PROTEIN tái tổ hợp và VIRURUS VIÊM não NHẬT bản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC **************** BÀI TIỂU LUẬN PROTEIN TÁI TỔ HỢP VÀ VIRURUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2006-2010 Sinh viên thực : PHAN MINH TIẾN Giáo viên hướng dẫn : NGUYỄN NGỌC HẢI MỤC LỤC LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CHƯƠNG TRANG Trang tựa Mục lục Danh sách chữ viết tắt I ĐẶT VẤN ĐỀ .4 II TỔNG QUAN II.1 Tìm hiểu bệnh viêm não II.1.1 Bệnh nguyên II.1.2 Dich tễ II.1.2.1.Sự phân bố địa cư II.1.2.2.Ổ virus II.1.2.3 Trung gian truyền bệnh II.1.2.4 Tuổi Phái tính II.1.2.25 Mùa II.1.3 Sinh lý bệnh II.1.4 Giải phẫu bệnh II.1.5 Lâm sàng II.1.6 Các thể lâm sàng II.1.7 Phân loại rối loạn thần kinh VNNB II.2 Tìm hiểu chung vắc-xin 11 Khái niệm vắc-xin 11 1.1.Đinh nghĩa vắc-xin 11 1.2 Lich sử hướng phát triển vắc-xin 12 2.Phân loại vắc-xin 14 Nguyên lý sử dung vắc-xin 15 Cơ chế hoạt đông vắc-xin 15 Đặc tính vắc-xin 19 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 5.1 An toàn 16 5.2 Hiệu lực 17 5.3 Tính kháng nguyên 17 5.4 Tính miễn dịch 17 II.3.Vật liệu phương pháp 17 III KẾT LUẬN 18 Danh sách chữ viết tắt: VNNBB : viêm não Nhật Bản B I.Đặt vấn đề I.1 GIỚI THIỆU: Thời gian gần đây, bệnh trẻ em làm nhiều người quan tâm tỉ lệ tử vong cao di chứng tàn phế mà bệnh để lại cho trẻ Đó bệnh viêm não nhật (VNNB) Gọi viêm não bệnh nhiễm trùng thần kinh cấp tính làm tổn thương nặng nề não Gọi Nhật Bản–B năm 1935, Nhật Bản, nhà khoa học lần tìm thấy nguyên nhân gây bệnh loại siêu vi thuộc LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com nhóm B dịng siêu vi có tên Arbovirut Siêu vi VNNB_B sống thiên nhiên lồi như: bơng lau, rẻ quạt, sẻ nhà, chích chịe, cị, sáo, quạ, cu gái, … muỗi chích hút máu chim nhiễm siêu vi chích truyền sang người, chủ yếu trẻ em gia súc heo, bò, ngựa, dê, đặc biệt heo Tuy nhiên loải muỗi truyền đươc bệnh mà chủ yếu la muỗi co tên khoa học Culex Tritaeniorhycus VNNB lưu hành rộng rãi Châu Á bao gồm Trung Quốc, Đài Loan, Hàn Quốc, Philippin, vùng Viễn Đông( Liên Xô cũ), tất nước Đông Nam Á Ấn Độ Ở Ấn Độ bệnh xảy hàng năm với số lượng lớn, có năm lên đến 10000 trường hợp Ở miền Bắc Thái Lan hàng năm tỉ lệ mắc từ 10-20/100000 dân Hầu hết nước có nhiệt độ cao vào mùa hè mưa nhiều thuận lợi cho việc trồng lúa nước, đồng thời nghề chăn ni lợn phổ biến Chính tảng nông nghiệp xã hội tạo điều kiện thuận lợi cho việc lưu hành virut, VNNB tự nhiên từ dẫn tới vụ dịch VNNB người Ở Việt Nam, bệnh lưu hành rộng rãi đặc biệt nghiêm trọng đồng châu thổ đồng Sông Hồng trung du thuôc miền bắc Việt Nam với tỉ lệ mắc hàng năm từ 6-10/100000 dân Các tỉnh miền Nam VNNB xuất chưa thấy xảy dịch tỉnh miền Bắc, nhiên xét nghiệm huyết học Tp.Hồ Chí Minh thấy tỉ lệ dương tíng với VNNB la 62%, Mỹ Tho 30,3%( Đỗ Quang Hà, 1978) Những năm gần phương pháp tiêm phòng vắc xin, bệnh VNNB dược khống chế Vì phạm vi cho phép em làm tiểu luận prôtêin tái tổ hợp virus viêm não nhật để từ tạo vắc xin để phịng ngừa VNNB I.2 MỤC ĐÍCH Tạo loại vắc xin để chủng ngừa VNNB để ngăn ngừa nạn dịch xảy nước nhằm hạn chế số lượt tử vong bệnh II.TỔNG QUAN II.1 TÌM HIỂU VỀ VIÊM NÃO NHẬT BẢN II.1.1 BỆNH NGUYÊN Virus viêm não nhật B loại Arbovirus, kích thước nhỏ, đường kính 15-40nm, có cấu trúc kháng ngun gần giống virut viêm não Saint Louis Cùng nhóm có virus viêm não Úc châu (Murray valley) Virus chịu đựng nhiệt độ cao: 600C virus chết sau 10 phút, 700C chết sau phút Trái lại nhiệt độ lạnh giữ nguyên lực (-700C) Cồn, ete, axeton làm hoạt lực sau ngày Lysol tiêu diệt virus sau phút, phenol 1% sau 10 phút, formol 0,5% sau 48 Virus ni cấy trứng gà lộn, tổ chức tế bào phôi gà, thận khỉ, tế bào Hela LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Virus viêm não Nhật Bản B (Japanese B Encephalitis virus) II.1.2DỊCH TỄ HỌC