BÀI 1 hóa học GLUCID, LIPID, PROTID

1 BÀI 1: HÓA HỌC GLUCID, LIPID, PROTID I A HĨA HỌC LILIP Khảo sát tính chất Triglycerid 1.Ngun tắc: ● Triglycerid không tan nước ,tan dung mơi hữu ● Mức độ hịa tan hịa tan Tryglycerid phụ thuộc vào mức độ phân cực dung môi theo tỉ lệ nghịch( d.dịch phân cực lipid khó hịa tan) 2.Tiến hành giải thích:Cho vào ống nghiệm ống giọt dầu ăn,rồi thêm: ● ống 1:1ml nc cất →H2O dung mơi phân cực hồn tồn nên tryglycerid khơng tan ● ống 2: 1ml ethanol (C2H5OH)→ dầu ăn tan ethanol dung mơi phân cực nhiều nên tryglycerid tan ● ống 3: 1ml acetol →dầu ăn tan hồn tồn Acetol d.mơi khơng phân cực nên tryglycerid tan hoàn toàn II.Khảo sát cholesterol Nguyên tắc ● Cholesterol tác dụng với Acid sulfuric đậm đặc, với có mặt Anhydrid acetid tạo phức hợp màu xanh lục đặc trưng 2.tiến hành giải thích: cho 0.5 ml cholesterol chloroform vào ống nghiệm, thêm 10 giọt Anhydrid acetid giọt H2S04 đậm đặc,lắc đều,để 10p Quan sát ta thấy màu sắc tạo thành d.dịch ống nghiệm có màu xanh lục → Do cholesterol tác dụng vs H2S04 đậm đặc với có mặt anhydrid acetid tạo phức hợp màu xanh lục đặc trưng B HÓA HỌC GLUCID I.Khảo sát monosacarid disacarid: Phản ứng khử a Nguyên tắc: Ở nhiệt độ nóng mơi trường kiềm, tất chất đường có nhóm chức aldehyd có tính khử Khử muối kim loại nặng Cu2+,Pb2+,Ag+,BI3+,Fe3+ nhị đường có nhóm OH bán tự cho p.ư R-CHO +2Cu(OH)2 →R-COOH +Cu2O( đỏ gạch) +2H2O b.tiến hành giải thích: ● Lấy ống nghiệm chi vào 0,5 ml Felling A(d.d CuSO4) 0.5 ml Felling B(d.d NaOH Na, K tautrat), trộn ,đun cách thủy sôi 5p.quan sát ống nghiệm có màu xanh đậm: ● Sau thêm :ống 0,5 ml sacarose 5%o.ống 2: 0,5ml glucose 5%o,ống 3:0,5 ml fructose 5%o, ống 4: 0,5 ml lactose 5%o ống 0.5ml formol 1% ống 1ml hồ tinh bột 10% ● Trộn đun sôi cách thủy 5p, quan sát ,ta thấy ống 2,3,4,5 tạo kết tủa đỏ gạch→ glucose fructose đường đơn có nhóm andehyd có tính khử muối Cu2+, bên cạnh lactose nhị đường có nhóm OH bán acetal có tính khử,Formol andehyd có tính khử →tất chất tham gia p.ư OXH Cu2+ →Cu+ tồn dạng hợp chất Cu2O có kết tủa đỏ gạch ● Sacarose nhị đường khơng có nhóm OH- bán acetal →khơng tham gia p.ư OXH →không tạo tủa ● Hồ tinh bột khơng có tính khử →khơng tạo tủa vad dd ống nghiệm không đổi màu P.Ư Furfural: a Nguyên tắc : nhóm OH- rượu bậc 2trong phân tử đường bị khử nước acid mạnh HCl,H2SO4 đ.đặc tạo nối đôi Những chất thu dẫn xuất fufural, vs có mặt của polyphenol tạo phức hợp có màu đặc trưng cho loại đường b Tiến hành giải thích: Cho vào ống nghiệm 1ml dd glucose 5%o, thêm giọt thuốc thử Molish Sau nghiêng ống nghiệm cho từ từ dọ theo thành ống nghiệm khoảng 1ml H2SO4 đ.