(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy lên sự sinh trưởng cây lan vũ nữ (oncidium sp ) in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY LÊN SỰ SINH TRƢỞNG CÂY LAN VŨ NỮ (Oncidium sp.) IN VITRO Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS HUỲNH HỮU ĐỨC KS VÕ THANH HUY Sinh viên thực MSSV: 1411100514 : NGUYỄN THỊ ANH ĐÀO Lớp: 14DSH03 TP Hồ Chí Minh, 2018 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực hướng dẫn TS Huỳnh Hữu Đức – Phó trưởng phịng Thực nghiệm Cây trồng KS Võ Thanh Huy – cán phòng Thực nghiệm Cây trồng Đề tài thực sở nghiên cứu lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phịng Thực nghiệm Cây trồng Trung tâm Cơng nghệ Sinh học TP HCM Các số liệu, bảng hồn tồn trung thực Đồ án khơng chép hình thức nào, có phát gian lận tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm TP HCM, ngày 27, tháng 07, năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Thị Anh Đào Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến Trung Tâm Công Nghệ Sinh Học Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cho em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp em xin đặc biệt chân thành cảm ơn TS Huỳnh Hữu Đức – Phó trưởng phịng Thực nghiệm Cây trồng, KS Võ Thanh Huy – cán phòng Thực nghiệm Cây trồng tận tình hướng dẫn, bảo, giải đáp thắc mắc suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy cô giảng dạy Viện Khoa học Ứng dụng HUTECH toàn thể quý thầy cô công tác trường Đại học Công Nghệ TP HCM tận tình giúp đỡ truyền đạt kiến thức cho em suốt quãng thời gian học tập bồi dưỡng trường Đồng thời, em xin chân thành cảm ơn anh chị, bạn, em Phòng Thực nghiệm Cây trồng giúp đỡ nhiệt tình, hỗ trợ, đóng góp ý kiến cho em suốt trình làm đồ án, giúp em thực tốt đề tài Cuối xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ba, mẹ nguời sinh thành nuôi dưỡng dạy dỗ nên người gia đình ln động viên, lo lắng, tạo điều kiện cho học tập suốt thời gian qua Mặc dù em cố gắng để hoàn thiện đồ án tất nhiệt huyết lực mình, nhiên khơng trách khỏi thiếu sót, mong nhận đóng góp q báu thầy bạn Xin chân thành cảm ơn! TP HCM, Ngày 27, tháng 07, năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Thị Anh Đào Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .0 LỜI CẢM ƠN .1 MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC BIỂU ĐỒ vi DANH MỤC HÌNH vii LỜI MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề Mục đích nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu .3 Nhiệm vụ nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu .3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài .3 Kết đạt đƣợc Kết cấu đề tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung hoa lan 1.1.1 Nguồn gồc lịch sử vị trí phân bố hoa lan 1.1.2 Tình hình sản xuất, giá trị kinh tế hoa lan giới Việt Nam 1.1.3 Giới thiệu lan Vũ nữ 10 1.2 Giới thiệu kỹ thuật nuôi cấy in vitro 18 1.2.1 Khái niệm 18 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.2 Cơ sở khoa học chung nuôi cấy in vitro 18 1.2.3 Quy trình nhân giống in vitro 20 1.2.4 Thành phần hóa học mơi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 22 1.2.5 Ưu nhược điểm kỹ thuật nhân giống in vitro 27 1.2.6 Sự phát sinh hình thái thực vật 29 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Thời gian địa điểm .31 2.1.1 Thời gian 31 2.1.2 Địa điểm 31 2.2 Vật liệu dụng cụ nghiên cứu 31 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu 31 2.2.2 Trang thiết bị, dụng cụ hóa chất 31 2.2.3 Điều kiện phịng ni cấy .33 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu .34 2.3 Nội dung nghiên cứu .34 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam 34 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam .36 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam 38 3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam 47 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 ii Đồ án tốt nghiệp 4.1 Kết luận 58 4.2 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO .59 PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AC : Than hoạt tính BA : 6-Benzyl Adenine CNSH : Cơng Nghệ Sinh Học CĐHSTTV : Chất điều hòa sinh trưởng thực vật CW : Nước dừa Cs : Cộng IBA : Indolebutyric Acid GA3 : Gibberellic acid MS : Murashige - Skoog NAA : Napthalene Acetic Acid NT : Nghiệm thức PLB : Protocorm like body TDZ : 1-phenyl-3-(1,2,3-Thiadiazol-5 yl)-urea TP HCM : Thành Phố Hồ Chí Minh iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các trang thiết bị thí nghiệm 32 Bảng 2.2 Hóa chất mơi trường MS 33 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam 35 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam 37 Bảng 3.