NGUYỄN VĂN LÝ – Ảnhhưởnggâyrụng trứng
1
ẢNH HƯỞNGGÂYRỤNG TRỨNG 35NGÀY/LẦNĐẾNSỐ PHÔI /BÒ/NĂM
TRÊN ĐÀNBÒ SỮA
Nguyễn Văn Lý
1
, Lưu Công Khánh
3
, Nguyễn Thị Thoa
2*
, Đỗ Văn Hương
2
,
Trần Sơn Hà
2
, Nguyễn Thị Hương
2
, Lưu Ngọc Anh
2
và Phan Lê Sơn
3
1
Vụ Khoa học công nghệ - Bộ Nông nghiệp & PTNT
2
Phòng Thí nghiệm trọng điểm Công nghệ tế bào động vật
3
Bộ môn sinh sản và thụ tinh nhân tạo
Viện Chăn nuôi - Thụy Phương - Từ Liêm - Hà Nội
* Tác giả liên hệ: Nguyễn Thị Thoa – Phòng TN Trọng điểm tế bào động vật
Tel: (04) 2.166.165 / 0977. 249.755; Fax: (04). 38.389.775; Email: methoa2002@yahoo.com
ABSTRACT
Effect of superovulation interval 35 days/time on embryo number/cow/year of dairy cow
Bovine embryo transfer has been studied and applied widely around the world. Superovulation and embryo
recovery were the first important basic steps of embryo transfer technology. The objective of our study was to
compare 35 day-reapeated to 2-3 months repeated superovulation and embryo recovery. Two high genetic value
dairy cows were used as donors in this experiment. Cows received a standard Ovsync protocol plus a Prid for 12
days (starting on Day 0). From Day 10 to Day 13, cows were administered i.m, twice daily. Prid was removed
and then donors received PGF2
ỏ
on Day12. On Day 14 and 15, donors showed oestrous were inseminated
articificially twice. The number of copus lutea was counted and embryos were collected on Day 21. Donors
received PGF2
ỏ
on the day of embryo collection. On Day 35 cows were given Prid, and subsequent steps were
carried out repeately. In 8 experimental sessions, two cows reponsed well to the administration of hormone. We
collected a total of 109 embryos and ova (including 88 transferable embryos) from 2 donors. The average
number of embryo and ova/cow/ collection was 6.8. The average number of transferable embryo/cow/time was
5.5. Our results indicated that repeatability of 35 days- superovulation and embryo recovery increased the
number of embryo collected per donor a year. Although the results of superovultion depend on many factors
such as response of donors to the kinds of hormone using, abitity of AI, flushing… we can apply the 35-day
repeated superovulation schedule to increase the embryo number per valuable donor per year in Vietnam
conditions.
Key words: superovulation, repeated, bovine, embryo transfer, FSH, PGF2
ỏ
ĐẶT VẤN ĐỀ
Trước đây sau mỗi lần gâyrụng trứng nhiều (GRTN) phải để bò cho phôi nghỉ 2 - 3 tháng rồi
mới tiếp tục GRTN lặp lại. Như vậy, một năm chỉ tiến hành thu phôi 3 - 4 lần và số phôi bình
quân/bò/năm chỉ đạt 15 phôi. Hiện nay công nghệ cấy truyền phôi và kỹ thuật gâyrụng trứng
nhiều lặp lại đã có nhiều cải tiến. Rút ngắn thời gian GRTN lặp lại từ 2-3 tháng xuống 35
ngày/lần/bò có thể tăng số phôi thu được/bò/năm góp phần nâng cao hiệu quả trong công nghệ
cấy truyền phôi (CTP) bò.
Vì vậy, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu ứng dụng rút ngắn gâyrụng trứng nhiều và
thu phôi lặp lại từ 2-3 tháng xuống 35 ngày trênbò sữa”.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Bò cái lai F2 hướng sữa, năng suất 4000-6000 lit/chu kỳ
Các hormone sinh sản: FSH, PGF2α, Progesterone (PRID, CIDR)
ViÖn Ch¨n nu«i - T¹p chÝ Khoa häc C«ng nghÖ Ch¨n nu«i - Sè 15 -Th¸ng12- 2008
2
Nội dung nghiên cứu
Nghiên cứu gâyrụng trứng nhiều theo quy trình 35 ngày/lần.
