(TIỂU LUẬN) THÍ NGHIỆM 1 PHẢN ỨNG NINHYDRIN HOẠT ĐỘNG của ENZYME xét NGHIỆM GLUCOSE, CHOLESTEROL UREA máu

TỔ TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNG – ĐH DƯỢC 9E GVHD Dương Trương Dung **Nhóm 1 Huỳnh Tuyết Ngân Tâm Nguyễn Thị Bảo Trân Nguyễn Quốc Huy Ký Lâm Vĩnh Phú Đặng Tự Trọng 10 Trần Hoàng Trọng Hiếu MỤC LỤC Bài ĐỊNH TÍNH PROTEIN & ACI HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYME LIPID, ENZYME DỊCH VỊ & D XÉT NGHIỆM GLUCOSE, CH UREA MÁU XÉT NGHIỆM PROTEIN, BIL MÁU XÉT NGHIỆM HÓA SINH NƯ THÍ NGHIỆM 1: PHẢN ỨNG NINHYDRIN I Nguyên tắc : Aminoacid II Tiến hành: Dung dịch Ống Ống III Kết & Biện luận - Ống 1: dd có màu xanh tím - Ống 2: khơng màu + Ninhydrin chất oxy hóa nên tạo nên phản ứng Carboxyl Oxy hóa Acid amin với nước, để cuối cho CO2, NH3, Aldehyde ngắn C so với gốc Acid amin ban đầu Ninhydrin bị khử + Sau đó, Ninhydrin bị khử tiếp tục tác dụng với NH3 vừa phóng thích kết hợp với phân tử Ninhydrin thứ hai tạo thành sản phẩm ngưng kết có màu xanh tím **Ý nghĩa: + Đây phản ứng chung cho Protid Acid amin tự + Phản ứng cho phép nhận dạng tất a.a có nhóm NH2 COOH tự -1- THÍ NGHIỆM 2: PHẢN ỨNG MÀU BIURET I Nguyên tắc : Protein + CuSO4 + NaOH → phức chất màu tím hồng ♠ Tại gọi phản ứng Biuret ? Sở dĩ gọi phản ứng Biuret chất Biuret (có nhóm CO-NH, giống liên kết peptide) cho phản ứng tương tự, tạo phức hợp có màu giống protein II Tiến hành thí nghiệm & kết Quan sát tượng III Biện luận + Trong dd protein trứng có liên kết peptit: -CO-NH- nên cho phản ứng biure tạo phức hợp muối Cu với polypeptit có màu tím hồng + Phản ứng Biure phản ứng màu đặc trưng để phát liên kết peptid + Độ tím phản ứng khác tùy theo độ dài liên kết peptid lượng muối CuSO4 -2- THÍ NGHIỆM 3: PHẢN ỨNG TỦA PROTEIN BỞI NHIỆT VỚI MÔI TRƯỜNG ACID YẾU I Nguyên tắc: - Protein hịa tan nước hình thành dung dịch keo, tiểu phân protein tích điện dấu mang lớp áo nước (hydrat hóa) Nhờ tích điện dấu nên tiểu phân protein đẩy nhờ có lớp áo nước nên chúng ngăn cách nhau, dung dịch keo protein bền vững - Nếu làm yếu tố tiểu phân protein chuyển động gặp nhau, dính vào thành hạt to kết tủa II Tiến hành Đun sôi cách thủy ống III Kết & Biện luận -3- Ống nghiệm **Kết luận: + Phần lớn protein bị đong tụ đun mơi trường trung tính hay axit yếu + Trong mơi trường kiềm mạnh hay axit mạnh, protein cịn tích điện nên khơng tạo tủa + Protein dễ dàng tạo tủa pH môi trường đạt điểm đẳng điện + Nồng độ muối pH mơi trường đóng vao trò quan trọng tạo tủa protein -4- THÍ NGHIỆM 4: PHẢN ỨNG TỦA BỞI ACID MẠNH VÀ KHƠNG ĐUN NĨNG I Ngun tắc: Các acid vơ mạnh (HNO3, H2SO4, HCl,…) acid hữu (acid Trichloracetic, acid Sulfosalicylic) có tác dụng làm biến tính kết tủa đại đa số protein II Tiến hành: III Kết Quan sát tượng Biện luận -5- -11- THÍ NGHIỆM 3: TÌM THỂ CETONE TRONG NƯỚC TIỂU I Nguyên tắc Sodium nitroprussiat tác dụng với chất ceton cho phức chất màu tím, phản ứng xảy môi trường kiềm - OH Cetone + Na Nitroprussiat *Chú ý: thể ceton bao gồm: + Acid aceto acetic + Acid β-hydroxy butyric + Aceteon II Tiến hành III Kết & biện luận **Ống 1: xuất vòng màu tím → ceton nước tiểu Vì nước tiểu có ceton nên cho sodium nitroprussiat vào cho phức màu tím - Kết luận: Các trường hợp bệnh lý thường gặp + Bệnh tiểu đường nặng điều trị insulin không đủ liều, bệnh nhân đe dọa bị mê + Nhịn đói lâu ngày, nôn nhiều + Vận động nhiều, Cushing,… **Ống 2: khơng xuất vịng màu tím → khơng ceton nước tiểu - Kết luận: bình thường -12- ĐỊNH LỰỢNG GLUCOSE ( PHƯƠNG PHÁP ENZYMATIC ) I Nguyên tắc Glucose huyết bị oxy hóa phân hóa tố Glucose Oxydase cho Gluconic Acid H2O2 kết hợp với Phenol –aminoantipyrine có diện