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam 40 Bảng 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam 49 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến số chồi PLB lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy .42 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến chiều cao chồi PLB lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 42 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BA nước dừa đến trọng lượng tươi, trọng lượng khô hàm lượng chất khô PLB lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy .43 Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến số chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy .51 Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến chiều cao chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 51 Biểu đồ 3.6 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến số rễ chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 52 Biểu đồ 3.7 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến chiều dài rễ chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 52 Biểu đồ 3.8 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến trọng lượng tươi, trọng lượng khô hàm lượng chất khô chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy .53 Biểu đồ 3.9 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến trọng lượng tươi, trọng lượng khơ hàm lượng chất khô rễ lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 53 Biểu đồ 3.10 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến tổng trọng lượng tươi, tổng trọng lượng khô tổng hàm lượng chất khô chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 54 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Lan Vũ nữ 10 Hình 1.2 Lan Vũ nữ cam 12 Hình 1.3 Một số giống lan Vũ vữ .13 Hình 1.4 Rễ lan Vũ nữ 14 Hình 1.5 Thân lan Vũ nữ 15 Hình 1.6 Hoa lan Vũ nữ 15 Hình 1.7 Quy trình nhân giống in vitro 20 Hình 1.8 α-naphthaleneacetic acid (NAA) .24 Hình 1.9 6-benzylaminopurine (BA) 25 Hình 3.1 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng BA nước dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam 44 Hình 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam 55 vii Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua trình thực đề tài dựa vào kết thí nghiệm thu kết luận sau: - Sau tuần theo dõi, mơi trường thích hợp cho tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam môi trường MS bổ sung mg/l BA kết hợp với 50 ml/l nước dừa (cho kết 42,6 chồi) nghiệm thức A10 - Sau tuần theo dõi, mơi trường thích hợp đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l NAA (cho kết 4,72 rễ) nghiệm thức B4 4.2 Kiến nghị Do thời gian thực đề tài có hạn nên chưa thể thực nhiều nghiên cứu sâu hơn, tơi có kiến nghị sau: - Áp dụng kết thí nghiệm tiếp tục khảo sát ảnh hưởng đèn led lên tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam - Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng chất hữu tự nhiên lên tạo chồi phát triển chồi lan Vũ nữ cam - Nghiên cứu thêm ảnh hưởng số yếu tố khác đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam - Nghiên cứu điều kiện ánh sáng, giá thể khác để hồn thiện quy trình nhân giống lan Vũ nữ cam đưa vườn ươm 58 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Trịnh Thị Lan Anh, Dương Tấn Nhựt (2011) Ảnh hưởng nước dừa già tới trình phát sinh hình thái phơi vơ tính lan hồ điệp (phalaenopsis amabilis), Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011, 138-142 [2] Nguyễn Tiến Bân (1997) Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín (Nagnoliphyta emgiuspermae) Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 67-83 [3] Ngô Xn Bình ( 2009) Ni cấy mơ tế bào thực vật, Nhà xuất Khoa học kĩ thuật [4] Bùi Bá Bông (1995) Nhân giống nuôi cấy mô, Sở Khoa học Công nghệ môi trường An Giang [5] Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến (1978) Phân loại thực vật bậc cao, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp [6] Nguyễn Văn Chương, Trịnh Văn Thịnh (1991) Từ điển bách khoa nông nghiệp, Trung tâm Quốc gia biên soạn [7] Nguyễn Minh Chơn (2004) Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật, Đại học Cần Thơ [8] Hoàng Đức Cự, Vũ Văn Vụ csv (1993) Sinh