BỘ CÔNG THƯƠNG DNTN TRÀ HOÀN NGỌC CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CÔNG NGHIỆP HÓA DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN[.]
BỘ CƠNG THƯƠNG DNTN TRÀ HỒN NGỌC CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CƠNG NGHIỆP HĨA DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO CHẾ PHẨM PHỊNG CHỐNG KHỐI U TỪ CÂY HOÀN NGỌC PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RALDK.” Mã số: CNHD ĐT 030/11-12 Cơ quan chủ trì đề tài: DNTN Trà Hoàn Ngọc Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Thị Minh Hằng HÀ NỘI - 2012 BỘ CƠNG THƯƠNG DNTN TRÀ HỒN NGỌC CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CƠNG NGHIỆP HĨA DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO CHẾ PHẨM PHỊNG CHỐNG KHỐI U TỪ CÂY HOÀN NGỌC PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RALDK.” Mã số: CNHD ĐT 030/11-12 Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì đề tài Giám đốc TS Nguyễn Thị Minh Hằng Ban chủ nhiệm Chương trình HÀ NỘI - 2012 Bộ Cơng thương DOANH NGHIỆP TƯ NHÂN TRÀ HỒN NGỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Hà Nội, ngày tháng năm 2012 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI KHCN I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ tạo chế phẩm phịng chống khối u từ Hồn Ngọc Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk Mã số đề tài: CNHD.ĐT.030/11-12 Thuộc: - Chương trình (tên, mã số chương trình): Chương trình nghiên cứu khoa học công nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020 Chủ nhiệm đề tài: Họ tên: Nguyễn Thị Minh Hằng Ngày, tháng, năm sinh: 07/08/1979 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sỹ Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Chức vụ: Phó giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Phát triển thuốc - Viện Hóa sinh biển Điện thoại: Tổ chức: 04-37916337 Nhà riêng: 04-38538754 Mobile: 0947216181 Fax: 04-37917054 E-mail: minhhang@imbc.vast.vn Tên tổ chức công tác: Viện Hóa sinh biển - Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Địa tổ chức: Viện Hóa sinh biển Địa nhà riêng: số 41 ngõ 132 phố Khương Trung, Thanh Xuân, Hà Nội Tổ chức chủ trì đề tài: Tên tổ chức chủ trì đề tài: Doanh nghiệp Tư nhân Trà Hoàn Ngọc Điện thoại: 066 3621121 Fax: 066 3621121 E-mail: hoanngoc7nga@yahoo.com Website: www.hoanngoctea.com Địa chỉ: 37 Nguyễn Trọng Cát; F - Hiệp Ninh; Thị Xã Tây Ninh Họ tên thủ trưởng tổ chức: Bùi Kim Nga Số tài khoản: 5700211001399 Ngân hàng: Nông nghiệp phát triển nông thôn Tây Ninh Tên quan chủ quản đề tài: Tỉnh Tây Ninh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực đề tài/dự án: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 02/ 2011đến tháng 02/ 2012 - Thực tế thực hiện: từ tháng 02/2011 đến hết tháng 05/2012 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng 03 năm 2012 đến tháng 05 năm 2012 - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 880tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ SNKH: 880 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: 0tr.đ + Tỷ lệ kinh phí thu hồi dự án (nếu có): ………… b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn SNKH: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số TT Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) 08/2011 612,9 08/2011 612,9 01/2012 267,1 12/2011 267,1 … Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng SNKH 437 Thực tế đạt Tổng SNKH 437 Nguồn khác 437 437 Nguồn khác 150 150 150 150 70 70 70 70 223 880 223 880 0 223 880 223 880 0 - Lý thay đổi (nếu có): Khơng thay đổi Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xác định nhiệm vụ, xét chọn, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì đề tài, dự án (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban TT hành văn Quyết định số 0154/QĐ-BCT ngày 12 tháng 01 năm 2011 Tên văn Quyết định việc giao kế hoạch khoa học cơng nghệ năm 2011 thuộc “Chương trình nghiên cứu khoa học công nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020” Quyết định số 4024/ QĐ-BCT ngày 29 tháng 07 năm 2011 Hợp đồng số 030/2011/HĐĐTCNHD ngày 14 tháng năm 2011 Công văn số Công văn việc thay đổi nội dung đề tài 2674/BCTCNHD.