Preliminary data of the biodiversity in the area

Preliminary data of the biodiversity in the area Tạp chí Khoa học ĐHQGHN Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1 7 Đặc điểm sinh học của chủng Paecilomyces variotii NV01 phân lập từ[.]

Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 Đặc điểm sinh học chủng Paecilomyces variotii NV01 phân lập từ đất trồng hồ tiêu khu vực ĐăkLăk Chu Thanh Bình*,1, Bùi Thị Việt Hà2, Hồ Tuyên3, Nguyễn Phương Nhuệ3 Trung tâm Nhiệt đới Việt - Nga, 63 Nguyễn Văn Huyên, Hà Nội, Việt Nam Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN, 334 Nguyễn Trãi, Hà Nội, Việt Nam Viện Công nghệ Sinh học, Viện HLKH&CNVN, 18 Hoàng Quốc Việt, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 16 tháng 08 năm 2017 Chỉnh sửa ngày 21 tháng năm 2017; Chấp nhận đăng ngày 10 tháng 10 năm 2017 Tóm tắt: Từ 15 mẫu đất trồng hồ tiêu ĐăkLăk, chủng vi nấm phân lập chọn lọc cho khả sinh enzyme chitinase, protease, amylase, cellulase Chủng lựa chọn nghiên cứu hình thái, màu sắc khuẩn lạc, ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến hình thành bào tử Kết cho thấy môi trường PDA môi trường thích hợp cho sinh trưởng nấm Paecilomyces variotii NV01 Sau 14 ngày nuôi cấy chủng P variotii NV01 cho sớ bào tử 106/cm2 Chủng nấm có khả sinh số enzyme ngoại bào amylase, cellulase, chitinase, protease Kết giải trình tự phân tích vùng ITS rDNA với cặp mồi ITS1F/ITS4 cho thấy chủng nghiên cứu có độ tương đồng 100% với chủng Paecilomyces variotii KF305752 đặt tên P variotii NV01 Tại Việt Nam, nghiên cứu ứng dụng loài nấm cịn ít, sở liệu đặc tính sinh học cịn hạn chế Từ khóa: Đặc điểm sinh học, Paecilomyces variotii, hồ tiêu Mở đầu ∗ lớn quản lý dịch hại trùng [2], sớ có nấm ký sinh ấu trùng Nấm ký sinh ấu trùng sử dụng mấu bám hệ sợi chúng nhằm tiêu diệt ấu trùng [3] Một sớ đại diện cho nhóm thuộc chi Pochonia, Paecilomyces, Lecanicillium Các nghiên cứu Lopez - Llorca L cộng [3] cho thấy, nấm diệt tuyến trùng thuộc ngành Ascomycota có chi Paecilomyces, chúng tiết số enzyme ngoại bào chitinase, protease Các enzyme đóng vai trị quan trọng phân hủy ấu trùng dẫn tới tiêu diệt ấu trùng, người ta gọi loại nấm nấm diệt tuyến trùng Từ 15 mẫu đất trồng hồ tiêu, nhóm nghiên cứu phân lập 25 chủng vi nấm, từ sàng lọc chủng ký hiệu NV01 dựa vào khả sinh enzyme ngoại bào chitinase, protease, tiêu chí đánh giá khả diệt tuyến trùng nấm Trong báo này, đưa kết nghiên cứu đặc điểm sinh học, đặc điểm phân loại chủng nấm NV01 phân lập từ mẫu đất trồng Hồ Hiện nay, việc sử dụng thuốc trừ sâu tràn lan phịng trừ trùng gây hại dẫn đến tình trạng kháng th́c Để đạt mức độ kiểm sốt mong ḿn sớ lượng liều lượng thuốc ngày gia tăng Việc sử dụng th́c hóa học khơng tiêu diệt hệ sinh vật có lợi mà cịn gây nhiều bệnh dịch mới, ảnh hưởng đến sức khỏe người, động vật môi trường sinh thái Từ thực tế đó, biện pháp quản lý dịch hại theo hướng sinh học ngày phát triển Đấu tranh sinh học sử dụng nấm tiêu diệt trùng dần thay cho th́c hóa học vấn đề kiểm sốt trùng gây hại [1] Hướng nghiên cứu thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học giới Ngày nay, có 100 chi