Híng dÉn chung TCVN T I Ê U C H U Ẩ N Q U Ố C G I A Dự thảo 2 TCVN 2019 Xuất bản lần 1 THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHONDROITIN SULFAT BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI[.]
TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA Dự thảo TCVN … :2019 Xuất lần THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHONDROITIN SULFAT BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR UV SAU KHI THỦY PHÂN BẰNG ENZYM Dietary supplements – Determination of chondroitin sulfate content by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection after enzymatic hydrolysis HÀ NỘI – 2019 TCVN … :2019 TCVN … :2019 Lời nói đầu TCVN :2019 xây dựng sở tham khảo AOAC 2015.11 Chondroitin sulfate content in raw materials and dietary supplements High-performance liquid chromatography with ultraviolet detection after enzymatic hydrolysis; TCVN … :2019 Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN … :2019 TCVN … :2019 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN :2019 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe – Xác định hàm lượng chondroitin sulfat phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector UV sau thủy phân enzym Dietary supplements – Determination of chondroitin sulfate content by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection after enzymatic hydrolysis Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng chondroitin sulfat (CS) nguyên liệu thô thực phẩm bảo vệ sức khỏe (viên nang cứng, viên nén, viên nhai, viên nang mềm dạng lỏng) sắc ký lỏng hiệu cao với detector UV sau thủy phân enzym Nguyên tắc Chất phân tích chiết nước, tạo dẫn xuất với enzym Chondroitinase ACII 37 ºC/3 h phân tích thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) bước sóng 240 nm Thuốc thử vật liệu thử Tất thuốc thử sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, dùng cho sắc ký lỏng hiệu cao có chất lượng tương đương Nước sử dụng phải nước cất hai lần nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 3.1 Dung mơi 3.1.1 Axetonitril 3.1.2 Axit clohydric đặc 3.2 Tetrabutylamoni bisulfat, độ tinh khiết ≥ 99,0 %, ví dụ: Cat No 86868 Sigma-Aldrich 1) 1) Sản phẩm Sigma-Aldrich (Fluka, St Louis, MO, USA; http://www.sigma-aldrich.com) Đây ví dụ sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thơng tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nêu Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương TCVN … :2019 3.3 Tris-(hydroxymethyl)aminometan (TRIS), ví dụ: Cat No T-1503 Sigma-Aldrich 1) 3.4 Natri axetat, dạng khan, ví dụ: Cat No S-8750 Sigma-Aldrich 1) 3.5 Axit axetic băng, ví dụ: Cat No A-0808 Sigma-Aldrich 1) 3.6 Natri clorua 3.7 Albumin từ huyết bò, 1x kết tinh, 97 %, ví dụ: Cat No A-4378 Sigma-Aldrich 1) 3.8 Chondroitinase AC II, đơn vị, ví dụ: Cat No 100335-1A Seikagaku America 2) 3.9 Pha động A Cân 340 mg tetrabutylamoni bisulfat (3.2), chuyển vào bình định mức 000 ml (4.11) Hịa tan hồn tồn nước thêm nước đến vạch Đưa bình vào bể rung siêu âm (4.4) để loại khí 3.10 Pha động B Cân 340 mg tetrabutylamoni bisulfat (3.2), chuyển vào bình định mức 000 ml (4.11) hịa tan hồn toàn 330 