LUẬN văn THẠC sĩ phân tích thành phần hóa học của lá mơ lông việt nam (paederia lanuginosa)

TỔNG QUAN

Tổng quan về cây mơ lông (Paederia lanuginosa)

Các cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) thường là loại cây thân gỗ, cây bụi hoặc nửa bụi, đôi khi là cây thân thảo hay dây leo Lá mọc đối, luôn có lá kèm với nhiều hình dạng khác nhau Hoa thường tập hợp thành cụm hình xim, đôi khi hình đầu, mẫu

5 hoặc 4 Đài và tràng đều hợp, tràng có tiền khai hoa thường vặn Trong một vài trường hợp, số thùy của tràng có thể lên tới 8 hoặc 10 Số nhị thường bằng với số thùy tràng và nằm xen kẽ giữa các thùy, dính vào ống tràng hoặc họng tràng Bộ nhụy gồm hai lá noãn dính vào nhau thành bầu dưới, có hai buồng Một vòi nhụy mảnh, đầu nhụy chia hai Mỗi buồng của bầu chứa một đến nhiều noãn đảo hay thẳng Quả mọng, hạch hay quả khô (quả mở hoặc quả phân thành những hạch nhỏ) Hạt thường có phôi thẳng có nội nhũ hoặc đôi khi không có [8,18]

Trên thế giới, họ Cà phê (Rubiaceae) là một trong năm họ có nhiều loài nhất trong nhóm thực vật có hoa, với khoảng 13.000 nghìn loài [18], được phân bố trong

620 chi, hơn 40 tông và được chia làm 3 phân họ: Cinchonoideae, Ixoroideae, Rubioideae [18]

Chúng được tìm thấy ở tất cả các lục địa, kể cả nam cực, với một vài loài của chi Coprosma, Galium, và Sherardia [18] Phần lớn được phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Ở Việt Nam, theo các tài liệu nghiên cứu đã công bố mới nhất về họ Cà phê cho thấy, họ này có khoảng 93 chi và 450 loài, phân bố rộng khắp cả nước [1,8]

1.1.2 Vị trí, phân loại của chi Paederia

Vị trí của chi Paederia trong hệ thống phân loại thực vật của Takhtajan (1987) [27]:

Giới thực vật (Planta) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa Môi (Lamiidae)

Họ Cà Phê (Rubiaceae) Chi Paederia

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU Ở Việt Nam, có hai loài là Paederia lanuginosa (Mơ lông) và Paederia foetida (Mơ leo) [8]

Phân bố: Cây phân bố ở vùng Ấn Độ - Malaysia Ở Việt Nam, cây mọc ở lùm bụi và cũng được trồng làm cây dược liệu

Công dụng: Chữa co thắt túi mật và dạ dày ruột, tê đau do chấn thương; trẻ em cam tích, tiêu hoá kém và suy dinh dưỡng; viêm gan, vàng da, viêm ruột, lỵ; viêm khí quản, ho gà, lao phổi; phong thấp đau nhức gân cốt, đòn ngã tổn thương; giảm bạch cầu gây ra bởi bức xạ; nhiễm độc bởi phốt pho hữu cơ trong các sản phẩm nông nghiệp; dùng ngoài trị viêm da, eczema, lở loét, áp xe; toàn cây còn dùng chữa vết thương do côn trùng độc cắn [18]

Dây leo bằng thân quấn Lá mọc đối hình trứng, nếu mặt dưới lá màu tím đỏ thì gọi là mơ tam thể Hoa màu tím nhạt, mọc thành xim ở kẽ lá Quả dẹt Toàn cây có lông mềm và có mùi khó ngửi [18]

Phân bố: Cây được phát hiện ở một số nước châu Á như Nhật Bản, Trung Quốc Ở nước ta, cây mọc hoang và được trồng vào các mùa xuân, thu ở các bờ rào để làm thuốc hoặc gia vị trong các bữa ăn [18]

Công dụng: Chữa lỵ trực trùng; kiết lỵ mới phát; tiêu chảy do nóng; sôi, đầy bụng, ăn khó tiêu; tiêu chảy ra máu; ho gà [18]

1.1.3 Đặc điểm thực vật cây mơ lông

Mơ lông còn có tên khác là dây mơ lông, dây mơ tròn, ngưu bì đống, rau mơ, dắm chó, ngũ hương đẳng [8]

Tên khoa học: Paederia lanuginosa

Thuộc họ Cà phê (Rubiaceae)

