PHẦN I PHẦN I MỞ ĐẦU 1 1 Đặt vấn đề Cây thuốc có một vị trí vô cùng quan trọng trong đời sống con người Không chỉ được sử dụng trực tiếp mà nó còn là nguồn nguyên liệu vô vùng quý giá cung cấp cho sản[.]
PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây thuốc có vị trí vơ quan trọng đời sống người Không sử dụng trực tiếp mà cịn nguồn ngun liệu vơ vùng q giá cung cấp cho sản xuất bào chế thuốc nhằm phục vụ chăm sóc sức khỏe cho nhân dân Với lợi vị trí địa lý, đa dạng địa hình tạo cho Việt Nam điều kiện đa dạng vùng khí hậu đất đai, có nguồn tài nguyên sinh vật phong phú, có nhiều lồi động thực vật sử dụng để làm thuốc Hiện đời sống người nâng cao, nhu cầu chăm sóc sức khỏe người ngày tăng lên, mặt khác xuất diễn biến phức tạp bệnh yêu cầu ngày phải có nhiều loại dược liệu mới, với số lượng lớn cung cấp cho ngành cơng nghiệp sản xuất thuốc Vì vậy, năm gần nhà khoa học không ngừng nghiên cứu, đẩy mạnh phát triển thuốc vào sản xuất Trong số đó, số lồi thuốc thuộc chi Phyllanthus quan tâm Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus Schum Et Thonn.) với tác dụng ức chế DNA polymerase virus viêm gan B virus viêm gan khác, bảo vệ tế bào gan, gây hạ đường máu, hạ áp người [3] Chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L.) với tác dụng điều trị nhiều loại tế bào ung thư mà khơng có tác dụng phụ độc tế bào bình thường, ức chế nhiễm virus Herpes simplex – [12] Hiện có nhiều loại thuốc biệt dược sản xuất từ loài Fenlinat, VG – 5, Livlilnic, Diệp hạ châu, trà túi lọc Diệp hạ châu…đặc biệt chúng sử dụng làm thuốc mà khơng cần kết hợp với dược liệu khác Các sản phẩm cấp phép Bộ Y tế, bán rộng rãi thị trường người tiêu dùng đón nhận Tuy lồi thuốc có giá trị chưa có nghiên cứu cơng bố quy trình trồng trọt thức cho lồi Việt Nam Do chúng tơi tiến hành nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật trồng trọt nhằm góp phần xây dựng quy trình trồng trọt cho lồi diệp hạ châu Xuất phát từ lý đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllanthin hai loài Diệp hạ châu thuộc chi Phyllanthus điều kiện vụ xuân Gia Lâm – Hà Nội” 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích Xác định mật độ trồng, thời vụ thích hợp giúp Diệp hạ châu sinh trưởng, phát triển tốt, đạt suất chất lượng dược liệu tốt 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Đánh giá ảnh hưởng mật độ trồng đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh suất loài Diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh suất loài Diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến hàm lượng hoạt chất Phyllanthin loài diệp hạ châu PHẦN III TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguồn gốc, phân bố, đặc điểm thực vật học chi Phyllanthus hai loài nghiên cứu 2.1.1 Nguồn gốc, phân bố chi Phyllanthus L Chi Phyllanthus L Thuộc họ Thầu dầu (Euphorbicaceae), Thầu dầu (Euphorbiales), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) [1], [2], [7], [18], [4], [5], [33], [7], [34] Họ Thầu dầu, với khoảng 283 chi 7300 loài, phân bố rộng rãi khắp giới, tập trung o Brazil Ấn Độ, Mã Lai [33], [8] Ở Việt Nam, họ Thầu dầu có 79 chi 459 loài Riêng chi Phyllanthus, nước ta có tổng số 53 lồi biết đến, có 47 lồi dân gian gọi Diệp hạ châu như: Diệp hạ châu Phú Quốc, Diệp hạ châu Trừng, Diệp hạ châu Ấn có lồi dân gian sử dụng làm thuốc từ lâu đời, có lồi sử dụng làm thuốc chữa bệnh gan bệnh có liên quan tới gan là: P emblica, P amarus, P urinaria L var urinaria, P urinaria var nudiscapa Ross.