đặc quan sát ta thấy xuất hiện vịng màu tím bề mặt phân cách lớp chất lỏng → p.ư để nhận biết đường thuốc Molish 3.Khảo sát polysacarid: khảo sát tinh bột a Nguyên tắc: tinh bột khơng tan nước lạnh ,tan nước nóng tạo thành dd keo gọi hồ tinh bột Hồ tinh bột cho p.ư Molish, không cho p.ư khử,với Iod tạo dd màu xanh tím C.HĨA HỌC PROTID I Phản ứng Acid amin Tác dụng với Ninhydrin: a Nguyên tắc: tác dụng đông thời với nhóm –COOH –NH2, acid amin td vs Ninhydrin cho phức chất màu xanh tím, p.ư để phát acid amin,p.ư quan trọng p.pháp sắc ký acid amin Riêng prolin hydroxyprolin cho với ninhydrin phức chất màu vàng b Tiến hành giải thích: cho vào ống nghiệm 0,5ml glycin, 0.5ml dd ninhydrin Lắc đều,đun cách thủy 3p P.ư cho màu xanh tím tác dụng đồng thời nhóm – COOH Và –NH2,Acid amin tác dụng ninhydrin cho phức chất màu xanh tím Đây p.ư quan trọng dùng để phát Acid amin II.Phản ứng protein: Phản ứng Biure: a Nguyên tắc: peptid protein tác dụng với Cu mơi trường kiềm tạo phức chất màu tím hồng, tương tự p.ư biure với Cu2+ môi trường liềm nên gọi p.ư biure b Tiến hành giải thích:lấy ống nghiệm Hóa chất ống ống ống CuSO4 (ml) 3 NaOH (ml) 2 Lòng trắng trứng (ml) 0.5 1.5 Nước cất (ml) 2.5 1.5 Lắc đều,quan sát ta thấy đổi màu:ống màu xanh, ống màu hồng tím nhạt, ống màu hồng tím đậm Vậy nồng độ lồng trắng trứng (protein) cao p.ư xảy nhiều →dd ống nghiệm có màu tím sẫm 2.Trầm hiệu Protein acid a Nguyên tắc: protein bị biến tính khơng thuận nghịch trầm acid acid sulfosacylic,acid trichloracetic,acid nitric, b Tiến hành giải thích: cho vào ống nghiệm 2ml đ lòng trắng trứng,thêm vào 0,5ml dd acid trichloracetic 20% →quan sát ta thấy trông ống nghiệm xuất kết tủa đục Đây p.ư dùng để định tính Protein, áp dụng y học BÀI 2: PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG –ĐỊNH LƯỢNG GLUCOSE, PROTEIN I.Định lượng Glucose phương pháp dùng enzyme (Glucose oxydase) Nguyên tắc: glucose oxydase (GOD) oxy hóa glucose thành acid gluconic peroxyd hydrogen (H2O2) Peroxyd hydrogen tạo thành bị enzyme peroxydase (PED) phân hủy giải phóng oxy Oxy giải phóng oxy hóa 4-aminophenazon phenol tạo phức chất quinonmin có màu đỏ hồng Cường độ màu tỉ lệ vs hàm lượng glucose GLUCOSE +O2 +H2O → (GOD) ACID GLUCONIC + H2O2 2H2O2 +4-aminophenazon +phenol →(POD) Quinonimin +4 H2O Lưu ý: mẫu thử huyết huyết tương cần bỏ thêm chất chống tiêu đường Natri Fluor Ý nghĩa ống trắng: giúp loại trừ mật độ quang thuốc thử mẫu thuốc thử trước p.