Mô tả: Dây leo bằng thân quấn, sống nhiều năm Thân màu xanh lục hoặc màu tím, có nhiều lông cứng màu trắng; tiết diện tròn ở thân già, hơi dẹt ở thân non Lá đơn, nguyên, mọc đối, có mùi đặc trưng; phiến lá hình tim đỉnh nhọn, dài 9-11 cm, rộng 4-6 cm, mặt trên màu xanh lục mặt dưới màu tím, có nhiều lông cứng màu trắng; gân lá hình lông chim nổi rõ ở mặt dưới, 6 cặp gân phụ đối hoặc gần đối [18] Cuống lá hình lòng máng nông, dài 2-3 cm, màu xanh, có nhiều lông trắng; 2 lá kèm ở giữa 2 cuống lá, dạng vẩy tam giác hoặc hình tim dài 0,3-0,5 cm, màu xanh, tồn tại Cụm hoa xim hai ngả rất phân nhánh ở nách lá hoặc ngọn cành, dài 10-50 cm Hoa nhỏ, đều, lưỡng

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU tính, mẫu 5 rất ít mẫu 6, không cuống, lá bắc hình tam giác nhỏ Đài hoa: 5-6, rời, hình tam giác nhỏ cao 1 mm, màu xanh hơi tím, có lông trắng, tiền khai vặn Tràng hoa: 5-6 cánh đều, màu tím mặt ngoài màu trắng xanh ở mặt trong, dính nhau ở 2/3 dưới tạo thành ống tràng dài 0,4-0,5 cm, phía trên xòe ra 5 phiến dài 0,2 cm có nhiều gai nạc, mỗi phiến có 3-4 thùy cạn không đều và uốn lượn; mặt trong họng tràng có nhiều lông tiết màu tím nhạt, dài 0,2-0,3 cm, chân dài đa bào (tế bào to dần về phía đỉnh của lông tiết) đầu đơn bào to tròn dài; mặt ngoài ống tràng có rất nhiều lông màu trắng, 4-6 tế bào mọng nước xếp chồng lỏng lẻo Bộ nhị: 5-6 nhị đều, rời, đính ở đáy ống tràng xen kẽ cánh hoa Chỉ nhị dạng sợi mảnh, màu hồng hoặc tím nhạt dài 0,2-0,25 cm, nhẵn bóng Bao phấn 2 ô, màu trắng, thuôn dài 0,3-0,35 cm, nứt dọc, hướng trong, đính lưng Hạt phấn mở, rộng 20-25 àm, màu trắng, hỡnh bầu dục 2 đầu thuụn trũn, cú 3 rónh dọc, cú võn, dài 42,5-50 àm Bộ nhụy: bầu dưới hỡnh chuụng 2 ụ, mỗi ụ cú 1 noãn, đính noãn trung trụ; 1 vòi nhụy ngắn, màu hồng nhạt; 2 đầu nhụy dạng sợi uốn lượn, dài 0,4-0,7 cm, màu hồng nhạt, có nhiều lông mịn màu trắng; đĩa mật hình khoen bao quanh gốc vòi nhụy [8,17]

Phân bố: Cây mọc hoang ở các nước châu Á như Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản và Philippin Ở Việt Nam, cây mọc hoang và cũng được trồng xung quanh nước ta để làm thuốc và gia vị Cây thường được trồng vào mùa xuân, thu, ở các bờ rào, bờ ao có lùm bụi cho leo [8]

Bộ phận dùng: Lá, thân, rễ [4,8]

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

1.1.4 Tác dụng dược lý cây mơ lông 1.1.4.1 Tác dụng chống tiêu chảy

Hoạt tính chống tiết niệu của dịch chiết lá mơ lông trong ethanol đã được nghiên cứu Nghiên cứu này sử dụng mô hình tiêu chảy do dầu thầu dầu và magie sulphate gây ra ở chuột Kết quả cho thấy chiết xuất lá mơ làm tăng thời gian tiềm ẩn tiêu chảy ở chuột và làm giảm đáng kể khả năng vận động của đường tiêu hóa [24]

1.1.4.2 Tác dụng bảo vệ gan

Dịch chiết lá mơ lông trong methanol đươc chứng minh có tác dụng cải thiện các tổn thương tại gan trên mô hình chuột Sprague Dawley (SD) Mô hình invivo được xây dựng bằng cách tiêm carbon tetrachloride (CCl4) vào màng bụng chuột và sau đó tiêm dịch chiết cho chuột trong vòng ba tuần liên tiếp Việc sử dụng dịch chiết làm giảm đáng kể nồng độ lipid peroxide gan (LPO) trong chuột nhiễm độc CCl4 (khoảng 40%) Sự gia tăng các enzyme hoạt động trong huyết thanh như GPT, GOT, ALP khi bị nhiễm độc CCl4 cũng được hạn chế đáng kể Kết quả của nghiên cứu này cho thấy lá mơ tam thể có thể làm giảm các tổn thương tại tế bào gan bằng cách ức chế các chất oxy hóa [24]

