Nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem silver sulfa 1

Trần văn quang nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả kháng khuẩn in vitro chế phÈm kem Silver sulfa 1% Ngêi híng dÉn : TS Ngun ThÞ Léc LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Đặt vấn đề Bỏng bệnh ngoại khoa quan trọng Để điều trị bỏng chế phẩm sulfadiazin bạc có nhiều u điểm đà đợc chứng minh lâm sàng Viêc cung ứng thuốc có khó khăn Các mục tiêu cụ thể khóa luận : Nghiên cứu kỹ thuật bào chế kem Silver sulfa 1% Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất chế phẩm Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro cã so s¸nh víi víi chÕ phÈm Silvirin 1% (Ên §é) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phần I Tổng quan tài liệu Tỷ lệ mắc bệnh bỏng Thời bình : 1,8% - 10% so với chấn thơng ngoại khoa Trong chiến tranh : 3% - 10% tổng số thơng binh lên tới 70% - 85% Thuốc mỡ sát khuẩn điều trị vết bỏng chỗ * Kem maduxin;* Mỡ cao vàng;* Damcream * Chế phẩm chứa hoạt chất sulfadiazin bạc nh : Sivadene (Mỹ), Flammazin (Pháp), Silvirin (ấn Độ), Slivin (Pakistan)… LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com chÕ phÈm thc mì cã ho¹t chÊt sulfadiazin b¹c 3.1 Công thức hoá học Sulfadiazin bạc muối bạc cña N1- pyrimidin - yl - sulfanilamid (AgC10H9N4O2S) KLPT = 357,1 Độ hoà tan nớc < 1/10.000 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com O H2N S N(6) N(1) N(2) O(2) Ag Hình : Công thức hoá học sulfadiazin bạc LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.2 Cơ chế tác dụng * sulfadiazin có tác dụng kìm khuẩn: cạnh tranh ức chế với PABA * Ion bạc: Ion bạc chuyển cầu nối nitơ thuộc nhân purin đối diện Do đà làm khả sinh sản phân đôi vi khuẩn Phối hợp: nhân pyrimidin dễ dàng làm vận chuyển ion bạc qua màng vi khuẩn * Cơ chế tác dụng khác với hợp chất bạc khác, khác với sulfadiazin đơn độc LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3 Tác dụng kháng khuẩn Bảng 1: Khả kháng khuẩn invitro sulfadiazin bạc Nồng độ sulfadiazin bạc Họ loài 50 g/ml 100 g/ml 130/130 130/130 E cloacae 24/24 24/24 Klebsiella pneumoniae 53/54 54/54 Escherichia coli 63/63 63/63 100/101 101/101 S epidermidis 51/51 51/51 Enterococus (nhãm D) 52/53 52/53 Candia albicans 43/50 50/50 Ps Aeruginosa S aureus LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.4 Hấp thu thuốc * Các nghiên cứu vỊ hÊp thu víi Ag111 cho thÊy hÇu hÕt thc tích tụ lớp biểu bì (có tác dụng chỗ) Khoảng 10% lợng sulfadiazin bôi chỗ đợc hấp thu Để đo sulfadiazin chất chuyển hoá đặc hiệu cần dùng phơng pháp HPLC * Lợng bạc đợc hấp thu thể khoảng dới 1% Đo quang phổ hấp phụ nguyên tử 3.5 Những u điểm điều trị lâm sàng - Có phổ kháng khuẩn rộng - Có thể làm mềm mô bỏng đông cứng - Không gây đau bôi - Không gây rối loạn điện giải hay kiềm toan - Không làm bẩn y phơc hay v¶i tr¶i giêng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phần II Vật liệu phơng pháp nghiên cứu Vật liệu trang thiết bị 1.1 Vật liệu hoá chất - Bạc sulfadiazin đạt tiêu chuẩn USP 24 - Các tá dợc cần thiết đạt tiêu chuẩn DĐVN III - Các chất bảo quản, chất chống ôxy hoá đạt tiêu chuẩn DĐVN III - Các dung môi dùng cho SKLM, HPLC-pp - Màng nhân tạo cellophan - Các hoá chất khác cần thiết LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2 Dông cô, trang thiết bị - Cân phân tích độ xác 0,1mg Trung Quốc - Máy ly tâm Nhật Bản - Tủ điều nhiệt giữ đợc nhiệt độ 400C, Trung Quèc - B¶n máng Silicagel 60 F254 ,VKN cung cÊp - §Ìn hnh quang soi ë bíc sãng 254 nm - Thạch Muller - Hinton - Các chủng vi khuÈn: S aureus, P aeruginosa, E coli - Dông cụ nghiên cứu khả giải phóng dợc chất khỏi tá dợc thuốc mỡ - Máy sắc ký lỏng cao áp hiệu cao Shimadzu - Các dụng cụ cần thiết khác phòng thí nghiệm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CT Sulfadiazin b¹c 1,0g Sorbitan stearat 1,4g Polysorbat 80 0,6g Alol cetostearic 6,5g Triglycorides 11,0g Glycrol 0,4g ChÊt b¶o qu¶n 0,5g Níc tinh khiÕt vđ 100ml CT 3: Sulfadiazin bạc 1,0g Alcol cetostearic 8,0g Glycerin monostearat 0,4g Vaselin 6,0g Paraffin 0,5g Tween 60 0,6g Chất bảo quản 0,2g Nớc tinh khiết vđ 100ml CT 4: Sulfadiazin bạc Alcol stearylic Sáp ong Tween 80 Span 80 Sorbitol Chất bảo quản Nớc tinh khiếtvđ CT 5: Sulfadiazin bạc Alcol cetylic Dầu paraffin Glycerol stearat Polysorbat 80 Glycol propylen Chất bảo quản Nớc tinh khiết vđ 1,0g 15,0g 8,0g 3,8g 1,2g 8,0g 0,2g 100ml 1,0g 3,0g 20,0g 2,9g 3,1g 7,0g 0,2g 100ml LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Lựa chọn chất chống oxy hoá Bảng 2: Hiệu lực bảo vệ chống ôxy hoá natri bisulfit Thêi ®iĨm t0 t1 t2 t3 0,05% - - + 0,10% - - - + 0,15% - - - - Hàm lượng Chọn chất chống ôxy hoá natri bisulfit , hàm lợng 0,15%, LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kết nghiên cứu sơ độ bền vững Bảng 3: Kết nghiên cứu sơ độ ổn định Điều kiện CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 §K ++ - + ++ - §K ++ - - +++ ++ Chọn công thức: CT2, CT3, CT5 để đo giải phóng hoạt chất qua màng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KÕt đo giải phóng hoạt chất 3.1 Kết định tính hoạt chất giải phóng qua màng: Bảng 4: Kết định tính SKLM Thời điểm lấy mẫu CT2 CT3 CT5 30 - - - 60 + + - 90 + ++ + Chän c¸c thêi ®iĨm t1 = 90phót, t1 =120phót, t3 =180phót, t 4=360 phút để đo lợng hoạt chất giải phóng qua màng b»ng HPLC LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.2.Kết định lợng dợc chất giải phóng qua màng 3.2.1 Kết xây dựng đờng chuẩn - Sắc ký đồ dung môi cốt tá dợc - Các ®êng chuÈn: + ChuÈn 1: nång ®é ho¹t chÊt 2,12g/ml + Chuẩn 2: nồng độ hoạt chất 5,30g/ml + Chuẩn 3: nồng độ hoạt chất 10,60g/ml Kết đợc phơng tr×nh tuyÕn tÝnh y = 5,9118.e - 0,06.x + HƯ sè t¬ng quan r = 0,999833 1 Cho thÊy có tơng quan chặt chẽ diện tích pic nồng độ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.2.2.NhËn biÕt pic cđa sulfadiazin b¹c Sư dơng hƯ thèng HPLC kÕt hỵp detecter diode array: - Thêi gian lu tR - HÖ sè Match =1 3.2.3 TÝnh nồng độ dợc chất giải phóng qua màng *Kết tính nồng độ dợc chất giải phóng qua màng: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com B¶ng 5: Nång độ dợc chất giải phóng qua màng theo thời gian CT3(n = 5;SD = 0,0018) Các thời điểm tR (giây) S(mAU) Nồng độ (g/ml) t1 3,389 626244 3,138 t2 3,448 974704 4,912 t3 3,517 1055665 5,320 t4 3,408 1692586 8,532 *Tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua màng: Công thức tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua mµng: 250C 25C x%  100  3.10 30 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com B¶ng 6: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng cđa c¸c CT theo thêi gian t CT2 CT3 CT5 t1 1,198 2,614 1,488 t2 2,567 4,093 2,766 t3 3,566 4,459 3,650 t4 4,816 7,111 6,285 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 80 70 60 50 CT2 40 CT3 30 CT5 20 10 90 120 180 360 Hình 6: Đồ thị so sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng CT theo thời gian (các tỷ lệ % đợc gấp lên 10 lần) Chọn CT3 để xác định khả kháng khuÈn trªn invitro LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 7: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phãng qua mµng cđa Silvirin 1% theo thêi gian(n = 5;SD = 0,0018) Thêi gian tR S(mAU) C x% t1 3,460 628819 3,002 2,502 t2 3,358 657693 4,831 4,026 t3 3,448 1048732 5,017 4,182 t4 3,444 1328906 7,544 6,287 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com B¶ng 8: So sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua mµng cđa CT3 víi Silvirin 1% theo thêi gian Nång độ giải phóng qua màng (x%) Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua màng CT3 / Silvirin 1% CT3 Silvirin 1% 2,614 2,502 1.045 4,093 4,026 1.017 4,459 4,182 1.043 7,111 6,287 1.131 Khả giải phóng hoạt chất qua màng CT3 Silvirin 1% tơng đơng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KÕt qu¶ đo kháng khuẩn invitro Bảng 9:So sánh khả khuẩn invitrô CT3 Silvirin 1% Vi khuẩn S.aureus P.aeruginosa E.coli §­êng kÝnh vïng øc chÕ (mm) CT3 Silvirin 1% 10 10 6 12 10 KÕt qu¶ kháng khuẩn invitrô CT3 Silvirin 1% tơng đơng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kết luận - Đà xây dựng đợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn định bền vững điều kiện bình thờng đà ổn định điều kiện khắc nghiệt - Khả giải phóng hoạt chất qua màng CT3 Silvirin 1% tơng đơng Nh kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá dợc không cản trở khả giải phóng hoạt chất kem - Khả kháng khuẩn CT3 tơng đơng với Silvirin 1% trªn invitro LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu tính chất khác kem Silver sulfa 1%: * Nghiên cứu độ ổn định lâu dài * Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất kháng khuẩn invivo * Nghiên cứu độc tính cấp trờng diễn * Nghiên cứu hiệu lực ®iỊu trÞ cđa kem LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Xin chân thành cảm ơn quý vị đại biểu thầy cô giáo toàn thể bạn sinh viên! LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... bỏng chế phẩm sulfadiazin bạc có nhiều u điểm đà đợc chứng minh lâm sàng Viêc cung ứng thuốc có khó khăn Các mục tiêu cụ thể khóa luận : Nghiên cứu kỹ thuật bào chế kem Silver sulfa 1% Nghiên cứu. .. Silvirin 1% theo thời gian Nồng độ giải phóng qua màng (x%) Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua mµng CT3 / Silvirin 1% CT3 Silvirin 1% 2, 614 2,502 1. 045 4,093 4,026 1. 017 4,459 4 ,18 2 1. 043 7 ,11 1 6,287 1. 1 31. .. TiÕp tục nghiên cứu tính chất khác kem Silver sulfa 1% : * Nghiên cứu độ ổn định lâu dài * Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất kháng khuẩn invivo * Nghiên cứu độc tính cấp trờng diễn * Nghiên cứu hiệu