Đánh giá phản ứng của buồng trứng bò qua các lần gâyrụng trứng nhiều.
Đánh giá kết quả thu hoạch phôi và chất lượng phôi thu được.
Phương pháp nghiên cứu
Chọn bò cho phôi
Bò cho phôi là những con bò cái lai hướngsữa khỏe mạnh, được chọn từ đàn hạt nhân,
năng suất sữa bình quân 4000-6000l/chu kỳ, có chu kỳ sinh dục bình thường, sinh đẻ bình
thường, không có dị tật ở cơ quan sinh dục, buồng trứng mềm, không mắc các bệnh truyền
nhiễm, có độ tuổi từ 2-6 năm. Tiến hành kiểm tra hoạt động của buồng trứng bằng phương
pháp khám qua trực tràng.
Tiêu chuẩn bò đực phối tinh
Bò GRTN khi động dục được thụ tinh nhân tạo bằng tinh đông lạnh. Tinh dịch phối giống
phải lấy từ những đực giống tốt nhất, đặc trưng cho giống về tính trạng mong muốn như: sản
lượng sữa, sản lượng thịt, tính trạng cao sản ở đực giống phải được di truyền cho thế hệ sau.
Phương pháp GRTN
Chúng tôi tiến hành GRTN lặp lại trênbò sử dụng hormone FSH và PGF
2ỏ
.
Bò sau khi được kiểm tra qua trực tràng thấy có thể vàng của chu kỳ trước, được đặt PRID
vào xoang âm đạo. Ngày đặt là ngày 0 của quy trình
Tiêm FSH từ ngày thứ 10 kể từ khi đặt PRID trong vòng 4 ngày theo liều giảm dần (3,5ml;
2,5ml; 2,0ml; 1,5ml lần lượt cho 4 ngày) tiêm bắp FSH cho bò cho phôi vào buổi sáng và buổi
chiều với khoảng cách 12 giờ.
Ngày thứ 12 tiêm 5ml PGF
2ỏ
(đồng thời rút PRID vào buổi sáng).
Bò động dục vào ngày thứ 14 sau khi tiêm. Được thụ tinh nhân tạo bằng tinh đông lạnh đã
được giải đông.
Đến ngày thứ 7 sau khi phối giống tiến hành thu phôi bằng phương pháp không phẫu thuật.
Sau khi thu phôi, tiêm prostaglandin – F
2ỏ
cho bò thu phôi. Sau đó 14 ngày tiến hành đặt
PRID lặp lại quy trình như trên lần thứ hai,.
Phương pháp thu hoạch và phân loại loại phôi
Phôi được thu hoạch bằng phương pháp không phẫu thuật vào ngày thứ 7 sau khi động dục và
phối giống, ngày thứ 7 ứng với giai đoạn phôi dâu và phôi nang. Đây là giai đoạn thích hợp
cho bảo quản và cấy truyền. Những phôi chất lượng tốt và phát triển đúng giai đoạn được sử
dụng trong công nghệ cấy phôi.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Chúng tôi tiến hành GRTN trên 2 bò bằng dụng cụ chứa hormone sinh dục Progesterone, FSH
và PGF
2
trung bình khoảng cách lặp lại là 35 ngày. Kết quả thu được như sau:
Kết quả kiểm tra phản ứng của buồng trứng bò khi GRTN
NGUYỄN VĂN LÝ – Ảnhhưởnggâyrụng trứng
3
Bò sau khi GRTN sẽ được thụ tinh nhân tạo bằng tinh cọng rạ. Đến ngày thứ 7 kể từ khi thụ
tinh nhân tạo thì tiến hành thu phôi bằng phương pháp không phẫu thuật. Trước khi giội rửa
thu hoạch phôi, chúng tôi tiến hành khám qua trực tràng để kiểm tra phản ứng của buồng
trứng bò cho phôi. Kết quả thể hiện ở bảng 1.