Peroxidase cho màu đỏ tím Phản ứng tóm tắt sau : Glucose + O2 + H2O H2O2 + Phenol + - aminoantipyrine II Tiến hành o Trộn - Ủ 37 C/10 phút – Đo đọc kết má III Kết & Biện luận -Kết luận: + GLU conc = 210 57 mmol/L → tăng cao máu + Một số trường hợp bệnh lý thường gặp: Tiểu đường tụy, + Nồng độ GLU máu bình thường: 75 – 125 mg/dL Rối loạn nội tiết trường hợp : cường tuyến giáp, u tủy thượng thận, cường tiền não thùy -13- ĐỊNH LƯỢNG CHOLESTEROL TRONG MÁU ( PHƯƠNG PHÁP ENZYMATIC & POINT ) I Nguyên tắc Cholesterol ester + H2O Cho Oxdase Cholesterol + O2 2H2O2+ Phenol + 4-aminoantipyrin II Tiến hành thí nghiệm o Trộn - Ủ 37 C/10 phút – Đo đọc kết máy III Kết IV Biện luận C= (với S đo là: 6525 mg/dL) Trị số bình thường: 140 – 250 mg% **Kết luận: Hàm lượng Cholesterol máu bình thường -14- ĐỊNH LỰỢNG ALBUMIN TRONG MÁU I Tiến hành thí nghiệm o Trộn - Ủ 37 C/10 phút – Đo đọc kết máy II Kết III Biện luận Nồng độ ALB máu bình thường: 35 – 55 g/L ALB conc = 12.3 g/L → ALB huyết giảm **Kết luận: Albumin máu giảm thường gặp trường hợp sau: + Giảm cung cấp albumin cho thể: suy dinh dưỡng, thể suy kiệt, rối loạn tiêu hoá, hấp thu + Bệnh lý gây giảm sản xuất albumin: bệnh lý gây giảm chức gan như: xơ gan, viêm gan mạn + Các bệnh lý thận gây albumin bên qua nước tiểu như: hội chứng thận hư, viêm cầu thận cấp, viêm cầu thận mạn + Bệnh lý gây tăng sử dụng albumin như: đái tháo đường giai đoạn muộn, ung thư Hoặc thời kì thai nghén cho bú -15- ĐỊNH LƯỢNG BILIRUBIN TRONG MÁU I Tiến hành thí nghiệm Bilirubin tồn phần Lắc - Ủ 10 phút - Đo đọc kết trê II Kết III Biện luận TBIL DBil TBil conc = 254.6 mg/dL → Bilirubin toàn phần tăng cao DBil conc = 52 mg/dL → Bilirubin trực tiếp tăng cao **Kết luận: Bilirubin tăng cao liên quan đến số bệnh lý gan mật như: viêm gan, xơ gan, tắt mật, sỏi đường mật, ung thư đầu tụy…v…v -16- I Nguyên tắc - Máy PTNT tự động máy quang kế sử dụng để đo bán định lượng 10 thông số nước tiểu cách sử dụng nhúng nước tiểu Các bóng đèn phát ánh sáng sử dụng nguồn sáng thời gian đo tối ưu hóa để phản ứng hóa học tạo màu xảy vùng phản ứng thuốc thử - Đầu đo máy chứa bóng đèn có bước sóng khác Que thử đặt vị trí cố định đầu đo di chuyển miếng đệm thuốc thử, vị trí “tham chiếu” – nơi hệ thống quang học bắt đầu hoạt động - Trong trình đo, máy kiểm tra vị trí thử thử đầu đo cách thực kiểm tra cách xác dòng ánh sáng khúc xạ đo - Nếu que thử đặt thiếu xác đầu đo, máy thơng báo tín hiệu lỗi “Strip problem–rest” II Tiến hành thí nghiệm chữ Bật cơng tắc máy, thử nghiệm thực hình lên READY FOR TREST (Lưu ý: loại que thử phải phù hợp với máy) Lấy que thử từ chai đựng que thử đậy nắp lại Nhúng sâu que thử vào mẫu nước tiểu cần thử lấy lên Ấn nút xanh máy ngón tay trái Đồng thời thấm giọt nước tiểu dư cách dựng nghiêng que thử lên giấy thấm mềm Đặt que thử lên bàn thử theo hướng vị trí Khay thử tự động kéo vào bên máy PTNT Khi thử nghiệm kết thúc, bỏ que thử sử dụng, lau khay thử thấy cần giấy mềm III Kết & biện luận -17- STT 10 **Kết luận: Bình thường -End- ... TÍNH PROTEIN & ACI HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYME LIPID, ENZYME DỊCH VỊ & D XÉT NGHIỆM GLUCOSE, CH UREA MÁU XÉT NGHIỆM PROTEIN, BIL MÁU XÉT NGHIỆM HÓA SINH NƯ THÍ NGHIỆM 1: PHẢN ỨNG NINHYDRIN I Nguyên... protein trứng có liên kết peptit: -CO-NH- nên cho phản ứng biure tạo phức hợp muối Cu với polypeptit có màu tím hồng + Phản ứng Biure phản ứng màu đặc trưng để phát liên kết peptid + Độ tím phản ứng. .. ♠ Tại gọi phản ứng Biuret ? Sở dĩ gọi phản ứng Biuret chất Biuret (có nhóm CO-NH, giống liên kết peptide) cho phản ứng tương tự, tạo phức hợp có màu giống protein II Tiến hành thí nghiệm & kết