ĐT.030/11-12 BĐHHD ngày 29 tháng 03 năm 2012 Quyết định việc phê duyệt kinh phí đề tài, dự án KHCN năm 2011 thuộc “Chương trình nghiên cứu khoa học cơng nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020” Hợp đồng nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ Ghi Tổ chức phối hợp thực đề tài, dự án: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Viện Hóa sinh biển - Viện KHCNVN Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Tên tổ chức tham gia thực Viện Hóa sinh biển Viện KHCNVN Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt - Xác định - Báo cáo thành phần thành phần tritecpen có tritecpen có Hồn Ngọc rễ vây Hồn Ngọc - Xây dựng quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc - Báo cáo quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hoàn Ngọc - Thử độc tính cấp độc tính bán trường diễn hoạt tính kháng u sản phẩm - Báo cáo độc tính hoạt tính kháng u sản phẩm Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm tổng tritecpen từ rễ Hoàn ngọc, kiểm nghiệm sản phẩm theo tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định sản phẩm Tiêu chuẩn sở cho sản phẩm - Lý thay đổi (nếu có): khơng thay đổi - Phiếu kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm - Kết luận độ ổn định sản phẩm Ghi chú* Cá nhân tham gia thực đề tài, dự án: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân đăng Tên cá nhân Nội dung ký theo Thuyết tham gia thực tham gia minh TS Nguyễn Thị TS Nguyễn Thị Nghiên cứu Minh Hằng Minh Hằng qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Bùi Phước Hòa Bùi Phước Hòa Trồng, thu hái cung cấp nguyên liệu Hồn Ngọc Báo cáo tình hình trồng thu hái Hoàn Ngọc Bùi Kim Nga Bùi Kim Nga Trồng, thu hái cung cấp nguyên liệu Hồn Ngọc Báo cáo tình hình trồng thu hái Hoàn Ngọc PGS TS.Nguyễn PGS TS.Nguyễn Nghiên cứu Văn Hùng Văn Hùng qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Đoàn Thị Mai TS Đoàn Thị Mai Nghiên cứu Hương Hương, qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Phạm Cường Văn Nghiên cứu qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc CN Nguyễn Thị CN Nguyễn Thị Nghiên cứu Tú Oanh Tú Oanh qui trình chiết xuất thành phần hóa học Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Số TT Văn TS Phạm Cường Sản phẩm chủ yếu đạt Báo cáo thành phần trotecpen Hồn Ngọc, quy trình chiết xuất tổng tritecpen Ghi chú* sản phẩm Ngọc CN Hà Thị Thoa CN Hà Thị Thoa Nghiên cứu qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Đỗ Thị Thảo TS Đỗ Thị Thảo Thử độc tính khả kháng u Báo cáo độc tính khả kháng u - Lý thay đổi ( có): Khơng thay đổi Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch Số TT Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Đi khảo sát Vườn thực vật Bắc Kinh Trung Quốc Đi khảo sát Vườn thực vật Bắc Kinh, Trung Quốc Thời gian: tháng 8/2011 Thời gian: tháng 8/2011 Số đoàn: 01 gồm 05 người Số đoàn: 01 gồm 04 người Kinh phí: 115,9 triệu đồng Kinh phí: 115,9 triệu đồng Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Do thay đổi tỷ giá USD/VND nên kinh phí dự tốn đủ cho đồn 04 người Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Người, quan thực Theo kế hoạch Thực tế đạt Tổng quan tài liệu xây dựng đề cương Nội dung 1: Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu Nguyễn Thị Minh Hằng Chăm sóc Hồn Ngọc theo độ tuổi năm thu hái nguyên liệu theo độ tuổi: - Thu hái Hoàn Ngọc theo độ tuổi năm xử lí ngun liệu thành dạng bột khơ Nghiên cứu thành phần tổng tritecpen từ Hoàn Ngọc theo độ tuổi năm: - Phân lập chất tritecpen từ mẫu Hoàn Ngọc 1/20116/2011 1/20116/2011 1/20116/2011 Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa cộng 1/20116/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 7/20118/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 7/20118/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hịa - Xác định cấu trúc hóa học chất