VẮC XIN PHÒNG BỆNH GUMBORO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ****************** CHUẨN ĐOÁN BỆNH CHỦ ĐỀ: VẮC – XIN PHÒNG BỆNH GUMBORO Cán hướng dẫn: PGS.TS NGUYỄN NGỌC HẢI Sinh viên thực hiện: LÊ THỊ NHƯ THẢO MSSV: 0612 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com I ĐẶT VẤN ĐỀ: Bệnh gumboro bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm, gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi gà, kể gà nuôi công nghiệp gà chăn thả vườn Tỷ lệ chết gà bị nhiễm bệnh từ 3-20% không ghép với bệnh khác từ 21-100% nhiễm kèm với bệnh khác gây virút, vi khuẩn, ký sinh trùng Do tính nguy hiểm bệnh nên việc phịng ngừa để không tái nhiễm bệnh gumboro đàn gà quan trọng Ngành kinh tế nông nghiệp gia cầm gặp nhiều nguy đe dọa q trình phát triển Trong đó, dịch bệnh ảnh hưởng lớn lợi nhuận, trình sản xuất, tình hình chăn ni gia cầm giới Vì vấn đề nghiên cứu để sản xuất vắc xin trị bệnh Gumboro cần thiết tiến hành, tạo nhiều loại vắc xin có giá trị II BỆNH GUBORO KHÁI NIỆM: Bệnh Gumboro bệnh cấp tính gà, virut gây bệnh Gumboro (IBDV) phá huỷ túi Fabracius, làm giảm khả miễn dịch gà Mầm bệnh sống hàng tháng chuồng trại, thức ăn, nước uống, phân Lứa tuổi gà mắc bệnh cao – tuần tuổi, gà nhỏ mắc bệnh thể tiềm ẩn, không biểu triệu chứng ảnh hưởng lớn làm ức chế q trình sinh miễn dịch LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com - Trong năm gần đây, nhiều dòng chủng IBDV (vvIBDV), nguyên nhân gây tử vong đồng loạt gà, xuất châu Âu, Mỹ Latin, Đông Nam Á, châu Phi Trung Đông TÚI FABRACIUS: + Túi Fabricius quan dạng lympho, nằm gần hậu mơn + Trong q trình phát triển bào thai, xuất sau tuyến ức giống tuyến ức, túi Fabricius có cấu trúc lympho biểu mô + Túi Fabricius quan dạng lympho trung ương, q trình biệt hóa túi diễn khơng bị ảnh hưởng kích thích kháng ngun từ bên + Túi Fabricius nhỏ sớm: gà khoảng tháng thứ (tuổi dậy thì), bắt đầu teo tới tháng 11-12 hẳn + Chia túi thành đơn vị cấu trúc gọi nang (Foliculum) Mỗi nang gồm có vùng vỏ giàu lympho bào vùng tủy tế bào có chứa tương bào + Đây cịn nơi biệt hóa dịng lympho B 3.IBDV (Infectious bursal disease virus) : IBDV virus dạng trần, khơng có vỏ bọc ngồi IBDV có cấu trúc mạch đơi RNA cuộn tròn phân thành đoạn riêng biệt, thuộc lồi Avibirnavirus họ Birnaviridae (Leong et al., 2000) Quanh nhân vỏ protein (vỏ capsid) Lớp capsid hợp thành 32 capsomer (đơn vị hình thái) Mỗi capsomer tạo loại protein cấu trúc khác nhau: VP1, VP2, VP3, VP4 VP5 (Viral ProteinVP) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com IBDV genome chứa hai mạch, A B Mạch B (2.9kb) mã hóa cho VP1 (VP1: 95kDa), người ta cho enzyme RNA polimerase phụ thuộc RNA (RNA dependent RNA polimerase-RdRp) (Bruenn, 1991; Macreadie & Azad, 1993; Spies et al., 1987) Polipeptide diện dạng virus nghỉ tế bào chủ (virion), mang