1.1.4.3 Tác dụng tiêu diệt ký sinh trùng

Chiết xuất methanol của lá mơ đã được sàng lọc hoạt tính chống sán lá đối với Pheretima posthuma và Tubifex tubifex Chiết xuất thể hiện hoạt tính thuốc tẩy giun sán cao nhất ở nồng độ 100 mg/ml so với piperazine citrate (10 mg/ml) làm chất chuẩn và nước cất là mẫu chứng [24]

Hoạt tính chống viêm của dịch chiết lá mơ lông trong ethanol đã được nghiên cứu để tìm cơ sở cho việc ứng dụng các tác dụng sinh học của cây Kết quả nghiên cứu cho thấy dịch chiết có khả năng ức chế đáng kể sự hình thành mô hạt ở chuột cấy bông

Nó cũng ức chế sự gia tăng nồng độ orosomucoid trong huyết thanh ở chuột, cho thấy khả năng chống bệnh thấp khớp của dịch chiết [24]

Hoạt tính chống loét của cao chiết từ lá mơ được đánh giá bằng hai phương pháp: phương pháp thắt môn vị và phương pháp loét do aspirin gây ra ở chuột Thể tích axit dạ dày, tổng độ axit và độ axit tự do được đo để đánh giá khả năng chống loét của dịch chiết lá mơ Kết quả nghiên cứu cho thấy tác dụng chống loét của dịch chiết có thể là do ức chế thụ thể H2 dẫn đến ức chế bài tiết acid dạ dày [24]

1.1.4.6 Một số tác dụng dược lý khác

Tác dụng trị tiêu chảy: lá mơ có tác dụng chống tiêu chảy do ức chế sự vận động của hệ tràng vị [24]

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Đối tượng nghiên cứu

Mẫu nghiên cứu là lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi, Hà Nội vào tháng 9 năm 2018 và được giám định thực vật học bởi TS Nghiêm Đức Trọng - trường Đại học Dược Hà Nội Mẫu được lưu giữ tại Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trong điều kiện nhiệt độ và độ ẩm của phòng thí nghiệm.

Phương tiện nghiên cứu

Các thiết bị, dụng cụ được sử dụng trong quá trình thực nghiệm bao gồm:

 Tủ sấy Memmert (Memmert-Đức)

 Máy cô quay chân không Rotavapor R-220, Rotavapor R-200 (Buchi, Thụy Sĩ)

 Máy siêu âm Power sonic 405 (Powersonic - Hàn Quốc)

 Cân kĩ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR (Precisa-Thụy Sĩ)

 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Mỹ)

 Bình chạy sắc ký lớp mỏng

 Các dụng cụ thường dùng trong quá trình thực nghiệm khác như: bình nón, ống đong, ống nghiệm, pipet, ống nhỏ giọt, cốc có mỏ…

 Dung môi dùng để chiết xuất: Etanol 80%

 Dung môi để chạy sắc ký lớp mỏng: Methanol, nước cất 2 lần

 Dung môi dùng để chạy HPLC: Acetolnitril, acid sulfuric 0,05%

 Dung môi để định lượng iridoid: Acid acetic, Đồng sunphat 0,2%, acid hidrocloric 1%

 Các dung môi, hóa chất dùng để định tính bằng các phản ứng hóa học:

Methanol, CuSO4 0,05%, HCl 1%, Acid acetic, FeCl3, NaOH, H2SO4, Anhydrid acetic, chloroform, dung dịch NH3, thuốc thử Mayer, thuốc thử Bouchardat, bột Magnesi.

