Điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng liên cầu khuẩn gây bệnh trên cá rô phi

DOWNLOAD» AGRIVIET.COM I 1.1 GIỚI THIỆU Đặt Vấn Đề Theo đề án phát triển nuôi cá rô phi 2003 – 2010 Thủy sản, sản lượng cá rô phi tăng từ 30.000 năm 2003 lên 100.000 năm 2005 200.000 năm 2010 Giá trị xuất cá rô phi năm tới dự kiến lên tới 160 triệu USD, tương đương 1.500 tỷ đồng Với mục tiêu đưa diện tích nuôi cá rô phi tăng lên đến 10.000 triệu m3 lồng vào năm 2010, tổng mức đầu tư dành cho đề án phát triển nuôi cá rô phi ước tính cần 12.840 tỷ đồng Và theo nhận định, trước hết khâu đầu tư giống quan trọng Ước tính 250 triệu giống cỡ – 10 gam vào năm 2005 500 triệu vào năm 2010 Để đạt mục tiêu với mở rộng quy mô, áp dụng nhiều mô hình nuôi tiên tiến việc tìm phương pháp phòng trị bệnh hiệu vấn đề cấp thiết Bệnh cá rô phi gây tổn thất không nhỏ đến người nuôi, đặc biệt bệnh vi khuẩn Streptococcus gây Vi khuẩn gây bệnh với tỷ lệ chết cao làm kìm hãm phát triển nghề nuôi thủy sản nói chung nghề nuôi cá rô phi nói riêng Cùng với việc sử dụng thuốc điều trị không đạt hiệu cao, gây tốn nghiên cứu dịch bệnh đòi hỏi phương pháp phức tạp, trang thiết bị đại, việc tìm phương pháp chẩn đoán tác nhân gây bệnh nhanh, xác nhu cầu cần thiết Trước yêu cầu thực tế đó, phân công Khoa Thủy Sản trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh hướng dẫn tận tình thầy Nguyễn Hữu Thịnh – Chúng tiến hành đề tài: “Điều chế kháng huyết thỏ kháng liên cầu khuẩn gây bệnh cá rô phi” 1.2 Mục Tiêu Đề Tài Điều chế kháng huyết thỏ kháng vi khuẩn Streptococcus sp chẩn đoán nhanh bệnh gây cá rô phi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 2.2 Phân Loại Cá Rô Phi Lớp : Ostichthyes Lớp phụ : Actenopterigii Trên : Percomorpha Bộ : Percoidae Họ : Cichlidae Giống : Tilapia, Saratherodon, Oreochoromis Nguồn Gốc Phân Bố Căn vào đặc trưng tập tính sinh sản hình thái loài, người ta phân loại cá rô phi thành giống: Giống Tilapia gồm loài ấp trứng vật bám ( giá thể) Giống Sarotherodon gồm loài ngậm trứng cá miệng Giống Oreochromis cá tự đào tổ đẻ, có cá ấp trứng miệng Hiện biết có tới 80 loài thuộc giống 10 giống phụ Cá rô phi nhập vào nước ta trước thuộc giống Oreochromis loài O mosambica (nhập vào Việt Nam năm 1951) O nilotica (nhập vào miền Nam Việt Nam 1973), loài cá rô phi đỏ có màu sáng hồng, nhập vào ta từ thập niên 90 Cá O nilotica (rô phi Đài Loan, rô phi vằn) vóc lớn cá rô phi O mosambica (rô phi thường hay rô phi cỏ ) Cá rô phi vằn có thân màu hồng, vẩy sáng, có - 12 sọc đen đậm song song từ lưng xuống bụng, vi đuôi có màu sọc đen, viền vi đuôi vi lưng có màu hồng nhạt Cá rô phi thường thân có màu đen lưng, bụng có màu sáng Tốc độ tăng trưởng cá tùy thuộc điều kiện nuôi thức ăn Cá rô phi vằn lớn nhanh cá rô phi thường Sau thời gian nuôi – tháng, cá rô phi vằn đạt kích thước thương phẩm 200 – 400 gam Cá đực thường lớn nhanh cá cái, sau thành thục sinh dục Vì nên dùng cá đực để nuôi tăng sản Năm 1992, công ty Đài Loan nhập cá rô phi đỏ vào Việt Nam để nuôi thử Bình Dương Sau cá đưa tới nhà hàng thành phố Hồ Chí Minh với tên gọi hấp dẫn cá điêu hồng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.3 Đặc Điểm Sinh Học 2.3.1 Đặc điểm dinh dưỡng Giai đoạn đầu sau hết noãn hoàn cá ăn thức ăn có kích thước nhỏ phù du động, thực vật, … Sau tháng cá ăn thức ăn có kích thước lớn hơn, ăn thức ăn chế biến, rau xanh bằm nhỏ, bèo Các loại cá lớn trưởng thành ăn tạp nhiều loại thức ăn rau, bèo, mùn bả hữu cơ, tảo lắng đáy, ấu trùng côn trùng, thức ăn nhân tạo, chế biến, thức ăn công nghiệp, … Phổ thức ăn loài cá rô phi khác thay đổi rộng chia làm nhóm chính: loài ăn tạp mùn bả hữu cá rô phi đen (Oreochoromis mossambicus) cá rô phi vằn (O niloticus), loài ăn tảo O macrochir, Saratherodon esculentus loài ăn thực vật thượng đẳng Tilapia