chất protein tự protein liên kết genome (còn gọi VPg) VPg cố định vào đuôi 5’ sợi dương mạch genome (Dobos, 1993; Spies & Muller, 1990) Mạch A lớn (3.2kb) chứa hai khung đọc mở thành phần (overlapping open reading frame-ORF) ORF nhỏ mã hóa cho protein không cấu trúc VP5, không cần thiết cho trình chép virus in vitro lại quan trọng khả gây bệnh virus (Mundt et al., 1997; Yao et al., 1998) ORF lớn mã hóa cho polyprotein 110 kDa, tự xác tác phân cắt hình thành loại polipeptide: pVP2 (48 kDa), VP3 (32 kDa) VP4 (28 kDa) VP4, loại enzyme protease phân cắt serinelysine (Birghan et al., 2000), cịn tham gia trình tự tách RNA dư thừa (Lejal et al., 2000; Sanchez & Rodriguez, 1999) pVP2 tách thêm RNA dư thừa Carbon cuối để trở thành VP2 (40 kDa) (Da Costa et al., 2002; Lejal et al., 2000) VP2 VP3 protein cấu trúc Trong đó, VP2 chứa vị trí kháng nguyên quan trọng hệ thống đáp ứng miễn dịch (Heine and Boyle, 1993) - Về miễn dịch: IBDV có hai serotype khác biệt rõ ràng, có loại serotype có khả gây bệnh gia cầm + Serotype 1: gồm nhiều chủng gây bệnh cho gà Có khoảng loại kháng nguyên phụ serotype xác định thử nghiệm trung hòa ống nghiệm Những virus thuộc loại kháng nguyên phụ thường biết dạng biến thể, nguyên nhân gây tỉ lệ tử vong gà từ 60-100% Có khác kháng nguyên LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com chủng cổ điển biến thể Miễn dịch chéo biến chủng nhỏ (Mc Ferran Cs 1980) + Serotype 2: gồm có chủng virus gây bệnh cho gà tây Về phương diện miễn dịch, hai serotype khơng có khả miễn dịch chéo với Tuy nhiên gà gà tây bị nhiễm chủng virus mà không phát bệnh - Sức đề kháng: IBDV có sức đề kháng cao với tác nhân lý hóa mơi trường o Chịu đựng pH từ 2-12 (Benton cs, 1967) Ở 56 C, IBDV tồn o o 5h, 70 C bị tiêu diệt sau 30 phút, -50 C 18 tháng độc lực không suy giảm (Landgraf cs, 1967) Trong chất thải, phân, nước tiểu, IBDV giữ nguyên tính gây nhiễm gây bệnh vịng 52 ngày IBDV đề kháng hoàn toàn với ether, chloroform Trong phenol 0.5% o timerosal 1.125% 50 C 1h, formalin 0.5% 6h, chloramin 0.5% 10 phút Các hợp chất như: dẫn suất phenol, phức hợp iode, formol nồng độ cao, diệt IBDV Chất chứa mầm bệnh: thận túi Fabricius, nơi chứa nhiều virus Ngoài ra, chất tiết, thức ăn, nước uống, chất độn chuồng chứa virus - Đường xâm nhiễm: tự nhiên, lay truyền qua đường tiêu hóa phổ biến nhất, việc lây nhiễm qua khơng khí quan trọng Trong phịng thí nghiệm, dùng đường mũi mắt Sự lan truyền: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bệnh truyền ngang từ gà ốm sang gà khỏe qua thức ăn, nước uống, dụng cụ chăn nuôi, Bệnh mang tính phức tạp đường lây lan sức chịu đựng virus môi trường nhiệt độ cao, với số hóa chất sát trùng V CƠ CHẾ: IBDV công chủ yếu vào mô lympho Tế bào lympho B túi Fabricius bị phá hủy Tế bào lympho T tuyến Thymus bị tổn thương Sau ngày