liệu trình bày khóa luận trung thực Đây kết nghiên cứu giảng viên hướng dẫn chưa công bố cơng trình khác trước Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm vi phạm quy định đạo đức khoa học Tên SV Kiều Đức Toàn i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khoá luận tốt nghiệp Khoa Sinh – Môi trường, trường Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng, xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình thực đề tài khố luận Để hồn thành khố luận tốt nghiệp này, nỗ lực thân, xin chân thành cảm ơn đến TS Nguyễn Minh Lý tận tình hướng dẫn, khích lệ, động viên định hướng cho tơi suốt q trình thực khố luận tốt nghiệp Cuối cùng, tơi gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ln động viên, khích lệ tơi vật chất lẫn tinh thần để đạt kết tốt Xin chân thành cảm ơn! ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG BIỂU ix TÓM TẮT x MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Ý nghĩa .2 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn 2.3 Nội dung nghiên cứu .2 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vi khuẩn nội sinh thực vật .4 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Nguồn gốc đa dạng vi khuẩn nội sinh 1.1.3 Sự xâm nhập vai trò vi khuẩn nội sinh 1.1.4 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn nội sinh 1.2 Giới thiệu Ralstonia solanacearum 1.2.1 Bệnh héo xanh vi khuẩn .9 1.2.2 Phân loại Ralstonia solanacearum 10 1.2.3 Đặc điểm hình thái, cấu tạo vi khuẩn Rastonia solanacearum 10 1.2.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá vi khuẩn Ralstonia solanacearum 10 iii 1.2.5 Các hình thức xâm nhập triệu chứng nguyên nhân phát sinh bệnh vi khuẩn Ralstonia solanacearum .11 1.2.6 Tình hình nghiên cứu bệnh HXVK Việt Nam Thế giới 12 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Phạm vi nghiên cứu 14 2.2 Vật liệu nghiên cứu .14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp thu mẫu .14 2.3.2 Phương pháp phân lập 14 2.3.3 Định danh vi khuẩn phương pháp mã vạch DNA 18 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt lực đối kháng vi khuẩn nội sinh 20 2.3.5 Phương pháp khảo sát thử nghiệm khả chống chịu với vi khuẩn Ralstonia solanacearum 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .22 3.1 Kết phân lập vi khuẩn nội sinh .22 3.2 Kết phân lập vi khuẩn định danh Ralstonia solanacearum .24 3.2 Kết định danh vi khuẩn Ralstonia solanacearum 28 3.2.1 Kết phản ứng PCR với cặp mồi 759/760 đoạn mồi 16S 23S .29 3.2.2 Kết giải trình tự vi khuẩn Ralstonia solanacearum 29 3.3 Khảo sát khả đối kháng vi khuẩn nội sinh với vi khuẩn Ralstonia solanacearum .30 3.4 Đánh giá số hoạt tính sinh hóa chủng vi khuẩn B01 B02 .32 3.5 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn Ralstonia solanacearum vi khuẩn nội sinh giai đoạn .33 3.6 Tái phân lập vi khuẩn xác định tác nhân gây HXVK 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 Kết luận 39 iv Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC 44 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DNA Deoxyribonucleic acid HXVK Héo xanh vi khuẩn NCBI National Center for Biotechnology Information PCR Polymerase Chain Reaction PGPB Plant Growth Promoting Bacteria TN Thí nghiệm VKNS Vi khuẩn nội sinh VSV Vi sinh vật vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Số thứ tự Tên hình hình Trang Hình 1.1 Ứng dụng vi khuẩn nội sinh 16 Hình 3.1 Các vị trí khuẩn lạc chọn 32 Hình 3.2 Kết phản ứng Colony - PCR với cặp mồi 759/760 32 Hình 3.3 Kết ni cấy khuẩn lạc mơi trường TZC 33 Hình 3.4 