Untitled Science & Technology Development, Vol 19, No T3 2016 Trang 64 Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau của nọc ong trên chuột được gây mô hình viêm khớp Cấn Văn Mão Nguyễn Thị Hoa Bộ môn Si[.]
Science & Technology Development, Vol 19, No.T3-2016 Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau nọc ong chuột gây mơ hình viêm khớp Cấn Văn Mão Nguyễn Thị Hoa Bộ môn Sinh lý học, Học viện Quân Y Lê Hữu Thọ Nguyễn Trung Nhân Nguyễn Xuân Hải Đỗ Văn Nhật Trường Nguyễn Thị Thanh Mai Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM (Bài nhận ngày 17 tháng 11 năm 2015, nhận đăng ngày 06 tháng 05 năm 2016) TÓM TẮT Nghiên cứu đánh giá tác dụng chống viêm (liều mg/kg) Kết nhận thấy: dung dịch giảm đau nọc ong nhiều nhà adjuvant complete (liều 50 µL tiêm bàn chân khoa học giới thực Trên động vật chuột lần) gây nên tình trạng viêm thực nghiệm, nọc ong cho thấy khả khớp, tăng nhiệt độ, gây đau bàn chân chuột, chống viêm Sử dụng nọc ong thủy châm vào tăng bạch cầu giảm nhẹ hồng cầu máu huyệt đạo cho có kết mạnh ngoại vi Nọc ong (liều mg/kg 1,5 mg/kg) có phương pháp khác Nghiên cứu tác dụng giảm đau, giảm nhiệt độ chỗ tiến hành 60 chuột chia thành nhóm: nhóm bàn chân chuột, giảm nhẹ số lượng bạch cầu chứng, nhóm gây viêm khớp (bằng dung dịch hồng cầu máu ngoại vi thời gian 21 adjuvant complete) điều trị nước muối, nhóm gây ngày sau gây viêm Tác dụng nọc ong viêm điều trị nọc ong (3 liều khác nhau: 0,5 liều 1,5 mg/kg tương tự Mobic liều mg/kg chuột mg/kg; mg/kg 1,5 mg/kg tiêm vào huyệt túc tam lý) nhóm gây viêm điều trị Mobic Từ khóa: nọc ong, nhiệt độ, giảm đau, bạch cầu, hồng cầu MỞ ĐẦU Theo đông y, nọc ong (Bee Venom), sử dụng điều trị số chứng bệnh hiệu quả, u bã đậu (mà không cần phẫu thuật), cai nghiện ma túy, viêm khớp Đã có nhiều nghiên cứu cho thấy tác dụng chữa bệnh nọc ong sử dụng làm dạng cao xoa giảm đau, chống viêm, cho ong đốt trực tiếp vào huyệt tương ứng thể Hiệu chữa bệnh nọc ong thể người động vật Trang 64 số nghiên cứu cho thấy chế chống viêm nọc ong số hợp chất như: enzyme A2 (phospholipase, hyaluronidase ), phân tử protein, peptid (Melittin, secapin…), số hợp chất có phân tử nhỏ (Histamin, dopamin, norepinephrin…) [1] Nghiên cứu đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau nọc ong nhiều nhà khoa học giới thực Trên động vật thực nghiệm, nọc ong cho thấy khả chống viêm TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SỐ T3- 2016 nói chung đặc biệt tình trạng viêm khớp chuột bị ức chế điều trị nọc ong [1, 3] Có nhiều cách thức sử dụng nọc ong điều trị thực nghiệm như: tiêm da, tiêm bắp… Tuy nhiên sử dụng nọc ong thủy châm vào huyệt đạo cho có kết mạnh phương pháp khác [4, 5] Có nhiều mơ hình gây viêm khớp động vật thực nghiệm như: gây viêm khớp