Bảng 1. Kết quả theo dõi phản ứng của buồng trứng bò khi GRTN
Số thể vàng kiểm tra thấy
Lần GRTN
Bò số hiệu 552
Bò số hiệu 789
Tổng số
Lần 1
10
8
18
Lần 2
12
9
21
Lần 3
13
8
21
Lần 4
9
12
21
Lần 5
10
8
18
Lần 6
8
10
18
Lần 7
10
7
17
Lần 8
9
8
17
Cộng
81
70
151
Mean SE
10 1,69
9 1,65
19 1,98
Qua Bảng 1 cho thấy, sau 8 lần GRTN số thể vàng bình quân của hai bò cho phôi là tương đối
cao bòsố hiệu 552 là 10 1,69 dao động trong khoảng 8 đến 13, còn bòsố hiệu 789 là
9 1,56. dao động khoảng từ 7 đến 12. Kết quả cho thấy, phản ứng của buồng trứng có sự dao
động giữa các lần thu phôi.
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với kết quả của một số tác giả khác đã công bố:
Theo Sacher và cs (1987) nghiên cứu GRTN bằng PMSG và FSH lặp lại từ 4- 23 lần với
khoảng cách lặp lại là 85 ngày, số thể vàng bình quân biến động từ 8,7-10,2 cho một lần lấy
phôi. So với kết quả nghiên cứu trước đây tại Việt Nam, kết quả trong nghiên cứu của
chúng tôi cao hơn kết quả của tác giả Đỗ Kim Tuyên, (1995) thí nghiệm GRTN với
khoảng cách lặp lại là 85 ngày trênbò lai F1 và F2 giữa bòsữa Hà Lan và bò Laisind cho
kết quả số thể vàng thu được trung bình là 6,3 0,5.
Tuy nhiên, so với nghiên cứu của một số tác giả khác, kết quả nghiên cứu của chúng tôi lại
thấp hơn. Tác giả Kim và cs (1987) GRTN bằng FSH và PMSG cho biết số thể vàng khi
GRTN bằng FSH là 12,3 và sử dụng PMSG thì kết quả là 11,9 .
Như vậy, xét về mặt số lượng, phản ứng buồng trứng của 2 bò được GRTN trong thí nghiệm
này là khá tốt; số lượng thể vàng thu được khá cao và trong giới hạn đảm bảo chất lượng tốt.
Về mặt thời gian, trong vòng 9 tháng, chúng tôi tiến hành 8 lần GRTN trên 2 bò, với khoảng
cách lặp lại trung bình là 35 ngày. So với nghiên cứu trước đây với khoảng cách lặp lại là 85
ngày thì khoảng cách lặp lại giữa các lần GRTN đã giảm khá nhiều.
Kết quả thu hoạch phôi từ bò thí nghiệm GRTN
Bò động dục sau khi GRTN được thụ tinh nhân tạo, ngày thứ 7 sau khi thụ tinh, chúng tôi tiến
hành thu hoạch phôi. Số lượng phôi và tế bào trứng thu được từ 2 bò thí nghiệm qua 8 lần
GRTN được thể hiện trong Bảng 2.
ViÖn Ch¨n nu«i - T¹p chÝ Khoa häc C«ng nghÖ Ch¨n nu«i - Sè 15 -Th¸ng12- 2008
4
Qua Bảng 2 cho thấy, sau 8 lần GRTN trung bình số phôi và số tế bào trứng thu được của bò
số hiệu 552 cao hơn so với bòsố hiệu 789. Bòsố 552 tổng số phôi và tế bào trứng thu được
qua các lần GRTN là 57; Số lượng này dao động từ 5 đến 8; trung bình mỗi lần thu là 7,13
1,13. Ở bòsố 789, tổng số phôi và tế bào trứng thu được là 52, dao động từ 5 đến 10 và trung
bình mỗi lần thu là 6,50 1,69. Tuy vậy, nếu tính riêng số phôi thu hoạch được thì kết quả của
2 bò không có sự chênh lệch đáng kể. Ở bòsố 552 thu được trung bình số phôi là 5,63 1,41
so với bòsố 789 là 5,38 1,69 phôi.