phân lập Nội dung 2: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ chiết xuất tổng tritecpen có Hồn Ngọc 7/20118/2011 - Nghiên cứu qui trình chiết xuất tổng tritecpen - Nghiên cứu qui trình tinh chế tổng tritecpen Nội dung 3: Xây dựng quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc quy mơ 0,5 kg sản phẩm/mẻ 7/20118/2011 - Hồn thiện quy trình nghiên cứu nội dung - Sản xuất 10 kg sản phẩm 8/201111/2011 8/201111/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 8/201111/2011 8/201102/2012 Đỗ Thị Thảo Nguyễn Thị Thu Hà Nội dung Nghiên cứu hoạt tính chống khối u sản phẩm tritecpen 8/201112/2011 8/201102/2012 Đỗ Thị Thảo Nguyễn Thị Thu Hà Nội dung 7: Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm 08/201101/2012 08/201103/2012 Th khốn chun mơn Viện kiểm nghiệm thuốc TW Tập hợp kết viết báo cáo tổng kết đề tài 02/2012 04/2012 Nguyễn Thị Minh Hằng Nội dung 4: Chứng minh cấu trúc thành phần sản phẩm tổng tritecpen - Phân lập chất có sản phẩm tổng tritecpen - Ghi phổ xác định cấu trúc chất phân lập Nội dung Nghiên cứu tính an tồn tiền lâm sàng mẫu sản phẩm tổng tritecpen: - Nghiên cứu độc tính cấp - Nghiên cứu độc tính bán trường diễn - Lý thay đổi (nếu có): Một số nội dung có thực chậm tiến độ đăng ký số yếu tố khách quan trình làm thực nghiệm III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI, DỰ ÁN Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: có 21 cacbon sp2 cacbon sp3 tương ứng với nhóm metyl, nhóm metylen, nhóm metin bão hồ 15 nhóm metin thơm, nhóm cacbonyl cacbon bậc bốn thơm Trên phổ khối lượng EIMS pic ion phân tử xuất m/z 444 Các kiện phổ 13C-NMR EI-MS cho phép xác định công thức phân tử chất C27H28N2O4 Trên phổ 1H-NMR vùng trường thấp dễ dàng nhận thấy tín hiệu cộng hưởng 15 proton thơm (H 7,06-7,72) cho biết phân tử có vịng benzen bị lần Tín hiệu cộng hưởng proton thuộc nhóm amin bậc hai (>NH) xuất trường thấp (H 6,74 5,96) cho biết nhóm amin thuộc hai liên kết amit (-NH-CO-) Các tín hiệu hai proton hai nhóm metin xuất dạng multiplet vùng trường thấp (H 4,75 4,34) chứng tỏ nhóm metin có liên kết với nguyên tố có độ âm điện lớn Tiếp theo tín hiệu nhóm metylen có liên kết với oxi xuất dạng double doublet (H 3,94 3,82) Một nhóm metylen khác xuất dạng double doublet (H 3,21 3,03) Các proton nhóm metylen thứ ba xuất dạng multiplet (H 2,73) Nhóm metyl xuất dạng singlet (H 2,16) chứng tỏ thuộc nhóm acetyl (CH 3-CO-) Trên phổ 13C-NMR dễ dàng nhận thấy tín hiệu nhóm cacbonyl vùng trường thấp có hai nhóm cacbonyl amit (C 170,63, C-1 167,50, C-1') nhóm cacbonyl este (C 171,16, C-3) Ở vùng trường cao có tín hiệu cộng hưởng 18 cacbon thơm thuộc vòng benzen (C 127-137) Tín hiệu cacbon cịn lại dễ dàng nhận thấy phổ Các tín hiệu phổ 2D NMR cho phép xác định vị trí nhóm phân tử Từ kiện phổ với việc tham khảo tài liệu [70] cho phép xác định chất dipeptide có tên asperglaucide 25 Axit pomolic (9): 30 HO 29 20 19 18 25 13 11 22 17 26 COOH 14 28 16 10 27 HO 23 24 Chất phân lập dạng tinh thể màu trắng, điểm nóng chảy 2902910C Phổ 13C-NMR DEPT cho tín hiệu cộng hưởng 30 cacbon có cacbon sp 27 cacbon sp3 tương ứng với nhóm metyl, nhóm metylen, nhóm metin có nhóm hydroxymetin cacbon bậc bốn, cacbon bậc ba gắn với nhóm hydroxyl (C 78,84) nhóm cacbonyl (C 180,74) Trên phổ khối lượng EI-MS thấy pic [M-46]+ xuất m/z 426 Các kiện phổ 13C-NMR EI-MS cho phép xác định công thức phân tử chất C30H48O4 cho biết tritecpen có năm vịng với liên kết đơi hai nhóm hydroxy phân tử Trên phổ H-NMR thấy có tín hiệu proton olefinic (H 5,29, H-12), proton thuộc nhóm hydroxymetin dạng double douplet (H 3,15, H-3) với số tương tác lớn (J=5,5 11.0 Hz) cho biết cấu hình proton Proton nhóm metin xuất dạng singlet (H 2,50, H-18), proton khác có dạng double triplet (H 2,43, H-16) Có nhóm metyl xuất dạng doublet (H 0,86, H-30) cịn nhóm metyl khác xuất dạng singlet vùng trường cao (H 0,70-1,15) Trên phổ 13C-NMR dễ dàng nhận thấy tín hiệu nhóm cacbonyl (C 180,74), nối đơi (C 138,01 129,05), nhóm hydroxymetin (C 78,84) cacbon