ư Tính kết Glucose (mmol/l) = E( thử)/E(chuẩn) x C( chuẩn) C(t) = E(t) x factor (C(c)/E(c)) Nhận định kết ● Đối với glucose huyết o Người bình thường: 4,2- 6,4 mmol/l Thay đổi trường hợp sau: ➢ Sinh lý : tăng sau bữa ăn,xúc động,lạnh ; giảm nhịn đói lâu ngày ➢ Bệnh lý: o o Tăng bệnh đái đường tụy ,cường giáp tăng, u thần kinh, thiểu gan Giảm thiểu tuyến yên, tuyến thượng thận, dùng nhiều insulin ● Đối với glucose nước tiểu: ● Bình thường: khơng có glucose nước tiểu , có có glucose nước tiểu dạng vết mang thai ● Bệnh lý: glucose niệu xuất bị bệnh đía đường tụy, cường tuyến yên,tuyên giáp, tuyến vỏ thượng thận, bệnh đái đường ngưỡng tái hấp thu glusose thận thấp II Định lượng Protein huyết (pp biuret) Nguyên tắc: protein tác dụng với CuSO4 mơi trường kiềm cho phức chất màu tím hồng ,cường độ màu tỉ lệ vs nồng độ protein huyết Tính kết C(t) = E(t)/E(c) x C(c) Nhận định kết quả: ● Nồng độ protein huyết bình thường: 62-80 g/l ● Tăng u tủy,mất nước, nôn nhiều, chảy, thiểu vỏ thượng thận ● Giảm hội chứng thận hư, suy dinh dưỡng, xơ gan, đái tháo đường BÀI 3: ĐỊNH LƯỢNG URE, CREATININE, ACID URID I ĐỊNH LƯỢNG URE HUYẾT THANH (PP URE UV) 1.Nguyên tắc: định lượng ure pp enzym theo phương trình: Ure +H2O →( Urenase) 2NH3 + CO2 2NH3 + 2α- Ketohlutarate + NADHH+ → (GDH) 2L-Glutamate + 2NAD+ +2H2O GDH: glutamate dehydrogenase ● Sự giảm độ hấp thụ ánh sáng NADHH+ tỉ lệ với nồng độ ure phẩm vật ● Mẫu thử: huyết thanh, nước tiểu, pha lỗng 1/100 Tính kết quả: C(c) =E(t) /E(c) x nồng độ chuẩn ( 8,32 mmol/l) Nhận định kết quả: ● Bình thường: ure huyết : 15- 40 mg/dl 2,5 – 7,49 mmol/l Ure nước tiểu: 20- 35 mg/dl 333 – 583 mmol/24h ● Biện luận: ➢ Ure máu tăng sinh lí,trong chế độ ăn thịt ,giảm chế độ ăn rau ➢ Tăng bệnh lí:sỏi thận ,viêm thận cấp, suy thận giảm sơ gan giai đoạn cuối II ĐỊNH LƯỢNG CREATININE HUYẾT THANH (PP JAFFE,động học) Nguyên tắc: creatinine p.ư vs acid picnic môi trường kiềm tạo thành picrat creatinine có màu vàng cam Cường độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ creatinine Tính kết quả: C(c) = (t)/ E( c) x C(c) ( 2mg/dl 176mol/l) Nhận định kết Giá trị bình thường: creatinine huyết o Nữ:44- 88mmol/l (0,5- 1mg%) o Nam : 53- 115mmol/l (0,6- 1,3mg%) o Trẻ em : 35- 88 mmol/l (0,4-1mg%) ➢ Creatinine nước tiểu 7,02 – 15,9 mmol/24h ( 0,8- 1,8g/24h) ➢ Thay đỏi bệnh lí: creatinine huyết tăng suy thận,viêm thận cấp,sỏi thận, đường,ure tăng xem lại chế độ ăn III ĐỊNH LƯỢNG ACID URID TRONG NƯỚC TIỂU P.pháp phosphotungstic acid a Nguyên tắc: môi trường kiềm,acid urid khử acid phosphotungstic thành màu xanh