Bảng 2. Kết quả thu hoạch phôi qua các lần gâyrụng trứng nhiều
Số lượng phôi và tế bào trứng thu được
Bò số hiệu 552
Bò số hiệu 789
Lần GRTN
Số phôi
Tế bào trứng
Tổng số
Số phôi
Tế bào trứng
Tổng số
Lần 1
5
2
7
3
2
5
Lần 2
8
0
8
6
1
7
Lần 3
6
2
8
7
0
7
Lần 4
7
1
8
7
3
10
Lần 5
6
2
8
5
1
6
Lần 6
4
1
5
7
0
7
Lần 7
4
3
7
5
0
5
Lần 8
5
1
6
3
2
5
Tổng
45
12
57
43
9
52
MeanSE
5,63 1,41
1,50 0,93
7,13 1,13
5,38 1,69
1,13 1,13
6,50 1,69
Kết quả của chúng tôi phù hợp với kết quả của một số tác giả khác đã công bố. Theo tác giả
Lamberson và cs (1986) tiến hành GRTN lặp lại 3 lần số phôi bình quân của các lần GRTN
tương ứng là 5,2; 4,6; 5,2 phôi. Kết quả của chúng tôi cao hơn khá nhiều so với kết quả
nghiên cứu của bộ môn cấy truyền phôi Viện Chăn nuôi năm, (1995). Nhóm tác giả đã nghiên
cứu GRTN trênbò lai F1 và F2 giữa bòsữa Hà Lan và bò Laisind cho biết số phôi thu được
trung bình là 3,360,04 với khoảng cách lặp lại là 85-90 ngày.
Bảng 3. Tỷ lệ số phôi thu được so với số thể vàng kiểm tra
Bò số 552
Bò số 789
Lần
Số thể
vàng
Số phôi
Tỷ lệ phôi/
thể vàng
(%)
Số thể
vàng
Số phôi
Tỷ lệ phôi/
thể vàng
(%)
Lần 1
10
5
50
8
3
37,5
Lần 2
12
8
66,67
9
6
66,67
Lần 3
13
6
46,15
8
7
87,5
Lần 4
9
7
77,78
12
7
58,33
Lần 5
10
6
60
8
5
62,5
Lần 6
8
4
50
10
7
70
Lần 7
10
4
40
7
5
71,43
Lần 8
9
5
55,56
8
3
37,5
Tổng
81
45
55,56
70
43
61,63
NGUYỄN VĂN LÝ – Ảnhhưởnggâyrụng trứng
5
Tuy nhiên, kết quả của chúng tôi lại thấp hơn so với nghiên cứu của một số tác giả khác. Theo
Kim và cs (1987) khi GRTN trênbò bằng FSH và PMSG cho kết quả, số phôi thu được trong
mỗi lần là 8,2 và 7,3 phôi. Năm 1986, Sergeev NI và cs (1986) nghiên cứu GRTN lặp lại 3 lần
bằng PMSG và anti- PMSG cũng thu được số phôi tương ứng là 6,7; 6,7; 5,8 ở mỗi lần GRTN
Để đánh giá hiệu quả của việc GRTN, chúng tôi đã tính tỷ lệ tạo phôi so với số trứng rụng.
Kết quả thể hiện ở Bảng 3.
Bảng 3 cho thấy tỷ lệ số phôi trênsố trứng rụng thu được của 2 bò thí nghiệm đạt tỷ lệ khá
cao bòsố 552 đạt tỷ lệ 55,56% dao động trong các lần thu phôi từ 40 đến 77,78%, còn bò số
789 đạt tỷ lệ là 61,63% dao động trong khoảng từ 37,5 đến 87,5%.
Kết quả của chúng tôi cao hơn khá nhiều so với kết quả của Đỗ Kim Tuyên (1995) GRTN trên
bò lai F1 và F2 giữa bò Hà Lan và bò Laisind tỷ lệ thu phôi trênsố trứng rụng là 42,08%.
