( 21 ) ( TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP HCM SỐ 3 (1) 2008 )KHOA HOC CÔNG NGHÉ 67 SȘ PHÁT SINH CØ QUAN VÀ PHÁT SINH PHÔI VÔ TÍNH Ò CÂY KHOAI LANG ȚIPOMOEA BATATAS L ) TRONG ÔNG NGHI$M NGUYE N S[.]
67 21 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG KHOA ĐẠIHOC HỌC MỞ - CÔNG TP.HCM NGHÉ - SỐ (1) 2008 SȘ PHÁT SINH CØ QUAN VÀ PHÁT SINH PHÔI VƠ TÍNH Ị CÂY KHOAI LANG ȚIPOMOEA BATATAS L.) TRONG ƠNG NGHI$M NGUYE N SỴ TN * HSIA MŸ NGOC ** GIĨI THIWEU Trên the giói, khoai lang có măt ô hdn 100 quÖc gia — da so Ià quÖc gia dang phát trien Khoai lang Ià mğt năm loai cày ludng th¿c chính, giàu tinh bơt, khống vitamin Trơ ngai hàng dáu Iâu dịi sàn xuät khoai lang Sùng Hà ( Cuclas formicarius - Sweetpotato weevil) Ton that sù ng hà gây rat Ión, tùy vu thịi tiet, có the dao dong tù 30 — 80% thu ho?ch Giài pháp mà nhieu nuóc dang theo duoi de giåm ton thät Sùng Hà khoai lang Ià tąo giƯng khoai lang kháng sùng hà bang công nghé gen (Trán Văn Minh, 2001) Măt khác, cịng nghe khoai lang ngồi dong ruong sú d? ng nguon giÖng in vitro sè han che tÖi da sâu benh cho khoai lang Trên the giói, cơng trình nghiên cúu ve khoai lang rat nhiáu tù rät sóm Tuy nhiên, viec sù d? ng ket quå nghiên cúu cûa công trình tąi Viet Nam Ià rät khó khăn, khå tái sinh in vitro phq thuoc rat nhiáu vào giÖng (Uyen cong st, 1994, Canttlife cğng st, 1988) Vi nhân giƯng khoai lang bang ni cäy dỵnh sinh trng (0,1 mm) dũc tách tù choi phát sinh tù mam cû disc nghiên cúu tù sóm vói rät nhieu cơng bƯ (Alconero cong st, 197s; iiTA, 1981; McRae, 1981; Moran cong st, 1983; IBPGR, 1987; Zamora cong so, 1993) Khoai lang cû ng dugc nhân giƯng tù ni cäy dƯt thân (Moran cong st, 1983) Mơi trc/ịng bån de vi nhân giƯng khoai lang Ià mơi trng MS (Murashige & Skoog, 1962) bƯ sung thiamin inositol, vói 50 g/I dng (IBPGR, 1987) hoăc 30 g/I (Nair cơng st, 1994) BA NAA thuòng duqc sù d? ng mơi trng cåm úng mơi trüịng tái sinh it sù dqng ng GA (1 mg/I) cho thäy vai trò rät hieu quå viec tái sinh tù ni cäy dỵnh sinh tri ơng to hdp vói mg/I IAA Kinetin (Rey cong so, 1985) St phát trien cûa khoai lang in vitro dugc cåi thien di dieu kien vi nhân giƯng quang th dtïõng (khơng bo sung dng mơi trng ni cäy, cng chieu sáng 100 pM m-2s-' PPFD nong CO2 cao) (Kozai cong st, 1993) Mơt quy trình gom giai doąn cho thäy hieu quå hdn de vi nhân giÖng 27 giÖng khoai lang dã diJdc công bo Giai doan däu, Iá dugc cäy Iên mơi trng MS có bo sung 0,1 mg/I 2,4-D 0,2 mg/I zeatin cho tói cng Iá bat däu phình Iên (2-4 ngày) Giai doan thú hai, chúng dugc cay truyen sang mơi trt/ịng MS có bo sung 0,8 mg/I zeatin dąt dùc tän sƯ tái sinh chöi cao (Desai cğng si , 1995) Nghiên cúu däu tiên ve st phát sinh chÖi tù re in vitro khoai lang có Ié Ià cơng bćí cùa Hwang cong st (1983) Theo nghién cúu này, däu tiên doan re kích thc 2-3 mm dudc cäy Iên mơi triJịng MS bien dƯi có bó sung nưng mućíi khống cao, 100 mg/I meo-inositol, mg/I BA, 0,1 