II.1.2.1 SỰ PHÂN BỐ ĐỊA CƯ Trong năm gần VNNBB có chiều giảm Trung Quốc, Nhật Bản, Cộng Hòa Triều Tiên, lại gia tăng phát triển nhiều vùng Bangladesh, Burma, Indian, Nepal, Thái Lan Việt Nam Lý thay đổi vùng chưa biết rõ, nêu lên số yếu tố thuận lợi : a) Trong nông nghiệp, trồng lúa sử dụng nhiều thuốc diệt sâu chuột phát triển trại chăn nuôi heo b) Sự thay đổi điều kiện kinh tế xã hội gồm có thay đổi vị trí trồng lúa vùng đất khơ đẩy mạnh chăn nuôi heo làm nguồn thực phẩm lớn c) Khí hậu, tác dụng nhiệt độ lượng mưa d) Tác dụng tiêm chủng người lợn e) Có thể có vai trị phụ thêm vật chủ truyền bệnh heo lợn Về dịch tễ có hai vùng VNNBB liên quan đến khí hậu, mùa Ở nước nhiệt đới bệnh xuất rải rác quanh năm khơng có mùa rõ rệt Ở phía Bắc vùng nhiệt đới, bệnh phát triển thành dịch vào cuối mùa mưa mật độ muỗi đạt mức tối đa Dịch thường ngắn hạn, từ hai đến ba tháng Riêng phía tây Bengala Tamie Nadu (India), VNNBB kéo dài 4-6 tháng Ở Thái Lan hai miền Bắc Nam có nhiều vectơ truyền bệnh, vật ký chủ nhiều virus VNNBB có nhiều miền Bắc gặp miền Nam II.1.2.2 Ổ VIRUS Trong thiên nhiên súc vật bị nhiễm trùng muỗi đốt Nhiễm trùng tiềm tàng phát triển mạnh, rộng rãi loại có vú chim Ở Nhật Bản, Trung Quốc, thường chim hậu điểu, gặp gà, lồi bị sát (rắn, rùa, thằn lằn) Ở Việt Nam có hai nhóm chim có khả truyền bệnh : a) Nhóm chim sống làng mạc, lũy tre, an : chim lau, chim rẽ quạt, chim sẻ nhà, liêu điêu, chim khách, chim chích chịe b) Nhóm chim kiếm ăn ngồi đồng, vào làng : cị, sáo, quạ, cu gáy, chim chèo bẻo LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Ngồi cịn có số loại súc vật khác bị nhiễm trùng tiềm tàng ( khơng phải loại có vú) Đư ờng lây truyền bệnh viêm não Nhật Bản Ảnh: suckhoedoisong.com II.1.2.3 TRUNG GIAN TRUYỀN BỆNH Chủ yếu muỗi Culex tritaeniorhyncus Ở Malaysia va Singapore, culex gelidus có vai trị quan trọng Ngoài phải kể đến ba loại culex khác : vishnui, pseudovishnui Ấn Độ annulirostris Guam Muỗi truyền virus từ đời mẹ sang đời Muỗi culex tritaeniohyncus sinh sản phát triển nhiều đồng ruộng, đốt chim, gia súc người Chim dễ bị nhiễm trùng máu với nồng độ cao dài ngày không mắc bệnh Lợn tham gia vào dây truyền bệnh thường dướng dạng nhiễm trùng thể ẩn Trong máu lợn, nồng độ virus cao nên có khả truyền virus cho muỗi Ngựa người bị nhiễm virus lây truyền Muỗi ưa hoạt động quanh nhà Hút máu đêm từ 18 đến 20-22 giờ, giảm dần ngừng hoạt động lúc sáng II.1.2.4 TUỔI VÀ PHÁI TÍNH Trẻ em hay mắc bệnh VNNBB tỉ lệ mắc bệnh theo lứa tuổi thay đổi từ năm sang năm khác tùy theo nước Trong phần lớn vụ dịch nam mắc bệnh nhiều nữ Ở Việt Nam, trẻ mắc bệnh thường lứa tuổi từ đến tuổi, nông thôn nhiều thành thị, đồng nhiều rừng núi Thể ẩn nhiều gấp 500-1000 lần thể có triệu chúng lâm sàng Tuổi cao kháng thể cao Người lớn mắc bệnh VNNBB miễn dịch Nghiên cứu huyết binh lính Úc đóng quân miền Nam Việt Nam cho thấy tỉ lệ nhiễm trùng VNNBB ẩn 210 :1 Ở Nhật Bản, 10% trẻ em bị nhiễm trùng ẩn hàng năm 11-13 năm lại xuất vụ dịch lớn đặc biệt lứa tuổi chưa miễn dịch LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com II.1.2.5 MÙA Bệnh thường xảy vào mùa hè nóng Ở Việt Nam vào tháng 6-7-8 Bệnh tản phát nhiều thành dịch Ở Nhật Bản bệnh phát triển vào mùa hè, từ tháng đến tháng 10, nhiều hai tháng va Từ tháng 10 trở mật độ muỗi giảm nhiều dịch kết thúc I.1.3 SINH LÝ BỆNH : Viêm não Nhật B tiến triển làm giai đoạn : 1)Nhiễm virus huyết : giai đoạn có dấu hiệu tồn thân, khơng có triệu chứng đặc hiệu nên tất khó chuẩn đốn Phần lớn bệnh nhân dừng lại giai đoạn này, khơng có giai đoạn xâm nhiễm cố định hệ thần kinh Đó thể khơng điển hình, quan trọng dịch tễ học làm bệnh lan tràn 2) Xâm nhiễm hệ thần kinh gây nhiều biểu tinh thần kinh phong phú Ở giai đoạn cần phân biệt với hội chứng não viêm nguyên nhân khác II.1.4 GIẢI PHẪU BỆNH : Đại