Như vậy, tỷ lệ phôi và trứng thu được của 2 bò đều có sự biến động qua các lần thu phôi và số
phôi thu được thấp hơn so với số trứng rụng. Điều này có thể là do kỹ thuật thụ tinh và quá
trình thu phôi chịu ảnhhưởng của các yếu tố như: thao tác của kỹ thuật viên trong quỏ trỡnh
giội rửa, soi tìm phôi… Kết quả thu phôi trong nghiên cứu này của chúng tôi không thấp hơn
nhiều so với kết quả GRTN của nhiều tác giả trên thế giới. Vì vậy, có thể nói quy trình chúng
tôi đã sử dụng khá đảm bảo về mặt kỹ thuật và phù hợp với điều kiện ở Việt Nam.
Kết quả phân loại phôi thu được
Để đạt được kết quả tốt khi sử dụng hay bảo quản phôi nhất là đạt tỷ lệ có chửa cao của bò cái
nhận phôi sau khi cấy, một việc làm rất cần thiết là phải đánh giá phân loại phôi trước khi
quyết định sử dụng như thế nào. Trong công nghệ cấy truyền phôi, phôi loại A và B có thể cấy
ngay cho bò nhận hoặc đem đông lạnh để bảo quản. Phôi loại C không đông lạnh được mà chỉ
có thể cấy ngay cho con nhận đồng pha, mặc dù kết quả có chửa thấp hơn so với khi cấy phôi
loại A, B. Kết quả đánh giá phân loại phôi để sử dụng hợp lý được trình bày trong Bảng 4
Bảng 4. Kết quả phân loại phôi
Lần GRTN
(n = 2 bò)
Tổng
Số
Phôi đủ tiêu chuẩn
cho cấy truyền
(A + B + C)
Phôi đủ tiêu chuẩn
đông lạnh
(A+ B)
Phôi kém chất lượng,
chậm phát triển không
sử dụng (D)
n
%
n
%
n
%
Lần 1
12
8
66,67
7
58,33
4
33,33
Lần 2
15
14
93,33
12
80,00
1
6,67
Lần 3
15
13
86,67
12
80,00
2
13,33
Lần 4
18
14
77,78
13
72,22
4
22,22
Lần 5
14
11
78,58
9
64,29
3
21,43
Lần 6
12
11
91,67
9
75,00
1
8,33
Lần 7
12
9
75,00
8
66,67
3
25,00
Lần 8
11
8
72,73
6
54,55
3
27,27
Tổng
109
88
80,73
76
69,72
21
19,27
Mean SE
100%
112,51
80,70
9,52,56
69,69
2,631,19
19,29
Qua bảng 5 ta thấy, sau 8 lần GRTN thu được 88 phôi đủ tiêu chuẩn dùng cấy truyền trung
bình là 11,88 2,51 với tỷ lệ 80,37%, 76 phôi đủ tiêu chuẩn đông lạnh trung bình là 9,50
2,56 tỷ lệ 69,72% và 21 phôi kém chất lượng, chậm phát triển không sử dụng bình quân
là 2,631,19 với tỷ lệ 19,27%. Như vậy, phôi đủ tiêu chuẩn dùng cho cấy truyền và đông
ViÖn Ch¨n nu«i - T¹p chÝ Khoa häc C«ng nghÖ Ch¨n nu«i - Sè 15 -Th¸ng12- 2008
6
lạnh chiếm tỷ lệ khá cao. Tỷ lệ số phôi đủ tiêu chuẩn cấy và đông lạnh trung bình của chúng
tôi tương ứng với kết quả của tác giả Nguyễn Thị Ước và cs (1996) tỷ lệ phôi đủ tiêu chuẩn
cấy và phôi đủ tiêu chuẩn đông lạnh lần lượt là 80,25%; 73,50% với khoảng cách lặp là 2,5
tháng.Tỷ lệ phần trăm số phôi đủ tiêu chuẩn đông lạnh của chúng tôi cao hơn tỷ lệ phần trăm
số phôi đông lạnh của các tác giả Hoàng Kim Giao và cs (2004) 69,72% so với 62,82%. Tỷ lệ
phôi đủ tiêu chuẩn cấy của chúng tôi thấp hơn so với các tác giả trên 80,37% so với 95,29%.