Phương pháp nghiên cứu

Mẫu lá mơ được sấy khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 80℃, sau đó vò nát Mẫu được đem chiết 3 lần bằng cồn 80 độ Mỗi lần chiết kéo dài 24 giờ Dịch chiết thu được được lọc qua phễu lọc Bucher Dịch chiết sau khi đã lọc được đưa vào máy cô quay chân không để cô lấy cao ở nhiệt độ 75℃ [6,12] Sơ đồ cụ thể như sau:

Lá mơ lông tươi (2 kg)

Cô quay chân không Ethanol 80 độ, 3 lần

2.2.2 Phương pháp định tính mẫu cao lá mơ bằng các phản ứng hóa học

Phương pháp định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp được thực hiện theo các phản ứng được ghi trong sách Dược liệu, Thực tập dược liệu, nhà xuất bản Y học [2,4]

2.2.2.1 Phương pháp định tính iridoid

 Phản ứng với thuốc thử Trim-Hill

Muốn phát hiện iridoid, ngưới ta thường dùng thuốc thử Trim-Hill: 10 ml acid acetic + 1 ml CuSO4 0,2% + 0,5 ml HCl 1% Cho vào ống nghiệm 1-2 ml giọt dịch chiết ethanol, thêm 10 ml thuốc thử Sau khoảng vài phút ống nghiệm sẽ xuất hiện màu xanh dương Tuy nhiên, cũng có một số iridoid âm tính với thuốc thử trên [4,14]

2.2.2.2 Phương pháp định tính flavonoid

 Phản ứng Cyanidin Đây là phản ứng khử hay được sử dụng để tìm sự có mặt của các dẫn chất nhóm flavonoid Cho vào ống nghiệm 2-3 ml dịch chiết ethanol, thêm một ít bột magnesi kim loại, nhỏ từng giọt HCl đậm đặc (3-5 giọt) Sau 1 đến 2 phút sẽ có màu đỏ cam, đỏ thẫm hoặc đỏ tươi với các dẫn chất flavon, flavonol, flavanonol, flavanon [9] Phản ứng này dựa trên khả năng chống oxi hóa của flavonoid Màu sắc đôi khi có thể bị thay đổi tùy theo loại, vị trí nhóm thế ví dụ các dẫn chất methoxy flavon thì âm tính [4,25]

Cho dịch chiết vào ống nghiệm, thêm vài giọt dung dịch sắt (III) clorid 5%, lắc sẽ xuất hiện màu [7,10] Tùy theo nhóm flavonoid và tùy theo số lượng nhóm OH trong phân tử mà cho màu lục, xanh, nâu Đa số các phân tử flavonoid đều có nhóm

OH phenol, do đó nó có khả năng tạo phức màu với Fe 3+ [4,25]

 Tác dụng với kiềm Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dịch chiết Thêm vài giọt dung dịch NaOH 5%

Sẽ thấy xuất hiện kết tủa màu vàng Thêm 1 ml HCl, tủa sẽ tan và màu vàng của dung

2.2.2.3 Phương pháp định tính saponin

Dựa trên tính chất tạo bọt đây là tính chất đặc trưng nhất của saponin Do phân tử saponin có tính chất hoạt động bề mặt, đặc tính này được giải thích bởi tính chất vừa thân dầu vừa thân nước của phân tử saponin Phần aglycon có tính thân dầu còn phần đường có tính thân nước nên saponin có đặc tính làm giảm sức căng bề mặt và tạo bọt

Khả năng tạo bọt thay đổi theo cấu trúc của saponin: phần genin, số mạch đường, chiều dài mạch đường nhờ đặc tính này mà saponin tạo bọt nhiều khi lắc với nước [4]

Dược liệu được chiết bằng cồn 70%, dịch chiết được bốc hơi trong dung môi và hòa tan lại trong một ít nước Lấy dung dịch này cho vào ống nghiệm Thêm nước cất, dùng ngón tay bịt miệng ống nghiệm và lắc mạnh theo chiều [2]

Dọc ống nghiệm trong 1 phút (0 lần lắc) Quan sát lớp bọt trong 15 phút, nếu ống nghiệm còn bọt trên bề mặt chứng tỏ có saponin [25]

2.2.2.4 Phương pháp định tính tanin

Phản ứng Braemer’s: đây là phản ứng kết tủa với kim loại, tanin cho tủa với các muối kim loại nặng như chì, thủy ngân, kẽm, sắt, đồng Với muối sắt, các tanin khác nhau cho màu xanh lá hay xanh đen với độ đậm khác nhau Có thể dựa vào màu sắc của tủa với muối sắt để xác định tanin trên vi phẫu [4]

Cách tiến hành: Cân 100 mg cao chiết, thêm 10ml ethanol, hòa tan Lấy 2ml dịch thử cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5%

