THIẾT bị máy móc TRONG KIỂM NGHIỆM

Mã học phần: PPHA121 Học phần: Kiểm nghiệm dược phẩm Drugs quality control THIẾT BỊ MÁY MÓC TRONG KIỂM NGHIỆM Chương trình Dược sĩ Đại học Buổi 14 – tiết GV: Lê Minh Trân Năm học 2020 - 2021 NỘI DUNG BÀI HỌC HPLC UV-Vis IR AAS, AES Chuẩn độ điện Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.1 Định nghĩa • Tách hỗn hợp cột nhồi hạt pha tĩnh có d ≤ 10 µm • Sử dụng bơm có áp suất cao gần 400 atm để đẩy pha động qua cột sắc ký • Tốc độ dịng khoảng vài ml/phút • Phân giải nhanh mt lng mu nh c 20 àg ã Thớch hp với hợp chất không bay bền với nhiệt • Độ nhạy cao, kết xác lặp lại Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.1 Định nghĩa Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.1 Định nghĩa Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.2 Phân loại Dựa vào chế tách chiết phương pháp SKLHNC chia làm loại: - Sắc ký phân bố (partition chromatography) - Sắc ký hấp phụ hay sắc ký lỏng rắn (adsorption/liquid chromatography) - Sắc ký ion (ion chromatography) - Sắc ký rây phân tử (size exclusion/gel permeation chromatography) Trong sắc ký phân bố ứng dụng nhiều phân tích hợp chất từ không phân cực đến hợp chất phân cực, hợp chất ion có khối lượng phân tử khơng q lớn (< 3000) Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.2 Phân loại SKPB: chia thành hai loại dựa độ phân cực tương đối pha tĩnh pha động: - SK pha thường (Normal phase chromatography): • Pha tĩnh: phân cực Pha động: DM hữu phân cực • Dùng để tách phân tích hợp chất có độ phân cực cao với phân tử lượng không lớn - Sắc ký pha đảo (Reversed phase chromatography): • Pha tĩnh: chất lỏng phân cực (hydrocarbon…) Pha động: DM phân cực (nước, methanol, acetonitrile…) • Hầu hết hợp chất hữu có mạch carbon dài (ít phân cực) thích hợp cho phân tích RP • RP ứng dụng nhiều phổ biến NP Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị 1.3.1 Bình chứa dung mơi Thủy tinh màu, trung tính, 100 – 2000 ml, kín (tránh bay dung môi) - Xử lý dung môi: lọc qua màng lọc 0,45 um 0,22 um đuổi khí hịa tan - Vật liệu lọc: + Nước: cellulose nitrat, cellulose acetat + Hỗn hợp dung môi hữu nước: màng lọc RC (regenerated cellulose), polyamid hay nylon + Dung môi hữu cơ: màng lọc teflon Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị 1.3.2 Bộ phận khử khí dung mơi - Siêu âm: đuổi khí thừa khỏi dung mơi - Sục khí trơ (helium): đuổi khí hịa tan khỏi dung mơi - Khử khí dịng (on-line membrane degassing) Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.2 Máy quang phổ HTNT 4.2.2 Bộ hóa ngun tử • Có phận phun sương để tạo hạt aerosol mẫu • Hạt aerosol phải đồng kích thước để tiếp xúc với lửa hay lị nung ta có đám mây nguyên tử có mật độ đồng • Nguồn hố ngun tử dùng lửa (hỗn hợp khí đốt + oxy) • Hoạt động hoá nguyên tử phải ổn định, dễ vệ sinh, dễ hiệu chỉnh Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.2 Máy quang phổ HTNT 4.2.2 Bộ hóa nguyên tử a) Dùng lửa • Khí đốt : butan, propan, acetylen, hay hỗn hợp khí oxy hóa : khơng khí, oxy + protozo oxid (N2O) • Ngọn lửa dãi dài 10 cm, hay thành lửa vòng tròn, chiều cao 5cm Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.2 Máy quang phổ HTNT 4.2.2 Bộ hóa ngun tử b) Dùng lị graphit • Lị nung làm carbon graphit, đốt nóng điện đến 3.000 °C • Lị đặt đường tia cơng hưởng Hai đầu có cửa sổ thạch anh cho phép ánh sáng qua Lượng mẫu bơm vào lổ lò 1- 100 µl (so