thể : não phù xung huyết tượng huyết động não Não to nặng, tĩnh mạch rõ Có nhiều chấm xuất huyết Hình ảnh cịn thấy nhiều nội tạng khác Vi thể : bốn loại tổn thương đặc hiệu Vỏ ngoại quản điển hình : tế bào đa nhân, đơn nhân, lymphơ có đại thực bào, sau quản với huyết tương qy quanh huyết quản, chủ yếu quanh tĩnh mạch chất xám Hiếm gặp quanh động mạch Bạch cầu đa nhân chiếm ưu giai đoạn cấp, sau biến nhanh chóng Đa số trường hợp có xâm nhiễm màng não lymphô bào Ổ hoại tử khan tế bào : tế bào thần kinh thối hóa tiêu tan, để lại khoảng trống rỗng tế bào, có ranh giới rõ rệt, hình trịn hoăc bầu dục, có khuynh hướng kết hợp Thường gặp chất xám, nhiều chất vỏ não lớp sâu Các ổ hoại tử phục hồi Quá sản tế bào thần kinh đệm thành ổ dày đặc nhân tế bào giống nhỏ Tiêu mỡ thần kinh (trong chất trắng) ; Lớp mỡ thần kinh bị thóai hóa ngắt đoạn thành cục mỡ rải rác đám tế bào thần kinh hay biến hoàn toàn để lại hốc nhỏ Các loại tổn thương chiếm ưu chất xám co thể tìm thấy rải rác chất trắng quanh sàn não thất tổn thương vỏ não Tổn thương phân phối rộng rãi đại não, não trung gian, tiểu não, thân não tủy sống Tổn thương nặng nằm sừng Ammon, hạt nhân bên đồi thị liềm đen II.1.5 LÂM SÀNG A-NUNG BỆNH Trung bình tuần, tối thiểu ngày, tối đa 15 ngày B-KHỞI PHÁT : từ đến ngày, ngắn 12 Hội chứng nhiễm trùng : - Bệnh khởi phát giống cảm cúm với sốt 38-390C, ho, khó thở, nghe phổi đơi có ran nổ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com - Có thể gặp tiêu chảy, nôn ( khoảng 2/3 trường hợp) Hội chứng tinh thần kinh : - Rối loạn tinh thần kinh chủ yếu : ngủ quấy khóc nhiều, ngủ gà ngủ gật, ngủ miết, thay đổi tính nết (trong lúc sốt khơng cao) - Rối loạn thực vật : đỏ bừng mặt hoăc tái nhợt, vã nhiều mồ hôi - Hội chứng màng não : nhức đầu, nôn Dịch tủy não biến đổi kiểu viêm màng não nước tăng lymphơ bào Chuẩn đốn giai đoạn dựa vào cấy máu phân lập virus phản ứng huyết (cố định bổ thể) Về huyết học có tượng tăng bạch cầu 20000/mm3, đa nhân trung tính chiếm ưu C-TỒN PHÁT : 2-4 ngày Hội chứng tinh thần kinh : - Các triệu chứng thần kinh xuất đột ngột co giật liên tục kiểu động kinh, tái diễn nhiều lần ngày, mở đầu giật nửa người sau lan toàn thân Hiện tượng co cứng tăng trương lực ngày tăng, sau nhanh chóng vào tìng trạng lơ mơ li bì, mê sảng, ngủ miết hôn mê ngày sâu Các dấu hiệu tháp, ngoại tháp xuất hiện, bệnh nhân bị bại liệt, run đầu chi - Thần kinh thực vật bị rối loạn, ảnh hưởng đến nhiều chức sinh tồn : da lúc đỏ lúc tái, tăng tiết đờm rãi, vã mồ hơi, rối loạn chuyển hóa nước điện giải (Na giảm, K giảm, Ca bình thường, dự trữ kiềm thấp) Hội chứng màng não có khơng có biến đổi dịch não tủy kiểu viêm màng não nước trong, phân ly tế bào albumin không rõ rệt Sang tuần 2, albumin tế bào giảm, tế bào giảm nhanh Hội chứng nhiễm trùng : - Biểu nhiễm trùng kịch liệt tuần lễ đầu có co giật nhiệt độ tăng đến 39-400C hay rối loạn trung tâm điều hòa nhiệt, tăng sinh nhiệt sau co giật liên tiếp - Sốt liên tục cao tuần đầu kèm theo dấu hiệu tiêu hóa (nơn, tiêu chảy), hơ hấp (tăng tiết, ứ đọng đờm rãi, ran nổ phổi) Gan lách không sờ thấy - Đặc điểm lâm sàng thời kỳ toàn phát biểu tinh thần kinh thay đổi hàng ngày, hàng giờ, biểu đa dạng, phong phú khơng có hệ thống (hiện tượngviêm lan tỏa) tăng giảm lúc hồi D-DIỄN TIẾN Tối cấp : giai đoạn nhiễm trùng ngắn 1-2 Sốt cao vọt bất chợt, co giật, hôn mê chết suy hô hấp hoăc trụy tim mạch Cấp : bệnh biến diễn theo ba hướng : - Tử vong : sốt cao liên tục 39-400C, có giảm khơng nhiệt độ trở bình thường Các chức sinh tồn bị rối loạn ngày trầm trọng Chết tuần lễ đầu - Khỏi : bệnh nhân tỉnh lại hồi phục gần hoàn toàn lúc viện Phải theo dõi nhiều năm kết luận hậu bệnh - Có di chứng : sau thời gian điều trị tích cực, sốt giảm dần hình thành bậc thang từ tuần thứ trở Bệnh nhân khỏi mê cịn ngơ ngác, co giật, ngôn