bậc ba gắn với nhóm hydroxyl (C 72,98) Trên phổ HMBC, tương tác proton olefinic (H 5,29) với cacbon C-11, C-18, C-9, C-14 cho biết vị trí nối 26 đôi 12,13 Các tương tác khác phổ HMBC cho phép xác định vị trí nhóm phân tử Các kiện phổ với tài liệu tham khảo [71] cho phép xác định chất axit pomolic Hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào biểu mô đốt sống cổ ME-180 ung thư tế bào có hắc tố phát triển M-14 [72], đồng thời thể hoạt tính chống HIV [73] -sitosterol (3) -sitosterol glucoside (10) nhận dạng nhờ chấm so sánh với chất chuẩn sắc kí lớp mỏng Dữ liệu phổ chất: Lupeol (1) : Tinh thể hình kim màu trắng (CH2Cl2) Điểm nóng chảy 2102110 H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 0,76 (3H, s, H-24), 0,79 (3H, s, H-28), 0,83 (3H, s, H-25), 0,94 (3H, s, H-27), 0,96 (3H, s, H-23), 1,68 (3H, s, H-30), 2,37 (1H, dt, J=5,5, 11,0 Hz, H-19), 3,18 (1H, quin, J = 5,5 Hz, H-3), 4,56 (1H, m, H-29a), 4,68 (1H, t, J=2,0 Hz, H-29b) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 14,58 (q, C-27), 15,38 (q, C-24), 16,02 (q, C-26), 16,14 (q, C-25), 18,03 (q, C-28), 18,36 (t, C-6), 19,34 (q, C-30), 20,98 (t, C-11), 25,21 (t, C-12), 27,47 (t, C-2), 27,50 (t, C-15), 28,02 (q, C23), 29,90 (t, C-21), 34,34 (t, C-7), 35,63 (t, C-16), 37,22 (s, C-10), 38,12 (d, C-13), 38,76 (t, C-1), 38,89 (s, C-4), 40,04 (t, C-22), 40,89 (s, C-8), 42,88 (s, C-14), 43,03 (s, C-17), 48,02 (d, C-19), 48,37 (d, C-18), 50,50 (d, C-9), 55,36 (d, C-5), 79,04 (d, C-3), 109,33 (t, C-29), 150,98 (s, C-20) EI-MS (70 eV) m/z (%):426 ([M]+., 5,1), 411 (2,0), 315 (1,8), 257 (1,4), 207 (85,5), 189 (99,9), 135 (81,1), 121 (85,6), 109 (95,7), 95 (100), 69 (73,6), 55 (71,7) Betulin (2) : Tinh thể hình kim màu trắng (CH2Cl2) Điểm nóng chảy 2482490C 27 H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 0,76 (3H, s, H-24), 0,83 (3H, s, H-25), 0,97 (3H, s, H-23), 0,98 (3H, s, H-27), 1,02 (3H, s, H-26), 1,68 (3H, s, H-30), 2,38 (1H, dt, J=6,0, 11,0 Hz, H-19), 3,18 (1H, m, H-3), 3,33 (1H, dd, J=10,5, 3,0 Hz, H-28b), 3,80 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-28a), 4,57 (1H, t, J=1,0 Hz, H29a), 4,68 (1H, d, J=2,0 Hz, H-29b) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 14,78 (q, C-27), 15,36 (q, C-24), 16,01 (q, C-26), 16,11 (q, C-25), 18,33 (t, C-6), 19,10 (q, C-30), 20,86 (t, C-11), 25,26 (t, C-12), 27,09 (t, C-15), 27,42 (t, C-2), 28,00 (q, C-23), 29,21 (t, C16), 29,80 (t, C-21), 33,99 (t, C-22), 34,28 (t, C-7), 37,19 (s, C-10), 37,35 (d, C-13), 38,74 (t, C-1), 38,89 (s, C-4), 40,96 (s, C-8), 42,75 (s, C-14), 47,81 (s, C-17, C-19), 48,81 (d, C-18), 50,44 (d, C-9), 55,33 (d, C-5), 60,58 (t, C-28), 79,00 (d, C-3), 109,68 (t, C-29), 150,48 (s, C-20) EI-MS (70 eV) m/z (%):442 ([M]+., 2,3), 411 (4,9), 234 (4,3), 203 (74,1), 189 (93,2), 175 (39,8), 147 (43,8), 135 (64,8), 107 (6,7), 95 (100), 69 (65,7), 55 (69,2) Lupenone (4): Tinh thể hình kim màu trắng (CH 2Cl2) Điểm nóng chảy 1641650C H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 0,78 (3H, s, H-28), 0,93 (3H, s, H-25), 0,95 (3H, s, H-27), 1,02 (3H, s, H-24), 1,07 (6H, s, H-23 H-26), 1,68 (3H, s, H-30), 1,87-1,97 (2H, m, H-1a H-21a), 2,40 (2H, m, H-2), 2,46 (1H, m, H-19), 4,57 (1H, q, J=1,0 Hz, H-29a), 4,68 (1H, d, J=2,0 Hz, H-29b) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 14,50 (q, C-27), 15,81 (q, C-26), 15,98 (q, C-25), 18,03 (q, C-28), 19,33 (q, C-30), 19,71 (t, C-6), 21,05 (q, C-24), 21,50 (t, C-11), 25,20 (t, C-12), 26,68 (q, C-23), 27,46 (t, C-15), 29,87 (t, C21), 33,60 (t, C-7), 34,17 (t, C-2), 35,55 (t, C-16), 36,91 (s, C-10), 38,21 (d, C-13), 39,65 (t, C-1), 40,00 (t, C-22), 40,82 (s, C-8), 42,93 (s, C-14), 43,02 (s, C-17), 47,35 (s, C-4), 47,98 (d, C-19), 48,28 (d, C-18), 49,83 (d, C-9), 54,97 (d, C-5), 109,40(t, C-29), 150,89 (s, C-20), 218,12 (d, C-3) ESI-MS m/z: 425 ([M+H+) 28 Epifriedelanol (5): Tinh thể hình kim màu trắng (CH2Cl2/MeOH), điểm nóng chảy 281-2820C IR (KBr) max cm-1: 3474, 2931, 2865, 1451, 1384 H NMR (500 MHz, CDCl3): H 0,86 (3H, s, H-25), 0,94 (3H, s, H-29+H-24), 0,96 (3H, s, H-27), 0,99 (6H, s, H-26 H-28), 0,99 (3H, d, J=6,5 Hz, H-23), 1,17 (3H, s, H-30), 1,73 (1H, dt, J= 12,5; 3,0 Hz H-6a), 1,91 (1H, dt, J=10,0; 2,5 Hz, H-2a), 3,73 (1H, bd, J=1,5 Hz, H-3); 13 C NMR (125 MHz, CDCl3): C 11,62 (C-23), 15,83 (C-1), 16,41 (C-24), 17,58 (C-7), 18,27 (C-25), 18,65 (C-27), 20,13 (C-26), 28,10 (C-20), 30,06 (C-17), 30,67 (C-12), 31,81 (C-30), 32,38 (C-15), 32,88 (C-21), 32,12 (C28), 35,03 (C-29), 35,25 (C-2), 35,38 (C-19), 35,61 (C-11), 36,13 (C-16), 37,16 (C-9), 37,89 (C-5), 38,42 (C-14), 39,31 (C-22), 41,79 (C-6), 39,72 (C13), 42,90 (C-18), 49,24 (C-4), 53,25 (C-8), 61,42 (C-10), 72,78 (C-3) EIMS m/z (%): 428 ([M]+., 52), 413 ([M-CH3]+, 38), 275 (46), 234 (47), 206 (43), 179 (29), 165 (100), 125 (47), 109 (47), 96 (71), 69 (38) Palatiferin A (6): Tinh thể màu vàng nhạt, nóng chảy 103- 104°C; Rf 0.62, silica gel 60 F254, n-hexane/CH2Cl2/acetone (1/1/0.5); [α]D 30+ 28.2 (c 0.71, CHCl3), UV (MeOH): λmax (log ε) = 284 (3.2), 215 (3.8); IR (KBr): νmax = 3427, 2926, 1631, 1471, 1344, 1262, 1034, 808, 560 cm−1; positive EI-MS: m/z = 400 [M]+; positive HR-EIS-MS: m/z = 423.1064 [M + Na]+ (cơng thức phân tử tính C21H 20O8Na 423.1056) H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 6,92 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-2); 6,83 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5); 6,87 (1H, dd, J = 8,0; 1,5 Hz, H-6); 4,79 ((1H, s, H-7); 3,92 (1H, d, J = 1,5 Hz, Hα-9); 4,04 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-9); 5,92 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-10); 6,52 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5’); 6,96 (1H, d, J = 8,5 Hz, H6’); 5,07 (1H, d, J = 5,0 Hz, H-7’), 2,93 (1H, m, H-8’); 4,53 (1H, dd, J = 9,5; 29 8,5 Hz, Hα-9’); 3,94 (1H, dd, J = 9,5; 5,5 Hz, H-9’); 5,97 (1H, s, H-10’); 4,01 (3H, s, OMe); 1,65 (1H, s, OH) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 129,4 (C-1); 107,4 (C-2); 148,1 (C-3); 147,8 (C-4); 108,5 (C-5); 120,1 (C-6); 86,9 (C-7); 91,2 (C-8); 74,4 (C-9); 101,0 (C-10); 126,5 (C-1’); 140,6 (C-2’); 136,2 (C-3’); 149,1 (C-4’); 102,1 (C-5’); 118,7 (C-6’); 82,4 (C-7’); 60,2 (C-8’); 72,7 (C-9’); 101,2 (C-10’); 59,4 (-OCH3) Palatiferin B (7): Tinh thể màu vàng nhạt, nóng chảy 167-169°C, Rf 0.49, silica gel 60 F254, n-hexane/CH2Cl2/acetone (1/1/0.5); [α]D 30 − 53.0 (c 0.28, CHCl3), UV (MeOH): λmax (log ε) = 284 (3.6), 213 (4.3); IR (KBr): νmax = 3446, 2884, 1629, 1495, 1440, 1243, 1041, 928, 778 cm−1; positive EI-MS: m/z = 416 [M]+; positive HR-EI-MS: m/z = 439.1007 [M]+ (cơng thức tính C21H20NaO 439.1005) H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 6,91 (1H, br.s, H-2); 6,81 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5); 6,84 (1H, br.d, J = 8,0; H-6); 4,91 ((1H, s, H-7); 4,06 (2H, m, H-9); 5,95 (1H, s, H-10); 6,57 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5’); 6,94 (1H, d, J = 8,0 Hz, H6’); 5,94 (1H, s, H-7’), 4,07 (1H, d, J = 10,0; Hz, Hα-9’); 4,28 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-9’); 5,95 (1H, s, H-10’); 4,03 (3H, s, OMe); 2,65 (1H, s, 8’-OH); 2,66 (1H, s, 8-OH) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 130,1 (C-1); 107,8 (C-2); 147,8 (C-3); 147,6 (C-4); 108,2 (C-5); 120,5 (C-6); 86,0 (C-7); 88,1 (C-8); 76,1 (C-9); 101,1 (C-10); 121,3 (C-1’); 140,5 (C-2’); 136,3 (C-3’); 149,7 (C-4’); 102,8 (C-5’); 120,3(C-6’); 84,7 (C-7’); 88,2 (C-8’); 77,0 (C-9’); 101,2 (C-10’); 59,6 (-OCH3) Asperglaucide (8): Điểm nóng chảy 180-1810C H-NMR (CDCl3, 500 MHz) ppm: 2,04 (3H, s, OCOCH3), 2,75 (2H, m, CH2-b’), 3,05 (1H, dd, J=13,5; 8,5 Hz, H-b), 3,21 (1H, dd, J=13,5; 6,0 Hz, H- 30 b), 3,82 (1H, dd, J = 11,5; 4,5 Hz, H-2), 3,92 (1H, dd, J=11,5; Hz, H-2), 4,34 (1H, m, H-a’), 4,75 (1H, m, H-a’), 5,96 (1H, d, J=8,5 Hz, NH-a’), 6,73 (1H, d, J=7,5 Hz, NH-a),7,06 (2H, dd, J=6,6 Hz, H-d + H-h), 7,11-7,18 (3H, m, H-e + H-f + H-g), 7,21-7,30 (5H, m H-d’ + H-e’ + H-f’ + H-g’ + H-h’), 7,43 (2H, t, J=7,3 Hz, H-4’ + H-6’), 7,52 (1H, td, J=7,3 ; 1,2 Hz, H-5’) ; 7,70 (2H, dd, J= 7,3 ; 1,2 Hz, H-3’ + H-7’) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) ppm: 2,18 (s, C-4), 37,84 (t, C-b’), 38,81 (t, C-b), 49,85 (d, C-a’); 55,39 (d, C-a); 64,97 (t, C-2), 128,98 (d, C-f), 127,44 (d, C-3’ + C-7’), 128,98 (d, C-e’ + C-g’), 129,03 (d, C-e + C-g), 129,16 (d, C4’ + C-6’), 129,52 (d, C-d’ + C-h’), 129,68 (d, C-d + C-h), 132,31 (d, C-5’), 134,06 (s, C-2’), 137,01 (s, C-c’), 137,08 (s, C-c), 167,50 (s, C-1’), 170,63 (s, C-1), 171,16 (s, C-3) ESI-MS m/z: 445 [M+H]+ Axit pomolic (9): Tinh thể hình kim màu trắng (CH2Cl2) Điểm nóng chảy 290-2910C H-NMR (CDCl3+MeOD, 500 MHz) ppm: 0,70 (3H, s, H-26), 0,72 (3H, s, H-24), 0,85 (3H, s, H-25), 0,89 (3H, d, J=6,5 Hz, H-30), 0,92 (3H, s, H-23), 1,15 (3H, s, H-29), 1,20 (3H, s, H-27), 1,91 (2H, m, H-11), 2,43 (1H, dt, J=4,5, 12,8 Hz, H-16), 2,5 (1H, brs, H-18), 3,14 (1H, dd, J=5,5, 11,0 Hz, H3), 5,29 (1H, t, J=8,5 Hz, H-12) 13 C-NMR (CDCl3+MeOD, 125 MHz) ppm: 15,10 (q, C-25), 15,43 (q, C- 24), 15,98 (q, C-30), 16,46 (q, C-26), 18,34 (t, C-6), 23,57 (t, C-11), 24,32 (q, C-27), 25,42 (t, C-16), 25,93 (t, C-21), 26,79 (t, C-2), 27,10 (q, C-29), 27,92 (q, C-23), 28,12 (t, C-15), 32,72 (t, C-7), 36,87 (s, C-10), 37,46 (t, C-1), 38,39 (s, C-4), 38,61 (t, C-22), 39,82 (s, C-8), 41,05 (s, C-14), 41,10 (t, C-20), 47,11 (s, C-17), 47,47 (d, C-9), 53,09 (d, C-18), 55,07 (d, C-5), 72,98 (s, C-19), 78,84 (d, C-3), 129,05 (d, C-12), 138,01 (s, C-13), 180,74 (s, C-28) EI-MS 31 (70 eV) m/z (%):426 ([M-46]+, 4,9 %), 354 (3,2), 246 (10,5), 190 (32,5), 146 (100), 119 (34,8), 105 (37,9), 69 (50,6), 55 (81,5) Nghiên cứu thành phần tritecpen Hoàn Ngọc 1-2 năm 3-4 năm tuổi: Tiến hành phương pháp chiết xuất phân lập chất tương tự làm với rễ Hồn Ngọc 5-7 năm tuổi, chúng tơi xác định thành phần rễ tương tự rễ 5-7 năm tuổi khác hàm lượng chất nhiên không đáng kể Kết nghiên cứu với 1,0 kg nguyên liệu khơ trình bày bảng sau: Khối lượng Hàm lượng Stt 1-2 năm 3-4 năm 1-2 năm 3-4 năm Lupeol 5,5 g 5,6 g 0,55% 0,56% Betulin 3,7 g 3,5 g 0,37% 0,35% -sitosterol 0,75 g 0,8 g 0,075% 0,08% -sitosterol glucoside 0,2 g 0,15 g 0,02% 0,015% Lupenone 10 mg 12 mg 0,001% 0,0012% Epifriedelanol mg mg 0,008% 0,006% Như vậy, thành phần rễ Hoàn Ngọc độ tuổi khác tương tự thành phần hàm lượng 3.3 Nghiên cứu quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc : 3.3.1 Nghiên cứu quy trình chiết xuất: Nguyên liệu ngâm chiết thử với nhiều loại dung môi để lựa chọn dung môi chiết xuất tổng tritecpen với hiệu suất cao thuận lợi 32 cho trình tinh chế sau Chúng sử dụng loại dung môi: nhexan, n-hexan/diclometan (1:1), n-hexan/axeton (8:2) 100% diclometan Kết cho thấy ngâm chiết 100% n-hexan sau cất loại dung môi thu cặn chiết dạng bột màu vàng, chiết nhexan/diclometan (1:1) thu cặn chiết màu vàng xanh keo, chiết n-hexan/axeton (4:1) cho cặn chiết keo màu xanh đen chiết với 100% diclometan thu cặn chiết keo màu xanh đen Kết cụ thể khối lượng cặn chiết thu cho 1kg nguyên liệu ngâm hệ dung môi, dung môi ngâm lần (lần đầu 3,5 L, lần sau L) sau: Dung môi dùng để ngâm chiết Loại rễ nguyên liệu Loại (1-2 năm) Loại (3-4 năm) Loại (5-7 năm) n-hexan 7,50 g chất bột màu vàng 7,6 g chất bột màu vàng 7,8 g chất bột màu vàng n-hexan/CH2Cl2 (1:1) 8,76 g chất keo màu vàng xanh 8,89 g chất keo màu vàng xanh 8,94 g chất keo màu vàng xanh n-hexan/axeton (8:2) 9,40 chất keo màu xanh đen 9,60 g chất keo màu xanh đen 9,65 g chất keo màu xanh đen CH2Cl2 9,50g chất keo màu xanh đen 9,40 g chất keo màu xanh đen 9,75 g chất keo màu xanh đen Kết khảo sát sắc ký lớp mỏng có so sánh với chất chuẩn cho biết thành phần cặn chiết thu chiết dung môi hai tritecpen lupeol betulin Ngồi cịn có số chất khác so với hai chất Như vậy, hệ dung mơi n-hexan/axeton (1:4) CH2Cl2 100% cho khối lượng chiết tổng tritecpen thô từ rễ Hoàn Ngọc tương đương cao chiết n-hexan 100% nhexan/diclometan (1:1) 33 Sản phẩm tổng tritecpen thô nghiên cứu tinh chế cách rửa với etanol 96% hỗn hợp etanol 96%/axeton (1:1) Hỗn hợp tổng tritecpen thơ hịa etanol 96%, lọc lấy phần không tan tiếp tục rửa lại với etanol 96% để thu phần tổng tritecpen màu trắng ngà Các dịch etanol sau lọc gộp lại cất loại dung môi để thu cặn chiết keo màu xanh đen Cặn tiếp tục rửa hỗn hợp etanol 96%/axeton (1:1) theo cách tương tự rửa với etanol 96% để thu phần tritecpen lại Kết cho thấy, cao chiết n-hexan 100% cần rửa 2-3 lần với etanol 96% thu tổng tritecpen dạng bột màu trắng ngà Với cao chiết dung môi khác n-hexan/diclometan (1:1), n-hexan/axeton (4:1) diclometan 100% sau rửa etanol 96% cần phải rửa lại hỗn hợp etanol 96%/axeton (1:1) thu sản phẩm có chất lượng giống sản phẩm thu chiết hexan rửa etanol Sau tinh chế từ cặn chiết với n-hexan cho khối lượng tổng tritecpen cao (~5 g/1kg nguyên liệu) Các cặn chiết khác có chứa keo nên khó tinh chế hiệu suất thu tổng tritecpen từ cặn chiết thô thấp (2 - g) Qua kết nghiên cứu định lựa chọn n-hexan làm dung môi để chiết xuất tổng tritecpen từ rễ Hồn Ngọc etanol làm dung mơi để tinh chế tổng tritecpen thơ sau chiết Quy trình chiết xuất tinh chế sau: Rễ sấy khô, nghiền nhỏ Ngâm chiết với n-hexan Dung môi Dịch chiết Cất loại dung môi Cao chiết Rửa etanol 96% Lọc hút Sấy khô 50oC Sản phẩm 34 Phần khơng tan 3.3.2 Nghiên cứu quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc với quy mơ 0,5 kg sản phẩm/mẻ: Từ kết nghiên cứu chiết xuất tritecpen từ rễ Hồn Ngọc quy mơ nhỏ, nghiên cứu nâng quy mô chiết xuất lên 0,5 kg sản phẩm mẻ theo sơ đồ sau: Rễ sấy khô, nghiền nhỏ (100 kg) Ngâm chiết với n-hexan (400 L) Dung môi Dịch chiết Cất loại dung mơi Cặn chiết Hịa với etanol 96%, lọc hút (2-3 lần) Dịch lọc hút Cất loại dung mơi Hịa rửa với etanol 96% (3 lần) Phần không tan Cặn Sấy khô 50 oC Sản phẩm (~ 0,5 kg) Quy trình có độ lặp lại tương đối ổn định Chúng sản xuất kg sản phẩm theo quy trình Mẻ từ 100 kg nguyên liệu thu 495 g sản phẩm Mẻ từ 100 kg nguyên liệu thu 510 g sản phẩm 3.3.3 Nghiên cứu thành phần hóa học sản phẩm tổng tritecpen thu được: Sản phẩm tổng tritecpen (1,0 g) phân tách phương pháp sắc ký cột chất hấp phụ silica gel, rửa giải hệ dung môi nhexan/diclometan (98:2 - 0:100) để thu nhóm phân đoạn kí hiệu F1- 35 F5 Nhóm phân đoạn F1+F2 tinh chế lại sắc ký cột chất hấp phụ silica gel, rửa giải hệ dung môi n-hexan/etyl axetat (95:5) thu chất lupenone (4, 5mg) epifriedelanol (5, mg) chất màu (~ 10 mg) Nhóm phân đoạn F3-F6 kết tinh hệ dung môi diclometan/metanol (9:1) để thu chất lupeol (1, 570 mg), betulin (2, 320 mg ), -sitosterol (3, 70 mg ), -sitosterol glucoside (10, 20 mg) Như sản phẩm tổng tritecpen từ rễ Hoàn Ngọc gồm có khoảng lupeol (~57%), betulin (~32%), -sitosterol (~8%), -sitosterol glucoside (~1%) thành phần khác (~2%) bao gồm lupenone (~0,5%), epifriedelanol (~0,4%) chất màu (~1,1%) 3.4 Nghiên cứu tính an tồn tiền lâm sàng sản phẩm tổng tritecpen từ rễ Hồn Ngọc: Độc tính cấp, độc tính bán trường diễn sản phẩm tổng tritecpen từ rễ Hoàn Ngọc (ký hiệu Tritecpen-HN) thử phịng thử nghiệm hoạt tính sinh học, Viện Cơng nghệ sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 3.4.1 Nghiên cứu độc tính cấp sản phẩm: Nội dung thực hiện: Xác định độ độc cấp hoạt chất Tritecpen-HN thông qua liều gây chết 50% động vật thí nghiệm LD50 (Lethal Dose) 3.4.1.1 Vật liệu phương pháp: Vật liệu: Động vật: chuột BALB/c khoẻ mạnh, không mắc bệnh, nuôi khu nuôi động vật Viện Công nghệ sinh học Chuột cho ăn thức ăn tiêu chuẩn nước uống tự Dụng cụ thí nghiệm: kim uống thiết bị phụ trợ khác Phương pháp: Phương pháp thử độc cấp tính Tritecpen-HN: 36 40 chuột BALB/c khoẻ mạnh, nuôi khu nuôi động vật Viện Công nghệ Sinh học, chia làm lô (8 chuột/lô), bị bỏ đói hồn tồn 16 h trước cho uống hoạt chất Tritecpen-HN Hoạt chất Tritecpen-HN cho uống lần ở nồng độ 1000, 2000, 3000, 4000 5000 mg/kg thể trọng (kgP) tương ứng với lơ thí nghiệm Sau cho uống hoạt chất 1-2 giờ, chuột ni dưỡng bình thường trở lại (cho ăn, uống tự do) theo dõi liên tục 72 để xác định số chuột chết lô sau cho uống Tritecpen-HN tính giá trị LD50 (Abraham, 1978; Turner, 1965) k-1 Tải FULL (112 trang): https://bit.ly/3PRIVFO Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net LD50= Xk - d/2 - d/n x mi i=2 Trong đó: LD50: liều chết 50% động vật thí nghiệm n: số động vật sử dụng lơ thí nghiệm k: số lô động vật mi: số động vật chết đếm theo lô 72 d: khoảng cách mức liều Xk: liều thuốc thấp gây chết 100% động vật thí nghiệm Phương pháp xử lí số liệu : Các số liệu xử lí Excel, thuật toán thống kê student t’ test F’test 3.4.1.2 Kết thảo luận: Kết xác định khả gây độc cấp tính Tritecpen-HN: Độc tính cấp Tritecpen-HN tiến hành theo phương pháp Abrham (1978) mô tả phần phương pháp Sau cho uống hoạt chất Tritecpen-HN, chuột theo dõi liên tục vòng 24 biểu chức năng, đồng thời đếm số lượng chuột chết lơ vịng 37 72 Kết thu tính độc cấp Tritecpen-HN trình bày Tải FULL (112 trang): https://bit.ly/3PRIVFO Dự phịng: fb.com/TaiHo123doc.net bảng 3.1 Bảng 3.1: Độc tính cấp Tritecpen-HN chuột thí nghiệm Lơ Uống Tritecpen-HN (mg/kgP/lần) Số chuột chết/tổng số chuột thí nghiệm sau 72 1000 0/0 2000 0/0 3000 0/0 4000 0/0 5000 0/0 Biểu chức vòng 24 chuột khoẻ mạnh, di chuyển ăn uống bình thường chuột khoẻ mạnh, di chuyển ăn uống bình thường chuột khoẻ mạnh, di chuyển ăn uống bình thường chuột khoẻ mạnh, di chuyển ăn uống bình thường chuột khoẻ mạnh, di chuyển ăn uống bình thường Kết cho thấy, khơng có chuột bị chết tất nồng độ thử nồng độ chất thử cao Liều 5000 mg/kgP/lần nói liều tối đa cho chuột uống hoạt chất Tritecpen-HN pha hoạt chất nồng độ cao thể tích tối đa mà chuột uống cho lần thí nghiệm Với kết trên, chúng tơi kết luận xác định liều độc cấp gây chết 50% động vật thí nghiệm (hay chưa xác định giá trị LD50) Có thể nói theo tiêu chuẩn an tồn độc tính OECD hoạt chất có nguồn gốc tự nhiên mẫu Tritecpen-HN khơng có độc tính cấp 3.4.1.3 Kết luận: Tritecpen-HN khơng gây độc tính cấp chuột thực nghiệm (theo tiêu chuẩn tổ chức OECD) 3.4.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn sản phẩm: 38 Các nội dung thực hiện: Nghiên cứu tính độc bán trường diễn tháng hoạt chất Tritecpen-HN chuột BALB/c đánh giá thông qua: - Theo dõi biểu bên động vật thí nghiệm - Sự tăng khối lượng chuột thí nghiệm - Sự thay đổi số tiêu huyết học, tiêu sinh hố máu từ đánh giá chức gan, thận 3.4.2.1 Vật liệu phương pháp: Vật liệu: Động vật: chuột BALB/c khoẻ mạnh, không mắc bệnh, nuôi khu nuôi động vật Viện Công nghệ sinh học Chuột cho ăn thức ăn tiêu chuẩn nước uống tự Dụng cụ thí nghiệm: kim uống thiết bị phụ trợ khác Phương pháp: a) Phương pháp nghiên cứu độc tính bán trường diễn: Nghiên cứu độc tính bán trường diễn tháng tiến hành theo phương pháp Bergmeyer (1974) Bao gồm nghiên cứu thay đổi lông, theo dõi khả thu nhận thức ăn, khả di chuyển so với lô đối chứng, nghiên cứu q trình thay đổi khối lượng chuột thí nghiệm ảnh hưởng hoạt chất nghiên cứu lên số tiêu huyết học, ảnh hưởng đến chức gan, thận Theo 18 chuột BALB/c khoẻ mạnh, nuôi khu nuôi động vật Viện Công nghệ Sinh học, chia làm lô (8 chuột/lô) Lô 1: cho uống bột ăn liền (dung môi hịa tan mẫu) 0,3ml/con/ngày Lơ 2: cho uống hoạt chất Tritecpen-HN (pha bột ăn liền) nồng độ 500 mg/kgP/ngày, với thể tích 0,3ml/con/ngày Lơ 3: cho uống hoạt chất Tritecpen-HN (pha bột ăn liền) 1000mg/kgP/ngày với thể tích 0,3ml/con/ngày 39 8312857 ... QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN C? ?U QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO CHẾ PHẨM PHỊNG CHỐNG KHỐI U TỪ CÂY HOÀN NGỌC PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RALDK.” Mã số: CNHD ĐT 030/11-12 Cơ quan chủ trì... THUYẾT MINH CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Giới thi? ?u quan chủ trì đề tài chủ nhiệm đề tài Tên đề tài: Nghiên c? ?u quy trình cơng nghệ tạo chế phẩm phịng chống khối u từ Hoàn Ngọc Pseuderanthemum palatiferum (Nees). .. CHUNG Tên đề tài/dự án: Nghiên c? ?u quy trình cơng nghệ tạo chế phẩm phịng chống khối u từ Hồn Ngọc Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk Mã số đề tài: CNHD.ĐT.030/11-12 Thuộc: - Chương trình