Mức độ tồn lưu của malachite green và leucomalachite trong nguyên liệu cá tra

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BÙI THỊ THU CÚC MỨC ĐỘ TỒN LƯU CỦA MALACHITE GREEN VÀ LEUCOMALACHITE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN 2009 i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BÙI THỊ THU CÚC MỨC ĐỘ TỒN LƯU CỦA MALACHITE GREEN VÀ LEUCOMALACHITE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Th.S VƯƠNG THANH TÙNG 2009 ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Luận văn đính kèm theo đây, với tựa đề tài: “MỨC ĐỘ TỒN LƯU CỦA MALACHITE GREEN VÀ LEUCOMALACHITE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA” sinh viên Bùi Thị Thu Cúc thực báo cáo ngày 16 tháng 07 năm 2009, hội đồng chấm luận văn thông qua Luận văn chỉnh sửa theo ý kiến hội đồng giáo viên hướng dẫn xét duyệt Cần Thơ, ngày 19 tháng 07 năm 2009 Cán hướng dẫn Th.S Vương Thanh Tùng iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM TẠ Luận văn bước đánh giá cuối trình học tập, rèn luyện sinh viên mơi trường đại học Thực tốt luận văn không nhờ cố gắng thân mà nhờ nhiều vào giúp đỡ từ thầy cô cán Để hoàn thành đề tài luận văn này, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy Vương Thanh Tùng tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian thực Ghi lịng biết ơn đến cố vấn học tập Lê Thị Minh Thủy hết lịng giúp đỡ khơng đợt luận văn mà cịn suốt khóa học Chân thành cảm ơn đến thầy cô giảng dạy môn Dinh Dưỡng Chế Biến truyền đạt kiến thức quý báu bổ ích Cảm ơn đến chị Lương Diễm Trang học viên cao học K13 anh Nguyễn Thanh Phong cán phịng thí nghiệm nhiệt tình giúp đỡ thực thao tác thực nghiệm cho tơi hồn thành đề tài Cám ơn cha mẹ gia đình quan tâm, chăm sóc tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập thời gian thực đề tài Gởi lời cảm ơn chúc thành công đến tất bạn lớp Chế Biến Thủy Sản K31, người giúp đỡ thực đề tài Cần Thơ, tháng 05 năm 2009 Sinh viên thực Bùi Thị Thu Cúc i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TĨM TẮT Trong tình hình nay, xuất thủy sản nước ta phải đối mặt với vấn đề khó khăn lớn, vấn đề dịch bệnh dư lượng hóa chất, kháng sinh thủy sản Dư lượng hóa chất, kháng sinh cịn tồn đọng thủy sản có hại sức khỏe người kinh tế nước nhà Vì vậy, việc xác định “mức độ tồn lưu Malachite green Leucomalachite nguyên liệu cá tra” thực nhằm mục đích xác định thời gian tồn lưu Malachite green Leucomalachite cá tra Đề tài bao gồm hai thí nghiệm: Thí nghiệm (1) Khảo sát phương pháp kiểm tra dư lượng kháng sinh MG cá tươi sắc kí lỏng cao áp ghép khối phổ Từ đó, chọn phương pháp cho hiệu suất tốt để tiến hành thí nghiệm (2) xác định mức độ tồn lưu Malachite green Leucomalachite green cá tra Thí nghiệm (2) cá gây nhiễm hai lần gồm ba nồng độ MG gây nhiễm: 0,1 ppm, 0,15 ppm 0,2 ppm với mức thời gian thu mẫu: trước gây nhiễm T0, sau gây nhiễm lần 1: (T1), 72 (T2) Sau gây nhiễm lần 2: (T3), 72 (T4), 7ngày (T5), 14 ngày (T6), 28 ngày (T7), 56 ngày (T8) Chất phân tích sau chiết tách xác định LC-MS Kết cho thấy phương pháp phương pháp tốt với hiệu suất đạt chọn làm thí nghiệm (2) Ở thí nghiệm (2) nồng độ MG tìm thấy da cá gây nhiễm tất nghiệm thức giảm xuống sau 72 gây nhiễm lần Hàm lượng MG phát cá nghiệm thức 0,1 ppm 0,15 ppm cho thấy sau 28 ngày gây nhiễm nồng độ MG thấp mức ấn định dư lượng tối đa MG LMG (không vượt hai phần tỉ (ppb)) sản phẩm thủy sản quốc gia khối Liên hiệp Âu Châu Úc Châu (Quyết định số 2002/657/EC ngày 22/12/2003) Sau 56 ngày sau gây nhiễm nồng độ MG tồn lưu cá tra với nồng độ thấp (0,31-2,42 ppb) ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CÁC TỪ VIẾT TẮT MG Malachite green LMG Leucomalachite green MW Molecular Weight MF Chemical Formula ppb Parts per billion ppm ng µm Parts per million Nanogram Micrometer HPLC High pressure Liquid chromatography MS Mass spectrometry LC-MS Liquid chromatography- Mass spectrometry EU Thị trường Châu Âu BTS GDP Bộ Thủy Sản Gross Domestic Product ACN Acetonitrile HA Hydroxylamine.HCl DEG Diethylene glycol TSA p-toluen sulfonic acid monohydrate TMPD N,N,N,N-tetramethyl- 1,4- phenilenediamine dihydrochloride iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH HÌNH Hình 3.