ngữ, biến đổi tác phong, ngủ Về thần kinh thừơng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com gặp liệt bại, cấm khẩu, động tác bất thường tăng động, gồng vặn người cơn, co cứng não Về sau chết bội nhiễm II.1.6 CÁC THỂ LÂM SÀNG A- THỂ ĐIỂN HÌNH Thể não- màng não( nói trên) Thể viêm màng não đơn : có biểu viêm màng não, không rối loạn ý thức, không để lại di chứng Dịch não tủy trong, albumin 1g, tế bào khoảng 200-300 chủ yếu đa nhân tuần đầu, đến tuần thứ chuyển sang lymphô Tuổi hay mắc : 10-12 tuổi, trẻ nhỏ tuổi người lớn mắc thể Tần suất thấp : 6,9% (Abe va Ishil 1962) Thể giống thương hàn : sốt kéo dài, bán hôn mê, li bì, ngủ miết Rất triệu chứng thần kinh khác Thể thô sơ : sốt nhức đầu, mệt mỏi giống cảm cúm Đôi nôn, tiêu chảy co cứng gáy, không phản ứng màng não Khỏi nhanh Khi lớn lên, trẻ trở nên đần độn, nghịch ngợm, khơng sống hịa tập thể B- THỂ KHƠNG ĐIỂN HÌNH Thể liệt hành tủy : sốt nhức đầu, rối loạn phát âm, khàn tiếng, khó thở, khó nuốt, liệt hầu ; tê liệt chi Thể tủy sống : sốt cao, rối loan ý thức, ngủ gà, nói khó, khó thở Run giật nhãn cầu, tê yếu chi Dịch não tủy trong, tế bào tăng, albumin tăng Thể tiếp sau chấn thương (tai nạn giao thông, sang chấn thương ) Thể rối loạn thần kinh kéo dài : giảm tăng động, biến đổi nhân cách, dễ khóc dễ cười, chức trí tuệ suy giảm II.1.7 PHÂN LOẠI CÁC RỐI LOẠN THẦN KINH TINH THẦN TRONG VNNBB I.1.7.1 Dị thường vận động tinh thần ; nhóm Giảm động : không rối loạn ý thức thân (rối loạn nhân cách), cười ép buộc, chứng hay nói Tăng động : run rẩy, múa giật, uốn éo, lắc lư, náo động đầu chi Có thể kết hợp với hầu hết rối loạn khác coi rối loạn tùy tiện Trạng thái hỗn hợp, vừa tăng động, giảm động kết hợp với hầu hết rối loạn khác coi triệu chứng tùy tiện Nhóm Parkinson : xung động lầm lạc, thiếu ức chế, giảm động ý chí Có thể pha trộn với rối loạn : tác phong nhi tính hóa, rối loạn ý thức thân, ảo tưởng Trang thái hỗn hợp nhóm tăng động Parkinson Nhóm khẩn trương : hai nhóm tăng động bất động giảm động kết hợp với trạng thái phủ định, giữ nguyên thể chúng lắp lắp lai điệu coi tùy tiện Trong dị thường vận động tinh thần thường có triệu chúng khác kèm : • Rối loạn thực vật : tăng tiết nước bọt, tăng tiết mồ hơi, mặt bóng mỡ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com • • • • • uống nhiều, đái nhiều, rậm lông Mất ngủ, ngủ gà, ngủ gật, rối loạn giấc ngủ Liệt, tăng phản xạ gân xương, Babinski (+) Run giật bánh chè, run giật bàn chân, giật mí Rối loạn chức trí tuệ nhiều mức độ, thường kết hợp với rối loạn trí nhớ khoảng 20-40 ngày • Mất trí nhớ (hội chứng Korsakov) thường xảy sau giai đoạn cấp, kéo dài từ 43 đến 312 ngày (trung bình 127 ngày) • Mất ngơn ngữ : mù đọc, viết, ký ức ngôn ngữ II.1.7.2 Trạng thái độ từ bán cấp sang mãn tính GOTO (1953-1962) quan sát tiến triển hai hội chứng chủ yếu tăng động, giảm động tiên lượng chức bệng viêm não Nhật B Nhóm tăng động thun giảm trung bình 30 ngày sau bệnh khởi phát, tiên lượng làng tính Nhóm giảm động với rối loạn kéo dài 16-525 ngày (trung bình 60 ngày) có tiên lượng xấu, để lại di chứng thần kinh tinh thần vĩnh viễn Từ giai đoạn cấp sang giai đoạn mãn có chuyển dần từ rối loạn thần kinh sang rối loạn tinh thần Rối loạn nặng nề chức trí tuệ tồn sau rối loạn vận động xúc cảm giảm bớt Tác phong xung động hay nhi tính hóa thiếu ức chế tồn trung bình 47 ngày II.1.7.3 Di chứng thần kinh-tinh thần giai đoạn mãn tính Di chứng trở thành vĩnh viễn sau năm GOTO (1957) theo dõi năm 40 bệnh nhân có rối loạn trầm trọng giai đoạn cấp ghi nhận tử vong, 22 di chứng nặng nề, có 2,5% bệnh nhân sống sót mà khơng di chứng Trong nhóm 143 bệnh nhân khơng chọn lọc, có 21,6% khơng di chứng Ở trẻ em, khuynh hướng để lại di chứng rõ rệt GOTO phân loại bệnh nhân sống sót 10 năm thành nhóm : Di chứng thần kinh-tinh thần : di chứng nhóm