với 700 lồi nấm ký sinh trùng khác nhiều lồi sớ có tiềm * Tác giả liên hệ ĐT.: 84-915323870 Email: chuthanhbinhvn@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst.4595 C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 tiêu Đăk Lăk từ sở để nghiên cứu khả diệt tuyến trùng loài nấm Vật liệu phương pháp nghiên cứu ITS4 (5’ - GCT GCG TTC TTC ATC GAT GC - 3’); - Định danh dựa giải trình tự vùng ITS: Trình tự vùng ITS so sánh với sở liệu GenBank sử dụng công cụ BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov) 2.1 Vật liệu - Chủng NV01-phân lập từ mẫu đất trồng Hồ tiêu khu vực ĐăkLăk - Môi trường nuôi cấy: PDA (Potato Dextrose Agar) (g/l): khoai tây để chiết dịch 200; sacharose - 20, Agar - 15, pH 6,8 Môi trường CDA (Czapek - Dox Agar) (g/l): sacharose - 30, Sacharose: 30; NaNO 3: 2; KCl: 0,5; MgSO4.7H2O: 0,5; FeSO4.7H2O: 0,01; agar: 15; pH: 6,8-7,0 Môi trường CD dịch thể (Mơi trường CD khơng có agar) Mơi trường SDA - Y1 (Sabouraud Dextrose Agar Yeast) (g/l): pepton - 10; dextrose - 40; yeast extract 2; agar - 15 Môi trường SDA - Y3 (Sabouraud Dextrose Agar Yeast có thêm khoáng chất): pepton - 10; dextrose - 40; yeast extract - 2; agar - 15; sớ chất khống - Mơi trường thử hoạt tính amylase; cellulase; protease (g/l) chứa chất tinh bột; CMC; casein; chitin: agar: 15 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Số lượng bào tử tạo thành/cm 2: tính lần thời điểm 14 ngày nuôi cấy, thu bào tử xác định mật số bào tử buồng đếm hồng cầu Thoma kính hiển vi Mật sớ bào tử/cm2 = sớ lượng bào tử - (bt/ml)/diện tích khuẩn lạc [4] - Khả sinh enzyme: Xác định phương pháp khuyếch tán thạch; sử dụng chất: tinh bột (amylase), CMC (cellulase), cazein (protease), chitinase [5] - Tách chiết DNA tổng số kit Zymo Reseach (Mỹ) sử dụng quy trình kèm theo nhà sản xuất - Định danh nấm: sử dụng cặp mồi: ITS1F / ITS4 (IDT, Mỹ) có trình tự sau: IST1F (5’ - CTT GGT CAT TTA GAG GAA GTA A - 3’); Kết thảo luận 3.1 Đặc điểm hình thái cấu trúc sinh bào tử chủng NV01 Trong số 25 chủng nấm sợi phân lập được, ngồi chủng định danh hình thái khuẩn lạc, cấu trúc sinh bào tử (như Aspergillus, Penicillium, Curvularia ), chủng NV01 có hệ sợi dài, khuẩn lạc phát triển nhanh, mịn, màu sắc vàng, nâu vàng, nâu sẫm, khơng chuyển sang màu xanh Penicillium, có hoạt tính enzyme chitinase ngoại bào mạnh lựa chọn để nghiên cứu Chủng NV01 nuôi cấy nhiệt độ phịng, mơi trường CDA Một sớ đặc điểm ni cấy sau: hệ sợi mọc dạng xốp, sợi ban đầu trắng ngà, sau chuyển dần sang màu kem sang màu vàng nâu Khuẩn lạc có kích thước từ 1-3 cm sau ngày; mép trơn Cuống sinh bào tử bào tử xuất sau ngày ni cấy Bào tử đính, dạng chuỗi, hình van (Hình 1) Thể bình hình trụ hình elip, sau nhỏ dần Bào tử hình cầu đơn độc, (làm biết khơng sử dụng kính hiển vi điện tử), chuỗi dài tỏa theo hướng Theo kết nghiên cứu Luangsa-Ard cộng cho thấy chủng thuộc chi Paecilomyces [6] Tuy nhiên, để phân biệt đến lồi, cần phải tiến hành sớ tiêu sinh lý sinh hóa sinh học phân tử C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 Hình Hình thái cấu trúc sinh bào tử chủng NV01.