Kết ni cấy vị trí khuẩn lạc nhuộm Gram vi khuẩn 34 Hình 3.5 Kết phản ứng Colony – PCR với cặp mồi 759/760 36 Hình 3.6 Hình thái khuẩn lạc nhuộm Gram chủng vi khuẩn 36 Hình 3.7 Kết phản ứng PCR với cặp mồi 759/760 đoạn mồi 16S 23S 40 Hình 3.8 Kết thử nghiệm phương pháp khuếch tán lỗ thạch 41 Hình 3.9 Kết thử nghiệm khả sinh enzyme chủng B01 B02 42 Hình 3.10 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn Ralstonia solanacearum chủng vi khuẩn B01 B02 giai đoạn 43 Hình 3.11 Cây có triệu chứng nhiễm bệnh khỏe mạnh 45 Hình 3.12 Tái phân lập vi khuẩn môi trường TZC 45 vii Hình 3.13 Kết sản phẩm PCR - Colony 46 viii solanacearum tiết độc tố làm chết Với nhóm bổ sung vi khuẩn nội sinh có tỉ lệ chết thấp nhiều so với nhóm đối chứng dương, nhóm B02 + RS có số chết thấp (16,67%) nhóm B01 + RS cao k Từ kết nói chủng vi khuẩn B01 B02 lồi vi khuẩn nội sinh có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum nên làm giảm tỉ lệ chết bị héo Khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum vi khuẩn thuộc chi Bacillus báo cáo Heena Agarwal cộng (2020) Khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum chủng B01 B02 sản xuất enzyme Protease, Amylase peptide kháng khuẩn Nhận định tác giả Heena Agarwal cộng (2020), Mora cộng (2015) báo cáo Nhiều tác giả nhận định peptide kháng khuẩn tạo vi khuẩn Bacillus spp ức chế vi khuẩn gây bệnh thực vật Hầu hết peptide kháng khuẩn báo bacillomycin, iturin, fengycin Suractin diện gen liên quan đến trình tổng hợp sinh học peptide kháng khuẩn có tương quan trực tiếp với việc kiểm soát sinh học nhiều vi sinh vật gây bệnh Đã có báo cáo trước gen liên quan đến sinh tổng hợp peptit kháng khuẩn ituC, srfAA, fenD bmyB Bacillus spp chống lại loại vi khuẩn gây bệnh khác Bên cạnh đó, chủng vi khuẩn Bacillus spp sản xuất phytohormone đóng vai trị quan trọng việc thúc đẩy tăng trưởng thực vật Điều góp phần làm tăng cường khả chống chịu với tác nhân gây hại Qua nghiên cứu cho thấy chủng vi khuẩn B01 B02 có tiềm phịng trừ bệnh héo xanh cà chua 3.6 Tái phân lập vi khuẩn xác định tác nhân gây HXVK Để khẳng định giống thực khảo sát chết độc tính vi khuẩn gây nhiễm, cần thực tái phân lập từ có triệu chứng héo xanh (Hình 3.11) Vi khuẩngây bệnh héo xanh phân lập từ xử lý khử trùng, với quy trình phân lập mơi trường TZC có bổ sung 0,5 mg Pennicillin 36 A B Hình 3.11 Cây có triệu chứng nhiễm bệnh khỏe mạnh A: Gây nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum B: Chỉ bổ sung nước cất Sử dụng đối chứng (-) (nước cất) thực kiểm chứng yếu tố lây nhiễm, gây héo khác Hình 3.12 Tái phân lập vi khuẩn môi trường TZC A Phân lập từ cà chua nhiễm Ralstonia solanacearum B Phân lập câ y cà chua sử dụng đối chứng Kết tái phân lập chủng vi khuẩn cho thấy: Hình thái khuẩn lạc phân lập giống với khuẩn lạc ban đầu xuất hình thái khuẩn lạc So sánh với đĩa phân lập từ đối chứng (-), cho kết đối chứng hoàn toàn bệnh, khơng có lây nhiễm chéo Sau thu hình thái khuẩn lạc từ tái phân lập, tiến hành thực kĩ thuật PCR khuẩn lạc (PCR – Colony) với cặp mồi 759/760 37 Hình 3.13 Kết sản phẩm PCR - Colony M: ladder 1kB; Lane 1: Mẫu vi khuẩn Ralstonia solanacearum tái phân lập Kết cho sản phẩn PCR với kích thước khoảng từ 280 – 283 bp (Hình 3.13), tương ứng với kích thước thực phản ứng PCR, gửi mẫu định danh Chứng tỏ, vi khuẩn xâm nhập vào hệ thống bó mạch, héo rũ nhiễm bệnh HXVK, không tác nhân ngoại cảnh khác 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Phân lập vi khuẩn Ralstonia solanacearum chủng T03 T04 có độ tương đồng 98 – 100% so