mg/I NAA, 30 g/I duòng 10 g/I agar Sau dó, tù nƯt re sè tąo mơ seo vù ng giƯng nhu’ mơ phân sinh de phát trien tiep thành chƯi Tiep sau dó, Berlamino dã cơng bƯ viec tái sinh chƯí tù nƯt re khoai lang in vitro ’, ’“ Or u sinh viën khoa Công nghe Sinh hqc - DH łvìá TP HCłvł 22 68 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞSÖ TP.HCM - SỐ (1) 2008 TAP CHI KHOA HOC 1(12)-2008 giÖng Benni Azuma bang cách ni cäy mơ Iá mơi trJơng MS có bo sung 0,5 mg/I 2,4-D 0,1 mg/I BA thu ductc tan so tái sinh Ià 60 Ô vói choi/re (Berlamino, 1993) Năm 1995, Pido cğng st dã dna mơi trng ni cay thích hdp de tái sinh choi tù re irt vitro, č ia Iá (leaf disc) doąn thân Ià mơi trng MS có bo sung 0,19 mg/I NAA mơi trng B5 có bo sung 0,1 mg/I NAA Mğt quy trình gom giai doąn: dau tiên, tách Iäy cuÖng Iá ú mơi trng MS bo sung 0,2 mg/I 2,4-D ngày Sau dó, chuyen mơ sang mơi trng thú hai: mơi trng khống MS bo sung 0,02 mg/I TDZ 2i-P Ket quà cho thay st tái sinh chÖi trúc tiep dat dudc 13 giƯng khåo sát, dó giƯng PI 318846 — có khà tái sinh tƯt nhät, vói tän so tái sinh dąt 77% den chÖi/cuÖng la (Gosukonda cong st, 1995) Thành công dau tièn ve tái sinh khoai lang thông qua mô seo dUdc th¿c hiên bôi Yamaguchi cuong st vào năm 1974 Cơng bƯ cho thäy st hình thành mơ s?o tù re cú mơi trng White có bo sung 1,01 mg/I NAA tái sinh chưi mơi trng MS có bo sung mg/I ABA, 0,02 mg/I kinetin 0,04 mg/I 2,4-D Năm 1984, Liu Cantliffe cơng bƯ st hình thành mơ s?o tù Iá, dỵnh chưi, thân re mơi trng MS có bo sung 0,5 den mg/I 2,4-D Các dąng mơ sęo chac (compact calli) xƯp (friable calli) dudc tao thành Tù cäu trúc mô s?o chac nhô Iên mô phôi dudc chuyen sang môi trng khơng bƯ sung chät diáu hịa sinh trng th¿c vât, sau dó phát triên thành St phát sinh phơi soma dùc thiet Iâp tù ni cäy d!ch huyen phù te bào (Chee công st, 1988) Viec bo sung 0,5 mg/I NAA vào mơi trng MS có ÿ nghïa quan trgng viec kích thích mơ Ià tao mơ s?o hình thành re (Sheng, 1989) Chee cơng st (1990) cho räng bang cách giåm nưng dng mơi trng ni cäy xng cịn 1,6% vói viec bo sung 2,4-D sé tăng cng st phát trien phơi Mot tän sƯ tái sinh cao duğc thiet Iãp tù mơ seo có ngn gƯc tù mành Iá khoai lang in vitro nuôi cay mơi trng LS có bo sung 0,5 mg/I 2,4-D, g/I d!Ch chiet näm men, 50 g/I dUòng chuyen sang mơi trng thú hai gƯm khống LS có bÖ sung mg/I ABA hoăc mg/I AgNO3 de tái sinh thành (Otani cong st, 1996) Môt quy trình tái sinh trúc tiep gƯm giai doąn cûng dã disc cơng bƯ bịi Prakash cơng st (1996) Các mơ cng Iá dudc ni cäy mơi trng MS có bo sung 2,4-D giai doąn däu tiên TDZ giai doąn thú hai Công bÖ cho thäy khå tái sinh phu thuDoc vào kieu di truyen, giai doąn phát trien huóng dăt mơ cng Iá mơi trng ni cäy Cac ket quå thong th cúng dã dudc chúng minh, vói nƯng dơ TDZ dao dong tù 0,2 den mg/I (Fung Tsey, 1996) Viêc thêm 2,5 mg/I ABA vào mơi tru’ịng MS tăng cng st phát sinh phơi soma ô khoai lang Trong th, 2,4D ô nÖng duo 0,2 mg/I cúng tăng