thực hiện được thao tác làm tiêu bản đúc cắt với mẫu buồng trứng chuột. Quan sát cấu tạo và phân biệt được các dạng nang trứng ở những giai đoạn phát triển khác nhau. Ở cơ thể cái, buồng trứng là nơi xảy ra quá trình tạo noãn trưởng thành, có khả năng thụ tinh để tạo cá thể mới. Buồng trứng tồn tại thành cặp và thường có dạng hình trứng. Buồng trứng gồm có vùng tủy và vùng vỏ. Phần vỏ gồm những tế bào hình thoi xếp theo nhiều hướng khác nhau gọi là mô kẽ. Vùi trong mô kẽ là các nang trứng có chứa các noãn bào.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC BÁO CÁO THỰC TẬP Sự tạo trứng chuột Năm học: 2017-2018 I Mục đích: - Sinh viên hiểu thực thao tác làm tiêu đúc cắt với mẫu buồng trứng chuột - Quan sát cấu tạo phân biệt dạng nang trứng giai đoạn phát triển khác II Cơ sở lý thuyết: - Ở thể cái, buồng trứng nơi xảy q trình tạo nỗn trưởng thành, có khả thụ tinh để tạo cá thể Buồng trứng tồn thành cặp thường có dạng hình trứng Buồng trứng gồm có vùng tủy vùng vỏ Phần vỏ gồm tế bào hình thoi xếp theo nhiều hướng khác gọi mô kẽ Vùi mô kẽ nang trứng có chứa nỗn bào - Các loại nang trứng: Nang trứng nguyên thủy: nỗn bào nằm giữa, xung quanh có lớp tế bào nang dẹt có nguồn gốc từ trung bì trung gian Nang thường nằm riêng lẻ thành nhóm nang Nang trứng bậc 1: Các tế bào nang từ dạng biểu mơ đơn dẹp thành dạng hình trụ Xuất lớp màng sáng bao quanh noãn bào Nang trứng bậc 2: Nang bào phát triển từ lớp thành lớp nhiều lớp Màng sáng dày rõ Vỏ nang mỏng, hình thành lớp: lớp tế bào đa giác bên lớp tế bào dạng sợi bên ngồi Nang trứng có hốc: xuất xoang chứa dịch có 5-7 lớp nang bào, kích thước nang lớn, vỏ nang dày Nang trứng chín: kích thước lớn, có vành phóng xạ, nhân nỗn bào lớn (bóng phơi) III Thực tập: Mẫu vật, dụng cụ: - Mẫu vật: Chuột bạch: Dễ ni điều kiện phịng thí nghiệm, dễ thao tác Sinh sản nhanh, sản phẩm sinh dục nhiều Mẫu đại diện để nghiên cứu động vật có vú - Dụng cụ, hóa chất: 01 kéo; 02 panh nhọn; 01 kim nhọn; găng tay; 40 lamen; 20 lam kính; 01 bút đánh dấu; giấy thấm; 01 ống đong; 01 khay đúc 24 giếng; 08 ống phancol; 01 đèn cồn; 01 dao rọc giấy; 01 bát ngâm mẫu Nước muối sinh lý; dung dịch Formalin 37- 40%; cồn nguyên chất; xylen; paraphin; sáp ong; lòng trắng trứng; dầu thông Thuốc nhuộm Eosin 1%; Hematoxylin Thiết bị cắt chuyên dụng; bể nhuộm- rửa; tủ ấm; tủ hút; kính hiển vi Các bước tiến hành: - Bước 1: Cố định mẫu rửa nước Cắt mẫu, rửa qua dung dịch sinh lý Cố định mẫu: ngâm mẫu dung dịch Boin (dung dịch boin acid picric, 250ml dung dịch formalin 37-40%; 50ml Glacial acetic acid) tích lớn gấp 30-50 lần thể tích mẫu Để vịng 24-72 Rửa nước: mẫu sau cố định rửa với dòng nước chảy liên tục vòng ngâm nước 8-12 (15-20 phút thay nước lần) - Bước 