sánh NCBI Đã phân lập tuyển chọn 10 chủng vi khuẩn nội sinh từ cà chua, có chủng thuộc chi Bacillus 01 chủng Methylobacterium có chủng vi khuẩn B01 B02 thể khả đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum điều kiện invitro Xác định dịch nội bào chủng vi khuẩn B01 B02 có khả đối kháng với Ralstonia solanacearum Đã khảo sát hiệu ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum bổ sung dịch vi khuẩn nội sinh đối kháng với lỉ lệ giảm bệnh cao 77,76% chủng B01 86,11% chủng B02 Kiến nghị - Tiến hành thí nghiệm khả đối kháng trưởng thành - Định danh chủng vi khuẩn nội sinh có khả đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trong nước Đỗ Thị Kiều An (2019) Nghiên cứu ảnh hưởng số chủng vi khuẩn nội sinh chọn lọc đến sinh trưởng, phát triển cà phê vối (Coffea canephora Pierre var robusta) Đỗ Tấn Dũng (2011), nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn (rasltonia solanacearum smith) hại khoai tây vùng h) nội - phụ cận v) biện pháp phòng trừ , 2011 Lê Thị Thanh Thủy (2015), Nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn đối kháng chống Ralstonia Solanacearum Lê Thị Thanh Thủy Nguyễn Thị Hồng Hải, Hoàng Hoa Long, Nguyễn Linh Chi, Nguyễn Ngọc Cường (2006), Đặc điểm sinh học ứng dụng vi khuẩn nội sinh thực vật phòng trừ bệnh héo xanh trồng (do ralstonia solanacearum) Nguyễn Thị Thanh Thủy (2014), Nghiên cứu, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng vi khuẩn ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh trồng Nguyễn Tất Thắng (2012), nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn ralstonia solanacearum smith hại lạc, khoai tây vùng hà nội, phụ cận biện pháp phòng trừ TCVN 9300:2014 Nguyễn Tất Thắng, nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn ralstonia solanacearum smith hại lạc, khoai tây vùng hà nội, phụ cận biện pháp phịng trừ 2012 Nước ngồi A Achari1, R Ramesh (2018), Colonization of Eggplant by Endophytic Bacteria Antagonistic to Ralstonia solanacearum, the Bacterial Wilt Pathogen Gauri Abdjad Asih Nawangsih , Ika Damayanti, Suryo Wiyono , Juang Gema Kartika, (2011), Selection and characterization of endophytic bacteria as biocontrol agents of tomato bacterial wilt disease Arika Purnawati , Ika Rochdjatun Sastrahidayat , Abdul Latief Abadi , Tutung Hadiastono (2014), Endophytic Bacteria as Biocontrol Agents of Tomato Bacterial Wilt Disease Bell CR, Dickie GA, Harvey WLG, Chan JWYF (1995), Endophytic bacteria in grapevine Can J Microbiol 41:46–53 40 Berg, Gabriele and Hallmann, Johannes (2006), "Control of plant pathogenic fungi with bacterial endophytes", in Schulz, Barbara J E , Boyle, Christine J 140 C., and Sieber, Thomas N., Editors, Microbial root endophytes, Springer Berlin Heidelberg, Berlin, Heidelberg: 53-69 Bhattacharyya P, Jha D.K (2012), "Plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR): emergence in agriculture", World Journal of Microbiology and Biotechnology 28, pp 1327-1350 Chen, C., Bauske, E M., Musson, G., Rodriguezkabana, R and Kloepper, J W (1995), "Biological control of fusarium wilt on cotton by use of endophytic bacteria", Biological Control, 5(1): 83-91 Compant, Stéphane, Clément, Christophe and Sessitsch, Angela (2010), "Plant growth-promoting bacteria in the rhizo- and endosphere of plants: Their role, colonization, mechanisms involved and prospects for utilization", Soil Biology and Biochemistry, 42(5): 669-678 N Amaresana,b, V Jayakumarc , Krishna Kumarb and N Thajuddin (2011), Endophytic bacteria from tomato and chilli, their