cng st phát sinh phơi thú cäp tù phôi sd cäp (Sheng công st, 1996) Năm 1997, Liu cong st dã thiet Iâp thành công mơt he thƯng hieu qua qua ni cäy d!ch huyen phù te bào có khå phát sinh phơi tái sinh thành ô khoai lang bang cách sú d?ng 2,4-D ABA Cúng năm 1997, Sihachakr dã nghién cúu thành cơng thƯng tái sinh khoai lang qua d0ịng phát sinh phơi Các nhân tó ành hu*ong den viec tao mơ sęo hình thành chƯi cûng dã dudc thșc hien Cơng bƯ dã cung cäp mot loai mơi triJịng cai biên nghiên cúu tái sinh khoai lang, mơi tru’ịng SPM (the Standard Sweet Potato Medium) SPM Ià mơi trng MS có bo sung vitamin Staba, 100 mg/I mgo-inositol, 50 mg/I vitamin C 30 g/I dng Ket q cho thay mơi trng SPM có bo sung to hdp cúa 0,S mg/I kinetin 0,1 mg/I 2,4-D, mơ tái tao chưi Gän dây, mơt cơng bƯ nêu st tái sinh chƯi hình thành tù mơ re có ngn gƯc in vitro bang cách nuôi cäy mành Iá khoai lang mơi triJịng khống MS có bƯ sung 0,05 mg/I 2,4D, 0,5 mg/I kinetin mg/I ABA Trên môi trng này, re bät d!nh (phát sinh tù mơ la in vitro) disc tao thành sau 2-3 tuàn nuói cay chÖi disc tái sinh trúc tiep tù cac nƯt re (nodular root) in vitro Cơng bƯ cúng ghi nhân nưng dơ 0,2 mg/I NAA có vai trị TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠIHOC HỌC -MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2008 KHOA CÔNG NGO 23 69 vi/ec tái sinh choi tù re, mô s?o Iá (Tuän cong st, 2005) Tąi Viet Nam, chúng tơi chua tìm thäy bät cú tài liêu có giá t ! cơng bƯ de câp ve khà tái sinh thành ô khoai lang thông qu.a dng phát sinh phơi soma phát sinh co quan Chính the, viêc nghiên cúu khå tái sinh thành trúc tiep gián tiep tù bo phân khác cúa khoai lang, nghiên cúu phuong pháp vi nhân giÖng hieu quå khoai lang tái sinh sé cung cäp mơt guy trình rat có y nghỵa ve măt khoa hgc (nghiên cúu chuyen gen) thtïc tien (sån xt tù ngn ni cay mơ) Chính nhúng Iÿ trên, chúng tơi quyet d!nh th¿c hien de tài: “Xây ding he thÖng tái sinh khoai lang qua hai duòng: phát sinh phôi soma phát sinh co quan” VAT LI WEU VÀ PHLfONG PHÁP VCAT LI WEU GiÖng khoai lang Benni Azuma in vitro tuán tuoi, cao khoång cm, khịe manh düğc sú dq ng Iàm vât lieu thí nghiem Các doąn thân (khơng chúa choi nách) dài khổng 0,5 mm Chgn ngåu nhiên v! trí dot Ià dot thú tinh tù ngqn in vitro Các Iá cịn cng v! trí tù thú den thú (tinh tù nggn xuÖng) disc tách riêng phan Iá cng de ni cäy Lá di c cat ngang Iàm dôi chqn cäy “phan bån” cûa Iá (the basal part of leaf) Mơi trng ni cay Ià mơi trcfịng MS (Murashige Skoog, 1962) có bo sung chat dieu hịa sinh tri ơng di òng tùy vào m?c dích thí nghiem PHLfONG PHÁP THI NGHIOEM Khåo sát ånh hIJóng cúa nƯng NAA, nƯng dğ 2,4-D Iên sql phát sinh hình thái t”iJ ni cay mô Iõng thân, cuong Iá khoai lang rn vitro Trên mơi trng MS, NAA dudc bƯ sung vào nưng dğ 0,1 mg/I; 0,2 mg/I; 0,5 mg/I; 1,0 mg/I; 2,0 mg/I Trên mơi trng MS, 2,4-D du?c bƯ sung vào õ nịng 8o 0,1 mg/I; 0,2 mg/I; 0,5 mg/I; 1,0 mg/I; 2,0 mg/I Khåo sát ånh hcfơng