2.2.2.5 Phương pháp định tính steroid

Phản ứng Libermann-Burchardt hay dùng để phân biệt 2 loại saponin triterpenoid và saponin steroid Lấy vài miligram sapogenin (phần aglycon của saponin) hòa nóng vào 1 ml anhydride acetic, cho thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc, nếu là dẫn chất steroid thì có màu lơ – xanh lá, còn dẫn chất triterpenoid thì có màu hồng đến tía [2,4]

Cách tiến hành: Lấy 1 ml dịch chiết, thêm 1 ml chloroform, thêm 2-3 ml anhydride acetic và 1-2 giọt acid sunfuric đặc

2.2.2.6 Phương pháp định tính tinh dầu

Cách tiến hành: Lấy 2 ml dịch thử, thêm 0,1 ml dung dịch NaOH 5% và một lượng nhỏ dung dịch HCl 5% Xuất hiện kết tủa trắng chứng tỏ trong thành phần dược liệu có chứa tinh dầu [25]

2.2.2.7 Phương pháp định tính terpenoid

Cân 100 mg cao chiết, thêm 10 ml ethanol, lấy 2ml dịch thử cho vào ống nghiệm,hòa tan thêm 1 ml chloroform, 2- 3ml của acetic anhydride, 1-2 giọt axit sulfuric đậm đặc [25]

Cân 100 mg cao chiết lá mơ, thêm 10ml etanol, hòa tan Lấy 2 ml dịch thử cho vào ống nghiệm Thêm 2 ml cloroform và 3 ml sulfuric axit H2SO4 [5]

2.2.2.8 Phương pháp định tính alkaloid Định tính alkaloid bằng các phản ứng tủa với một số thuốc thử Các alkaloid có khả năng tạo tủa ít tan trong nước với một số thuốc thử chung của alkaloid Tủa này sinh ra hầu hết một cation lớn là alkaloid với một anion lớn thường là anion phức hợp của thuốc thử [4,25]

Thuốc thử Mayer (K2HgI4 - kalitetraodomercurat): cho tủa trắng hay màu vàng nhạt [25]

Thuốc thử Bouchardat (Iodo - Iodid): cho tủa nâu [25]

2.2.2.9 Phương pháp định tính anthraquinon

Các hợp chất anthraquinone khi tác dụng với kiềm (amoniac, natrihydroxyd hoặc kaki hydroxyd) sẽ tạo các dẫn chất phenolat có màu đỏ sim tan trong nước Dựa vào tính chất này, định tính anthraquinone dựa trên phản ứng Borntrager [4] Định tính dạng tự do: lấy 1 ml dịch chiết thêm 1 ml dd amoniac 10% và 2ml chloroform, sau đó lắc nhẹ, lớp nước sẽ có màu đỏ sim Nếu lớp chloroform có màu vàng chứng tỏ trong dược liệu chứa acid chrysophanic Thêm tiếp từng giọt dung dịch NaOH 10%, lắc nhẹ Lớp dung môi hữu cơ có màu vàng, còn lớp nước đỏ thẫm hơn lúc ban đầu [2] Định tính anthraquinon toàn phần (cả dạng glycoside và dạng tự do): lấy 1ml dịch chiết, thêm 1 ml dung dịch amoniac, lắc nhẹ, lớp nước sẽ có màu đỏ sim Nếu lớp chloroform có màu vàng thì tiếp tục nhỏ từng giọt dung dịch NH3 10%, lắc nhẹ, lớp chloroform sẽ mất màu còn lớp nước thì có màu đỏ đậm hơn [2]

2.2.2.10 Phương pháp định tính đường khử

Phương pháp này dựa trên cơ sở trong môi trường kiềm (glucose, fructose, maltose…) có thể dễ dàng khử đồng (II) oxid thành đồng (I) oxid có màu đỏ gạch, qua đó ta định tính được đường khử Định tính đường khử ta sử dụng thuốc thử Fehling 1 (chứa CuSO4) và 2 ( là hỗn dịch của NaOH với muối tartrate của Na và K có công thức NaOOC-CHOH-CHOH- COOK (trong đó -OOC-CHOH-CHOH-COO- là gốc tartrate) [3]

2.2.3 Phương pháp định tính bằng sắc ký lớp mỏng Định tính các nhóm chất bằng phương pháp TLC: Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi để chọn ra các hệ cho kết quả tách tốt nhất [11]

Mẫu nghiên cứu: Lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi Hà Nội vào tháng 9 năm 2018

KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN

Chiết xuất

- Khối lượng dược liệu tươi: 2000 g

- Khối lượng dược liệu khô: 253,18 g

- Giá trị hàm ẩm của dược liệu khô: 10,81%

- Khối lượng cao thu được: 29,22 g

- Hiệu suất chiết được tính theo theo công thức:

H= 𝑎∗100∗100 𝑏∗(100−𝑥) Trong đó: a: Khối lượng cao b: Khối lượng dược liệu khô x: Giá trị hàm ẩm (10,81%)

Phân tích định tính các nhóm chất hữu cơ có trong cao lá mơ

Sử dụng các phản ứng thông thường để định tính các nhóm chất hữu cơ được trình bày trong các tài liệu [2,4], được kết quả trình bày ở bảng 3.1

Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp trong mẫu cao lá mơ bằng phản ứng hóa học

STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Nhận xét

1 Iridoid Thuốc thử Trim -Hill ++ Có

3 Saponin Phản ứng tạo bọt - Không

4 Tanin Phản ứng với FeCl3 + Có

5 Steroid Phản ứng Libermann-Burchardt - Không

6 Tinh dầu Phản ứng với kiềm + Có

7 Đường khử Phản ứng với thuốc thử Fehling - Không

8 Terpennoid Phản ứng Salkowski ++ Có

9 Alkaloid Phản ứng với thuốc thử Mayer + Có

10 Anthraquinon Phản ứng với NaOH + Có

Ghi chú: (-): phản ứng âm tính, (+): phản ứng dương tính, (++): phản ứng dương tính rõ

Nhận xét: Dựa vào phương pháp định tính bằng các phản ứng hóa học, ta có thể sơ bộ kết luận trong lá mơ lông có chứa các nhóm chất: Iridoid, tanin, tinh dầu, terpennoid, alkaloid, anthraquinon; không phát hiện sự có mặt của các nhóm chất:

Flavonoid, saponin, steroid, đường khử

3.2.2 Kết quả phân tích định tính iridoid bằng sắc ký lớp mỏng

Hình 3.1 Sắc ký đồ pha đảo của mẫu cao lá mơ với hệ dung môi MeOH-H 2 O ở các tỷ lệ lần lượt là 1:2 (A), 2:1 (B), 1:1 (C)

Nhận xét: Dựa vào hình ảnh sắc ký đồ ở trên, ta chọn được hệ dung môi MeOH-H2O (1:2) cho kết quả tách các chất tốt nhất

Hình 3.2 Sắc ký đồ pha đảo của cao tổng với hệ dung môi MeOH-H 2 O (1:2)

Nhận xét: Sau khi phun thuốc thử H2SO4 rồi hơ nóng bản mỏng, thấy xuất hiện màu xanh dương và màu nâu, đặc trưng cho thành phần iridoid [4]

3.2.3 Kết quả phân tích định tính bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC

Ta có hình ảnh sắc ký đồ HPLC của mẫu cao

Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC của mẫu cao lá mơ

Nhận xét: Hình ảnh sắc ký đồ cho tín hiệu rõ nét, các chất có trong mẫu cao được tách riêng rẽ Hình ảnh này cho thấy tính đặc hiệu của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Ta có một số hình ảnh về phổ UV của từng chất:

Hình 3.4 Phổ UV của chất có thời gian lưu 6,099 phút

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia tử ngoại cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 235 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất iridoid [4,19]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 260 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất anthraquinon [4]

Hình 3.9 Phổ UV của chất có thơi gian lưu 16,532 phút

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 265 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất anthraquinon [4]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 235 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất iridoid [4,19]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 330 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Nhận xét: Dựa vào phổ UV của các chất ứng với từng thời gian lưu, sơ bộ xác định được mẫu cao có chứa các chất thuộc các nhóm anthraquinon, flavonoid, iridoid.

Định lượng iridoid toàn phần có trong mẫu cao lá mơ

Ta có kết quả dựng đường chuẩn của mẫu iridoid như bảng 3.2 và hình 3.11:

Bảng 3.2 Nồng độ và giá trị độ hấp thụ quang tương ứng của mẫu chuẩn iridoid

Hình 3.12 Đồ thi miêu tả tương quan tuyến tính giữa độ hấp thụ quang và nồng độ của mẫu chuẩn iridoid

Ta có phương trình hồi quy tuyến tính của iridoid toàn phần giữa độ hấp thụ quang tại bước sóng 609 nm và nồng độ dung dịch là: y = 0,7631x – 0,0045 với hệ số

R 2 = 0,9995 Dựa vào mật độ quang đo được của mẫu thử và dữ liệu đường chuẩn ở trên, tính được nồng độ của iridoid trong mẫu thử và hàm lượng iridoid trong mẫu cao đặc, được kết quả trình bày ở Bảng 3.3 y = 0.7631x - 0.0045 R² = 0.9995