ml nước Thêm axetonitril (3.1.1) đến vạch Đưa bình vào bể rung siêu âm (4.4) để loại khí lọc qua thiết bị lọc (4.10) 3.11 Dung dịch axit clohydric, 0,12 M Lấy cẩn thận ml axit clohydric đặc (3.1.2) cho vào 99 ml nước trộn 3.12 Dung dịch axit clohydric, M Lấy cẩn thận 50 ml axit clohydric đặc (3.1.2) cho vào 50 ml nước trộn 3.13 Dung dịch đệm TRIS Cân g TRIS (3.3), 2,4 g natri axetat (3.4), 1,46 g natri clorua (3.6) 50 mg tinh thể albumin từ huyết bò (3.7), hòa tan vào 100 ml dung dịch axit clohydric 0,12 M (3.11) Chỉnh pH đến 7,3 dung dịch axit clohydric M (3.12) 3.14 Dung dịch enzym Hòa tan đơn vị chondroitinase AC II (3.8) 0,5 ml nước Bảo quản nhiệt độ thấp °C 3.15 Dung dịch pha loãng 2) Sản phẩm Seikagaku America/Associates of Cape Cod (East Falmouth, MA, USA; http://www acciusa.com) Đây ví dụ sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thơng tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nêu Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương TCVN … :2019 Chuẩn bị 20 ml dung dịch pha loãng chứa 80 % pha động A (3.9) 20 % pha động B (3.10) 3.16 Chất chuẩn, xem Bảng Độ tinh khiết chất chuẩn theo chứng nhận phân tích nhà cung cấp Độ tinh khiết xác định phương pháp sắc ký, độ ẩm lượng dung môi dư Không cần xác định lại độ tinh khiết chất chuẩn Bảng – Các chất chuẩn Tên chất chuẩn Kí hiệu Ví dụ nhà cung cấp 3) 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-gluco-4-enepyranosyluronic acid)- ΔDi-0SDi-0S Sigma ΔDi-0SDi-4S Sigma ΔDi-0SDi-6S Sigma ΔDi-0SDi-di(2,6)S ICN a) ΔDi-0SDi-di(4,6)S ICN ΔDi-0SDi-tri(2,4,6)S ICN D-galactose 2-Acetamido-2-deoxy-3-O(β-D-gluco-4-enepyranosyluronic acid)-4O-sulfo-D-galactose 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-gluco-4-enepyranosyluronic acid)6-O-sulfo-D-galactose 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(2-O-sulfo-β-D-gluco-4enepyranosyluronic acid)-6-O-sulfo-D-galactose 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-gluco-4-enepyranosyluronic acid)4,6-di-O-sulfo-D-galactose 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(2-O-sulfo-β-D-gluco-4enepyranosyluronic acid)-4,6-di-O-sulfo-D-galactose a) Hiện MP Biomedicals (Solon, OH, USA) 3.17 Dung dịch chuẩn hiệu chuẩn thiết bị 3.17.1 Dung dịch chuẩn gốc 3) Đây ví dụ nhà cung cấp sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thơng tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nhà cung cấp Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương TCVN … :2019 Cân xác khoảng mg chất chuẩn ΔDi-0SDi-0S, 10 mg chất chuẩn ΔDi-0SDi-4S ΔDi-0SDi-6S (xem Bảng 1), chuyển vào bình định mức 50 ml (4.11) Hịa tan hồn tồn nước thêm nước đến vạch 3.17.2 Dung dịch chuẩn làm việc Từ dung dịch chuẩn gốc (3.17.1), chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ ΔDi-0SDi-4S ΔDi-0SDi-6S khoảng 2, 8, 20, 40 100 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/ml nồng độ ΔDi-0SDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/ml theo Bảng Bảng – Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc hiệu chuẩn thiết bị Thể tích dung dịch chuẩn Thể tích cuối gốc (3.17.1) lấy, ml (dung tích bình định mức), ml 25 50 10 50 50 50 100 Số