zillii, T rendalli Ngoài cá rô phi có khả thích ứng với loại thức ăn tổng hợp người cung cấp 2.3.2 Đặc điểm sinh trưởng Cá rô phi có tốc độ tăng trưởng nhanh Loài Oreochoromis nilotica (dòng GIFT) đạt trọng lượng trung bình 600 – 700 gam sau vụ nuôi – tháng, cao đạt tới 1,2 – 1,4 kg Cá đực thường lớn nhanh cá Loài cá rô phi vằn thích hợp cho nuôi thịt có cường độ tăng trưởng nhanh khả sử dụng tốt thức ăn tự nhiên bổ sung Cá rô phi vằn đòi hỏi hàm lượng đạm phần thức ăn từ 20 – 50% tùy theo kích thước 2.3.3 Đặc điểm sinh sản Cá rô phi đỏ thành thục sinh dục sau – tháng tuổi Cá lần đẻ khoảng 1000 – 2000 trứng, buồng trứng có – lứa trứng, cá đẻ lứa Cá đẻ nhiều lần năm (8 – 11 lần) Cá rô phi vằn rô phi đỏ thời gian thành thục chậm hơn, tới – tháng Khi thành thục cá bắt cặp tự đào tổ đáy ao đẻ trứng, cá đực bảo vệ giữ trứng đến cá bột nở Cá giữ cá cá bột tiêu hết noãn hoàn tự kiếm ăn thức ăn bên Vì cá có tập tính đẻ sớm đẻ nhiều nên khó kiểm soát mật độ ao Cá rô phi nói chung có tuổi thành thục sớm, dể thành thục dể sinh sản Ta phân biệt cá đực cá cá lớn cỡ – cm cách quan sát lỗ huyệt chúng theo dễ dàng tách riêng cá đực, cá đàn cá rô phi Cá đực có lỗ gồm lỗ hậu môn nằm phía trước lỗ niệu sinh dục nằm ôû phía sau LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Cá có lỗ, phía trước lỗ hậu môn, tiếp đến lỗ niệu nằm lỗ sinh dục nằm phía sau Cá rô phi đỏ đẻ nhiều lần năm, từ 10 – 12 lần đẻ quanh năm Ở Đài Loan nuôi điều kiện chăm sóc tốt cá đẻ 20 lần năm Cá năm tuổi đẻ nhiều lứa cá từ năm tuổi trở lên Khi bắt đầu sinh sản, cá rô phi đực hợp làm tổ cách dùng đuôi quậy bùn đào hố đáy ao, hố có hình tròn, dốc thoai thoải, trơn nhẵn, không bùn lắng động, đường kính tổ từ 20 – 30 cm, độ sâu thích hợp 0,3 – 0,5 cm Cá đẻ trứng vào hố cá đực tưới tinh dịch để thụ tinh Sau trứng thụ tinh, cá hút ngậm tất trứng để ấp cá nở Ở nhiệt độ 300C thời gian ấp trứng từ – ngày Sau nở khoảng – ngày cá hết noãn hoàn bơi theo cá mẹ Khi gặp nguy hiểm cá mẹ há miệng thu đàn vào miệng Khi thấy an toàn, cá mẹ há miệng cho đàn chui Sau – ngày cá tách khỏi mẹ tự kiếm ăn, cá mẹ lại chuẩn bị cho chu kỳ sinh sản Thời gian lứa đẻ tùy thuộc vào thức ăn, tuổi cá, nhiệt độ, … Trung bình cá đẻ từ 1000 – 2000 trứng, cá cỡ lớn đẻ số lượng trứng nhiều Vì nên chọn cá bố mẹ trọng lớn để nâng cao suất sinh sản, cho số lượng cá nhiều khỏe mạnh 2.4 Yêu Cầu Về Các Yếu Tố Môi Trường Nước 2.4.1 Nhiệt độ Theo Ballarin Haller, 1982; giới hạn nhiệt độ nước cho sinh trưởng bình thường loài cá rô phi 20 – 350C Nhiệt độ tối hảo 29 – 310C Ngưỡng nhiệt độ thấp gây chết 10 – 110C Phần lớn cá rô phi ngừng ăn hay sinh trưởng chậm nhiệt độ nước 16 – 170C không sinh sản ngưng phát triển nhiệt độ 200C Giới hạn nhiệt độ tối hảo cho sinh sản từ 26 – 290C cho hầu hết loài cá rô phi 2.4.2 pH Cá rô phi có khả chịu đựng giới hạn pH rộng từ – 11 Tuy nhiên pH < tác động xấu đến kết hợp máu với oxygen, cá bỏ ăn ảnh hưởng đến phát triển pH thích hợp cho phát triển cá rô phi từ 6,0 – 8,5 (Wangead ctv., 1988) Cá rô phi chết pH tăng cao đến 12 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.4.3 Hàm lượng oxy hoà tan (DO) Cá rô phi dòng GIFT có khả chịu đựng vùng nước có hàm lượng oxy thấp mg/l, ngưỡng gây chết cá từ 0,1 – 0,3 mg/l, phát triển tốt khoảng – mg/l 2.4.4 Ammonia (NH3) Ammonia độc cho cá cá rô phi chịu đựng ammonia tốt loài cá khác, 20mg/l (Ballarin Haller, 1982) 2.4.5 Độ mặn Tuy loài thủy sản nước chúng sống phát triển môi trường nước lợ, mặn có nồng độ muối tới 32 0/00 (thích hợp – 200/00) 2.5 Tình Hình Nghiên Cứu Dịch Bệnh Cá Rô Phi Hiện nay, giới công trình nghiên cứu bệnh cá rô phi vi khuẩn như: Miyazaki ctv (1984) nghiên cứu số mô học cá bị nhiễm Pseudomonas flueorescens Streptococcus sp Kaige ctv (1996) nghiên cứu mô học cá bệnh Edwardsiella sp Lio – Po