Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro trong nhân giống Quế lan hương (Aerides odorata Lour.)

Bài viết Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro trong nhân giống Quế lan hương (Aerides odorata Lour.) thông báo kết quả nghiên cứu nhân giống thành công cây Quế lan hương bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro đạt hiệu quả cao.

Công nghệ sinh học & Giống trồng ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO TRONG NHÂN GIỐNG QUẾ LAN HƯƠNG (Aerides odorata Lour.) Nguyễn Văn Việt1, Bùi Văn Thắng2, Nguyễn Thị Hường3, Nguyễn Thị Thu Hằng4 1,2,3 Trường Đại học Lâm nghiệp Trung tâm phát triển Lâm nghiệp Hà Nội TÓM TẮT Vi nhân giống Quế lan hương kỹ thuật nuôi cấy in vitro nghiên cứu thành công Kết nghiên cứu cho thấy sát khuẩn bề mặt ethanol 70% phút, khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% 15 phút nuôi cấy môi trường Knops, cho tỷ lệ mẫu 94,33% 88,67 % mẫu tái sinh thể chồi sau tuần Môi trường Knops bổ sung BAP 0,5 mg/l, Kinetin 0,2 mg/l NAA 0,3 mg/l cho khả tạo thể chồi tốt nhất, thể chồi to, mập, xanh thẫm hệ số tạo thể chồi đạt 4,78 lần sau tuần Nhân nhanh chồi mơi trường khống Knops bổ sung BAP 0,8 mg/l, Kinetin 0,4 mg/l, NAA 0,1 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 30 g/l agar g/l, chồi phát triển nhanh, mập, màu xanh đậm hệ số nhân chồi đạt 9,67 lần sau tuần Tỷ lệ chồi rễ đạt 96,67%, số rễ trung bình 3,46 rễ/cây với chiều dài rễ trung bình 3,83 cm ni mơi trường Knops bổ sung NAA 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 20 g/l agar g/l sau tuần nuôi cấy Cây hoàn chỉnh huấn luyện chuyển trồng giá thể dớn trắng, xử lý giá thể ngày nước, cho tỉ lệ sống 93,33% Quy trình vi nhân giống áp dụng để sản xuất hàng loạt giống Quế lan hương chất lượng tốt, đáp ứng nhu cầu nguồn giống Quế lan hương Từ khóa: Aerides odorata Lour., in vitro, knops, nhân giống, Quế lan hương, rễ, thể chồi I ĐẶT VẤN ĐỀ Quế lan hương (Aerides odorata Lour.) dòng Giáng hương thuộc họ phong lan (Orchidaceae)- loài hoa quan tâm ưa chuộng hoa có kiểu dáng, màu sắc đẹp, tỏa mùi hương thơm loài hoa quý rừng Hịa Bình Ngồi giá trị thẩm mỹ Quế lan hương cịn có giá trị kinh tế lớn Do lồi hoa có hương thơm nên sử dụng để tách chiết lấy tinh dầu phục vụ cho ngành mỹ phẩm, tạo hương nước hoa… Hiện loài hoa nghiên cứu ứng dụng ngành y học Cây mọc nhiều thành bụi, có nhiều bụi cao đến mét, loài lan thường mọc rừng, bám gỗ, tán thưa Thân mảnh, biểu sinh, thân mọc khỏe mập Lá mềm, màu lục nhạt, xoắn đầu, dài tới 25 cm, dài tới 35 cm, rộng khoảng cm, mặt màu xanh, mặt có màu tím nhạt Lá xếp hai bên, cong xuống, đầu 162 có vết khuyết khơng Hoa mọc thành chùm thõng xuống, dài khoảng 40 cm Hoa nhỏ, cấu trúc nạc, màu trắng có đính tất phiến màu hồng dải tía cánh mơi Cánh mơi cuộn lại, hình ống rộng, bao phấn có mỏ dài Hoa nở phân bốn phía trơng hài hịa, cành hoa bng xuống thành chùm Hoa mọc thành