& Haic [16] 2.1.2 Đặc điểm thực vật học chi Phyllanthus L Chi Phyllanthus chi có số lượng lồi đa dạng, đồng thời đặc điểm thực vật học loài đa dạng phong phú Đặc điểm chung của chi là: Về dạng thân, lá: thân gỗ, bụi nhỏ, bụi vừa hay thân thảo Lá mọc cách, đơn, ngun, có cuống hay khơng có cuống, có kèm Cụm hoa: cụm hoa mọc kẽ hay nách Hoa nhỏ, khơng cánh Hoa đơn tính, gốc, khác gốc Hoa đực: Đài – 6, kiểu tiền khai hợp Đĩa mật hình dạng khác nhau, khơng có Nhị – 5, nhị rời hay nhị dính liền, bao phấn hình trứng hay hình cầu, bao phấn hai song song hay tách ra, mở dọc, mở chéo hay mở ngang Trên hoa đực đơi cịn có vết tích nhụy Hoa cái: Đài – hay nhiều Đĩa mật hình thành khác khơng có Bộ nhụy: bầu có ơ, – Vịi nhụy rời hay liền, ngun chẻ đôi hai đầu, mỏng hay dày mở rộng đỉnh Mỗi có hai nỗn xếp chồng hay xếp bên Quả: Quả nang, chín chia mảnh vỏ, mảnh van, có khơng có vỏ ngồi, có nạc hay mọng hay hạch Hạt: Hình cạnh (góc), khơng có mồng, lớp vỏ nang cứng, phơi nhũ nạc, phôi thẳng hay cong, mầm dày Theo nghiên cứu tiến sĩ thực vật học Nguyễn Nghĩa Thìn [18], chi Phyllanthus chi lớn với 700 loài, phân bố khắp nơi đặc biệt tập trung vùng Đông Nam Á vùng nhiệt đới Nam Mỹ Ở Việt Nam có 46 lồi thuộc phân chi: - Kiranelia: Thân bụi, mọc cách, có kèm Cụm hoa dạng bó nách Lá đài có – Đĩa mật tồn Nhị tự dính, bao phấn ô, mở dọc Bầu ô, nạc Ở Việt Nam phân chi có lồi - Cicca: Cây thân gỗ thân bụi Lá đơn, mọc cách, có kèm Hoa thành bó nách cành khơng có Lá đài thường – Cánh tràng khơng tồn Nhị 4, tự hặc dính liền Bầu ô ô Quả nang nạc Ở Việt Nam phân chi tồn loài - Phyllanthodendron: Lá đài kéo dài đỉnh, gần có gờ mặt lưng, khơng có đĩa mật thực hay nói cách khác xác lưỡi d, hẹp mọc xen kẽ với thùy đài loài tuyến; vịi nhụy thường dày khơng chia thành rãnh Phân chi Việt Nam có lồi - Phyllanthus: Hoa đực có nhị, bao phấn khơng có trung đới ngắn đỉnh Lá đài khơng có gờ mặt lưng khơng kéo dài đỉnh Hoa có vịi nhụy tự dính mức độ khác nhau, vịi nhụy phân chia phân chia khơng dày, có khía mặt Ở Việt Nam phân chi có 16 lồi - Eriococcus: Hoa đực có đài, hai nhị bé khơng cuống Hoa có – đài Ở Việt Nam phân chi có 13 loài 2.1.3 Đặc điểm thực vật loài nghiên cứu 2.1.3.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn.(Chó đẻ thân xanh, diệp hạ châu đắng) Cây thảo, cao 10 – 40 cm, phân cành, màu lục Lá mọc so le, xếp hai dãy cành trông kép lơng chim, gốc trịn, đầu tù nhọn, hai mặt nhẵn, mặt màu lục sẫm, mặt mốc Hoa đơn tính mọc kẽ lá, khơng có cánh hoa, màu lục nhạt, hoa đực có cuống ngắn xếp hoa cái, hoa có cuống dài Quả nang, hình cầu, nhẵn, dẹt, chia thành mảnh vỏ, mảnh vỏ có van chứa hạt Hạt hình tam giác, đường kính 1mm, có cạnh dọc vân ngang Mùa hoa tháng – 6, mùa tháng – [9] Diệp hạ châu đắng có nguồn gốc xa xưa vùng nhiệt đới Nam Mỹ thấy phân bố khắp vùng nhiệt đới cổ Ở Châu Á, vùng phân bố diệp hạ châu đắng gồm nước Ấn Độ, Malaysia, Philippin, Indonesia, Thái lam, Campuchia, Lào, Việt Nam, Nam Trung Quốc vùng đảo Salawesi Ở Việt Nam, diệp hạ châu đắng thấy khắp nơi, từ tỉnh vùng đồng bằng, ven biển, đảo lớn, đến tỉnh trung du miền núi có độ cao 800m, nước Đơng Nam Á, độ cao phân bố lên đến 1000m Diệp hạ châu đắng ưa sáng chịu bóng cịn nhỏ mọc xen lẫn với loài cỏ khác Cây thường mọc đất ẩm vườn, ruộng trồng hoa màu, ven đường hay nương rẫy Cây mọc từ hạt thường xuất vào khoảng cuối xuân, sinh trưởng nhanh vòng tháng mùa hè, sau hoa tàn lụi Tồn vòng đời kéo dài – tháng, hạt diệp hạ châu tồn đất – tháng sức mầm [3] Toàn (trừ rễ) sử dụng để làm thuốc, dùng tươi sấy khơ [3]Theo Phạm Hồng Hộ, Phyllanthus amarus Schum.& Thonn cỏ niên, cao đến 60cm, thân tròn, láng, nhánh ngắn daì – 6cm, mang nhỏ Lá có phiến trịn dài, to 5-11 x 3-6, tù hai đầu, gân phụ mảnh, có cặp gân; bẹ hẹp, nhọn Hoa nách lá, đài 5, tuyến mật nhiều thùy Quả nang trịn to 3mm, hạt có sọc dọc lưng, n = 13 [16] Đặc điểm vi phẫu thân loài P amarus so với loài P urinaria L Không khác nhiều, ngoại trừ P urinaria L có mấu lồi vịng gỗ gồm mạch gỗ kích thước nhau, xếp thành hàng khác [9] 2.1.3.2 Phyllanthus urinaria L (Chó đẻ cưa, cam kiềm, rút đất, chó đẻ) Theo Đỗ Tất Lợi cộng [11], Phyllanthus urinaria L hay cịn có tên gọi diệp hạ châu, diệp hịe thái, Lão nha châu, Prak phle (campuchia) mô tả loại cỏ, mọc hàng năm, cao khoảng 30cm, mọc thẳng đứng, mang cành, thường có màu đỏ Lá mọc so le, lưỡng hệ, trơng lồi kép, phiến thuôn, dài – 15 mm, rộng 2-5mm, đầu nhọn hay tù, mép nguyên có cưa nhỏ, mặt màu xanh lơ, khơng có cuống hay có cuống ngắn Hoa mọc kẽ lá, nhỏ, màu nâu đỏ, đơn tính, hoa đực hoa gốc, hoa đực đầu cành, hoa gốc cành Hoa khơng có cuống có cuống ngắn Đường kính đạt tới 2mm, treo lủng lẳng có tên diệp hạ châu, hạt cạnh, hình trứng, màu nâu nhạt, có vân ngang Về phân bố, Chó đẻ cưa mọc hoang khắp nơi nước ta khắp nước vùng nhiệt đới Người ta dùng toàn để làm thuốc Mùa thu hái quanh năm tốt vào mùa hạ 2.2 Thành phần hóa học 2.2.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn Trong Phyllanthus amarus Schum.& Thonn chứa chất đắng Phyllanthin, khơng có quinin alcaloid khác Lá khơ chứa chất đắng hypophyllanthin (0,05%) phyllanthin (0,35%) gây độc cá ếch Ngoài ra, có chứa niranthin, nitetralin phyteralin [6] Người ta cịn phát có lignan, flavonoid alkaloid kiểu securinin: niuroidin, isobubbialin, epibubbialin, chất amariinic acid, loại ellgitannin, với elaeocarpusin, geraniiic acid B repandusinnic acid A I-O-galloyl-2,4-dehydrohexahydroxydyphenoyl – glucopyranose [31], [32], 35] Foo-Ly tách được, 1,6-digalloylglucopyranosid, amariin geranniin, corilagin, rutin, quercetin-3-O-glucopyranosid từ phân đoạn phân cực phyllanthus amarus [32] Mới đây, nghiên cứu thành phần