Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)

Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)Đồ án tốt nghiệp: Khảo sát hoạt tính ức chế Tyrosinase của hạt me (Tamarindus Indica L.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP HỒ CHÍ MINH  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ỨC CHẾ TYROSINASE CỦA HẠT ME (TAMARINDUS INDICA L.) MÃ SỐ LUẬN VĂN: HC.19.11 Sinh viên: Nguyễn Hiếu Pháp MSSV: 15128048 Giáo viên hướng dẫn: TS Phan Thị Anh Đào Tp Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2019 LỜI CẢM ƠN Lời cảm ơn em xin gửi đến gia đình, thầy bạn bè quan tâm, giúp đỡ đóng góp ý kiến, tạo nguồn động lực to lớn để em hồn thành luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật TPHCM, đặc biệt thầy khoa Cơng nghệ Hóa học & Thực phẩm, thầy cô truyền kiến thức tảng nâng cao, hưỡng dẫn cho em kỹ để hoàn thành luận văn Em xin cảm ơn cô Ks Nguyễn Thị Mỹ Lệ chuyên viên quản lý phịng thí nghiệm mơn Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa học, trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật TPHCM, hướng dẫn tận tình tạo điều kiện tốt cho em sử dụng thiết bị, dụng cụ trình thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô TS Phan Thị Anh Đào, giảng viên môn Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa học, trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật TPHCM Cô đồng hành hướng dẫn em tồn khóa luận Cơ quan tâm bảo tận tình để em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn nội dung số liệu khóa luận tốt nghiệp Tất tài liệu tham khảo số liệu liên quan trích dẫn đầy đủ xác Tơi xin cam đoan thực qui trình kết theo thực nghiệm TPHCM, ngày tháng năm 2019 Ký tên ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC PHỤ LỤC viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix TÓM TẮT x MỞ ĐẦU xi CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Khái quát Tamarindus Indica L 1.1.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Những công dụng T indica 1.1.3.1.Kinh nghiệm sử dụng dân gian 1.1.3.2.Hoạt tính sinh học T indica 1.1.4 Nghiên cứu thành phần hóa học T indica 1.1.4.1.Thành phần dinh dưỡng T indica iii 1.1.4.2.Hợp chất phân lập từ T indica 1.1.4.3.Polysaccaride từ hạt me 12 1.2 Tổng quan tyrosinase chế phản ứng 14 1.2.1 Tyrosinase 14 1.2.2 Vai trò tyrosinase 16 1.3 Định hướng nghiên cứu 18 1.3.1 Những vấn đề tồn 18 1.3.2 Nội dung nghiên cứu 19 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 20 2.1 Hóa chất, thiết bị dụng cụ 20 2.1.1 Hóa chất 20 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Xử lý mẫu, điều chế cao methanol thô cao phân đoạn 21 2.2.1.1.Xử lý mẫu điều chế cao methanol thô 21 2.2.1.2.Điều chế cao phân đoạn 22 2.2.2 Phương pháp phân tích phân lập hợp chất 23 2.2.3 Các phương pháp nghiên cứu cấu trúc 23 2.2.4 Khảo sát khả ức chế tyrosinase 23 2.2.5 Khảo sát khả tạo phức chelate với Cu2+ 25 2.3 Thực nghiệm 27 iv 2.3.1 Nguyên liệu 27 2.3.2 Điều chế loại cao 27 2.3.3 Phân tích thành phần cao chiết ethyl acetate 28 2.3.4 Phân tách thành phần phân đoạn TI-C cao trích ethyl acetate 29 2.3.5 Phân tách thành phần phân đoạn TI-C3 từ phân đoạn TI-C 30 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Kết khảo sát khả ức chế tyrosinase mẫu cao 33 3.2 Khảo sát khả khử Cu2+ 34 3.2.1 Khảo sát thể tích CuCl2, BCDS, catechine 34 3.2.2 Kết khảo sát khả khử Cu2+ mẫu cao 36 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chất TI-C01 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 Kết luận 41 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC v DANH MỤC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Bảng 1: Phân loại khoa hoc Tamarindus indica L Bảng 2: Thành phần dinh dưỡng thịt me, non, hoa me Bảng 3: Thành phần dinh dưỡng hạt