với lửa phải cần tới 1- 2ml) Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.3 Sự nhiễu Trong AAS có ba tượng nhiễu (hiệu ứng tiếng ồn – noise) thường xảy ảnh hưởng đến độ hấp thu nguyên tử + Nhiễu hóa học: mẫu phân ly khơng hồn tồn + Nhiễu mạng phân tử (mơi trường chứa nguyên tố cần định lượng huyết tương, máu, dung môi …) + Nhiễu hấp thu không chuyên biệt (hiệu ứng nền) : tia cộng hưởng từ đèn nguồn đã sai lệch (đèn cathod hết tuổi thọ) Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.4 Ứng dụng • Định lượng kim loại mẫu thử • 200 mẫu / • Giới hạn phát hiện: 0,001 – 0,02 ppm • Mẫu đo: dung dịch, hỗn dịch • Dùng nhiều ngành thực phẩm, mơi trường, dược phẩm… • Ưu điểm: Độ nhạy cao, phân tích tới ppb Có thể phân tích nhiều ngun tố kim loại • Nhược điểm: Máy móc đắt tiền Cần kỹ thuật viên đào tạo Dễ sai sót q trình thực Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.4 Ứng dụng Muốn định lượng nguyên tố kim loại nào phải có đèn nguồn phát tia cộng hưởng nguyên tử Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm AAS 4.4 Ứng dụng Muốn định lượng nguyên tố kim loại nào phải có đèn nguồn phát tia cộng hưởng nguyên tử Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm QUANG PHỔ PHÁT XẠ NGUYÊN TỬ (AES) 5.1 Quang kế lửa Có trình xảy đồng thời: • Ngun tử hóa mẫu (dùng lửa) • Hấp thụ • Phát xạ Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm QUANG PHỔ PHÁT XẠ NGUYÊN TỬ (AES) 5.1 Quang kế lửa • Kính lọc cho tia cộng hưởng qua • Năng lượng ta phát xạ chuyển thành điện nhờ detector tế bào quang điện 5.2 Ứng dụng Định lượng kim loại kiềm kiềm thổ (mmol/l) Na+, K+, Ca2+, Li2+ với kính lọc tương ứng theo thứ tự 589 nm, 766 nm, 422 nm, 671 nm Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm CHUẨN ĐỘ ĐIỆN THẾ • Phương pháp chuẩn độ mà điểm kết thúc xác định thay đổi đột ngột điện dung dịch chuẩn độ • Nguyên tắc: tạo pin Galvanic với điện cực thị tùy thuộc chất cần định lượng Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm CHUẨN ĐỘ ĐIỆN THẾ • Áp dụng cho phản ứng chuẩn độ: oxy hóa khử, trung hịa (trong nước mơi trường khan), tạo phức kết tủa • Chuẩn độ đo khơng dịng (i = 0) chuẩn độ đo có dịng khơng đổi (i ≠ có giá trị khơng đổi) (Chuẩn độ volt-ampe) Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm CHUẨN ĐỘ ĐIỆN THẾ Ưu điểm phương pháp: • Áp dụng với dung dịch có màu, đục trường hợp khơng có chất thị thích hợp • Có độ nhạy cao, phân tích mẫu C < 10-5 M • Có thể chuẩn độ riêng phần hỗn hợp nhiều thành phần • Tránh sai số chủ quan tự động hóa Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm CHUẨN ĐỘ ĐIỆN THẾ Cách xác định bước nhảy • Xác định điểm uốn đường chuẩn độ • Xác định điểm cực đại đường đạo hàm bậc Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm CHUẨN ĐỘ ĐIỆN THẾ Lựa chọn điện cực Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm Kiểm nghiệm thuốc pp sinh học Kiểm nghiệm dược phẩm ... lặp lại Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.1 Định nghĩa Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.1 Định nghĩa Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược... dụng nhiều phổ biến NP Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị 1.3.1 Bình chứa dung... trình dung mơi - Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị Rửa giải gradient Thiết bị máy móc kiểm nghiệm Kiểm nghiệm dược phẩm HPLC 1.3 Trang thiết bị 1.3.4 Hệ thống