xâm nhập vào thể, thấy xuất biến đổi viêm túi Fabricius Đặc biệt đến ngày 3-4 túi Fabricius, thấy xung huyết, xuất huyết, phù thủng thâm nhiễm tế bào viêm đạt độ cực đại Cùng với phóng virus, thân nhiệt tăng đột ngột; sau đó, gây hoại tử tiến triển nang (Foliculu) túi, phá hủy tất mô lympho cuối sau 5-7 ngày túi teo nhanh Những thay đổi suy thoái phát triển nơi tế bào lympho B hay tụ tập LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRIỆU CHỨNG : Sau virus xâm nhập vào túi Fabracius gà có biểu hiện: - Đàn gà uống nhiều nước, sào xạc có tiếng động lạ hay có người bước vào chuồng - Cơ vùng hậu mơn co bóp nhanh, mạnh, gà có phản xạ muốn ngồi khơng thực được, gà có biểu giật lùi - Sau gà sốt cao, uống nhiều nước dẫn đến rối loạn tiêu hoá, gà tiêu chảy mạnh, viêm hoại tử ruột - Phân gà trắng lỗng, lúc đầu có màu trắng ngà sau chuyển sang vàng trắng, trắng nhớt lẫn máu - Bệnh tiến triển nhanh sau 6-8 kể từ ốm đầu tiên, đàn gà thay đổi mặt thể trạng, trông chúng xơ xác, xù lơng, run rẩy, nằm trẹo bên này, nằm nghiêng bên kia, yếu dần chết - Tỷ lệ chết từ – 30% , song lên tới 60 – 80% bị bội nhiễm bệnh khác BỆNH TÍCH: Bệnh tích đại thể - Lách sưng -Thận sưng, biến đổi màu, ống niệu quản đầy muối urat -Xuất huyết đám ngực, đùi -Da chân khô tóp lại (cơ thể bị nước tiêu chảy) -Dịch niêm mạc tăng -Túi Fabricius không ngừng bị biến đổi: Sau ngày nhiễm túi Fabricius tăng kích thước trọng lượng thủy thủng nang túi Đến ngày thứ trọng lượng tăng gấp 2-3 lần bình thường, nang viêm không Dịch nhày vàng lẫn hồng nang, có đám xuất huyết LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com nang dẫn đến dịch chuyển màu vàng đục sánh, đơi có kèm bã đậu (fibrin) Có trường hớp dịch nhày bao quanh bên túi Đến ngày thứ trọng lượng túi Fabricius bắt đầu giảm teo dần, nang túi không đồng Bệnh tích vi thể: Có hoại tử thành phần tế bào lympho như: túi Fabricius, van hồi manh tràng, lách Các thành phần tế bào lympho bị phá hủy, nhân tế bào bị teo rỗng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trong trường hợp nhẹ: Trong nang có đám thâm nhiễm lớn tế bào viêm mô nang Ở nang có tế bào rỗng tạo thành không bào (Vacuolas) thấy tượng hoại tử tế bào mảnh vụn tế bào bị phá hủy, làm thành khối Phản ứng viêm nhiễm không phân biệt rõ Việc tế bào bị phá hủy dẫn đến việc biến hoàn toàn nang lympho Tại chỗ chúng phát triển tế bào biểu mơ phân biệt Trong trường hợp cấp tính: Ở mơ đệm nang thường thấy đầy hồng cầu bề mặt Ở lớp tế bào thấy xuất thành phần tế bào hồn tồn bị lệch vị trí, có mảnh tế bào dịch nhày màu hồng III VẮC XIN CÁC LOẠI VẮC XIN HIỆN NAY: - Hiện nay, giới để phòng bệnh Gumboro người ta hay dùng vaccine nhược độc vaccin vô hoạt dầu Tuy nhiên, phân phối vaccine bất hoạt gà tốn nhiều thời gian khó khăn tiêm da hay Bên cạnh đó, gà thừa hưởng miễn dịch thụ động