thứ tự 3.18 Vật liệu đối chứng CS, từ khí quản bị, ví dụ: từ Bioiberica 4) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 4.1 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao, gồm bơm tự động Beckman 126 5), detector UV mảng diod số 168, lấy mẫu tự động 507e phần mềm 32 Karat 4.2 Cột sắc ký, ví dụ: Phenomenex Synergi Polar-RP 6), đường kính 4,6 mm × chiều dài 150 mm, cỡ hạt μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlm 4.3 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 4) Bioiberica (Barcelona, Tây Ban Nha) ví dụ nhà cung cấp sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thơng tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nhà cung cấp Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương 5) Sản phẩm Beckman Coulter (Fullerton, CA, USA) Đây ví dụ sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thông tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nêu Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương 6) Sản phẩm Phenomenex (Torrance, CA, USA) Đây ví dụ sản phẩm thương mại sẵn có thích hợp Thơng tin nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nêu Có thể sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương TCVN … :2019 4.4 Bể rung siêu âm 4.5 Máy đo pH, đo xác đến 0.01 đơn vị pH 4.6 Tủ ấm, cài đặt 37 °C 4.7 Lọ vial, dung tích ml, có nắp septa (màng phủ teflon) 4.8 Insert, 200 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll, phù hợp với lọ vial 4.9 Bơm bơm mẫu, phân phối thể tích 25 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll, 100 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll 500 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll 4.10 Thiết bị lọc, sử dụng màng lọc PTFE 0,2 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlm 4.11 Bình định mức, dung tích 50 ml, 100 ml 000 ml 4.12 Pipet tự động, phân phối thể tích thích hợp Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị dung dịch đối chứng CS Cân xác khoảng 100 mg mẫu đối chứng CS (3.18) vào bình định mức 50 ml (4.11) Thêm khoảng 30 ml nước rung siêu âm bể (4.4) khoảng 15 tan hoàn toàn Thêm nước đến vạch, trộn ghi nhãn Dung dịch đối chứng 6.2 Chuẩn bị dung dịch thử 6.2.1 Nguyên liệu thơ Cân xác khoảng 200 mg mẫu ngun liệu thơ CS vào bình định mức 100 ml (4.11) Thêm 60 ml nước rung siêu âm bể (4.4) mẫu tan hoàn hoàn (khoảng 15 min) Thêm nước đến vạch Lắc ghi nhãn Dung dịch thử TCVN … :2019 6.2.2 Viên nén Cân 20 viên nén mẫu thử, tính khối lượng trung bình viên, sau trộn Cân xác khoảng 200 mg mẫu nghiền, cho vào bình định mức 100 ml (4.11) Thêm khoảng 60 ml nước rung siêu âm bể (4.4) mẫu tan hoàn hoàn (khoảng 15 min) Thêm nước đến vạch Lắc đều, lọc khoảng ml đến ml dung dịch qua màng lọc PTFE 0,2 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlm (4.10) ghi nhãn Dung dịch thử 6.2.3 Viên nang Cân 20 viên nang mẫu thử, tính khối lượng trung bình viên Gom lượng chứa viên nang (sử dụng miếng gạc thổi khí để làm vỏ nang) trộn Tiến hành tương tự viên nén (xem 6.2.2) 6.2.4 Sản phẩm công thức dạng lỏng Trộn kỹ đề đồng mẫu Cân xác mẫu tương đương với khoảng 200 mg CS vào bình định mức 100 ml (4.11) Thêm 60 ml nước rung