cúa nƯng dğ 2,4-D KIN lên sŁï phãt sinh hình thái t”cf ni cay mơ la khoai lang in vitro Trên mơi tri ịng MS, bo sung to hgp cúa 0,5 mg/I KIN vói nong 2,4-D (0,01; 0,02; 0,05; 0,1; 0,2) Khåo sat ånh hcfóng cùa nong dğ ABA, to hğp 2,4-D KIN Iên sql phát sinh hình thái t”IJ ni cay mơ Iá khoai lang in vitro Trên mơi trt/ịng MS có bo sung to hqp 2,4-D KIN vói nong dó tƯi uu cho st phát sinh choi, nong duo ABA (0,5; 1,0; 2,0; 3,0 4,0 mg/I) dugc bo sung KET UÀ VÀ THÀO LULAN Ket quå ånh hcfông cúa nÖng dğ NAA, nong duo 2,4-D Iên sŁï phát sinh hình thái t"iJ ni cay mơ Iõng thân, cng Iá khoai lang in vitro Bång 1: Ánh huông cúa nong NAA, nong 2,4-D Iên st phát sinh hình thái tù ni cay mơ lóng thân, cng Iá Iá khoai lang in vitro 24 70 TẠP CHÍ KHOA H ỌCTAP TRƯỜNG ĐẠI HỌCHOC MỞ SO TP.HCM - SỐ (1) 2008 CHI KHOA 1(12)-2008 Chi tiêu theo dõi Loai mau Nong chat DHSTTV Mô seo (O ) Re (%) Choi (%) So choi C NAA (mg/I) Lóng thân Cuong 2,4-D (mg/I) 0,1 100 100 40 0,4 + 0,50 0,2 100 100 60 0,6 + 0,50 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0 0 100 100 100 100 100 0 0 100 80 30 20 0 0 26,7 40 86,7 60 46,7 0 0 53,3 0,8 + 0,41 0,3 + 0,48 0,2 + 0,41 0 0 0,3 + 0,4 0,4 + 0,5 0,9 + 0,7 0,6 * 0,5 0,5 + 0,5 0 0 0,5 + 0,5 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0 0 80 66,67 40 33,3 0 0 0,8 + 0,7 0,7 + 0,7 0,4 z 0,5 0,3 + 0,5 0 0 0,5 1,0 2,0 0 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 0 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 0,1 0,2 Lá 0,5 1,0 2,0 0 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HOC HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2008 KHOA - CÔNG NGO 25 71 Biêu 1: Ânh hifd’rig cúa nong NAA lên sit phã t sinh hlnh thai to' ni cry mơ Ióng thân, cuong i; iä khoai lang i'n vitro sun 45 ngăy 20 0,20.5 Hi 'fo Choi tù lóng thãn R Só chịi tỵf ldng thàn O No ChƯi tit cuong lä O So chƯi tù' cuong Iă M No ChƯi łỵf 1ăä$ So chịi tù’ Iă Ket q thí nghiem the hiên bång bieu Tù bàng cho thäy 2,4-D chi kích thích tąo mơ sęo ni cäy mơ Iá, cućíng Iá lóng thân khoai lang in vitro Tù bång bieu cho thäy NAA có vai trị rõ nét q trình phát sinh chƯi trúc tiep tù mơ lóng thân (hình 1e, f), cng iá Iá (hình 1b, a) khoai lang in vitro Thí nghiem cú ng cho thäy NAA có khà kích thích mơ khoai lang phát sinh re, 2,4-D khơng i vói mơ lóng thân cng Iá, nƯng d*o 0,5 mg/I NAA thích hgp nhät de mơ tái sinh chƯi (Iän Icfgt dąt 80% 86,7%) sƯ chưi trung bình cúng dąt cao nhät (Iän lugt Ià 0,8 0,9 chưi/mơ) Bieu dƯ bång cho thäy khå tái sinh chƯi so chƯi/mơ tăng dän nÖng dğ NAA tăng tù 0,1 mg/I den 0,5 mg/I giåm dän nÖng NAA tiep tic tăng den mg/I Có Ié nƯng dğ NAA cao (hdn mg/I) gây doc cho mô phá võ su' dieu hòa giúa hoocmon noi sinh ngoąi sinh mơ i vói thí nghigem mơ cng Iá, ket quà cho thäy tän sćí tái sinh cao nhät dąt 86,7%, cao hdn ket quà cùa Gosukonda cğng so cơng bćí năm 1995 (77%), m {ac dù so chưi/mó thäp hdn (chỵ dąt 0,9 chịi/cng Iá so den chưi/cng