có chọn lọc có rối loạn nghiêm trọng giai đoạn cấp Di chứng thần kinh, thường nặng nề trẻ 10 tuổi, kéo dài có đến 10 năm Tăng trương lực cơ, liệt nhẹ Vẻ mặt sửng sờ Phản xạ gân xương tăng giảm bất thường Rối loạn vận nhỡn Co cứng, run rẩy, động tác không chủ động, giật Nói khó Trạng thái Parkinson (11,6% trường hợp) khác với viêm não Economo chỗ biểu nhẹ với rối loạn vận nhỡn rối loạn thực vật cường độ thấp Những giật toàn thân, rối loạn ý thức, tiên hãn hữu sau tăng lên Di chứng vận động : • Trong nhóm tăng động, có di chuyển dần, từ dị thường vận động sang dị thường tinh thần (uốn, éo, lắc lư, lầm lẫn, lo lắng) • Trong nhóm giảm động bất động, giảm ý chí Các triệu chứng phát triển cuối năm thứ Sau có khuynh hướng ổn đnh dần Di chứng xúc cảm : dễ khóc dễ cười Di chứng trí tuệ : chức trí tuệ suy giảm, trí nhớ 10 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Di chứng nhân cách : rối loạn tác phong kiểu nhi tính hóa Thiếu kiềm chế, nói ln miệng, trơ tráo suồng sã Ở người lớn tác phong cứng nhắc hay thiếu tự nhiên chiếm ưu II.1.7.4 Tiên lượng xã hội Tiên lượng xã hội bệnh nhân sống sót nói chung xấu Khả thích ứng với đời sống gia đình xã hội có rối loạn nhiều người lớn khơng nghiêm trọng trẻ em Các di chứng tồn năm Sau năm di chứng trở thành vĩnh viễn Chưa có phương pháp chuẩn đoán sớm cách chắn So sánh với viêm não A hội chứng Parkinson xảy Di chứng xuất muộn năm thường phối hợp : • Rối loạn trí tuệ rối loạn thần kinh • Rối loạn nhân cách xuất muôn sở mang sẵn rối loạn thần kinh trí tuệ • Rối loạn thần kinh rối loạn nhân cách, ý chí, kiềm chế, náo động, ảo giác, phạm pháp nghiêm trọng Tỷ lệ di chứng nghịch với tỷ lệ tử vong Nơi có tử vong cao ( 33% hay nữa) di chứng xảy khoang3-14% Ngược lại nơi tử vong thấp 7,4% di chứng lên đến 32% II.2 TÌM HIỂU CHUNG VỀ VẮC-XIN Khái niệm vắc-xin 1.1 Định nghĩa vắc-xin: Vắc-xin chế phẩm có tính kháng ngun dùng để tạo miễn dịch đặc hiệu chủ động, nhằm tăng sức đề kháng thể (số) tác nhân gây bệnh cụ thể Các nghiên cứu mở hướng dùng vắc-xin để điều trị số bệnh (vắc-xin liệu pháp, hướng miễn dịch liệu pháp) Thuật ngữ vắc-xin xuất phát từ vaccinia, loại virus gây bệnh đậu bò đem chủng cho người lại giúp ngừa bệnh đậu mùa (tiếng Latinh vacca nghĩa "con bò cái") Việc dùng vắc-xin để phòng bệnh gọi chung chủng ngừa hay tiêm phòng tiêm chủng, vắc-xin cấy (chủng), tiêm mà cịn cho vào thể qua đường miệng 11 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Chuẩn bị vắc-xin cúm để chung ngừa 1.2 Lịch sử hướng phát triển văc-xin Edward Jenner công nhận người dùng vắc-xin để ngừa bệnh cho người từ người ta chưa biết chất tác nhân gây bệnh (năm 1796) Louis Pasteur với cơng trình nghiên cứu vi sinh học miễn dịch học mở đường cho kiến thức đại vắcxin Vào kỷ thứ trước Công nguyên, vua Mithridate VI ngày uống lượng nhỏ độc chất cho thể quen dần nhằm đương đầu với nguy bị ám sát Chuyện kể cách tỏ hiệu sau, Mithridate thất trận tự sát, liều thuốc độc ông ta uống vào chẳng có ép phê Ở Trung Quốc, vào khoảng kỷ thứ 10, thầy lang Đạo giáo bí mật dùng kỹ thuật phịng bệnh đậu mùa Đậu mùa chứng bệnh hiểm nghèo, không giết chết bệnh nhân để lại vết sẹo rỗ mặt Các thầy lang lấy vẩy sẹo người bị bệnh(chứa mầm bệnh), cho vào hộp kín giữ nhiệt độ định thời gian để giảm độc tính, sau nghiền nhỏ thổi vào mũi người khỏe chưa mắc bệnh đậu mùa để ngừa bệnh Một phương pháp tương tự dùng Thổ Nhĩ Kỳ vào kỷ 18 Bỏ qua huyền thoại lẻ loi không chắn trên, vắc-xin dầu tiên gắn với tên tuổi Edwrd Jenner, bác sĩ người Anh Năm 1976, Châu Âu có dịch đậu mùa, Jenner thử nghiệm thành công vắc-xin ngừa bệnh Kinh nghiêm dân gian cho thấy nông dân vắt sữa bị bị lây bệnh đậu bị, sau khỏi bệnh, họ trở nên miễn nhiễm bệnh đậu mùa Dựa vào đó, Jenner chiết lấy dịch từ vết đậu bị cánh tay bệnh nhân Sarah Nelmes cấy dịch vào cánh tay