khoáng cây, Vũ Văn Vụ xác định có mặt Gd, La, Ce có khả tạo phức có hoạt tính chống ung thư Các kim loại nặng độc có hàm lượng thấp, có Cu Zn vi lượng trội Hàm lượng K trung bình cao (1,8%), điều liên quan đến tác dụng mát gan lợi tiểu thuốc [24] 2.2.2 Phyllanthus urinaria L Trong lồi P urinaria L có mặt acid, triterpen, vài alkaloid dẫn xuất phenol Gần đây, từ người ta phân lập acid ellagic, acid gallic, acid phenolic flavonoid, chất thứ không tan nước, chất sau tan nước nóng, cịn chất gọi coderacin [6] Theo Trần Công Khánh, tác giả người Trung Quốc phân lập từ số hợp chất, có chất xác định methylester dehydrochebulic carboxylat methyl brevifolin Gần đây, cơng trình nghiên cứu khoa học thành phần hóa học loài Phyllanthus amarus Phyllanthus urinaria [9], Thạc sĩ Lê Việt Dũng cộng phân lập chất là: HQ, DUNG 1, DUNG Căn vào phổ thu dự kiến chúng polyphenol, DUNG có cấu trúc flavonon So sánh thành phần hóa học lồi, anh khẳng định: hai lồi có tannin, flovonoid, đường khử, acid hữu cơ, carotene, tannin flavonoid thành phần chính, lồi P amarus cịn có alkaloid, khác biệt giúp cho việc phân biệt hai lồi qua phản ứng định tính Cả hai lồi có hàm lượng tanin cao (P amarus: 7,78%; P urinaria: 9,11%), điều phần lý giải tính sát trùng, giải độc chống viêm chúng có liên quan đến tác dụng chữa viêm gan tác dụng ức chế enzyme polymerase DNA nội sinh virus viêm gan B [9] 2.3 Tác dụng dược lý sử dụng 2.3.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn 2.3.1.1 Tác dụng dược lý Cây Diệp hạ châu đắng có vị đắng, tính mát, có tác dụng tiêu độc, sát trùng, tán ứ, thông huyết, điều kinh, lợi tiểu, thông sữa [3] Cao Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ gan chuột cống trắng gây nhiễm độc gan carbon tetraclorid Trong mơ hình gây xơ gan thực nghiệm chuột cống trắng, thuốc có tác dụng làm giảm hàm lượng colagen máu làm giảm mức độ xơ gan động vật điều trị so với đối chứng Thuốc có tác dụng lợi tiểu, chống oxy hóa tỏ có mức độ an tồn cao thử nghiệm độc tính Các liguan phyllanthin hypophyllanthin Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ tế bào gan chuột cống trắng chống lại tác dụng độc hại tế bào gây carbon tetraclorid galactosamin Diệp hạ châu đắng ức chế DNA polymerase virus viêm gan B virus viêm gan khác Trong thời gian nghiên cứu lâm sàng sơ bộ, người mang virus viêm gan B điều trị với liều hàng ngày 200 mg cao toàn Diệp hạ châu đắng (bỏ rễ) 30 ngày Kết quả, 22/37 (59%) bệnh nhân điều trị kháng nguyên bề mặt viêm gan B 1/23 (4%) bệnh nhân đối chứng có tượng Một số đối tượng theo dõi tháng khơng có trường hợp kháng ngun bề mặt xuất trở lại Khơng thấy có có tác dụng độc Tồn Diệp hạ châu đắng có tác dụng gây hạ đường máu, hạ áp lợi tiểu người Cây có hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm Ba hoạt chất từ Diệp hạ châu đắng có tác dụng ức chế aldos reductase acid elargic, brefolin carboxylat ethylbrevifolin; acid elargic có tác dụng mạnh nhất, ức chế mạnh lần so với quereitrin chất thiên nhiên ức chế aldos reductase biết Nghiên cứu Viện Dược liệu tác