từ mẹ lại nhanh làm cho chúng dễ mắc bệnh Độ tuổi tối ưu để chủng vaccine sống khó đóan trước hệ thống miễn dịch gà non yếu, khó đáp ứng mạnh với vaccine sống Ở đây, trình bày DNA vaccine chủng cho phơi gà Điểm mạnh DNA vaccine vừa sử dụng cho gà nở miễn dịch thụ động không cản trở đến DNA vaccine (Babiuk, 1999; Seigrist, 2001; Hasset, 2000) - Vacxin nhược độc phòng chống bệnh Gumboro cho gà: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hiện nước ta, nhóm nhà khoa học GS Đái Duy Ban, viện Cơng nghệ Sinh học chủ trì, chế tạo thành cơng vacxin nhược độc phịng chống bệnh Gumboro cho gà lứa tuổi nhỏ gà giò Tuy nhiên, dể bảo vệ cho gà nở gà tuần tuổi, cần có kháng thể thụ động truyền từ gà mẹ qua lòng đỏ trứng cho gà Xuất phát từ thực tế này, nhà nghiên cứu chế tạo vacxin nhũ dầu phòng chống bệnh Gumboro cho gà sinh sản Vacxin đặt tên Vacxin Gumboro nhũ dầu Việt Nam viết tắt VN-97 Vacxin có màu trắng đục sữa , khơng phân lớp, nhuyễn đồng Vacxin VN-97 đạt an toàn: + Trên phôi gà 10 ngày tuổi + Trên gà mẫn cảm tuần tuổi với liều vacxin cao gấp 10 lần liều qui định, sản lượng trứng gà sau tiêm vacxin không bị ảnh hưởng Đạt khiết cấy môi trường sau: + Nước thịt dinh dưỡng + Thạch máu + Mơi trường yếm khí + Thạch nấm Hiệu lực miễn dịch vacxin:người ta tiến hành xác định hiệu giá kháng thể (HGKT) phản ứng AGP, ELISA phản ứng trung hòa cho kết tốt Kết cho thấy, vacxin VN-97 tạo miễn dịch chắn bảo vệ đàn gà chủng phòng chống bệnh Gumboro HGKT ngưỡng bảo hộ với tỷ lệ cao LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Vacxin VN-97 không làm ảnh hưởng đến sản lượng trứng đàn gà chủng Vacxin VN-97 tạo miễn dịch chắn không thua miễn dịch vacxin Gumborifa tạo Độ dài miễn dịch vacxin VN-97 đạt tháng Đã sử dụng 5000 liều vacxin VN-97 nhiều sở chăn nuôi gà ngoại thành Hà Nội, kết an toàn hiệu lực xây dựng ba qui trình: qui trình chế tạo, qui trình kiểm nghiệm qui trình sử dụng vacxin nhũ dầu Gumboro VN-97 CÁCH TẠO VẮC XIN DNA Để làm vaccine DNA, hay nhiều gen quy định kháng nguyên mầm bệnh li trích chuyển vào plasmid, tạo thành DNA tái tổ hợp Plasmid chuyển vào vsv nhận cho nhân lên Ly trích Plasmid chuyển vào vật chủ Bằng chế tế bào sử dụng gen gen tiến hành tổng hợp protein kháng nguyên gen quy định Hệ thống miển dịch đáp ứng lại protrin kháng ngun hình thành tính miển dịch Plasmid pVAX1 chứa gene VP2 giống GLS-BIDV giống D78IBDV có sẳn Gene VP3, VP4 từ D78 chuyển vào pUC19 thêm vào gene mã hóa protein khơng cấu trúc bị cắt bỏ tạo thành pUC19B69GLSVP2_NS pUC19B69GLSVP2_NS pVAX1 cắt EcoR1 Đoạn 3.2 kb (pUC19B69GLSVP2_NS) pVAX1được tách gel agarose 1% nối lại ligase tạo plasmid pVAX1B69GLSVP2_NS Plasmid chuyển vào Ecoli Chọn lọc khuẩn lạc thích hợp ly trích DNA Hàm lượng DNA vaccin xác định LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com cách đo