(A - Hình thái khuẩn lạc; B - Cấu trúc sinh bào tử độ phóng đại 600 lần) 3.2 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến phát triển chủng NV01 Sau 14 ngày nuôi cấy, PDA môi trường cho chiều dài đường kính khuẩn lạc cao (4,16 cm) Mơi trường SDA-Y3 cho đường kính khuẩn lạc 3,98 cm, mơi trường CDA 3,64 cm SDA-Y1 3,45 cm Kết Bảng cho thấy số lượng bào tử/cm2 tỷ lệ tḥn với đường kính khuẩn lạc Ngồi ra, mơi trường PDA cịn mơi trường sử dụng để phân lập chủng nấm Theo tác giả Juan Li, Chenggang Zou, 2015 [7] số lượng bào tử thu lớn điều kiện thuận lợi để sản xuất chế phẩm diệt tuyến trùng Điều có hiệu đới với nấm có bào tử nội ký sinh trứng ấu trùng Paecilomyces Lưu ý: đường kính khuẩn lạc sau 14 ngày ni cấy nhiệt độ phịng Với mục đích lựa chọn mơi trường lên men tối ưu, tiến hành nghiên cứu điều kiện pH, nhiệt độ thích hợp cho chủng sinh trưởng Bảng Đường kính khuẩn lạc (cm) chủng nấm NV01 Mơi trường Đường kính khuẩn lạc (cm) Sớ lượng bào tử (/cm2) PDA 4,16 106 CDA 3,64 0,17 x 106 SDA –Y1 3,45 0,008 x 106 SDA – Y3 3,98 0, 25 x 106 Hình thái khuẩn lạc Sau ngày ni cấy, bào tử hình thành, dày đặc Sau ngày nuôi cấy, bào tử từ vàng nhạt chuyển sang nâu dần Sau ngày nuôi cấy, bào tử hình thành, đến ngày thứ 14 khuẩn lạc màu vàng nhạt Sau 7-8 ngày nuôi cấy, bào tử hình thành, bào tử thưa mặt thạch Sau 4-5 ngày ni cấy, bào tử hình thành r 3.3 Ảnh hưởng pH, nhiệt độ đến sinh trưởng chủng NV01 Chủng NV01 nuôi cấy môi trường CD dịch thể, nhiệt độ nuôi cấy 28oC ± 2oC, pH môi trường nuôi cấy thay đổi từ đến Kết trình bày Bảng Bảng Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến sinh trưởng chủng NV01 pH Sự sinh trưởng + ++ ++ +++ ++ + Nhiệt độ (oC) 20 25 30 35 40 45 50 Sự sinh trưởng + ++ +++ +++ ++ + - Ghi chú: (+) Sau ngày nuôi cấy hệ sợi phát triển, (++) Sau ngày nuôi cấy bào tử bắt đầu lác đác xuất xung quanh tam giác nuôi cấy, (+++) Sau ngày nuôi cấy bào tử xuất chuyển sang màu vàng (-) Không mọc Kết Bảng cho thấy, pH 5-8 thích hợp cho chủng sinh trưởng, phù hợp với pH mẫu đất lấy ĐăkLăk thường có pH 5-7 Nhiệt độ ni cấy thường ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng, khả sinh enzyme ảnh hưởng đến sinh tổng hợp chất khác Thí nghiệm ni cấy tiến hành mơi trường CDA với nhiệt độ nuôi cấy: 20 oC; 25oC; 30oC; 35oC; 40oC; 45oC; 50oC Kết trình bày Bảng Như vậy, nhiệt độ từ 25 - 40oC nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 chủng NV01; nhiệt độ tương ứng với điều kiện khí hậu vùng Đăk Lăk Theo nghiên cứu tác giả Khan A, Williams KL [8] chủng Paecilomyces lilacinus 251 nuôi cấy nhiệt độ từ 25-30 oC thử nghiệm tiêu diệt tuyến trùng Meloidogyne javanica cách đưa trứng M javanica trưởng thành vào đĩa 96 giếng bổ sung chitinase protease bán tinh lồi P lilacinus, quan sát kính hiển vi từ đến ngày sau ủ để xác định khả sớng sót trứng Các kết tương tự báo cáo Van Nam Nguyen cs [9] nghiên cứu lên men chủng Paecilomyces variotii DG-3 với dải pH từ 5,0 đến 8,3 để tách chiết chitinase; tinh nghiên cứu hai loại chitinase Chi32 Chi46; Chi32 exo-chitinase Chi46 endo-chitinase Chủng P variotii DG-3 tác giả phân lập từ đất trồng dưa chuột vùng Daegu, Hàn Q́c Ngồi việc khảo sát nhằm tới ưu