Sanvictores (1987) nghiên cứu nguyên nhân gây chết cá bột Chang Plumb (1996) nghiên cứu mô học cá rô phi vằn nhiễm Staphylococcus sp ảnh hưởng độ mặn lên trình nhiễm Staphylococcus cá rô phi vằn Bunch Bejerano (1997) nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố môi trường lên nhạy cảm cá rô phi lai bệnh Streptococcus sp Perera ctv (1998) nghiên cứu mô học cá rô phi lai bị nhiễm Streptococcus iniae Klesius ctv (1999) nghiên cứu hiệu lực loại vaccine bào chế từ tế bào Streptococcus iniae bị diệt formol cá rô phi Nghiên cứu Evan ctv (2000) cho thấy Streptococcus iniae gây nhiễm cá rô phi qua đường mũi Shoemake ctv (2000) nghiên cứu mật độ cá thả liều lượng Streptococcus iniae có ảnh hưởng đến tỷ lệ chết cá chúng tiếp xúc vi khuẩn ( Trích Nguyễn Tri Cơ, 2004) Hiện Việt Nam công trình nghiên cứu bệnh cá rô phi chưa nhiều, có vài công trình nghiên cứu chủ yếu tập trung vào kí sinh trùng chưa có có công trình có tầm cỡ nghiên cứu tác nhân virus hay vi khuẩn gây bệnh cá rô phi Những công trình nghiên cứu Việt Nam như: nghiên cứu kí sinh trùng số dòng cá rô phi vằn Bắc Ninh Quảng Ninh (Bùi Quang Tề ctv., 1999) Kí sinh trùng giai đoạn khác ba dòng cá rô phi nuôi (O niloticus) dòng Thái, dòng Việt dòng GIFT miền Bắc Việt Nam (Bùi Quang Tề Vũ Thị Lụa, 1999) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.6 Một Số Bệnh Thường Gặp Trên Cá Rô Phi 2.6.1 Bệnh liên cầu khuẩn (do vi khuẩn Streptococcus) Bệnh thường xảy với tỷ lệ cá chết cao, đặc biệt vào tháng cuối mùa hè đầu mùa thu Đây khoảng thời gian nhiệt độ nước cao năm Tại thời điểm khác năm cá chết rải rác, ngoại trừ tháng mùa đông lúc nhiệt độ nước xuống thấp nước ôn đới không thấy bệnh xuất Về độ tuổi cá thường nhiễm bệnh, hầu hết báo cáo ghi nhận bệnh thường xảy giai đoạn nuôi thương phẩm Đường truyền bệnh: cá sống môi trường nước có tác nhân vi khuẩn sống chung với cá bệnh Bệnh dễ dàng xảy thông qua vết thương da hay yếu tố môi trường nuôi không tốt cá (Woo ctv., 2002; trích Nguyễn Tri Cơ, 2004) Dấu hiệu bệnh lý: cá bệnh thường có triệu chứng chung điển hình nhiều loài Cá bơi lờ đờ mặt nước, khả định hướng, bụng căng phồng, vùng da quanh miệng hậu môn xung huyết, mắt lồi hai bên, số cá bị đục giác mạc, xuất huyết vây lưng vây ngực, gan, lách thận vừa tái nhạt vừa sưng phồng (Perera ctv 1998; trích Nguyễn Hữu Thịnh, 2004) nghiên cứu hệ thống bệnh tích vi thể cá rô phi lai (O niloticus x O aureus) nhiễm Streptococcus iniae Kết cho thấy xâm nhập vi khuẩn vào tế bào mắt, màng não gây viêm hạt màng não Các ổ viêm với nhiều vi khuẩn nhu mô thận bệnh tích thường quan sát Vi khuẩn phát triển quanh mao tónh mạch tạo bệnh tích viêm hạt nhu mô gan Nhu mô lách nhiễm khuẩn nặng Một số trường hợp quan sát viêm bao tim tim Phòng trị bệnh: biện pháp phòng bệnh giảm mật độ nuôi, tránh cho ăn dư thừa, thường xuyên vệ sinh hệ thống nuôi, tránh đến mức tối đa việc chuyển đàn hay phân cỡ cá thời gian dịch bệnh thường xảy Trị bệnh cách sử dụng loại kháng sinh có phổ kháng khuẩn rộng hay loại kháng sinh có tác dụng diệt khuẩn gram dương trộn vào thức ăn cho cá ăn Liều lượng sau: 1996) - Enrofloxacin: mg/kg cá, cho ăn liên tục 10 ngày (Stoffregen ctv., - 100 mg Erythromycine + 70 mg Doxycycline kg cá, cho ăn liên tục ngày (Tung ctv., 1985) Theo Kitao Aoki (1979) sử dụng thêm số loại kháng sinh khác Kitasamycine, Lincomycine, Alkyl – trimethyl – ammonium – calcium – oxytetracycline, Oleandomycine điều trị bệnh liên cầu khuẩn cá LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.6.2 Bệnh nhiễm khuẩn huyết Aeromonas Tác nhân gây bệnh: nhóm vi khuẩn gây bệnh chủ yếu thuộc giống Aeromonas: A hydrophila, A caviae, A sobria Vi khuẩn diện môi trường nước, đặc biệt nước có nhiều chất hữu Các loài vi khuẩn không gây bệnh cư trú ruột cá Đối tượng nhiễm bệnh: loài cá nuôi nước ngọt: cá tra, cá điêu hồng, cá basa, cá trê, … Cá dễ mẫn cảm cá trưởng thành, gây chết đến 80% Dấu hiệu bệnh lý: cá bệnh bị sẫm màu vùng bụng Xuất mảng đỏ thể Hoại tử đuôi, vây, xuất huyết vết thương lưng, khối u bề mặt thể, vẩy dễ rơi rụng Mắt lồi, mờ đục phù Xoang bụng chứa nhiều dịch, nội tạng hoại tử Phòng trị: Tránh tạo tác nhân hội nhiễm ký sinh trùng ( nhóm nguyên sinh động vật), tránh làm xây xác cá, vệ sinh không quy định, nước giàu chất hữu (môi trường nuôi nhiễm bẩn), mật độ nuôi dày, hàm lượng oxy thấp, ô nhiễm từ nguồn nước thải công nghiệp, … Dùng thuốc tím (KMnO4) tắm cá, liều dùng ppm (4 g/m3 nước) cá nuôi ao 10 ppm (10 g/m3 nước) cá nuôi bè Xử lý lập lại sau ngày, định kỳ tắm cá tuần, hai tuần tháng/lần tùy thuộc vào tình trạng sức khoẻ cá Dùng thuốc trộn vào thức ăn: Oxytetracylin 55 – 77 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn – 10 ngày (nên hạn chế sử dụng) Enrofloxacin 20 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho cá ăn – 10 ngày Streptomycin 50 – 70 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn – ngày Kanamycin 50 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn ngày Nhóm Sulfamid 100 – 200 mg/kg thể trọng cá, cho ăn 10 – 20 ngày 2.6.3 Bệnh nhiễm khuẩn Pseudomonas (bệnh đốm đỏ) Tác nhân gây bệnh bao gồm: Pseudomonas fluorescens, P anguilliseptica, P chlororaphis, … Đối tượng nhiễm bệnh: loài cá nuôi nước cá tra, cá basa, cá trê, cá bống tượng, cá tai tượng, … LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Dấu hiệu bệnh lý: xuất huyết đốm đỏ da, xung quanh miệng nắp mang, phía mặt bụng Bề mặt thể bị chảy máu, tuột nhớt không xuất huyết vây hậu môn, … Pseudomonas spp gây nhiễm khuẩn huyết thường liên quan đến stress, thương tổn da, vẩy tác nhân học, nuôi với mật độ cao, dinh dưỡng kém, hàm lượng oxy giảm Pseudomonas spp xâm nhập vào thể cá qua đường thương tổn mang, da, … Phòng trị: dùng vaccin phòng bệnh, giảm mật độ nuôi Cung cấp nguồn nước tốt Tắm – ppm (KMnO4) không quy định thời gian Có thể dùng loại kháng sinh để điều trị bệnh nhiễm khuẩn huyết Aeromonas 2.6.4 Bệnh nhiễm khuẩn huyết Edwardsiella (edwarsiellosis) Tác nhân gây bệnh: bệnh vi khuẩn Edwardsiella tarda Đối tượng nhiễm bệnh: loài cá nuôi nước cá tra, cá điêu hồng, cá basa, cá trê, cá rô phi, … Dấu hiệu bệnh lý: xuất vết thương nhỏ da (phía mặt lưng), đường kính khoảng – mm, vết thương phát triển thành khối u bên thể, da bị sắc tố Cá mắc bệnh chức vận động vây đuôi bị tưa rách Có thể xuất vết thương bên biểu bì, cơ, ấn vào phát khí có mùi hôi, vết thương gây hoại tử vùng chung quanh Bệnh thường xảy cá lớn ruột vài loài rắn, cá số loài bò sát, ếch nhái nguồn lây nhiễm mầm bệnh E tarda Bệnh xuất chất lượng nước môi trường nuôi xấu, nuôi với mật độ dày, nhiệt độ thích hợp để bệnh phát triển khoảng 300C Tuy nhiên bệnh xuất nhiệt độ nước thấp dao động bình thường Phòng trị: cải tiến chất lượng nước môi trường nuôi Giảm thấp mật độ nuôi Dùng vaccine phòng bệnh, dùng kháng sinh để điều trị bệnh nhiễm khuẩn huyết Aeromonas 2.6.5 Nhiễm Staphylococcus Tác nhân gây bệnh: Staphylococcus epidermidis Đây tụ cầu khuẩn Gram dương Đối tượng nhiễm bệnh: gây bệnh cá rô phi, không gây bệnh loài cá nuôi ghép với cá rô phi (Huang ctv., 1998) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Dấu hiệu bệnh lý: đa số cá bệnh dấu hiệu bệnh lý bên rõ ràng, vài trường hợp thấy mắt lồi, thương tổn da vây, bụng căng chứa nhiều dịch, cá chết lờ đờ bơi lội quay vòng mặt nước đáy ao, lách sưng to, thận trước lách xuất khối u trắng hay vàng Ngoài cá nhiễm nặng thấy vết thương hình tròn gan, thận giữa, tuyến sinh dục, dày ruột Không có thương tổn tim não Nhiều trường hợp thấy có khối u mang Phòng trị: qua kiểm tra kháng sinh đồ cho thấy S epidermidis nhạy cảm với Ampicilline (10 mg), Erythromycine (15 