mật độ quang Sự tạp nhiểm kiểm tra điện di gel agarose ĐẶC ĐIỂM VẮC XIN GUMBORO: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com -ĐẶC TÍNH: ƒ Là vắc xin sống, đơng khơ, sản xuất từ chủng vi rút Gumboro nhược độc, nuôi cấy tế bào xơ phôi gà (CEF) ƒ Vắc xin an tồn, tạo miễn dịch tốt khơng gây ức chế đáp ứng miễn dịch loại vắc xin khác - CHỈ ĐỊNH: ƒ Dùng gây miễn dịch chủ động phòng bệnh Gumboro cho gà khoẻ mạnh - THÀNH PHẦN: ƒ Vi rút Gumboro nhược độc, liều vắc xin chứa 103 TCID50 ƒ Chất ổn định: Sữa không kem - CÁCH SỬ DỤNG: ٠ Đường dùng vắc xin: Nhỏ mắt, miệng pha nước cho uống ٠ Phương pháp chủng vắc xin: ƒ Cho uống nhỏ mắt con: Pha vắc xin với nước sinh lý vô trùng cho giọt chứa liều vắc xin Lắc tan đều, dùng ống hút nhỏ vào xoang miệng mắt gà giọt, bên mắt giọt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ƒ Cho uống đàn: Để gà nhịn khát từ 1-2 trước cho uống Tùy thuộc vào tuổi gà, pha vắc xin nước sinh lý hay nước làm lạnh không chứa chất tẩy sát trùng cho gà uống với số lượng nhau: + Gà 25-45 ngày tuổi cho uống ml/1 liều/con + Gà 45 ngày tuổi cho uống 7-10 ml/1 liều/con + Gà > 45 ngày tuổi cho uống 12-15 ml/1 liều/con ٠ Lịch tiêm chủng: Để tạo miễn dịch đầy đủ, gà phải chủng vắc xin 2-3 lần + Lần 1: từ 5-10 ngày tuổi + Lần 2: từ 20-25 ngày tuổi ٠ Chú ý: • Vắc xin sau pha phải giữ nước đá, tránh ánh sáng mặt trời dùng vòng 2-3 • Khơng nên sử dụng vắc xin Gumboro đồng thời với loại vắc xin khác BẢO QUẢN: ƒ Một năm nhiệt độ từ 20-80C Không để vắc xin vào ngăn đông đá V KẾT LUẬN Ngày nay, với kỹ thuật sinh học phân tử đại, việc chẩn đoán, điều trị bệnh Gumboro nghiên cứu phát triển rộng rãi Nhiều loại vắc xin đời làm cho ngành chăm nuôi đất nước không ngừng phát triển Ở nước ta sử dụng chủ yếu vaccine sống vaccine chết sản xuất nước, chi phí thấp LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VI TÀI LIỆU THAM KHẢO Sách Công nghệ sinh học thú y NGUYỄN THANH HẢI Nhà xuất nông nghiệp 2.http://en.wikipedia.org/wiki/Infectious_Bursal_Disease http://www.gumboro.com/ 4.http://www.oie.int/eng/normes/MMANUAL/A_00102.htm http://navetco.com.vn/gav_02.html http://www.vcn.vnn.vn/PrintPreview.aspx?ID=4511 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... tạo vacxin nhũ dầu phòng chống bệnh Gumboro cho gà sinh sản Vacxin đặt tên Vacxin Gumboro nhũ dầu Việt Nam viết tắt VN-97 Vacxin có màu trắng đục sữa , không phân lớp, nhuyễn đồng Vacxin VN-97... ƒ Vắc xin an tồn, tạo miễn dịch tốt khơng gây ức chế đáp ứng miễn dịch loại vắc xin khác - CHỈ ĐỊNH: ƒ Dùng gây miễn dịch chủ động phòng bệnh Gumboro cho gà khoẻ mạnh - THÀNH PHẦN: ƒ Vi rút Gumboro. .. liều vắc xin chứa 103 TCID50 ƒ Chất ổn định: Sữa không kem - CÁCH SỬ DỤNG: ٠ Đường dùng vắc xin: Nhỏ mắt, miệng pha nước cho uống ٠ Phương pháp chủng vắc xin: ƒ Cho uống nhỏ mắt con: Pha vắc xin