điều kiện lên men, việc nghiên cứu khả sinh enzyme ngoại bào chitinase, protease, amylase, cellulase cần thiết đới với chủng có khả tiêu diệt tuyến trùng 3.4 Khảo sát khả sinh enzyme Kết Hình cho thấy, chủng NV01 có khả sinh loại enzyme chitinase, protease, amylase, cellulase Trên đĩa thạch có độ dày mm có bổ sung chất (như phần 2.1), đường kính vịng phân giải đới với chitinase 15 mm; protease 23 mm; amylase 33 mm cellulase 16 mm Kết tương tự nghiên cứu tác giả Chen cs., L.V Lopez-Llorca cs [3, 10] ứng dụng chúng tiêu diệt tuyến trùng gây bệnh thực vật (cà phê, cà chua, hồ tiêu) C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 cứu Zaldivar, Zeilinger [12, 13], chitinase tách chiết tinh từ nấm Trichoderma spp., chitinase ngoại bào tách chiết từ chủng nấm Metarhizium anisopliae ký sinh trùng (có trọng lượng phân tử 60, 33, 43.5, 45 Kda); chitinase nội bào từ chủng Beauveria bassiana (có trọng lượng phân tử 45 Kda) [14, 15] Những chủng coi tác nhân gây bệnh trùng Hình Khả sinh amylase (A); cellulase (B); protease ( C ) chitinase (D) 3.5 Định danh nấm giải trình tự vùng ITS rDNA Protease P32 có trọng lượng phân tử 32kDa lần tinh từ chủng Ponchonia rubescens Lopez-Llorca [3]; tương tự protease ngoại bào tìm thấy chủng Ponchonia chlamydosporia mang tên VCP1 [11], thí nghiệm chứng minh có mặt VCP1 trứng bị tiêu hủy dễ dàng khơng có mặt enzyme Trong nghiên Vùng ITS (Internal Transcribed Spacer) gồm ITS1, gen 5,8S rRNA, ITS2 vùng thường sử dụng nghiên cứu tiến hóa nhóm nấm nói chung Trong nghiên cứu này, sử dụng cặp mồi gồm ITS1F ITS4 White et al (1990) để nhân đoạn DNA có kích thước ~ 600bp 0.05 Penicillium digitatum KJ834506 92 50 89 71 99 100 100 100 Paecilomyces variotii KF305752 NV01 Paecilomyces variotii JQ796880 Paecilomyces variotii KU729023 Paecilomyces variotii AF455416 Paecilomyces variotii GU968667 100 Byssochlamys spectabi KC009788 Paecilomyces variotii KC237293 Paecilomyces variotii JX231002 50 Purpureocillium lilac KC157750 100 k Paecilomyces variotii FJ549438 Paecilomyces variotii JX231004 100 80 Byssochlamys spectabi KC157706 100 Paecilomyces variotii FJ487938 C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 Hình Cây phả hệ dựa trình tự vùng ITS (ITS1 - 5,8S - ITS2) chủng NV01 chủng có mối quan hệ gần gũi Sử dụng công cụ BLAST so sánh trình tự thu với trình tự ITS chủng nấm biết GenBank NCBI cho thấy, chủng có độ mức tương đồng trình tự ITS với chủng Paecilomyces variotii IKF305752 100% Kết trình bày Hình Như vậy, dựa vào đặc điểm hình thái, trình tự vùng ITS kết ḷn chủng NV01 thuộc lồi P variotii đặt tên P variotii NV01 Các liệu cơng bớ lồi cho thấy: P.variotii có khả kháng tuyến trùng Meloidogyne javanica gây bệnh bướu rễ cà chua, cà tím, dưa chuột, phân lập đất trồng khu vực địa lý khác Jordani; M Al-Qasim cs thử nghiệm khả tiêu diệt trứng tuyến trùng hiệu đạt đến 61,4%; chủng Paecilomyces lilacinus đạt hiệu đến 68,5% [16] Các cơng trình nghiên cứu Z Perveen S Shahzad cho thấy chủng Paecilomyces variotii; Paecilomyces lilacinus; Paecilomyces fumosoroseus có khả ức chế q trình nở trứng ấu trùng lồi Meloidogyne incognita (tuyến trùng