cậu bé tuổi James Phipps Phipps có triệu chứng cua bệnh đậu bò sau 48 ngày khỏi Jenner liền tiêm chất có chứa mầm bệnh đậu mùa cho Phipps Phipps không mắc bệnh Cách làm Jenner xét theo tiêu chuẩn y đức ngày không ổn, rõ ràng hàng động có tính khai phá : đứa trẻ chủng ngừa đề kháng bệnh 12 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Thời Jenner, virus chưa khám phá, vi khuẩn tìm vai trị gây bệnh chúng chưa biết Thời điểm 1798, Jener cơng bố kết thí nghiệm mình, người ta hình dung có "mầm bệnh" gây nên truyền nhiễm Sau thí nghiệm thành công Jenner, phương pháp chủng đậu triển khai rơng rãi Tinh đến năm 1801, Anh cótrên 100000 người chủng Tám mươi năm sau, Louis Pasteur nghiên cứu bệnh tả dịch tả tàn sát đàn gà Ơng cấy vi khuẩn tả phịng thí nghiệm đem tiêm cho gà: bị tiêm chết Mùa hè năm 1878, ông chuẩn bị bình dung dịch ni cấy vi khuẩn dạng huyền phù, để đó, nghỉ mát Khi trở về, ơng lại trích lấy huyền phù đem tiêm cho gà Lần bầy gà bị bệnh nhẹ đàn khỏe lại Pasteur hiểu ông vắng, đám vi khuẩn huyền phù bị biến tính, suy yếu Ơng lấy vi khuẩn tả (bình thường) đem tiêm cho gà vừa trải qua thí nghiệm chưa bị chích vi khuẩn Kết chích vi khuẩn (biến tính) có khả đề kháng lại mầm bệnh, bọn cịn lại chết hết Qua đó, Pasteur xác nhận giả thuyết Jenner mở đường cho khoa miễn dịch học đại Từ đó, chủng ngừa đẩy lùi nhiều bệnh: triệt tiêu bệnh đậu mùa tồn cầu, tốn gần hồn tồn bệnh bại liệt, giảm đáng kể bệnh sởi, bạch hầu, ho gà, bệnh ban đào, thủy đậu, quai bị, thương hàn uốn ván v.v Ngun tắc khơng có thay đổi: gây miễn dịch vi khuẩn virus giảm độc lực, với proteinđặc hiệu có tính kháng nguyên để gây đáp ứng miễn dịch, tạo trí nhớ miễn dịch đặc hiệu, tạo hiệu đề kháng cho thể sau tác nhân gây bệnh xâm nhập với đầy đủ độc tính Người ta cịn hướng tới triển vọng dùng vắc-xin để điều trị số bệnh nan y ung thư, AIDS v.v Tuy nhiên, nhiều bệnh cịn thách thức người, chưa có vắcxin đủ hiệu để ngăn ngừa Trong phải kể nhiều bệnh ký sinh trùng (thí dụ sốt rét, giun, sán), vi khuẩn (lao), virus (cúm, sốt xuất huyết, AIDS v.v.) Một số lý tác nhân gây bệnh biến đổi thường xuyên khiến cho miễn dịch khơng cịn hữu hiệu chí công vào hệ miễn dịch trường hợp HIV v.v (Đã có lúc bệnh lao đẩy lùi nhiều biện pháp phối hợp (thuốc, vắc-xin biện pháp phòng ngừa khác), xuất AIDS làm cho dịch lao có dịp bùng phát, nước phát triển.) 13 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Lần lịch sử, người toán bệnh hiểm nghèo Ảnh chụp năm 1977, Ali Maow Maalin, người somali, xem bệh nhân cuối bệng đậu mùa 2.Phân loại vắc xin: -Vắc-xin hệ thứ nhất: • Vắc-xin bất hoạt (văc-xin vi khuẩn chết) vi sinh vật gây bệnh bị giết hóa chất nhiệt Ví du vắc-xin cúm, tả, dịch hạch… • Vắc-xin vi khuẩn, virus sống, giảm độc lực: vắc-xin chứa toàn tế bào vi khuẩn virus nuôi cấy điều kiện đặc biệt nhằm làm giảm hoạt lực, giảm đăc tính độc hại chúng • Vắc-xin có nguồn gốc từ độc tố anatoxin: vắc-xin chứa toàn tế bào vi sinh vật, số thành phần tiết chúng có khả kích thích miễn dịch biết độc tố (toxoid) Vắc-xin loại chứa độc tố làm bất hoạt 9gọi giả độc tố hay anatoxin) Các độc tố chế tạo thành sau ủ với formalin độc tính Ví dụ vắc xin giải độc tố uốn ván hay bạch hầu - Vắc-xin hệ thứ 2: Vắc-xin hệ thứ hệ thứ ba văc-xin tái tổ hợp thay hồn tồn vắc-xin cổ điển cịn gọi subunit vắcxin Đó loại vắc-xin sử dụng antigen vi sinh vật (subunit) thích hợp để kích thích tạo đáp ứng miễn dịch mạnh Với công nghệ gen đại, antigen tổng hợp cách cắt đoạn gen tổng hợp nên protein đặc trưng cho vi sinh vật gây bệnh, ghép gen vào gen vi 14 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com khuẩn, nấm men khác hay tế bào nuôi cấy để tạo protein đặc hiệu cho mầm bệnh, dùng protein đề tiêm chủng tạo miễn dịch đặc hiệu - Văc-xin hệ thứ 3: Là vắc-xin tái tổ hợp antigen đặc hiệu tổng hợp từ ADN