diversity and antagonistic potential against Ralstonia solanacearum Gazis R., Miadlikowska J., Lutzoni F., Arnold A E., Chaverri P (2012), Culturebased study of endophytes associated with rubber trees in Peru reveals a new class of Pezizomycotina: Xylonomycetes, Molecular Phylogenetics and Evolution Hallmann J, Quadt-Hallmann WF, Mahaffee A, Kloepper JW (1997) Bacterial endophytes in the agricultural crops Can J Microbiol 43:895–914 He L.Y., Sequeira L., and Kelman A (1983), "Characteristics of strains of Pseudomonas solanacearum from China", Plant Disease 67, pp 1357-1362 Jacobs MJ, Bugbee WM, Gabrielson DA (1985), Enumeration, location and characterization of endophytic bacteria within sugar beet roots Can J Bot 63:1262–1265 Ji X, Lu G, Gai Y, Zheng C, Mu Z (2008), Biological control against bacterial wilt and colonization of mulberry by an endophytic Bacillus subtilis strain FEMS Microbiol Ecol 65:565–573 Kado, C I (1992), “Plant pathogenic bacteria”, The prokaryotes, ed Balows, A., et al., Springer-Verlag, New York, 660 - 662 41 Kambiz Bahmani , Nader Hasanzadeh , Behrouz Harighi , Alireza Marefat (2021), Isolation and identification of endophytic bacteria from potato tissues and their effects as biological control agents against bacterial wilt Kelman A., (1954), “The relationship of pathogenicity of Pseudomonas solanacearum to colony appearance in Tetrazolium medium”, Phytopathology Kloepper, Joseph W., Ryu, Choong-Min and Zhang, Shouan (2004), "Induced systemic resistance and promotion of plant growth by Bacillus spp.", Phytopathology, Vol 94(11): 1259-1266 Kobayashi DY, Palumbo JD (2000), Bacterial endophytes and their effects on plants and uses in agriculture, p 199–233 Mehan V K & McDonald D (1995), “Techniques for diagnosis of Pseudomonas solanacearum, and for resistance screening against groundnut bacterial wilt”, Technical Report, International Crops Research Institute for the Semi-Arid Tropics Onathan M Jacobs, Lavanya Babujee, Fanhong Meng, Annett Milling, and Caitilyn Allen (2012) The in planta transcriptome of Ralstonia solanacearum: conserved physiological and virulence strategies during bacterial wilt of tomato Monther Tahat and Kamaruzaman Sijam (2010), Ralstonia solanacearum: The Bacterial Wilt Causal Agent: Asian Journal of Plant Sciences 9(7): 385-393 Ryan, Robert P., Germaine, Kieran, Franks, Ashley, Ryan, David J and Dowling, David N (2008), "Bacterial endophytes: recent developments and applications", FEMS microbiology letters, Vol 278(1): 1-9 Seeling, B and Zasoski, J.R (1993), "Microbial effects in maintaining organic and innorganic solution phosphorus concentrations in a grassland topsoil", Plant Soil, Vol 148: 277-284 Siddiqui, Zaki and Singh, Priyanka (2010), "Biocontrol of root-knot nematode Meloidogyne incognita by the isolates of Bacillus on tomato", Archives of Phytopathology and Plant Protection, Vol 43(6): 552 Sprent, J.I and de Faria, S.M (1988), Mechanisms of infection of plants by nitrogen fixing organisms Plant Soil 110:157–165 42 Sturz VA, Christie RB, Matheson GB, Nowak J (1997), Biodiversity of endophytic bacteria which colonize red clover nodules, roots, stems and foliage and their influence on host growth Biol Fertil Soils 25:13–19 Verma, Subhash C., Ladha, Jagdish K and Tripathi, Anil K (2001), "Evaluation of plant growth promoting and colonization ability of endophytic diazotrophs from deep water rice", Journal of Biotechnology, Vol 91(2): 127- 141 43 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Trình