Tuy vậy, số phôi chất lượng tốt, loại A và B của chúng tôi cao hơn 69,72% so với 65,93%.
Như vậy, với 8 lần GRTN trên 2 bò thí nghiệm chúng tôi thu được 109 phôi và tế bào trứng
trung bình mỗi lần thu là 13,63 0,03 trong đó số phôi sử dụng được chiếm tỷ lệ khá cao
80,73% so với tổng số phôi và tế bào trứng thu được.
KẾT LUẬN
Mặc dù, kết quả gâyrụng trứng nhiều còn phụ thuộc vào các yếu tố như: sự phản ứng với
hormone của bò cho phôi, dinh dưỡng, kỹ thuật phối giống, quá trình dội rửa vv… Bước đầu
có thể kết luận rằng trong điều kiện Việt Nam có thể rút ngắn khoảng cách GRTN từ 2-3
tháng xuống 35 ngày, tăng số phôi thu được/bò/ năm so với trước đây.
Điều này có ý nghĩa vô cùng quan trọng trong chăn nuôi. Rút ngắn khoảng cách giữa các lần
khai thác mà vẫn thu được kết quả phôi nhiều và tốt đồng nghĩa với việc giảm chi phí chăn
nuôi, tăng hiệu quả kinh tế. Không những thế, nó còn cho phép khai thác tận dụng nhiều hơn
tiềm năng di truyền của những bò cái tốt để đưa vào sản xuất.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Đỗ Kim Tuyên, (1995). Nghiên cứu gây siêu bài noãn ở bò bằng sử dụng FSH và prostaglandin F2α.
Luận án PTS KHNN- Hà Nội, 1995.
Hoàng Kim Giao, Nguyễn Thanh Dương, Đỗ Kim Tuyên, (1996). Kết quả nghiên cứu cấy truyền phôi bò tại
Viện Chăn nuôi (1990-1996)
Hoàng Kim Giao, Lưu Công Khánh, Nguyễn Văn Lý, Nguyễn Thị Thoa, Phan Lê Sơn, Đặng Vũ Hoà, Chu Thị
Yến (2004). Gâyrụng trứng nhiều ở bò cho phôi.Thông tin Khoa học Kỹ thuật Chăn nuôi - Số 6 năm
2004.
Kim, H.N, Rovie, R,W. (1987). The use of PMSG antibodies with PMSG for superovulation beef cattle.
Theriogenology Volume 27.
Lamberson W.R. and . Lambeth,V.A (1986). Repeatability of respone to superovulation in Brangus cows.
Theriogenology Volume 26, Issue 5, November 1986.
Nguyễn Thị Ước, (1996). Nghiên cứu gâyrụng trứng nhiều và gây động dục đồng pha trong cấy truyền phôi trâu
bò. Luận án PTS KHNN- Hà Nội.
Sacher, B., H. Niemann, Schilling, E. (1987). Effects of repeated superovulation and embryos recovery and
fertility. Animal Breeding- Abstract 55.
Segeeve, N.I. (1986). The improvement of hormone induction superovulation in donor cows for embryo
transfer.Animal Breeding- Abstract 35.
Người phản biện : TS. Lê Văn Tý ; TS. Đào Đức Thà
. NGUYỄN VĂN LÝ – Ảnh hưởng gây rụng trứng 1 ẢNH HƯỞNG GÂY RỤNG TRỨNG 35 NGÀY/LẦN ĐẾN SỐ PHÔI /BÒ/NĂM TRÊN ĐÀN BÒ SỮA Nguyễn Văn Lý 1 , Lưu Công Khánh 3 , Nguyễn. bình số phôi và số tế bào trứng thu được của bò số hiệu 552 cao hơn so với bò số hiệu 789. Bò số 552 tổng số phôi và tế bào trứng thu được qua các lần GRTN là 57; Số lượng này dao động từ 5 đến. cho thấy tỷ lệ số phôi trên số trứng rụng thu được của 2 bò thí nghiệm đạt tỷ lệ khá cao bò số 552 đạt tỷ lệ 55,56% dao động trong các lần thu phôi từ 40 đến 77,78%, còn bò số 789 đạt tỷ lệ là 61,63%