me, (%) .6 Bảng 4: Hàm lượng kim loại bên hạt me, (mg/100 g)[25, 29] Bảng 5: Một số hợp chất phân lập từ phận T indica Bảng 1: Khối lượng cao thành phần 28 Bảng 2: Khối lượng hiệu suất nhóm phân đoạn cao Ethyl acetate 29 Bảng 3: Thành phần phân đoạn TI-C1 đến TI-C6 30 Bảng 4: Thành phần phân đoạn TI-C3.1 đến TI-C3.3 31 Bảng 1: Kết khảo sát khả ức chế tyrosinase mẫu cao 33 Bảng 2: Kết khả ức chế acid koijic 34 Bảng 3: Kết khảo sát thể tích CuCl2, BCDS, catechine .35 Bảng 4: Kết thể tích tối ưu phương pháp ức chế Cu2+ 35 Bảng 5: Kết khả khử Cu2+ mẫu cao trích 36 Bảng 6: Số liệu phổ hợp chất TI-C01 với β-sitosterol 38 Sơ đồ 1: Quá trình điều chế cao methanol .21 Sơ đồ 2: Quá trình chiết cao phân đoạn 22 Sơ đồ 3: Quá trình khảo sát khả ức chế tyrosinase 24 Sơ đồ 4: Quy trình khảo sát khả tạo phức đồng chelate 26 Sơ đồ 5: Quá trình phân lập chất từ cao ethyl acetate tới phân đoạn TI-C3.2 32 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1:Cây me số phận Hình 2: Một số hợp chất terpen, steroic, chất béo từ T indica 11 Hình 3: Một số hợp chất polyphenol flavonoid từ T indica 12 Hình 4: Cấu trúc hóa học xyloglucan Tamarind seed polysaccharide (TSP) .13 Hình 5: Vị trí hoạt động enzym tyrosinase 15 Hình 6: Cơ chế chuyển hóa enzyme tyrosinase 16 Hình 7: Cơ chế hình thành sắc tố melanin 17 Hình 1: Chuyển hóa L-DOPA thành DOPAchrom tác động tyrosinase 23 Hình 2: Tạo phức đồng chelate giai đoạn 25 Hình 3: Tạo phức đồng chelate giai đoạn 26 Hình 4: Chất TI-C01 TLC 31 Hình 1: Cấu trúc hợp chất β-sitosterol (TI-C01) .37 vii DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H β-sitosterol .1 Phụ lục : Phổ 1H β-sitosterol Phụ lục 1: Phổ 13C β-sitosterol Phụ lục 2: phổ 13C β-sitosterol Phụ lục 1: Kết khảo sát khả ức chế tyrosinase .5 Phụ lục 2: Kết ức chế Cu2+ mẫu cao viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT A : Acetone d : Doublet (NMR), mũi đôi DCT : dopachrom tautomerase DHI : 5,6-Dihydroxyindole DHICA : 5,6-dihydroxy-1H-indole-2-carboxylic acid E : Ethyl acetate H : Hexane IC50 : Nồng độ mẫu mà ức chế 50 % gốc tự IQ : indole-5,6-quinon J : Hằng số ghép L-DOPA : L-3,4-dihydroxyphenylalanine m : Multiplet (mũi đa) M : Methanol MOPS : 3-morpholinopropane-1-sulfonic acid NMR : Nuclea magnetic resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) OD : Optical density: mật độ quang s : Singlet (mũi đơn) SKBM : Sắc ký mỏng SKC : Sắc ký cột t : triplet T indica : Tamarindus Indica L TSP : Tamarind seed polysaccaride UV : Ultraviolet (tử ngoại) ix >CH- 50.35 51.1 10 >C< 36.58 36.4 11 -CH2- 20.92 21.3 12 -CH2- 39.80 39.8 13 >C< 42.43 42.4 14 >CH- 56.79 56.8 15 -CH2- 24.06 24.2 16 -CH2- 28.06 28.3 17 >CH- 56.07 56.0 18 -CH3 0.72 s 11.39 0.69 s 11.8 19 -CH3 1.01 s 19.20 1.01 s 19.5 20 >CH- 21 -CH3 22 -CH2- 33.84 34.0 23 -CH2- 25.93 26.1 24 >CH- 45.86 45.8 25 >CH- 29.06 29.2 26 -CH3 0.85 d (6.9) 18.91 0.83 d (6.8) 19.8 27 -CH3 0.84 d (6.9) 18.47 0.81 d (6.9) 19.2 28 -CH2- 29 -CH3 36.04 0.96 d (6.6) 18.34 36.1 0.92 d (6.4) 22.89 0.87 t (7.4) 11.35 39 18.7 23.1 0.85 t (7.8) 11.0 ( trị số ngoặc J tính Hz) So sánh số liệu phổ TI-C01 với β-sitosterol cho thấy tương đồng (bảng 3.6), cấu trúc TI-C01 đề nghị β-sitosterol [60] 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ hạt me, điều chế mẫu cao thô gồm: cao methanol, cao cloroform, cao ethyl acetate Tiến hành sắc ký cột cao ethyl acetate thu phân đoạn từ TI-A đến TI-F Tiến hành khảo sát hoạt tính ức chế tyrosinase khả khử Cu2+ Qua việc khảo sát hoạt tính ức chế tyrosinase khả khử Cu2+ 11 mẫu cao phân đoạn trích từ hạt me, mẫu có hoạt tính ức chế enzyme khử đồng Trong đó, mẫu: cao methanol thơ mẫu từ phân đoạn TI-E đến TI-G tách từ cao ethyl acetate thể khả ức chế enzyme mạnh, vượt trội so với phân đoạn khác, giá trị IC50