Iá) i vói mơ lóng thân, tän sƯ tái sinh cao nhät dąt 80%, cao hon so công bo cúa Pido cong st năm 1995 (dąt tàn so tái sinh cao nhät Ià 60%) Tuy nhiên, cå Gosukonda Pido deu tien hành giÖng khoai lang khác vói thí nghiem i vói mơ Iá, tän sƯ tái sinh dąt cao nhåt (80%) mơi trng MS có bo sung 0,2 mg/I NAA Ket q cao hdn rät nhieu so vói cịng bƯ cúa Pido cong sV năm 1995 (chỵ dat tän so tái sinh 30% vói gićíng Kokei 50% vói giong jewel) Hon nđa, nghiên cúu cûa nhóm tác già Pido mät 60 ngày, Iâu hdn thí nghiem Ket quś 6nh hiJdng cûa nong 8ğ 2,4-D KIN Iên sql phát sinh hình thái t*U ni cay mơ Iã khoai lang in vitro Băng 2: Ânh huông cúa KIN nịng 2,4-D Iên st phát sinh hình thái tù ni cáy mơ Iá khoai lang in vitro TẠP CHÍ KHOA H ỌC ĐẠI HỌC - SỐ (1) 2008 TAPTRƯỜNG CHI KHOA HOCMỞ SÖTP.HCM 1(12)-2008 26 72 Chi tiêu theo dõi NƯng dğ chät DHSTTV KIN (mg/I) Mơ sęo (%) Re (%) ChÖi tù re (%) SÖ chÖi 0,01 100 100 20 0,2z0,4 0,02 0,05 0,1 100 100 100 100 100 100 80 100 100 0,8z0,7 7,5+1,2 4,2+1,1 0,2 100 100 100 2,7+0,9 2,4-D (mg/I) 0,5 Tù bang bieu dÖ cho thäy tÖ hip cúa 0,5 mg/I KIN vói cac nƯng 2,4-D thäp (di 0,2 mg/I) dã dieu hịa q trình phát sinh mơ s?o, rê chƯi tù ni cäy mơ la in vitro Tuy nhiên, thí nghiem này, chƯi disc tái sinh tù cac nƯt re có ngn gƯc mơ la in vitro (hình 1c, d) Ket quà tù bang bieu dư cho thäy tan sƯ tái sinh chƯi tù re dat 100%, cao hdn rät nhieu so ket qua cùa Berlamino cơng bƯ năm 1993 cû ng tù giÖng khoai lang Benni Azuma M{ac dù vây, sÖ chƯi/re cúa thí nghiem chi dat tƯi da 7,5 chƯi/re so vói chƯi/re mà tác gia Berlamino dã cơng bƯ Ket qua cû ng cao hon rät nhieu so vói cơng bƯ cùa chúng tơi năm 2005 (Tuän công so, 2005) Khåo sat ånh hcfông cúa nćỵng ABA, tƯ hqp 2,4-D KIN lên s? phát sinh hình thái I *If ni cay mơ la khoai lang in vitro !“) MÖi la phát sinh phơi soma tái sinh thành khổng 10 — 15 chƯi Bång 3: À nh hng cua KIN nong 2,4-D ABA Iên st phát sinh hình thái tù ni cäy mơ Ióng thân, cuong la khoai lang in vitro Chi tiêu theo dõi Nćỵng dğ chat DHSTTV KIN (mg/I) 0,5 2,4-D (mg/I) 0,05 Mô sęo Mô phơi (%) ChƯi (%) 0,5 100 26,67 100 1,0 2,0 3,0 4,0 100 100 100 100 80 100 60 40 100 100 100 100 (»y) So chÖi ABA (mg/I) Rät nhieu(”) Tù bång bieu dö cho thäy vai trị cúa ABA tăng cng st phát sinh phơi soma khoai lang (hình 1g, h) Ơ tƯ hqp cúa 0,5 mg/I KIN, 0,05 mg/I 2,4-D mg/I ABA cho thäy 100% mơ Iá ni cay có khå phát sinh phơi som a Q trình phát sinh phơi TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2008 IBOA HOC - CÔNG NG 27 73 soma tråi qua dú eac giai do?n phat sinh phơi soma: phơi hình cau — hình tim — hình thùy Iơi (hình 2) Tąi Viet Nam hie n nay, viec xây dąng mğt he thÖng tái sinh khoai lang thơng qua düịng phat sirih phôi — phuong thúc disc nhieu nhà khoa hoc xem Ià hieu quå nhat de chuyen gen (dăc biet Ià gen khang Sù ng Hà) vào khoai lang vân dang Ià câu bơ ngị Do dó, bat cú quy trình hie u quå nham tái sinh khoai lang qua phôi