Nồng độ (mg/ml) Đồ thị đường chuẩn của iridoid

Bảng 3.3 Hàm lượng iridoid trong mẫu cao tính được dựa vào độ hấp thụ quang của mẫu thử

Nồng độ mẫu thử (mg/ml)

Nồng độ iridoid trong mẫu thử (mg/ml)

Hàm lượng iridoid trong mẫu cao (%)

Hàm lượng iridoid trong mẫu cao được tính theo công thức:

Trong đó: a: Nồng độ iridoid trong mẫu thử tính được dựa vào phương trình đường chuẩn b: Nồng độ dung dịch mẫu thử X: Hàm lượng iridoid trong mẫu cao (%)

Nhận xét: Như vậy hàm lượng iridoid trong mẫu cao lá mơ được xác định khoảng 2,5%.

Bàn luận

Từ mẫu lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi, Hà Nội, đã tiến hành sấy khô và sử dụng phương pháp chiết lạnh để chiết xuất và cô lấy cao đặc Mẫu được đem chiết 3 lần bằng cồn 80 độ, mỗi lần chiết trong vòng 1 ngày Phương pháp này có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị rẻ tiền tuy nhiên hiệu suất chiết chưa cao Kết quả, từ 2000 g mẫu tươi, sấy khô thu được 253,18 g mẫu khô, đem chiết xuất và thu được 29,22 g cao đặc Lượng cao đặc đạt tỉ lệ 11,54% so với lượng mẫu khô và hiệu suất chiết đạt 12,94%

3.4.2 Về định tính mẫu cao lá mơ

Khóa luận đã tiến hành định tính mẫu cao lá mơ dựa theo phương pháp hóa học được trình bày trong các tài liệu Dược liệu học và Thực tập dược liệu Phương pháp

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU phản ứng có thể bị ảnh hưởng bởi chất lượng hóa chất, độ nhạy của phản ứng cũng như thao tác thực nghiệm Kết quả của phép định tính thống nhất với các tài liệu trong và ngoài nước về cây mơ tam thể khi chỉ ra sự có mặt của các nhóm chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid, tinh dầu Nhóm cũng đã sử dụng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng để xác định sự có mặt của nhóm chất iridoid trong mẫu cao

Ngoài ra, nhóm nghiên cứu cũng đã tiến hành định tính mẫu cao bằng việc sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Kết quả cho thấy, ngoài các chất thuộc nhóm iridoid và anthraquinon, còn phát hiện được thêm các chất thuộc nhóm flavonoid Đây là một phát hiện rất quan trọng nhưng cần phải có thêm những kỹ thuật khác để thẩm định tính chính xác của kết quả này

So với những nghiên cứu trước đây của PGS.TS Lê Ngọc Quang cùng cộng sự về cây mơ lông, việc sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định tính mẫu cao cũng là một điểm mới của đề tài khóa luận này Tuy nhiên cần sử dụng thêm các chất chuẩn vào phương pháp này để định tính cũng như định lượng các chất cụ thể có trong mẫu cao

3.4.3 Về định lượng iridoid toàn phần

Về định lượng, nhóm đã sử dụng phương pháp đường chuẩn để định lượng iridoid toàn phần trong mẫu cao lá mơ Đây cũng là một điểm mới của đề tài Trước đó, ở Việt Nam vẫn chưa có nghiên cứu nào đi vào định lượng các thành phần hóa học có trong cây mơ lông Phương pháp này được thực hiện khá nhanh và đơn giản nhưng kết quả cũng bị ảnh hưởng bởi thao tác thực nghiệm và tính chính xác của máy đo độ hấp thụ quang Hàm lượng iridoid trong mẫu cao được xác định khoảng 2,5% Để định lượng chính xác hàm lượng của nhóm chất iridoid có trong mẫu lá mơ lông, cần phải tách và sử dụng chất chuẩn để định lượng được hàm lượng của từng chất riêng biệt trong nhóm chất này

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận

Qua thời gian nghiên cứu đề tài, nhóm nghiên cứu đã thu được một số kết quả phù hợp với mục đích nghiên cứu ban đầu như sau:

 Đã thu mẫu lá mơ lông và sử dụng phương pháp chiết lạnh để tiến hành chiết xuất mẫu khô và thu lấy cao đặc Kết quả từ 2000 g mẫu tươi, thu được 253,18 g mẫu khô và 22,29 g cao đặc Lượng cao đặc chiếm 11,54% so với lượng mẫu khô và hiệu suất chiết đạt 12,94%