tá chất (adjuvant), carrageenan lipopolysaccharide (LPS), mơ hình gây viêm khớp sử dụng dung dịch tá chất Freund hoàn toàn (Complete Freund's adjuvant) nhiều tác giả áp dụng coi mơ hình gây viêm khớp điển hình [6, 7] Đặc biệt đánh giá tác dụng chống viêm giảm đau nọc ong mô hình sử dụng rộng rãi [7] Nọc ong thành phần báo cáo hiệu điều trị tình trạng viêm khớp người [1, 6] Việc ứng dụng cách chữa bệnh nọc ong tiến hành số quốc gia giới, có Việt Nam Hiện nước chưa thấy có nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau nọc ong thực nghiệm lâm sàng Do đó, nghiên cứu thực với mục đích đánh giá tác dụng chống viêm nọc ong nuôi Việt Nam thủy châm huyệt túc tam lý (Zusanli) động vật thực nghiệm gây viêm khớp tá chất VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu Chuột cống trắng trưởng thành (cân nặng 150–200 g) mua từ ban chăn nuôi Học viện Quân Y chia thành nhóm, nhóm 10 Nhóm (nhóm chứng): khơng gây viêm khớp, điều trị dung dịch NaCl 0,9 % Nhóm 2: gây viêm khớp, điều trị dung dịch NaCl 0,9 % Nhóm 3: gây viêm khớp, điều trị nọc ong liều 0,5 mg/kg Nhóm 4: gây viêm khớp, điều trị nọc ong liều mg/kg Nhóm 5: gây viêm khớp, điều trị nọc ong 1,5 mg/kg Nhóm 6: gây viêm khớp, điều trị Mobic (Boehringer Ingelheim Ellas A.E, Hy Lạp, Meloxicam 7,5 mg) liều mg/kg Nọc ong chiết xuất từ ong mật Apis mellifera, nuôi trang trại ông Lê Minh Điền, Ấp Đồng Nhơn, xã Lương Quới, huyện Giồng Trôm, tỉnh Bến Tre thiết bị thu thập nọc dựa chế sốc điện Phương pháp gây viêm khớp sử dụng thuốc, nọc ong điều trị Dung dịch tá chất Freund hồn tồn (có chứa vi khuẩn Mycobacterium butyricium, Sigma Aldrich) tiêm liều da (50 µL) vào bàn chân sau bên phải (chuột gây mê thiopentane) để gây viêm khớp cổ chân chuột Nhóm chứng tiêm nước muối sinh lý liều tương đương vào vị trí Nọc ong liều lượng khác (0,5 mg/kg; mg/kg; 1,5 mg/kg) hòa tan nước muối tiêm da vào huyệt Túc tam lý, phía gị chày ngồi gần khớp gối (nằm xương chày xương mác, phía ngồi cách lồi củ trước xương chày mm, chày trước) tuần liên tục bơm tiêm 0,3 mL đầu kim nhỏ (0,2 x 10 mm) để khơng gây kích thích viêm tiêm nhiều lần Nước muối sinh lý sử dụng tương ứng với thể tích nọc ong và tiêm da vào huyệt (Túc tam lý) tuần liên tục Phương pháp đánh giá mức độ viêm đau khớp Đánh giá cảm giác đau nhiệt Nguyên lý: sử dụng kích thích nhiệt tác động vào chân gây đau làm chuột co chân lại, chuột bị đau chân viêm trước gây nên tình trạng tăng cảm chuột co chân lại sớm Trang 65 Science & Technology Development, Vol 19, No.T3-2016 Xác định thời gian từ kích thích đến chuột phản ứng với kích thích nhiệt cho thấy mức độ đau chuột Qui trình: Chuột cho vào buồng nhựa có đáy kính (hot-plate) làm quen vịng phút Sau nguồn nhiệt đặt phía sàn, hai chân sau Cường độ kích thích tính tốn