soma cûng ean dloc xem xét tham khåo Ket nghiên cúu cho thay tan sƯ at sinh phơi soma cao hdn moi ng bƯ the gi sitJjỵ hình thai mơ Iń khoai Ian• 100 80 40 Ti 1ê 'fa 20 o ABA/2, 4-D/KIN (ing/1) Hln h Ãnh hũng cúa ốo ohat DHSTTV lên s* phźt sinh hình thái tù ni cay cźc mó c"ay khoai long (Ipomoea batatas cy BenniAzuma) CAT ôp tù mô 1â sau 45 ngãy nuôi c ifi Łi:yo ilp ttr m6 cuóng lă sau 4ó ngày mg/ NAA d H)ng hãi chà HćhthỈoh8 GMng quaśtdufnknđh no 28 74 TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ - SỐ (1) 2008 TAP CHI KHOA HOC SƯTP.HCM 1(12)-2008 KET LUAN VÀ KIEN NGH! Mơi trüịng MS có bo sung NAA õ nong dơ tù 0,5 mg/I trị xng 0,1 mg/I thích hip de tái sinh choi trúc tiep tù mơ Iá, cng Iá Ióng thân khoai lang in vitro sau 45 ngày nuôi cäy Môi trng MS có bo sung 0,5 mg/I NAA thích hip nhat de tái sinh choi trúc tiep tù mơ Ióng thân cuÖng Iá khoai lang in vitro Sau 45 ngày ni cay, Ióng thân tái sinh dugc 0,8 choi vói tan sƯ tái sinh dąt 80% mot cuong Iá tái sinh dugc 0,9 choi vói tan sƯ tái sinh dat 86,7 Mơi trüịng MS có bo sung 0,2 mg/I NAA thích hop nhät de tái sinh choi trúc tiep tù mô Iá khoai lang in vitro Sau 45 ngày nuôi cäy, mğt Iá tái sinh didc 0,8 chƯi vói tán so tái sinh dat 80% Mơi trng MS có bo sung 0,05 mg/I 2,4-D + 0,5 mg/I KIN thích hgp nhät de tái sinh choi tù not re có nguon goc mơ Iá khoai lang in vitro Sau 45 ngày nuôi cäy, 100% mô nuôi cäy tái sinh ré 100% mô re tái sinh chƯi Ket q Ià mơt Iá tái sinh duqc 7,5 choi ABA tăng cng so phát sinh phơi soma ô khoai lang nuôi cay in vitro Môi trtïòng MS có bo sung 0,05 mg/I 2,4-D + 0,5 mg/I KIN + mg/I ABA thích hgp nhät de mơ Iá khoai lang phát sinh phôi soma Sau 45 ngày nuôi cäy, 100% mô Iá phát sinh phôi soma, 100% phôi soma mam thành 10 — 15 choi TÀI LI WEU THAM KHÀO NGUYE N VÄN UYE N 1994 Úng dęng nuôi cay mô phęc vę công tác giong NXB Nông nghiep TRÄN VĂN MINH 2001 Công nghę sinh hęc thi/c vąt NXB DH Nông Lâm Tp HCM Murashige T & Skoog F 1962 A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissues Physiol.—Plant 15 473—496 Chadha L K., Ravindran N P and Leela S 2000 Biotechnology in Horticultural and Plantation Crops Malhotra Publishing House New Delhi India Tuan S N., Mai T N., Thuy T T D., Uyen V N and Nhut T D 2005 Shoot regeneration and plant formation derived from in vitro root culture of sweet potato (Ipomoea batatas L.) Proceedings of Vietnam — Korea international symposium on Biotechnology and Bio-system engineering 174-180 TÓM TAT Viec nghiên cúu he thóng tái sinh giong khoai lang BenniAzuma-mot giõng khoai lang cao sàn, sè mô mot quy trình nhân nhanh giong khoai lang vói tan so cao dÄ phU c VU Cho nghién cúu chuyên gen Moi Iá di gc cat ngang Iàm månh ddupc cćty Ién mơi trng MS có bo sung ABA, KIN v 2,4-D Tån so phát sinh phôi vô tinh só chịi trung bình mơi månh Iá ban ddàu ddąt cao nhát mơi tri ịng MS có bo sung 0,05 mg.I 2,4-D, 0,5 mg.I KIN mg.I ABA Trong nghiên cúu này, mot cách tiep c*an mói nghiê n cúu vè so tái sinh nhån nhanh cåy tù nuôi cáy rê bát d!