dụng dược lý bột phyllanthin cho thấy: Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây nhiễm độc CCL4 cho thỏ uống cao khô Diệp hạ châu đắng với liều 0,65 g/1kg/ngày kéo dài 18 ngày Nghiên cứu khẳng định cao khô Diệp hạ châu đắng có tác dụng chống viêm cấp tốt cho thuốc đường tiêm đường uống, nhiên đường tiêm có tác dụng mạnh đường uống Thuốc có tác dụng chống xơ gan antioxydant Khi sử dụng bột phyllanthin với liều lượng tương ứng 10g dược liệu/kg/ngày uống liên tục tuần có tác dụng bảo vệ gan tốt mơ hình gây xơ gan thực nghiệm 12 tuần Về tác dụng chống antioxydant, thuốc làm giảm peroxy hóa có ý nghĩa < 0,01 hoạt tính chống oxy hóa thuốc 29,76% Với liều tính theo dược liệu khơ 20 g/kg chuột cho thấy tác dụng lợi tiểu rõ rệt Đồng thời khẳng định cao Diệp hạ châu đắng có tính độc thấp, có độ an tồn cao việc sử dụng làm thuốc điều trị cho người [10] 2.3.1.2 Sử dụng Diệp hạ châu đắng từ lâu đời sử dụng thuốc dân gian nhiều dân tộc giới, nước vùng Đông Nam Á miền Nam Trung Quốc Ở Việt Nam, Diệp hạ châu đắng biết đến từ lâu với tác dụng trị viêm gan, vàng da, sốt, đau mắt, rắn cắn Diệp hạ châu đắng làm tăng mãnh liệt tiết nước tiểu kinh nguyệt khơng gây hại Ở nhiều nước Viễn đơng sử dụng tính chất Tác dụng lợi tiểu có tỷ lệ Kali cao [24], [6] Dân gian thường sử dụng làm thuốc thông tiểu, thông sữa điều kinh thông kinh trục ứ Ở Ấn Độ, người ta dùng toàn làm thuốc lợi tiểu [37] bệnh phù, bệnh lậu rối loạn đường niệu sinh dục Nước sắc chồi non dùng để trị lang; rễ tươi làm thuốc trị vàng da; dùng làm thuốc trị tiêu hóa, dịch dùng để đắp vết lở loét Người ta cịn dùng rễ phơi khơ nghiền thành bột, trộn với nước vo gạo dùng làm thuốc chữa vết sưng phù loét [6] Ở Tây Ấn, Diệp hạ châu đắng dùng để trị giun cho tre em Theo thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Thái Lan, Diệp hạ châu sử dụng làm thuốc trị vàng da Ở Peru, nhân dân uống nước sắc phần phía mặt đất để làm thuốc lợi tiểu, trị sỏi mật sỏi thận Ở số nước Nam Mỹ, Diệp hạ châu đắng dùng trị sốt rét, sỏi thận, sỏi bàng quang, rối loạn tiết niệu nói chung cịn có tác dụng gây sẩy thai Ở Haiti, nhân dân uống nước sắc Diệp hạ châu đắng tắm với nước ngâm để trị sốt Từ đảo Hải Nam đến Indonesia, nhân dân dùng nước sắc nước hãm Diệp hạ châu đắng làm thuốc lợi tiểu trị bệnh thận gan, bệnh hoa liễu, đau bụng làm thuốc long đờm cho trẻ em, hạ sốt, điều kinh trị tiêu chảy Nước sắc toàn thuốc bổ dày Lá giã nát làm thuốc trị dung giật bệnh da Ở Papua – Niu Ghine, nước hãm toàn để trị đau đầu, trị nhức nửa đầu 10 ... cho loài diệp hạ châu Xuất phát từ lý đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllanthin hai loài Diệp. .. hưởng mật độ trồng đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh hại suất loài diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh hại suất loài diệp hạ. .. hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến hàm lượng hoạt chất Phyllanthine loài diệp hạ châu 3.3 Phương pháp nghiên cứu bố trí thí nghiệm Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ trồng đến sinh