 Đã định tính được sơ bộ các nhóm chất có trong cây mơ lông bằng việc sử dụng các phản ứng hóa học, kỹ thuật sắc ký lớp mỏng Kết quả của phép định tính phù hợp với các tài liệu tham khảo nói về cây mơ tam thể khi chỉ ra sự có mặt của các nhóm chất chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid, tinh dầu

Ngoài ra còn phát hiện thêm sự có mặt của nhóm chất flavonoid khi định tính bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao

 Đã định lượng được hàm lượng iridoid toàn phần có trong cây mơ lông bằng phương pháp đường chuẩn Kết quả, hàm lượng iridoid trong mẫu cao được xác định khoảng 2,5%

Tuy nhiên, do điều kiện thời gian thực hiện nghiên cứu còn ngắn, phương pháp nghiên cứu còn tương đối đơn giản, thao tác thực nghiệm đôi khi chưa thật chuẩn xác cùng một số yếu tố khách quan khác, kết quả nghiên cứu vẫn còn một số hạn chế nhất định Có thể kể đến như:

 Do sử dụng phương pháp chiết xuất đơn giản nên hiệu suất chiết chưa cao

 Các phép định tính mới chỉ phát hiện được các nhóm chất chung chứ chưa đưa ra được các chất cụ thể

 Đã phát hiện và định lượng được hàm lượng iridoid toàn phần có trong mẫu cao nhưng chưa tách cũng như định lượng được các chất cụ thể trong nhóm chất này

Trên đây là những kết quả nghiên cứu đầu tiên trong nội dung nghiên cứu thành phần hóa học của cây mơ tam thể Ngoài những kết quả đã có được, nghiên cứu vẫn còn khá nhiều hạn chế Để khắc phục những hạn chế này, đề tài cần tiếp tục:

 Tiếp tục nghiên cứu tối ưu quy trình chiết hoặc sử dụng phương pháp chiết khác nhằm nâng cao hiệu suất chiết

 Tiến hành chiết xuất phân đoạn mẫu cao toàn phần đã có được với các dung môi như ethyl acetat, butanol, n-hexan để nghiên cứu cụ thể hơn các thành phần hóa học của mẫu

 Sử dụng kỹ thuật sắc ký cột, sắc ký khối phổ để tiến hành phân lập ra các hợp chất tinh khiết

 Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định lượng một số chất cụ thể thuộc nhóm chất iridoid có mẫu lá mơ

 Xây dựng một số mô hình sinh học để đánh giá thêm về tác dụng dược lý của lá mơ lông

1 Nguyễn Tiến Bân chủ biên (2003), Danh mục các loài thực vật Việt Nam, Tập

II, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội, tr 1063-1093

2 Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội

3 Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất bản Hà Nội

4 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 1 và 2, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội

5 Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2007), Đảm bảo chất lượng thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr 107 – 113, tr 216-250

6 Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr 75-76

7 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr 8-99, 162-196, 234-242

8 Trần Ngọc Ninh (1987), “Góp phần vào việc thống kê những loài thực vật có ích thuộc họ cà phê (Rubiaceae Juss) ở Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 9(2), 40-

9 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập chất hữu cơ, Nhà xuất bản ĐHQG TP HCM, tr 151-451

10 Trần Nhật Phương (2008), Học phần kỹ thuật Công Nghệ Sinh Học Proteomic-

11 Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ môn hoá phân tích (2006), Hoá phân tích II, tr 17, 99-146, tr 173-222

12 Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, tr 199 – 222; 493 – 685

13 Ann E Stapleton, Virginia Walbot (2008), “Flavonoids Can Protect Maize DNA from the Induction of Ultraviolet Radiation Damage”, Plant Physiology,

14 Brison Guiide, Ch Erdenechimeg, B Dejidmaa (2017), “Total phenolic, flavonoid, alkaloid and iridoid content and preventive effect of Lider-7-tang on lipopolysaccsaride-induced acute lung injury in rats”, Brazilian Journal of

Tiêu đề	Phân tích thành phần hóa học của lá mơ lông Việt Nam (Paederia lanuginosa)
Tác giả	Đàm Việt Hùng
Người hướng dẫn	TS. Lê Thị Thu Hường, TS. Nguyễn Hữu Tùng
Trường học	Đại học Quốc Gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	Khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2019
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	40
Dung lượng	1,51 MB