2: Loại nước làm mẫu: Loại nước: Chuyển mẫu qua dung dich cồn có nồng độ tang dần từ cồn 70 sang cồn 90 96 lần cồn 100 lần rửa cồn vòng 15 phút Làm mẫu: chuyễn mẫu qua xylen để loại cồn Chuyển mẫu qua dung dich cồn:xylen 1:1; xylen; xylen lần 15 phút - Bước 3: Tẩm paraphin Chuyển mẫu vào xylen : paraphin 1:1 nhiệt độ 37-40; paraphin; paraphin nhiệt độ 58-60 lần sau chuyển vào paraphin : sáp ong 12 - Bước 4: Đúc paraphin: Sử dụng paraphin lần tẩm cuối để đúc Chuẩn bị khuôn đúc: khuôn đúc khay nhiều giếng, giếng tráng lớp glyceryl mỏng Đun nóng chảy paraphin đổ vào khn đúc Dùng phanh hơ nóng gắp mẫu đưa vào khuôn Ngâm khuôn nước mát 24 - Bước 5: Cắt mẫu, gắn mẫu lên lam kính Khối paraphin đúc cắt thành hình khối, gắn lên đế dao Chỉnh độ dày 20 μm, cắt bỏ phần paraphin không chứa mẫu Chỉnh độ dày 10 μm μm đẻ cắt mẫu thành dải băng dài Gỡ băng ngâm bát nước ấm để dãn phẳng Đưa băng lên lam kính phủ sẵn lớp albumin lòng trắng trứng - Bước 6: Loại paraphin, nhuộm tiêu bản, gắn lamen: Loại paraphin: Ngâm lam kính có mẫu vào dung dịch: xylen (2 lần, lần 1015 phút); cồn:xylen 1:1, cồn 100, cồn 96, cồn 90, cồn 70 lần -3 phút; rửa lại nước cất Nhuộm Hematoxylin Eosin: Nhuộm mẫu loại paraphin với Hematoxylin 15-20 phút; rửa nước, cho qua dung dịch biệt hóa cồn 99: HCL 99:1; nhuộm tiếp Eosin 1% 10-15 phút, rửa nước Loại nước: Chuyển tiêu nhuộm qua dung dịch cồn 70; cồn 90, cồn 96, cồn 100 (2 lần) Mỗi lần 2-3 phút Làm tiêu bản: Chuyển tiêu qua dung dịch: cồn: xylen 1:1; xylen (2 lần) Mỗi lần 2-3 phút Gắn lamen: Để khơ tiêu bản, nhỏ lên vị trí có mẫu nhựa thơng để dính lamen vào tiêu Gắn lamen, ghi nhãn Bảo quản tủ ấm 37 IV Kết thảo luận: Tiêu lát cắt buồng trứng: Nang trứng nguyên thủy – vật kính 40X Nang trứng bậc I – vật kính 40X Nang trứng bậc II – vật kính 40X Nang trứng có hốc – Vật kính 40X Lưu ý: - Trong q trình đúc paraphin, paraphin không đồng nên cắt mẫu có nhiều lát cắt khơng chứa mẫu, hiệu cắt thấp, lát cắt khơng đẹp, khơng có mẫu nang trứng cịn nỗn bào - Do khơng thu lát cắt đẹp buồng trứng, tiêu thu chủ yếu lát cắt phần vòi trứng, số lượng tiêu khơng nhiều khó tìm ... buồng trứng chuột - Quan sát cấu tạo phân biệt dạng nang trứng giai đoạn phát triển khác II Cơ sở lý thuyết: - Ở thể cái, buồng trứng nơi xảy q trình tạo nỗn trưởng thành, có khả thụ tinh để tạo. .. 37 IV Kết thảo luận: Tiêu lát cắt buồng trứng: Nang trứng nguyên thủy – vật kính 40X Nang trứng bậc I – vật kính 40X Nang trứng bậc II – vật kính 40X Nang trứng có hốc – Vật kính 40X Lưu ý: - Trong... tạo cá thể Buồng trứng tồn thành cặp thường có dạng hình trứng Buồng trứng gồm có vùng tủy vùng vỏ Phần vỏ gồm tế bào hình thoi xếp theo nhiều hướng khác gọi mô kẽ Vùi mô kẽ nang trứng có chứa nỗn