tự Nucleotide chủng T03 T04 với cặp mồi 759/760 T03 759/760 (282bp) GTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCGATGCTGGCGCGTCTCTGACGCC GCCCGCACCCCTCCGAACGGCCGAGTCCTGTCCGGCATCCCGCACCGCC GTGCGGCCGATGACGCAACGGCATGGTGGCTGCGTGCTGAAATCGTGA GCAGACTATGGCAGGGCCTAACATCCCGATACAAAAGTCGTTTTGGAG GCAGGCACGTGAAAATGGTATGCTTCGGGTTATCACCTATGTAGAGTG CATAGATAAAAACAATCGAATTGGAAAGTGAGTTGACGGCGAC Hình Kết so sánh độ tương đồng chủng T03 (759/760) T04 759/760 (283bp) TGTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCGATGCTGGCGCGTCTCTGACGCCGC CCGCACCCCTCCGAACGGCCGAGTCCTGTCCGGCATCCCGCACCGCCGTGCG GCCGATGACGCAACGGCATGGTGGCTGCGTGCTGAAATCGTGAGCAGACTAT GGCAGGGCCTAACATCCCGATACAAAAGTCGTTTTGGAGGCAGGCACGTGAA AATGGTATGCTTCGGGTTATCACCTATGTAGAGTGCATAGATAAAAACAATC GAATTGGAAAGTGAGTTGACGGCGAC 44 Hình Kết so sánh độ tương đồng chủng T04 (759/760) Phụ lục 2: Trình tự Nucleotide chủng T03 T04 với đoạn mồi 16S 23S T03 16S/23S (591bp) AGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCT CCTTTAAGAGCGTGCATCTTAGTTAGGCGTCCACACTTATCGGTTTGTTT GATGTTACAGCCAAGGGTCTGTAGCTCAGGTGGTTAGAGCACCGTCTTG ATAAGGCGGGGGTCGTAGGTTCAAGTCCTACCAGACCCACCAAGTTAC GGGCGGCGGAGAGCGATCTTGCCGTGAACTGGGGGATTAGCTCAGCTG GGAGAGCACCTGCTTTGCAAGCAGGGGGTCGTCGGTTCGATCCCGTCA TCCTCCACCAACACCTTGTGGTAGCCAAACGCAAGCATCGAGAGATCG GTGTTTGCGTTTGGCATTGCCAAGACGAGTAGTAACTCGGCTGTTCTTT AACAATATGGAATGTAGTAAAGGTGTCGCGGCGCGTTGATGAGGCGCG CAATTTAAACGCGACACTGGGTTGTGATTGTATCAACCAGTATTACGAG TGATCGAAAGACCGCTTGGAATACGGCACAACGCGAGAACTCAGCCTA TAGCGAGACATACTCGTTATAGGGTCAAGCGAATAAGTGCATGTGGTG GATGCCTTGGCAC 45 Hình Kết so sánh độ tương đồng chủng T03 (16S 23S) T04 16S 23S (591bp) AGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTT TAAGAGCGTGCATCTTAGTTAGGCGTCCACACTTATCGGTTTGTTTGATGTTA CAGCCAAGGGTCTGTAGCTCAGGTGGTTAGAGCACCGTCTTGATAAGGCGGG GGTCGTAGGTTCAAGTCCTACCAGACCCACCAAGTTACGGGCGGCGGAGAGC GATCTTGCCGTGAACTGGGGGATTAGCTCAGCTGGGAGAGCACCTGCTTTGC AAGCAGGGGGTCGTCGGTTCGATCCCGTCATCCTCCACCAACACCTTGTGGT AGCCAAACGCAAGCATCGAGAGATCGGTGTTTGCGTTTGGCATTGCCAAGAC GAGTAGTAACTCGGCTGTTCTTTAACAATATGGAATGTAGTAAAGGTGTCGC GGCGCGTTGATGAGGCGCGCAATTTAAACGCGACACTGGGTTGTGATTGTAT CAACCAGTATTACGAGTGATCGAAAGACCGCTTGGAATACGGCACAACGCGA GAACTCAGCCTATAGCGAGACATACTCGTTATAGGGTCAAGCGAATAAGTGC ATGTGGTGGATGCCTTGGCAC 46 Hình Kết so sánh độ tương đồng chủng T04 (16S 23S) Phụ lục 3: Khả đối kháng dịch nội bào vi khuẩn Hình Kết đối kháng dịch nội bào vi khuẩn với vi khuẩn Ralstonia solanacearum (1): Dịch nội bào chủng B01; (2): Đối chứng âm; (3): Dịch nội bào chủng B02; (4): Đối chứng âm 47 Phụ lục 4: Kết xác định hoạt tính sinh hóa A B Hình Thử nghiệm phản ứng oxidase chủng B01 B02 A: B01 ;B:B02 B A Hình Kết thử nghiệm phản ứng catalase chủng B01 B02 A: B01 ;B:B02 A B Hình Thử nghiệm phản ứng citrate chủng vi khuẩn B01 B02 A: B01; B: B02 48 A B Hình Thử nghiệm khả di động chủng vi khuẩn B01 B02 Hình 10 Thử nghiệm khả phân giải Urea chủng vi khuẩn B01 B02 49 50 ... vi khuẩn nội sinh cà chua Nội dung 2: Phân lập định danh vi khuẩn Ralstoni solanacearum Nội dung 3: Đánh giá khả đối kháng vi khuẩn nội sinh vi khuẩn Ralstonia solanacearum invitro Nội dung 4:... KHOA SINH - MƠI TRƯỜNG ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI KHUẨN NỘI SINH CÂY CÀ CHUA ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM Ngành: Công nghệ sinh học Khóa: 2018-2022 Sinh. .. Khảo sát khả đối kháng vi khuẩn nội sinh với vi khuẩn Ralstonia solanacearum cà chua CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vi khuẩn nội sinh thực vật 1.1.1 Định nghĩa Vi khuẩn nội sinh thực