đục thân) Trên họ đậu Vigna radiata, sử dụng chủng Paecilomyces variotii; Paecilomyces lilacinus giảm tới 83% trứng nở so với mẫu đối chứng [17] Trên kết khả quan nghiên cứu khả diệt tuyến trùng loài tác giả giới công bố Đồng thời sở cho nghiên cứu đối với chủng NV01 khả diệt tuyến trùng Kết luận Môi trường PDA mơi trường thích hợp cho sinh trưởng nấm NV01 Sau 14 ngày nuôi cấy nấm NV01 cho sớ bào tử 106/cm2 Chủng có khả sinh số enzyme ngoại bào amylase, cellulase, chitinase, protease; sinh trưởng tối ưu pH từ đến - Kết giải trình tự vùng ITS cho thấy chủng nghiên cứu có độ tương đồng 100% với lồi Paecilomyces variotii KF305752 đặt tên Paecilomyces variotii NV01 Tài liệu tham khảo [1] Khetan S K., Microbial Pest Control, Marcel Dekker, Inc., New York, (2001) C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 [2] Roberts D W., World picture of biological control of insects by fungi, Memorias Instituto Oswaldo Cruz, (1989) 89 [3] Lopez-Llorca L.V., J.G Macia - vicente and H.B Jansson, Mode of action and interactions of nematophagous fungi, Integrated Management and Biocontrol of Vegetable and Grain Crops Nematodes, Springer, (2008) 51 [4] Amutha, M., J Gulsar Banu, T Surulivelu, N Gopalakrishnan, Effect of commonly used insecticides on the growth of white Muscardine fungus, Beauveria bassiana under laboratory conditions, Journal of Biopesticides 3, (2010) 143 [5] Bauer A W, Kirby W M M, Sherris J C & Turck M., Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method, Amer I C/in Pathol Depts Microbiology and Medicine, Univ Washington, Sch Med., Seattle., (1966) 45 [6] Luangsa-ard J J., N L Hywel-Jones, L.Manoch, R A Samson, On the relationships of Paecilomyces sect, Isarioidea species, Publisher, British Mycological Society, (2005), 581 [7] Juan Li, Chenggang Zou, Jianping Xu, Xinglai Ji, Xuemei Niu, Jinkui Yang, Xiaowei Huang, and Ke-Qin Zhang, Molecular mechanisms of Nematode-Nematophagous microbe interactions, Basis for biological control of plant-parasitic nematodes, Phytopathol., (2015), 53 [8] Khan A, Williams KL, Nevalainen HKM, Effects of Paecilomyces lilacinus protease and chitinase on the eggshell structures and hatching of Meloidogyne javanica juveniles, Biological Control 31, (2004), 346 [9] Van Nam Nguyen, In-Jae Oh, Young-Ju Kim, KilYong Kim, Young-Cheol Kim, Ro-Dong Par J Ind., Purification and characterization of chitinases from Paecilomyces variotii DG-3 parasitizing on Meloidogyne incognita eggs, (2009), 195 [10] Chen, Y Y., Cheng, C.Y., Huang, T L., Chitosanase from Paecilomyces lilacinus with binding affinity for specific chitooligosacharide, Biotechnology and Applied Biochemistry, (2005), 145 [11] Segers, R., Butt, T M., Keen, J.N., Kerry, B R., & Peberdy, J F., The Subtilisins of the invertebrate mycopathogens Verticillium chlamydosporium and Metarhizium anisopliae are serologically and functionally related, FEMS Microbiology Letters, (1995), 227 [12] Zaldivar M, Velasquez JC, Contreras I, Perez LM Trichoderma aureoviride 7-121, A mutant with enhanced production of lytic enzymes: its potential use in waste cellulose degradation