í'ł h có ngn gåc mơ Iá, so tái sinh choi trúc tiép tù phàn bàn cûa Iá, cng Ió ng thån du’gc trình bày Cac re bát d!^h h1nh thành tré n mô i trng MS có bb sung 0,05 mg.I 2,4-D (2,4-dichIorophenoxy acetic acid) 0,5 mg.1 kinetin (KIN) băng cách ni mành Iá 45 ngày Các chịi ddugc tái sinh trúc tiép tù nót re sau 45 ngày TẠP CHÍ KHOA H ỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM - SỐ (1) 2008 KHOA HOC - CÔNG NGHÈ 29 75 nuôi cäy Măt khác, so tái sinh choi tr¿c tiep dũc thiet Iâp mơi trüịng MS chúa 0,1 tói 0,5 mg.I NAA tù st nudi cay phan bàn cúa Iá, cuÖng Iá lóng thân sau 45 ngày ni cäy Khi chuyen vüịn m, sinh trng phát trien mąnh mé SUMMARY The study of regenerated system of sweet potato (Ipomoea batatas cv Benniazuma) — the high yield genotype, will be a prospect of rapid micropropagation and supply protocol of high frequency of shoot regeneration for transformation study Each leaf was horizontally cut into two segments and cultured on MS medium supplemented with ABA, KIN and 2,4 - D The highest frequencies of somatic embryogenesìs and shoot number per original leaf segment were obtained on MS medium supplemented with 0.05 mg.I-1 2,4-D, 0.5 mg.1-1 KIN and mg.1-1 ABA In this study, a new approach to sweet potato (Ipomoea batatas L.) regeneration and micropropagation via adventitious roots derived from leaf segments, shoot direct regeneration from the basal part of leaf, petioles and internodes were presented Adventitious roots were formed on MS (Murashige and Skoog, 1962) medium containing 0.05 mg.I-1 2,4-D (2,4-dichlorophenoxy acetic acid) and 0.5 mg.1-1 kinetin (KIN) by culturing leaf segments after 45 days Shoots were the directly regenerated from nodular roots after 45 days In the other hand, shoot direct regeneration was established on MS medium supplemented with 0.1 to 0.5 mg.I-1 NAA by culturing the basal part of leaf, petioles and internodes after 45 days Plantlets derived from adventitious roots showed normal growth and uniform features When transferred to the nursery, these plantlets grew and developed vigorously KEYWORDS Somatic embryogenesis(1), organogenesis!*), the basal part of leaf!*), petioIe!4), internode(5), Ipomoea batatas(* , adventitious root!7), nodular root( ), Benniazuma!°) ... hien de tài: “Xây ding he thÖng tái sinh khoai lang qua hai dng: phát sinh phơi soma phát sinh co quan? ?? VAT LI WEU VÀ PHLfONG PHÁP VCAT LI WEU GiÖng khoai lang Benni Azuma in vitro tn tuoi, cao... phơi soma phát sinh co quan Chính the, viêc nghiên cúu khå tái sinh thành trúc tiep gián tiep tù bo phân khác cúa khoai lang, nghiên cúu phuong pháp vi nhân giÖng hieu quå khoai lang tái sinh sé... ABA tăng cng so phát sinh phơi soma khoai lang ni cay in vitro Mơi trtïịng MS có bo sung 0,05 mg/I 2,4-D + 0,5 mg/I KIN + mg/I ABA thích hgp nhät de mơ Iá khoai lang phát sinh phôi soma Sau 45