mg), Gentamycine (10 mg), Kanamycine (30 mg), Lincomycine (2 mg), Oxaccillin (1 mg), Oxytetracyline (30 mg), Penecilline G (10 UI), Streptomycine (10 mg) đề kháng với sulfadiazine (300 mg), (Huang ctv.,1998), Sulfonamide, Clortetracycline (Vũ Thị Tám ctv., 1993) 2.6.6 Một số bệnh ký sinh trùng 2.6.6.1 Bệnh trùng bánh xe Tác nhân gây bệnh: số loài họ trùng bánh xe như: Trichodina centrostrigata, T domerguei, T heterodentata, T nigra, T orientalis, Trichodinella epizootica, Tripartiella bulbosa, T clavodonta Dấu hiệu bệnh lý: mắc bệnh, thân, vây cá có nhiều nhớt màu trắng đục, nước thấy rõ so với bắt cá lên cạn Da cá chuyển màu xám, cá cảm thấy ngứa ngáy, thường đàn lên mặt nước Một số tách đàn bơi quanh bờ ao Khi bệnh nặng trùng bám dày đặc vây, mang, phá hủy tơ mang khiến cá bị ngạt thở, bệnh nặng mang đầy nhớt bạc trắng Cá bơi lội phương hướng Cuối cá lật bụng vòng, chìm xuống đáy ao chết Phân bố lan truyền bệnh: trùng bánh xe gây bệnh chủ yếu giai đoạn cá giống, bệnh ký sinh đơn bào nguy hiểm giai đoạn Trùng bánh xe gây bệnh giai đoạn cá thịt Khi ương cá nhà, bệnh gây ảnh hưởng nghiêm trọng tỷ lệ chết cao (70 – 100%) Bệnh thường phát vào mùa xuân, mùa thu, nhiệt độ nước 25 – 30oC 2.6.6.2 Bệnh trùng dưa Tác nhân gây bệnh: trùng dưa Ichthyophthyrius multifiliis Dấu hiệu bệnh lý: da, mang, vây cá bệnh có nhiều trùng bám thành hạt lấm nhỏ, màu trắng đục (đốm trắng), thấy rõ mắt thường (người nuôi cá gọi bệnh vẩy nhớt) Da, mang cá có nhiều nhớt, màu sắc nhợt nhạt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 10 Caù bệnh đầu tầng mặt, bơi lờ đờ yếu ớt Lúc đầu cá tập trung gần bờ, nơi có cỏ rác, quẫy nhiều ngứa ngáy Trùng bám nhiều mang, phá hoại biểu mô mang làm cá ngạt thở Khi cá yếu ngoi đầu lên để thở, đuôi bất động cắm xuống nước Phân bố lan truyền bệnh: bệnh gặp nhiều loài cá nuôi Cá rô phi lưu qua đông miền Bắc nuôi nhà, thường bị bệnh trùng dưa làm cá chết hàng loạt Bệnh phát vào mùa xuân, mùa đông 2.6.6.3 Bệnh sán đơn chủ Tác nhân gây bệnh: sán đơn chủ Cichlidogyrus tilapiae, C sclerosus, Gyrodactylus niloticus Dấu hiệu bệnh lý: Cichlidogyrus, Gyrodactylus ký sinh da mang cá, làm cho mang da cá tiết nhiều dịch nhờn ảnh hưởng đến hô hấp cá Tổ chức da mang có sán ký sinh bị viêm loét tạo điều kiện cho vi khuẩn, nấm số sinh vật xâm nhập gây bệnh Phân bố lan truyền bệnh: cá bị bệnh ương giống với mật độ dày gây chết hàng loạt giai đoạn bể ương Bệnh phát vào mùa xuân, mùa thu, mùa đông 2.6.6.4 Bệnh rận cá Tác nhân gây bệnh: rận cá Caligus sp Dấu hiệu bệnh lý: rận cá thường ký sinh vây, mang cá rô phi, làm cho da cá bị viêm loét tạo điều kiện cho vi khuẩn, nấm, ký sinh trùng khác xâm nhập, thường lưu hành với bệnh đốm trắng, bệnh đốm đỏ, lở loét nên dẫn đến cá chết hàng loạt Cá bị Caligus ký sinh có cảm giác ngứa ngáy, vận động mạnh mặt nước, bơi lội cuồng dại, cường độ bắt mồi giảm Phân bố lan truyền bệnh: rận cá ký sinh nhiều loài cá nuôi Cá rô phi nuôi mật độ dày, rận cá ký sinh gây chết hàng loạt đầm nước lợ nước 2.7 Phương Pháp Phòng Bệnh Chung Phòng trị bệnh cá vấn đề quan trọng, nhiều địa phương hộ gia đình nuôi cá cần nhận rõ vai trò công việc Phát bệnh cá khó, chữa bệnh cho cá lại khó Vì cá sống môi trường nước tiêm cho hàng ngàn, hàng vạn cá LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 29 (3) Duøng pipette để trộn hỗn hợp giếng thứ Như vậy, ta hỗn hợp huyết pha loãng lần (4) Chuyển 25 μl giếng thứ sang giếng thứ trộn hỗn hợp cho Tiếp tục giếng thứ 12 Cuối cùng, ta dãy pha loãng bậc (5) Thêm 25 μl huyền phù vi khuẩn (FKC) vào giếng, bọc đóa lại miếng phim Lắc nhẹ đóa mặt phẳng bàn để hỗn hợp hòa trộn lại với Bảo quản đóa nhiệt độ phòng vòng 24h Ghi nhận kết giếng cuối có xuất kết tủa, ta kết luận lần pha loãng cho phản ứng ngưng kết Giếng Nước muối sinh lý (μl) 25 25 25 25 25 25 25 Huyeát (μl) 25 25 Vi khuẩn (μl) 25 25 25 25 25 25 Tổng cộng (μl) 50 50 50 50 50 50 25 50 25 50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 30 IV 4.1 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết Quả Thu Mẫu Cá Bệnh 4.1.1 Biểu bệnh tích Qua đợt thu mẫu thu nhận mẫu cá bệnh có biểu bệnh tích Cá thu có trọng lượng từ 50 – 250 g/con Cá bệnh với dấu hiệu bệnh sau: Cá có biểu tách đàn, bơi lờ đờ, bỏ ăn, vây bị lở loét, đục lồi mắt, bụng trướng to Trướng bụng Đục giác mạc Hình 4.1 Triệu chứng cá bệnh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 31 Lồi mắt Hình 4.2 Triệu chứng cá bệnh Giải phẫu xoang bụng cá thấy có chất dịch màu vàng nhạt trong; gan, mật, thận sưng to Hình 4.3 Giải phẫu xoang bụng cá đường cắt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 32 Hình 4.4 Giải phẫu não cá 4.1.2 Kết phân lập vi khuẩn Chúng tiến hành phân lập vi khuẩn mẫu gan, thận, não nuôi cấy môi trường thạch NA thu kết sau: Mẫu bệnh phẩm phân lập nuôi cấy môi trường NA (Nutrient Agar) Ủ nhiệt độ phòng thí nghiệm 24 giờ, xác định được: đa số khuẩn lạc mọc đóa thạch NA có hình tròn, rìa đều, bóng, lồi thấp, tâm đậm, đường kính từ 0,5 – 0,7 mm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 33 Hình 4.5 Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn streptococcuss sp đóa petri Sau xem xét hình dạng, chọn vài khuẩn lạc đóa NA làm tiêu bảng nhuộm gram để xem hình thái vi khuẩn Quan sát kính hiển vi ghi nhận được: vi khuẩn bắt màu tím, gram dương, có dạng hình cầu, đứng riêng lẻ, thành cặp hay tạo thành chuỗi dài Hình 4.6 Hình dạng vi khuẩn Streptococus sp 4.2 Kết Quả Tạo FKC Lấy vi khuẩn Streptococcus phân lập cấy vào 800ml môi trường canh NB (có màu vàng trong) Sau 24 nhận thấy môi trường canh NB chuyeån LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 34 sang màu vàng đục đem kiểm tra kính hiển vi nhận thấy đa số vi khuẩn dạng chuỗi dài, số cặp đôi đứng riêng lẻ Sau bất hoạt vi khuẩn formalin 35 – 37% Thể tích formol cần pha vào 800 ml môi trường canh NB ml Bảo quản điều kiện – 0C vòng 24h Hình 4.7 Vi khuẩn bất hoạt formalin sau ly tâm Sau ly tâm môi trường tăng sinh NB rửa vi khuẩn, thu khối lượng vi khuẩn Streptococcus bất hoạt formalin 238 mg Pha vi khuẩn với nước muối sinh lý theo tỷ lệ 10 mg/ml thu 23,8 ml hỗn hợp dung dịch vi khuẩn nước muối sinh lý 4.3 Kết Quả Tạo Kháng Thể Trên Thỏ 4.3.1 Lần tiêm thứ Sau lần tiêm đầu tiên, thỏ biểu khác thường riêng lưng chỗ tiêm bị sưng to Đến ngày thứ 14 lấy máu thỏ tiếp tục tiêm lần thứ hai LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 35 Sau laáy máu thỏ đặt nghiêng ống nghiệm để tăng diện tích mặt thoáng giữ yên từ – 2h máu hoàn toàn đông đặc lại, sau đêm ống nghiệm bỏ vào tủ lạnh khoảng 1h Đem ly tâm hút lấy phần huyết có màu vàng nhạt, nằm phần ống ly tâm Thực phản ứng ngưng kết vi khuẩn bất hoạt vi khuẩn sống nhận thấy: Phản ứng ngưng kết không xảy cho kết âm tính Kết luận: lần tiêm thứ kháng thể kháng vi khuẩn Streptoccus sp 4.3.2 Lần tiêm thứ 14 ngày sau tiêm vi khuẩn bất hoạt lần thứ hai, tiếp tục lấy máu thỏ Các thao tác lấy huyết thực Kiểm tra phản ứng ngưng kết với huyết thu được, nhận thấy: Trên vi khuẩn bất hoạt xuất chấm nhỏ ly ty có màu trắng đục biểu rõ phiến kính Tiếp tục tiến hành pha loãng lên lần thấy có kết tủa màu trắng đục ly ty khó nhìn thấy Trên vi khuẩn sống thực thao tác thu kết tương tự vi khuẩn bất hoạt Kết luận: Ở lần tiêm thứ có kháng thể kháng vi khuẩn streptococcus Nhưng pha loãng huyết lên đến lần thứ phản ứng ngưng kết phiến kính không xảy ra, chứng tỏ lượng kháng thể kháng vi khuẩn streptococcus có huyết thấp Với lần tiêm thứ 2, kháng thể thu không đạt kết mong đợi nên tiếp tục tiêm vi khuẩn lần thứ 4.3.3 Lần tiêm thứ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 36 Lần tiêm tiêm 1ml FKC không pha