and/or biocontrol, Electron J Biotechnol, (2001), [13] Zeilinger S, Galhaup C, Payer K, Woo SL, Mach RL, Fekete C, Lorito M, Kubicek CP., Chitinase gene expression during mycoparasitic interaction of Trichoderma harzianum with its host, Fungal Genet Biol., (1999), 131 [14] Kang SC, Park S, Lee DG., Purification and characterization of a novel chitinase from the entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae J Invertebr Pathol., (1999), 276 [15] Leger S, Joshi RJ, Bidochka L, Roberts DW., Characterization and ultrastructural localization of Metarhizium anisopliae, M Xavoviride, and Beauveria bassiana during fungal invasion of host (Manduca sexta) cuticle, Appl Environ Microbiol., (1999), 907 [16] Al-Qasim M., W Abu-Gharbieh and K Assas., Nematophagal ability of Jordanian isolates of Paecilomyces variotii on the root-knot nematode Meloidogyne javanica, Nematol medit., (2009), 53 [17] Perveen Z and S Shahzad., A comparative study of the efficacy of Paecilomyces species against root-knot nematode Meloidogyne incognita Pakistan Journal of Nematology, (2013), 125 S Biological Characteristics of the Paecilomyces variotii NV01 Strain Isolated in Đăk Lăk Pepper Soil C.T Bình nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 33, Số 1S (2017) 1-7 Chu Thanh Binh1, Bui Thi Viet Ha2, Ho Tuyen3, Nguyen Phuong Nhue3 Vietnam - Russian Tropical Center, 63 Nguyen Văn Huyen Str., Hanoi, Vietnam Faculty of Biology, VNU University of Science, 334 Nguyen Trai Str., Hanoi, Vietnam Institute of Biotechnology, VAST, 18 Hoang Quoc Viet Str., Hanoi, Vietnam Abstract: From 15 pepper soil samples collected in Daklak, fungal strains were isolated and screened for chitinase, protease, amylase, and cellulase activities The strain NV01 was chosen for further investigation of morphology, colonial color and influences of nutrients on fungal sporulation It has been shown that the PDA medium is suitable for the growth of the strain NV01 After 14 days of inoculation, this fungus produced 106 conidia per cm2 The strain is capable of producing some extracellular enzymes such as amylase, cellulase, chitinase, and protease The sequence-based results ITS1F and ITS4 showed that the strains were highly similar (100%) to Paecilomyces variotii KF305752 and were assigned as Paecilomyces variotii NV01 In Vietnam, detailed researches on this fungus and related information of its biological characteristics are still limited Keywords: Biological characteristics, Paecilomyces variotii, pepper  ... growth of the strain NV01 After 14 days of inoculation, this fungus produced 106 conidia per cm2 The strain is capable of producing some extracellular enzymes such as amylase, cellulase, chitinase,... activities The strain NV01 was chosen for further investigation of morphology, colonial color and influences of nutrients on fungal sporulation It has been shown that the PDA medium is suitable for the. .. (2015), 53 [8] Khan A, Williams KL, Nevalainen HKM, Effects of Paecilomyces lilacinus protease and chitinase on the eggshell structures and hatching of Meloidogyne javanica juveniles, Biological