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 15 Hình 3.2: Hệ thống quay chân không 18 Hình 3.3: Qui trình li trích MG phương pháp .19 Hình 3.4: Thiết bị li tâm lạnh 22 Hình 3.5: Bình chiết 23 Hình 3.6: Qui trình li trích MG phương pháp .24 Hình 3.7: Qui trình li trích MG phương pháp 33.2.3 Thí nghiệm xác định thời gian tồn lưu MG LMG cá tra 27 Hình 3.8: Bể ni .29 Hình 3.9: Sơ đồ bố trí nghiệm xác định mức độ tồn lưu MG LMG nguyên liệu cá tra .30 Hình 4.10: Đồ thị đường chuẩn 33 Hình 4.11: Sự tồn lưu MG LMG theo thời gian thí nghiệm .37 Hình 4.12: Sự tồn lưu MG theo thời gian thí nghiệm 40 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1: Tín hiệu máy LC-MS đọc ứng với nồng độ chuẩn 33 Bảng 4.2: Kết phân tích mẫu thêm chuẩn MG, LMG 39 ppb 34 Bảng 4.3: Kết phân tích mẫu thêm chuẩn 39 ppb MG LMG 35 Bảng 4.4: Kết phân tích mẫu thêm chuẩn 39 ppb MG, LMG 36 Bảng 4.5: Sự tồn lưu MG LMG theo thời gian thí nghiệm 37 Bảng 4.6: Sự tồn lưu MG theo thời gian thí nghiệm 39 Bảng 4.7: Sự tồn lưu LMG theo thời gian thí nghiệm 40 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ I TÓM TẮT II CÁC TỪ VIẾT TẮT III DANH SÁCH HÌNH IV DANH SÁCH BẢNG V DANH SÁCH BẢNG V MỤC LỤC VI CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Thời gian thực CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tìm hiểu malachite green 2.1.1 Sơ lược malachite green 2.1.2 Tình hình sử dụng MG 2.1.3 Các ứng dụng Malachite green 2.1.4 Tác hại Malachite green 2.1.5 Công dụng Malachite green sử dụng nuôi trồng thủy sản 2.1.6 Chất thay malachite green 2.2 Nguyên liệu cá tra 2.2.1 Đặc điểm sinh học cá tra 2.2.2 Tình hình phát triển ngành nuôi cá tra 2.3 Các phương pháp xác định dư lượng Malachite green 2.3.1 Phương pháp xác định dư lượng MG LMG sản phẩm cá sắc kì lỏng ghép với phổ khối lượng (LC-MS) 10 2.3.2 Phương pháp xác định dư lượng MG LMG sắc kí lỏng (LC) với oxi hóa LMG 11 2.3.3 Phương pháp xác định dư lượng MG LMG cá hồi Bắc Mỹ sắc ký lỏng sắc ký lỏng ghép với phổ khối lượng 11 2.4 Mức độ tồn lưu chất kháng sinh 11 2.5 Một số qui định quốc gia việc cấm sử dụng số loại thuốc hoá chất 12 CHƯƠNG .14 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 14 3.1 Phương tiện nghiên cứu 14 3.1.1 Địa điểm 14 3.1.2 Nguyên vật liệu 14 3.1.3 Thiết bị dụng cụ 14 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.2 Phương pháp thí nghiệm 14 3.2.1 Khảo sát phương pháp kiểm tra dư lượng kháng sinh MG cá tra sắc kí lỏng cao áp ghép khối phổ 14 3.2.2 Thí nghiệm xác định thời gian tồn lưu MG LMG cá tra 28 3.3 Xử lý số liệu 32 CHƯƠNG .33 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Xây dựng đường chuẩn MG, LMG 33 4.2 Khảo sát phương pháp kiểm tra dư lượng kháng sinh MG cá tra sắc kí lỏng cao áp ghép khối phổ 33 4.2.1 Phương pháp 1: Xác định dư lượng MG LMG nguyên liệu cá tra phương pháp sắc ký lỏng ghép với phổ khối lượng (LC-MS) 34 4.2.2 Phương pháp 2: Xác định dư lượng MG LMG nguyên liệu cá tra phương pháp sắc ký lỏng ghép với phổ khối lượng (LC-MS) 35 4.2.3 Phương pháp 3: Xác định dư lượng MG LMG nguyên liệu cá tra phương pháp sắc ký lỏng ghép với phổ khối lượng (LC-MS) 36 4.3 Sự tồn lưu MG LMG cá Tra giống 37 4.3.1 Sự tồn lưu MG + LMG 37 4.3.2 Sự tồn lưu MG 39 4.3.3 Sự tồn lưu LMG 40 CHƯƠNG .42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT .42 5.1 Kết luận 42 5.2 Đề xuất 43 PHỤ LỤC .44 PHỤ LỤC .47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.3 Thí nghiệm 2: Sự tồn lưu MG LMG cá Tra giống 4.3.1 Sự tồn lưu MG + LMG Bảng 4.5: Sự tồn lưu MG LMG theo thời gian thí nghiệm Nồng độ (ppm) Trước gây nhiễm Lần (ppb) Gây nhiễm Lần (ppb) T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 ĐC