dầu khoáng lần tiêm trước ngày sau tiêm vi khuẩn lần thứ lấy huyết thu kết sau: Kiểm tra kháng thể vi khuẩn bất hoạt nhận thấy xuất nhiều chấm nhỏ màu trắng kết tủa lại Tiếp tục pha loãng kháng thể lên lần, lần nhìn thấy phản ứng ngưng kết xảy Nhưng lần thứ không thấy nhiều lần thứ Khi pha loãng huyết lên lần không thấy phản ứng ngưng kết xảy Kết luận: Ở lần tiêm lượng kháng thể có huyết tăng lên nhiều so với lần tiêm trước lý không pha dầu khoáng lần tiêm Lượng kháng thể tăng lên nhiều chưa cao phản ứng ngưng kết nhìn thấy với độ pha loãng lần Vì tiếp tục tiêm vi khuẩn vào thỏ lần thứ tư 4.3.4 Lần tiêm thứ Sau 42 ngày lấy máu thỏ kiểm tra kháng thể thu kết dương tính Ở lần tiêm kháng thể tăng so với lần trước cụ thể pha loãng lên lần mà có phản ứng ngưng kết xảy vi khuẩn bất hoạt vi khuẩn sống Bảng4.1 Kết kiểm tra số lần pha loãng kháng thể đợt thu máu Ngày thu máu 14 28 35 42 Số lần pha loãng Vi khuẩn sống Vi khuẩn bất hoạt + + + + + + + + + + + + + + + + (-): Kết âm tính, phản ứng ngưng kết không xảy + LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 37 (+): Kết dương tính, phản ứng ngưng kết xảy 4.3.5 Kết phản ứng ngưng kết micrplate 96 giếng ĐC A TN TN B Hình 4.8 Kết phản ứng ngưng kết microplate A: Dương tính: vi khuẩn bất hoạt phân tán đáy giếng B: Âm tính: vi khuẩn bất hoạt lắng tụ tạo thành đốm trắng nhỏ đáy giếng ĐC: Thỏ đối chứng TN: Thỏ thí nghiệm 0, 2, 4, 8: Số lần pha loãng Sau lần thu máu kiểm tra lấy 20 ml máu thỏ sau để yên 2h sau giữ nhiệt độ 40C khoảng 1h đêm ly tâm vận tốc 3000 vòng/phút khoảng 20 phút LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 38 Hình 4.9 Thu máu thỏ Thu ml huyết kiểm tra có kháng thể kháng liên cầu khuẩn Streptoccus sp cho phản ứng ngưng kết với FKC độ pha loãng lần 4.4 Kết Quả Kiểm Tra Kháng Thể Thỏ Kháng Liên Cầu Khuẩn Trên Cá Gây Bệnh Thực Nghiệm Sử dụng cá gây bệnh thực nghiệm tiến hành đề tài tốt nghiệp Đạt Tuyền Các rô phi đỏ bị gây nhiễm vi khuẩn sống Streptococcus sp Phương pháp gây nhiễm: Tiêm huyền phù vi khuẩn Streptococcus sống với nồng độ 1,5 x 105 CFU/ml tiêm 0,1 ml cho cá < 50 gam 0,2 ml cho cá > 50 gam, tiêm vào xoang bụng cá 15 ngày sau tiêm, mổ cá phân lập vi khuẩn để xác định tình trạng cảm nhiễm vi khuẩn gây nhiễm Tiến hành mổ 161 cá gây nhiễm, cấy mẫu bệnh phẩm từ thận não cá nuôi cấy môi trường thạch NA Sau 24h nuôi cấy kiểm tra thấy có 12 đóa LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 39 mọc vi khuẩn Khuẩn lạc có dạng hình tròn, rìa đều, bóng, lồi thấp, đường kính từ 0,5 – 0,7 mm Kiểm tra kính hiển vi thấy vi khuẩn có dạng hình cầu đứng riêng lẻ, cặp đôi hay liên kết thành chuỗi dài Kiểm tra kháng thể thỏ với vi khuẩn vừa phân lập phiến kính cho phản ứng ngưng kết Tiếm hành pha loãng vi khuẩn lên lần cho phản ứng ngưng kết dương tính Nhưng pha loãng lên lần có vài phiến kính cho phản ứng ngưng kết Kết luận kháng thể thỏ cho phản ứng ngưng kết cá gây nhiễm thực nghiệm cho kết không khác biệt so với vi khuẩn phân lập lần thu mẫu thực địa LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 40 V 5.1 KEÁT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết Luận Cá bệnh có biểu tách đàn, bơi lờ đờ, bỏ ăn, đục lồi mắt, bụng trướng to Phân lập vi khuẩn Streptococcus sp có dạng hình cầu, đứng riêng lẻ, thành cặp hay tạo thành chuỗi dài Sau 42 ngày tiêm FKC với liều lượng 10mg/l vào thỏ thu 8ml huyết cho phản ứng ngưng kết với vi khuẩn Streptococcus sp độ pha loãng lần Kháng huyết thỏ kháng liên cầu khuẩn (Streptococcus sp) cá gây bệnh thực nghiệm cho kết ngưng kết tương tự vi khuẩn phân lập qua lần thu mẫu thực địa 5.2 Đề Nghị Tiếp tục nghiên cứu định danh vi khuẩn mức độ loài Điều chế kháng huyết thỏ kháng loài vi khuẩn khác gây bệnh cá roâ phi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài Liệu Tiếng Việt