cho bình thường chuột co chân lại khoảng 50 giây Thời gian tính từ kích thích nhiệt đến chuột co chân lại ghi cho hai chân sau chuột Lặp lại thí nghiệm sau phút nghỉ chừng với chân Thí nghiệm đánh giá thời điểm sau ngày tiêm thuốc gây viêm khớp, ngày lại ghi lại lần Đánh giá nhiệt độ khớp cổ chân chuột Nguyên lý: bị viêm nhiệt độ vùng khớp viêm tăng lên, đánh giá nhiệt độ khớp cho thấy mức độ viêm Cách xác định: Chuột giữ thoải mái tay, phịng trì nhiệt độ mơi trường khoảng 26 oC, nhiệt độ khớp cổ chân đo sử dụng nhiệt kế hồng ngoại (thời gian đo vịng giây) Thơng số đo ngày từ trước tiêm thuốc gây viêm khớp suốt trình điều trị Đánh giá mức độ viêm xét nghiệm huyết học Sau tuần điều trị nọc ong, chuột lấy máu ngoại vi để xét nghiệm số huyết học: Hồng cầu, Bạch cầu, tỷ lệ phần trăm loại bạch cầu Trang 66 Thống kê xử lý số liệu Số liệu nghiên cứu xử lý thống kê sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2007 phần mềm SPSS version 20 Kết nghiên cứu tiềm thời đáp ứng với kích thích nhiệt, nhiệt độ khớp cổ chân thông số huyết học nhóm gây viêm khớp điều trị nọc ong Mobic so sánh với nhóm chứng nhóm chứng dương gây viêm khơng điều trị ngày sử dụng phân tích phương sai chiều (one way ANOVA) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Đánh giá cảm giác đau nhiệt Bảng cho thấy, thời gian đáp ứng với kích thích nhiệt chuột nhóm chứng khơng có biến đổi theo thời gian từ ngày thứ đến 21 sau tiêm Trong thông số chuột thuộc nhóm cịn lại lại có xu hướng tăng lên theo thời gian Chuột gây viêm khớp adjuvant (liều 50 µL) điều trị nước muối có thời gian phản ứng với kích thích nhiệt nhanh so với nhóm chứng nhóm cịn lại Điều có lẽ chuột thuộc nhóm chứng khơng bị viêm khớp nên cảm nhận với kích thích nhiệt khơng có biến đổi theo thời gian, chuột nhóm cịn lại bị gây viêm khớp Ở giai đoạn đầu đau nên tăng nhận cảm với kích nhiệt sau đau giảm dần theo thời gian nên cảm nhận với kích thích nhiệt giảm Nghiên cứu phù hợp với số tác giả gây viêm khớp chuột cống adjuvant thấy tăng cảm nhận với kích thích xúc giác [5, 7] TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SOÁ T3- 2016 Bảng Tiềm thời đáp ứng với kích thích nhiệt chuột (giây) Lơ Ngày Ngày Ngày 12 Ngày 15 Ngày 18 Ngày 21 42,09 ± 8,54 16,88 ± 5,78a2 19,57 ± 6,18a2 24,96 ± 4,43a2 29,26 ± 6,54a1,b2 28,26 ± 6,78a1,b2 41,86 ± 11,63 19,42± 4,47a2 23,77± 4,88a2 28,35 ± 6,48a1 33,12 ± 4,89a1,b2 35,15 ± 7,23b2 39,97 ± 10,30 20,78 ± 6,35 a2 24,60± 5,99a1 30,03 ± 6,88 34,46 ± 6,30b2 36,06 ± 10,62b2 43,27 ± 7,81 23,05± 8,09a2 28,80 ± 5,50a1 32,75 ± 7,84 33,66 ± 8,81b2 34,59 ± 6,83b2 44,09 ± 7,27 25,91 ± 3,99a2 29,36 ± 5,77a1 32,27 ± 13,03 34,00 ± 7,85 34,18 ± 8,62 45,38 ± 7,05 27,00± 9,37a2 32,95 ± 6,89a1 31,09 ± 6,59a1 37,55 ± 10,62b1 36,27 ± 8,81 (a1 : p