vi sinh vật phối hợp với tá dược làm gia tăng tính miễn dịch - Dạng kháng- kháng thể vắc-xin (Anti-idiotypic vaccines): Một hướng điều chế dùng kháng –kháng thể làm vắc-xin Kháng – kháng thể đóng vai trị nhái lại cấu trúc kháng thể antigen từ vi sinh vật tạo thành chúng an toàn - Huyêt miễn dịch: Sử dụng huyết đưa vào thể kháng thể có nguồn gốc từ người động vật, giúp cho thể có kháng thể đặc hiệu chống lại tác nhân gây bệnh Nói cách khác: sử dụng huyết tạo miễn dịch thụ động nhân tạo Nguyên lý sử dung vắc-xin: Sử dụng vacxin đưa vào thể kháng nguyên có nguồn gốc từ vi sinh vật gây bệnh vi sinh vật có cấu trúc kháng nguyên giống vi sinh vật gây bệnh, bào chế đảm bảo độ an toàn cần thiết, làm cho thể tự tạo tình trạng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh Nói cách khác: sử dụng vacxin tạo miễn dịch chủ động nhân tạo Tình trạng miễn dịch mà thể có sau sử dụng vacxin kết đáp ứng miễn dịch thành phần kháng ngun có vacxin Cơ thể ln đáp ứng miễn dịch dịch thể (miễn dịch qua trung gian kháng thể) miễn dịch tế bào (miễn dịch qua trung gian tế bào), tuỳ loại vacxin, hiệu lực bảo vệ miễn dịch dịch thể, miễn dịch tế bào phối hợp hai loại Ngoài miễn dịch đặc hiệu, vacxin cịn có khả tăng cường miễn dịch khơng đặc hiệu làm tăng trình thực bào nhờ kháng thể đóng vai trị yếu tố opsonin đặc hiệu, nhờ lymphokin hoạt hoá đại thực bào Cơ chế hoạt động vắc-xin Hệ miễn dịch nhận diện vắc-xin vật lạ nên hủy diệt chúng "ghi nhớ" chúng Về sau, tác nhân gây bệnh thực thụ xâm nhập thể, hệ miễn dịch tư sẵn sàng để công tác nhân gây bệnh nhanh chóng hữu hiệu (bằng cách huy động nhiều thành phần hệ miễn dịch, đặc biệt đánh thức tế bào lympho nhớ) Đây ưu điểm đáp ứng miễn dịch đặc hiệu Đặc tính vacxin 5.1 An toàn 15 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Một vacxin lý tưởng sử dụng không gây bệnh, không gây độc không gây phản ứng Sau sản xuất vacxin phải quan kiểm định nhà nước kiểm tra chặt chẽ mặt vô trùng, khiết không độc - Vô trùng: Vacxin không nhiễm vi sinh vật khác, vi sinh vật gây.bệnh - Thuần khiết: Ngồi kháng ngun đưa vào để kích thích thể đáp ứng miễn dịch chống vi sinh vật gây bệnh, khơng lẫn thành phần kháng ngun khác gây phản ứng phụ bất lợi - Không độc: Liều sử dụng phải thấp nhiều so với liều gây độc Tuy nhiên, khơng có vacxin đạt độ an toàn tuyệt đối Về nguyên tắc, vacxin phải đảm bảo đủ độ an toàn Song thực tế đạt mức độ an tồn tuyệt đối Tất vacxin gây phản ứng phụ số người Phản ứng chỗ: Những phản ứng nhẹ thường gặp sau tiêm chủng nơi tiêm đau, mẩn đỏ, sưng cục nhỏ Những phản ứng nhanh chóng sau vài ngày, khơng cần phải can thiệp Nếu tiêm chủng khơng đảm bảo vơ trùng, nơi tiêm chủng bị viêm nhiễm, làm mủ Phản ứng toàn thân: Trong phản ứng toàn thân, sốt hay gặp cả, khoảng từ 10 đến 20 % Sốt thường hết nhanh sau vài ngày Co giật gặp với tỷ lệ thấp, khoảng phần vạn, hầu hết khỏi khơng để lại di chứng Một số vacxin gây phản ứng nguy hiểm hơn, có sốc phản vệ, nhiên gặp Khi bàn phản ứng vacxin, cần phải nhấn mạnh mức độ nguy hiểm vacxin nhỏ nhiều so với mức độ nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng gây Thí dụ, tỷ lệ biến chứng nguy hiểm bệnh ho gà gấp hàng trăm đến hàng nghìn lần phản ứng nguy hiểm vacxin bạch hầu - ho gà - uốn ván gây Khi cân nhắc để định xem vacxin có đưa vào sử dụng hay không, cần phải so sánh mức độ phản ứng vacxin tính nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng 5.2 Hiệu lực: Vacxin có hiệu lực lớn vacxin gây miễn dịch mức độ cao tồn thời gian dài Hiệu lực gây miễn dịch vacxin trước hết đánh giá động vật thí nghiệm, sau thực địa Trên động vật thí nghiệm: Cách thứ nhất, đánh giá mức độ đáp ứng miễn dịch thông qua việc xác định hiệu giá kháng thể xác định mức độ dương tính phản ứng da 16 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Cách đánh giá