NGÔ TRỌNG LƯ – THÁI BÁ HỒ, 2002 Kỹ thuật nuôi thủy đặc sản nước Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội NGUYỄN DUY KHOÁT, 2000 Sổ tay hướng dẫn nuôi cá nước Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội NGUYỄN HỮU THỊNH, 2004 Bộ môn Quản lý sức khỏe Động vật Thủy Sản, Khoa Thủy Sản, Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh TRẦN TRỌNG CHƠN, 2000 Bệnh cá – tôm Bài giảng trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh NGUYỄN TRI CƠ, 2004 Điều tra tình hình nuôi dịch bệnh cá rô phi nuôi bè đồng sông Cửu Long cách phòng trị Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh DƯƠNG PHƯNG UYÊN, 2004 Khảo sát kỹ thuật nuôi bệnh streptococcus sp gây cá rô phi nuôi bè Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Nội PHẠM VĂN TY, 1998 Miễn dịch học Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Hà ĐỖ NGỌC LIÊN, 2001 Miễn dịch học sở Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Hà Nội VÕ VĂN TUẤN, 2005 Hiện trạng tình hình bệnh vi khuẩn cá rô phi đỏ nuôi lồng bè tỉnh Đồng Nai Khoa Thủy sản, Trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh www.vietinh.com.vn/fish/carophi/carophi.htm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 42 Tài Liệu Tiếng Anh KITAO AND AOKI, 1979 Therapeutic studies of doxycyline of steptoccosis of cultured yellowtail (Seriola quinqueradiata) Bulletin of the faculty of Agricultere, Miyazaki University, 26, 357–363 PIER, G.B AND MADIN, S H AND AL-NAKEEB S 1978 Isolation and characterization of a second isolate of Streptococcus iniae International Journal of Systematic Bacteriology 28, 311-314 NGUYEN, H.T., KANAI, K.1999 Selective agars for the isolation of Streptococcus iniae from Japenese flounder (Paralichthys olivaceus), and its cultural enviroment Journal of Applied Microbiology 86, 769–776 www.elsevier.nl/locate/aqua-online LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DOWNLOAD» AGRIVIET.COM GIỚI THIỆU VỀ TÀI LIỆU Tài liệu bạn xem download từ website WWW.AGRIVIET.COM WWW.MAUTHOIGIAN.ORG »Agriviet.com website chuyên đề nông nghiệp nơi liên kết thành viên hoạt động lĩnh vực nông nghiệp, thường xuyên tổng hợp tài liệu tất lĩnh vực có liên quan đến nông nghiệp để chia tất người Nếu tài liệu bạn cần khơng tìm thấy website xin vui lòng gửi yêu cầu ban biên tập website để cố gắng bổ sung thời gian sớm »Chúng xin chân thành cám ơn bạn thành viên gửi tài liệu cho Thay lời cám ơn đến tác giả cách chia lại tài liệu mà bạn có người Bạn trực tiếp gửi tài liệu bạn lên website gửi cho theo địa email Webmaster@Agriviet.Com Lưu ý: Mọi tài liệu, hình ảnh bạn download từ website thuộc quyền tác giả, chúng tơi khơng chịu trách nhiệm khía cạnh có liên quan đến nội dung tập tài liệu Xin vui lòng ghi rỏ nguồn gốc “Agriviet.Com” bạn phát hành lại thông tin từ website để tránh rắc rối sau Một số tài liệu thành viên gửi cho không ghi rỏ nguồn gốc tác giả, số tài liệu có nội dung khơng xác so với tài liệu gốc, bạn tác giả tập tài liệu liên hệ với chúng tơi có u cầu sau : • • • Xóa bỏ tất tài liệu bạn website Agriviet.com Thêm thông tin tác giả vào tài liệu Cập nhật nội dung tài liệu www.agriviet.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... kháng thể kháng liên cầu khuẩn Streptoccus sp cho phản ứng ngưng kết với FKC độ pha loãng lần 4.4 Kết Quả Kiểm Tra Kháng Thể Thỏ Kháng Liên Cầu Khuẩn Trên Cá Gây Bệnh Thực Nghiệm Sử dụng cá gây. .. trị bệnh liên cầu khuẩn Nhật Bản (Kitao Aoki, 1979) 2.8.4 Nghiên cứu huyết học Pier ctv (1978) điều chế kháng huyết thỏ kháng S iniae Kháng huyết thỏ không cho phản ứng ngưng kết với loài vi khuẩn. .. ngược lại Kháng huyết thỏ điều chế từ tế bào vi khuẩn chủng khuẩn lạc nhầy cho phản ứng ngưng kết với hai khuẩn lạc nhầy không nhầy Kháng huyết thỏ điều chế từ tế bào vi khuẩn chủng khuẩn lạc