siêu âm bể (4.4) mẫu tan hoàn hoàn (khoảng 15 min) Thêm nước đến vạch Lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,2 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlm (4.10) ghi nhãn Dung dịch thử 6.3 Thủy phân mẫu thử mẫu kiểm soát enzym Hút 20 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll dung dịch đệm TRIS (3.13), 30 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll dung dịch enzym (3.14) 20 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll Dung dịch đối chứng (xem 6.1) Dung dịch thử (xem 6.2) vào lọ vial ml (4.7) với insert 200 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll (4.8) Ủ lọ vial 37°C h tủ ấm (4.6) Sau lấy để nguội nhiệt độ phịng Dùng pipet tự động (4.12) chuyển toàn mẫu insert sang lọ vial khác, tráng insert xác 100 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll pha động A (3.9) Thêm xác 830 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll pha động A, lắc ghi nhãn Dung dịch đối chứng Dung dịch thử 6.4 Xác định 6.4.1 Điều kiện vận hành HPLC Các điều kiện vận hành sau cho thích hợp: - Tốc độ dịng: 1,1 ml/min; - Nhiệt độ cột: ổn định; - Thể tích bơm mẫu: 30 μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mll; - Bước sóng phát hiện: 240 nm; - Chương trình gradient: 10 TCVN … :2019 Bảng – Chương trình gradient Thời gian, Pha động A, % Pha động B, % 80 20 từ đến 7,0 35 65 từ 7,0 đến 12,0 35 65 từ 12 đến 12,5 80 20 6.4.2 Bơm dung dịch đo độ hấp thụ Cân hệ thống HPLC (4.1) pha động (3.9 3.10) 30 thu đường ổn định Bơm dung dịch chuẩn làm việc (3.17.2) dung dịch thử (6.3) vào hệ thống HPLC (4.1) Sau 20 lần bơm dung dịch thử sau bơm xong tất dung dịch thử, bơm riêng dung dịch chuẩn Sau thiết bị ổn định, tiến hành đo độ hấp thụ quang dung dịch bơm 6.4.3 Đường chuẩn Bơm dãy dung dịch hiệu chuẩn thiết bị (3.17.2) Sử dụng phương pháp hồi quy tuyến tính để xác định độ dốc, giao điểm với trục tung hệ số tương quan r2 đường chuẩn chất chuẩn ΔDi-0SDi-0S, ΔDi-0SDi-4S ΔDi-0SDi-6S Giá trị r2 phải lớn 0,995 ΔDi-0SDi-0S lớn 0,998 ΔDi-0SDi-2S, ΔDi-0SDi-6S Hệ số đuôi thành phần dải tuyến tính phải khoảng từ 0,80 đến 1,5 6.4.4 Độ thu hồi Bơm Dung dịch đối chứng tính hàm lượng CS vật liệu đối chứng theo Điều Độ thu hồi phải khoảng ± % so với mức công bố Tính kết 7.1 Hàm lượng ΔDi-0S Di-0S Hàm lượng ΔDi-0SDi-0S (phần CS chưa sulfat hóa) mẫu thử, X0, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/ g), tính theo Cơng thức (1): X0 P0 b0 V D m0 W (1) 11 TCVN … :2019 đó: P0 diện tích peak ΔDi-0SDi-0S mẫu thử; b0 hệ số cắt đường chuẩn ΔDi-0SDi-0S; m0 độ dốc đường chuẩn ΔDi-0SDi-0S; V thể tích định mức Dung dịch thử 1, tính mililit (ở V = 100 ml); W khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); D hệ số pha loãng (ở D = 50) 7.2 Hàm lượng ΔDi-0S Di-4S Hàm lượng ΔDi-0SDi-4S (phần CSA) mẫu thử, X4, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Công thức (2): X4 P4 b4 V D m4 W (2) đó: P4 diện tích peak ΔDi-0SDi-4S mẫu thử; b4 hệ số cắt đường chuẩn ΔDi-0SDi-4S; m4 độ dốc đường chuẩn ΔDi-0SDi-4S; V, W, D nêu 7.1 7.3 Hàm lượng ΔDi-0S Di-6S Hàm lượng ΔDi-0SDi-6S (phần CSC) mẫu thử, X6, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Cơng