lý thực vật, Giáo trình cao học Nơng nghiệp Sinh học, Viện KHKTNNMN Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [9] Trần Hợp (1990) Phong lan Việt Nam, tập – 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [10] Phan Thúc Huân (2005) Hoa lan cảnh vấn đề sản xuất kinh doanh xuất 59 Đồ án tốt nghiệp khẩu, NXB Phương Đông [11] Dương Công Kiên (2006) Nuôi cấy mô, NXB Đại học Quốc gia, Tp Hồ Chí Minh [12] Đồng Văn Khiêm (1995) Tiếp thị sinh vật cảnh, hoa cảnh Việt Nam thị trường giới, Việt Nam Hương sắc, số 25 [13] Nguyễn Xuân Linh (1998) Hoa kỹ thuật trồng hoa, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 145-162 [14] Nguyễn Đức Thành (2000) Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội [15] Bùi Trang Việt (2000) Sinh lý thực vật đại cương, Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [16] Vũ Văn Vụ (1999) Sinh lý thực vật ứng dụng, NXB Giáo Dục Tài liệu Tiếng Anh [17] Arditti (1992) Fundamentals of orchid biology, Jonh Wiley and Sons Inc., New York, U.S.A [18] Burnet G., Ibrahim R K (1973) Tissue culture of Citrus peel and its potential for flavonoid synthesis, Z Pflanzenphysiol, 69, 152-162 [19] Chen JT, Chang C, Chang WC (1999) Direct somatic embryogenesis on leaf explants of Oncidium Gower Ramsey and subsequent plant regeneration Plant Cell Reports 19, 143-149 [20] Chen JT, Chang WC (2000) Plant regeneration via embryo and shoot bud formation from flower-stalk explants of Oncidium Sweet sugar, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 62 60 Đồ án tốt nghiệp [21] Intuwong O., Sagawa Y (1973) Clonal propagation of sarcanthine orchids by aseptic culture of inflorescences, Amer Orc Soc Bull, 42, 264-270 [22] K Kalimuthu, R Senthilkumar and S Vijayakumar (2007) In vitro micropropagation of orchid, Oncidium sp (Dancing Dolls), African Journal of Biotechnology, (10), 1171-1174 [23] Prashant Bagde and Madhuri Sharon (1997) In vitro regeneration of Oncidium gower ramsey by high frequency protocorm like bodies proliferation, IndianJ Plant Physiol., (1), 10-14 [24] Ming-T sair Chan, Sanjaya, Jaime A Teixeira da Silva (2006) Oncidium Tissue Culture, Transgenics and Biotechnology, Floriculture, Ornamental and Plant Biotechnology: Advances and Topical Issues (Vol II), Edition: 1, Chapter: 24, Publisher: Global Science Books, Editors: Jaime A Teixeira da Silva, 193-198 [25] Saranjeet K., Bhutani K K (2012) Organic growth supplement stimulants for in vitro multiplication of Cymbidium pendulum, HortScince, (1), 47-52 [26] Wu IF, Chen JT, Chang WC (2004) Effect of auxins and cytokinins on embryo formation from root-derived callus of Oncidium 'Gower Ramsey' Plant Cell, Tissue and Organ Culture 77, 107-109 Tài liệu internet [27] https://www.sbc-vietnam.com/san-pham/hoa-chat-dung-cu-nuoi-cay-mo-thucvat/than-hoat-tinh-la-gi-va-vai-tro-than-hoat-tinh-tro.aspx [28] https://khonggiansinhhoc.com [29] http://doc.edu.vn/tai-lieu/khoa-luan-anh-huong-cua-cac-chat-dieu-hoa-sinhtruong-den-qua-trinh-nuoi-cay-in-vitro-cua-hai-giong-lan-dendrobium-va10266/ [30] http://kenhantan.com/ 61 Đồ án tốt nghiệp [31] http://phan-phanthanhbinh.blogspot.com/2014/10/tim-hieu-ve-lan-vu-nuoncidium.html [32] http://vuonhoalan.net/ [33] http://hoalanonline.blogspot.com/ 62 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục A: Thống kê xử lý số liệu chƣơng trình SAS V8 Kết thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng BA nƣớc dừa đến tạo chồi từ PLB lan Vũ nữ cam  Số chồi Đồ án tốt nghiệp Đồ án tốt nghiệp  Chiều cao chồi Đồ án tốt nghiệp Đồ án tốt nghiệp Phụ lục B: Thống kê xử lý số liệu chƣơng trình SAS V8 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Vũ nữ cam  Số Đồ án tốt nghiệp  Chiều cao Đồ án tốt nghiệp  Số rễ Đồ án tốt nghiệp Đồ án tốt nghiệp  Chiều dài rễ Đồ án tốt nghiệp 10 ... số điều kiện nuôi cấy lên sinh trưởng lan Vũ nữ nhằm thiết lập mơi trường thích hợp góp phần nhân nhanh giống lan Vũ nữ (Oncidium sp. ) Đồ án tốt nghiệp Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên. .. chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 51 Biểu đồ 3.6 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA than hoạt tính đến số rễ chồi lan Vũ nữ cam sau tuần nuôi cấy 52 Biểu đồ 3.7 Ảnh hưởng. .. cấy lên sinh trưởng lan Vũ nữ (Oncidium sp. ) in vitro? ?? nhằm tìm nồng độ thích hợp số chất cho việc nhân chồi, tạo hoàn chỉnh gia tăng chất lượng giống Mục đích nghiên cứu Xác định ảnh hưởng số