chưa cho biết hiệu lực bảo vệ, cho biết mức độ đáp ứng miễn dịch thể động vật loại vacxin thử nghiệm Cách thứ hai, xác định tỷ lệ động vật tiêm chủng sống sót sau thử thách vi sinh vật gây bệnh Trên thực địa: Dù quan kiểm định nhà nước kiểm tra đánh giá động vật, trước đưa tiêm chủng rộng rãi, vacxin phải thử nghiệm thực địa (field test): Vacxin tiêm chủng cho cộng đồng, theo dõi thống kê tất phản ứng phụ đánh giá khả bảo vệ mùa dịch tới Ngoài tiêu chuẩn trên, để chọn vacxin tiêm chủng, người ta quan tâm đến giá thành tính thuận lợi việc tiến hành tiêm chủng 5.3 Tính kháng nguyên: Người ta gọi khả kích thích thể tạo thành kháng thể tính kháng ngun Tính kháng ngun mạnh hay yếu Kháng nguyên mạnh kháng nguyên đưa vào thể lần sinh nhiều kháng thể, kháng nguyên yếu chất phải đưa vào nhiều phải kèm theo tá dược sinh kháng thể 5.4 Tính miễn dịch: Vacxin gây miễn dịch vi khuẩn virus giảm độc lực, với protein đặc hiệu có tính kháng nguyên để gây đáp ứng miễn dịch, tạo trí nhớ miễn dịch đặc hiệu, tạo hiệu đề kháng cho thể sau tác nhân gây bệnh xâm nhập với đầy đủ độc tính II.3 VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP: Bộ gien của JEV môt sợi đơn phân tử RNA khoảng 11kb mã hóa protein bao gồm protein cấ trúc, protein capsid, protein màng, NS1, NS2B, NS3, … Phương pháp tiến hành sau: • Li trích DNA dịng JaOarS982 • Mồi oligonucletid tổng hợp tiêu biểu cho đầu 3’ kết thúc đầu 5’ gien dòng JaOarS982 JEV ( nguồn gốc la JEC) Trình tự gốc JEV mơ tả Simiyoshi • Sợi tổng hợp thực cách sử dụng đầu 3’- mối kết thúc sử dung enzyme phiên mã ngược RNA • Sợi kép cDNA tổng hợp cách sử dụng đầu 5’-mồi • Sau phân tử cDNA đươc cắt bở enzyme BamHI va Sali • Các mảnh nhỏ đươc chèn vào pBR322 • Một thư viện cDNA đươc xây dựng cách chuyển vào tế bào vi khuẩn E coli nhân lên 17 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com • Sau nhân lên người ta li trich để lấy mảnh DNA cần thiết • Sau người ta lấy mảnh nhỏ đầu 5’ đoạn từ pM433 gắn với mảnh đầu 3’ từ pH756, pH313, pH173, pH756X ( virus có tính độc nhỏ so với JEV gốc nên đươc nhân lên để dùng làm vaccine) • Sau chúng ni cấy mơi trường dinh dưỡng thích hợp ( tế bào thận chuột) để thu sinh khối Sỡ dĩ virus có độc tính giảm axit amin vị trí 138 lysin dược mã hóa AAA JEV gốc axit vị trí 138 la axit glutamic mã hóa GAA III KẾT LUẬN VNNBB bệnh nhiễm trùng thần kinh đăc biệt nghiêm trọng thể gây dịch vào mùa hè bệnh gây tỉ lệ tử vong cao trẽ em măc bệnh Đặc biệt cịn để lại di chứng nặng nề cho nhừng bênh nhân Vì mà giới giới tất ý tới việc tiêu diệt bệnh Ngày với trang thiết bị kĩ thuật đại người chế tạo đươc nhiều loại vắc-xin để chủng ngừa bệnh Và phương pháp protein tái tổ hợp phương pháp để tạo vắc-xin phòng VNNBB Đây loại vắc-xin đảm bảo tính an tồn sản xuất, tác dụng phụ khả miễn dịch cao Vì sản xuất vắc-xin theo hướng đươc quan tâm tới ngày nhiều Vì điều kiện khơng có nên o em giới thiệu cách tổng quát cách tổng hợp không nêu cụ thể Tài liệu tham khảo Bệnh truyền nhiễm : Bộ môn truyền nhiễm hội y dược TP Hồ Chí Minh Giáo án mơn học cơng nghệ dược phẩm cuả GVC TS Trần Minh Hạnh trường Đai hoc Đà nẵng www.patentstorm.us www.biomedcentral.com 18 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... VIÊM NÃO NHẬT BẢN II.1.1 BỆNH NGUYÊN Virus viêm não nhật B loại Arbovirus, kích thước nhỏ, đường kính 15-40nm, có cấu trúc kháng ngun gần giống virut viêm não Saint Louis Cùng nhóm có virus viêm. .. loại tổn thương chiếm ưu chất xám co thể tìm thấy rải rác chất trắng quanh sàn não thất tổn thương vỏ não Tổn thương phân phối rộng rãi đại não, não trung gian, tiểu não, thân não tủy sống Tổn... lại cho trẻ Đó bệnh viêm não nhật (VNNB) Gọi viêm não bệnh nhiễm trùng thần kinh cấp tính làm tổn thương nặng nề não Gọi Nhật Bản? ??B năm 1935, Nhật Bản, nhà khoa học lần tìm thấy nguyên nhân gây