thức (3): X6 đó: 12 P6 b6 V D m6 W (3) TCVN … :2019 P6 diện tích peak ΔDi-0SDi-6S mẫu thử; b6 hệ số cắt đường chuẩn ΔDi-0SDi-6S; m6 độ dốc đường chuẩn ΔDi-0SDi-6S; V, W, D nêu 7.1 7.4 Hàm lượng ΔDi-0S Di-di(2,6)S Hàm lượng ΔDi-0SDi-di(2,6)S mẫu thử, X2,6, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Cơng thức (4): X 2, P2, b6 m6 V D F W (4) đó: P2,6 diện tích peak ΔDi-0SDi-di(2,6)S mẫu thử; b6, m6 nêu 7.3; V, W, D nêu 7.1; F hệ số chuyển đổi khối lượng phân tử ΔDi-0SDi-6S ΔDi-0SDi-di(2,6)S (ở F = 1,190) 7.5 Hàm lượng ΔDi-0S Di-di(4,6)S Hàm lượng ΔDi-0SDi-di(4,6)S mẫu thử, X4,6, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Công thức (5): X 4,6 P4,6 b6 m6 V D F W (5) đó: P4,6 diện tích peak ΔDi-0SDi-di(4,6)S mẫu thử; b6, m6 nêu 7.3; V, W, D nêu 7.1; F hệ số chuyển đổi khối lượng phân tử ΔDi-0SDi-6S ΔDi-0SDi-di(4,6)S (ở F = 1,190) 7.6 Hàm lượng ΔDi-0S Di-tri(2,4,6)S 13 TCVN … :2019 Hàm lượng ΔDi-0SDi-tri(2,4,6)S mẫu thử, X2,6,6, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Cơng thức (6): X 2, , P2, 4, b6 m6 V D F W (6) đó: P2,6,6 diện tích peak ΔDi-0SDi-tri(2,4,6)S mẫu thử; b6, m6 nêu 7.3; V, W, D nêu 7.1; F hệ số chuyển đổi khối lượng phân tử ΔDi-0SDi-6S ΔDi-0SDi-tri(2,4,6)S (ở F = 1,380) 7.7 Hàm lượng CS tổng số Hàm lượng CS tổng số mẫu thử, X, biểu thị microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g), tính theo Công thức (7): X = X0 + X4 + X6 + X2,6 + X4,6 + X2,4,6 (7) 7.8 Hàm lượng CS mẫu chế phẩm a) Hàm lượng CS mẫu viên nén, XT, biểu thị microgam viên (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/viên), tính theo Công thức (8): X XT WT 1000 (8) đó: X hàm lượng CS mẫu thử, tính microgam gam (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/g); WT khối lượng trung bình viên nén (xem 6.2.2), tính gam (g) b) Hàm lượng CS mẫu viên nang, XC, biểu thị microgam viên (μg/ml nồng độ ΔDi-0S tương ứng 0,4, 1,6, 4, 20 μg/mlg/viên), tính theo Cơng thức (9): X XC WC 1000 đó: 14 (9) TCVN … :2019 WC khối lượng trung bình lượng chứa viên nang (xem 6.2.3), tính gam (g) c) Hàm lượng CS mẫu sản phẩm công thức dạng lỏng, XL, biểu thị miligam mililit (mg/ ml), tính theo Cơng thức (10): X XL SG 1000 (10) đó: SG khối lượng riêng mẫu thử (xem 6.2.4), tính gam mililit (g/ml) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thơng tin sau: – thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; – phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; – phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; – tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tuỳ ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng đến kết quả; – kết thử nghiệm thu 15 TCVN … :2019 Phụ lục A (Tham khảo) Sắc đồ điển hình hỗn hợp dung dịch chuẩn số mẫu CHÚ DẪN : (1) ΔDi-0SDi- 0S (2,5 min), (2) ΔDi-0SDi-6S (5,9 min), (3) ΔDi-0SDi-4S (6,3 min) Hình A.1 – Ví dụ sắc đồ hỗn hợp dung dịch chuẩn CHÚ DẪN : (1) ΔDi-0SDi- 0S, (2) ΔDi-0SDi-6S, (3) ΔDi-0SDi-4S Hình A.2 – Ví dụ sắc đồ mẫu khí quản bị 16 TCVN … :2019 CHÚ DẪN : (1) ΔDi-0SDi-0S, (2) ΔDi-0SDi-6S, (3) ΔDi-0SDi-4S, (4) ΔDi-0Sdi-di(2,6)S (5) ΔDi-0Sdi-di(4,6)S Hình A.3 – Ví dụ sắc đồ mẫu vây cá mập 17