tungsten,cường độ màu tỉ lệ với nồng độ acid uric huyết nước tiểu b Tính kết quả: C(t) = E(t)/E(c) x 0,025 x1,48 x (mmol/l) 2g/l Lưu ý: muốn tính nồng độ acid uric nước tiểu lấy C(t) nhân với lượng nước tiểu bệnh nhân 24h (tính theo l),lúc đơn vị mmol/24h c Nhận định kết quả: ➢ Bình thường :nồng độ acid uric huyết :178- 339µmol/l (3-5,7 mg/dl); nồng độ acid uric nước tiểu :4,76- 5,95mmol/24h (800 -1000mg/24h) ➢ Tăng sinh lí ăn nhiều thịt,giảm acid uric ăn rau ➢ Tăng bệnh lí trường hợp bệnh goutte,bệnh bạch cầu, giảm viêm cầu thận ➢ BÀI : ĐỊNH LƯỢNG LIPID, BICARBONAT VÀ CÁC CHẤT ĐIỆN GIẢI TRONG HUYẾT THANH I.ĐỊNH LƯỢNG LIPID TRONG HUYẾT THANH Định lượng cholesterol toàn phần huyết (p.p so màu dung enzym CHOD-PAP) a nguyên tắc: Cholesterol este + H2O → (cholesterol esterase) cholesterol + acid béo Cholesterol + O2 →(cholesterol oxydase) +4-cholesten-trione + H2O2 H2O2 + phenol + 4-aminoantipyrine →(peroxydase) đỏ phenol + 4H2O b tính kết quả: C (cholesterol TP) = E(t)/E(c) x 5,17 mmol/l (nồng độ cholesterol TP) c nhận định kết quả: ● bình thường: cholesterol tồn phần thay đổi theo lứa tuổi, cholesterol TP người trưởng thành 4-6,7 mmol/l (150- 260mg/dl) ● bệnh lí cholesterol tăng xơ vữa ĐM, cao H.A,xơ gan, vàng da tắc mật, đái đường, thạn nhiễm mỡ, viêm thạn mãn tính ● Bệnh lí cholesterol giảm lao tiến triển, nhiễm khuẫn nặng kéo dài,thiểu thượng thận,viêm gan nặng,cường giáp,tan máu Định lượng HDL-cholesterol:PP so màu dùng enzym CHOD-PAP sau tạo tủa với acid phosphotungstic a Nguyên tắc: chlomicron VLDL HDL bị tủa cho huyết tương hay huyết tác dụng với acid phosphotungstic ion Mg2+,li tâm giải phóng HDL dd,nồng độ HDL-cholesterol xác định pp so màu dùng enzym CHOD-PAP b.Tính kết quả: C(HDL-C) = E(t)/E(c) x1,3 x (mmol/l) c.Nhận định kết ● Bình thường: cholesterol HDL tăng biểu tốt cho bệnh tim: ➢ Nam:HDL-C >0,9mmol/l (35 mg/dl) ➢ Nữ :HDL-C >1,2mmol/l (45mg/dl) ● Bệnh lí :cholesterol HDL giamrtrong xơ vữa ĐM, nhồi máu tim, tai biến mạch máu não, đái đường, hội chứng thận hư, Triglycerid (TG) pp so màu dùng enzym GPO-PAP a Nguyên tắc: thủy phân tryglycerid enzym, xác định glycerol pp so màu Triglycerid + H2O →( triglycerid lipase) glycerol + R-COOH Glycerol + ATP →( glycerol kinase) glycerol 3-phosphate +ADP Glycerol 3-phosphate +3O2 →( glycerol 3-phosphate oxydase) Dihydroxyacetan + H202 H202 + 4-aminoantipyrine →(peroxydase) Đỏ quinone +4 H2O Cường độ màu đỏ tỉ lệ thuận với nồng độ triglycerid huyết Tính kết quả: C(triglycerid-HT) = E(t)/E(c) x2,28 mmol/l Nhận định kết ● Bình thường: triglycerid