chùm, có màu đậm đầu cánh mơi hoa Hoa to khoảng – cm, có hương thơm Hoa thường thấy có hai màu trắng màu tím hồng Quả nang hình trái xoan, có cuống dài Nở theo – đường nứt dọc, chín nở mảnh vỏ cịn dính lại với phía đỉnh phía gốc Hạt nhiều nhỏ li ti, xốp, chứa đầy khơng khí Hạt trưởng thành sau - 18 tháng Mặc dù Quế lan hương có khu vực phân bố rộng, nhiên loài lan bị khai thác cạn kiệt nhu cầu lớn người cộng thêm môi trường sống bị thu hẹp TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 Công nghệ sinh học & Giống trồng nạn phá rừng, cháy rừng ngày nhiều nên lan rừng khơng cịn nơi cư trú Mặt khác, tự nhiên nội nhũ hạt lan thường bị tiêu giảm, muốn nảy mầm phải có cộng sinh nấm Rhiroctonia nên tỷ lệ tái sinh hạt kém, bên cạnh nhân giống từ quan sinh dưỡng thường chậm, hệ số nhân giống thấp ảnh hưởng đến mẹ Đã có số tác giả báo cáo xây dựng thành cơng quy trình nhân giống Quế lan hương (Aerides odorata Lour.) từ mảnh lá, nhiên quy trình thường kéo dài phải tạo chồi thông qua giai đoạn tạo callus Hiện nay, kỹ thuật nhân giống in vitro với hệ số nhân từ lan lớn Do đó, nhân giống in vitro hoa lan từ phôi hạt ống nghiệm hoàn hảo thường sử dụng nhân giống lan Dendrobium Bài báo thông báo kết nghiên cứu nhân giống thành công Quế lan hương kỹ thuật nuôi cấy in vitro đạt hiệu cao II VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Vật liệu ni cấy hạt có nguồn gốc từ Quế lan hương tuyển chọn từ có tính trạng tốt vườn lan thuộc xã Hương Ngải, Thạch Thất, Hà Nội Các loại mơi trường ni cấy ghi bảng Hóa chất dùng để khử trùng mẫu bao gồm: ethanol 70%, HgCl2 0,1% Javen 6% 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nuôi cấy khởi động: Mẫu Quế lan hương rửa nước máy, ngâm mẫu dung dịch xà phịng lỗng - 10 phút, rửa lại vịi nước máy - lần, tráng lại nước cất vô trùng - lần Sát khuẩn bề mặt ethanol 70% phút, tráng lại nước cất vô trùng - lần Khử trùng mẫu HgCl2 0,1% Javen 6% khoảng thời gian khác nhau, rửa lại mẫu nước cất vô trùng sau lần khử trùng Tách vỏ quả, trải hạt lên môi trường nuôi cấy khởi động (MTKĐ) Sau - tuần hạt bắt đầu tái sinh thể chồi (protocorm) - nguyên liệu cho nghiên cứu Nhân nhanh thể chồi: Mẫu hạt Quế lan hương nuôi cấy môi trường tạo thể chồi (T1-8) gồm mơi trường chất khống Knops bổ sung chất điều hịa sinh trưởng (ĐHST) có nồng độ khác nhau, ánh sáng giàn đèn neon Sau tuần nuôi cấy, mẫu tạo thể chồi, thống kê số thể chồi bình tính hệ số nhân Nhân nhanh chồi: Các chồi hữu hiệu nuôi cấy môi trường nhân nhanh chồi (N1-8) Môi trường ni cấy sử dụng Knops có bổ sung chất ĐHST với nồng độ khác Kết thí nghiệm theo dõi tuần, thống kê hệ số nhân chồi đặc điểm cụm chồi Tạo hoàn chỉnh: Chọn cụm chồi phát triển đồng đều, dùng kéo dao sắc tách chồi hữu hiệu cấy lên môi trường cảm ứng rễ (R1-9) để bình ni ánh sáng giàn đèn neon, sau tuần chồi rễ tạo hoàn chỉnh, thống kê số rễ chồi, đo chiều dài rễ đánh giá số rễ Huấn luyện ngôi: Các Quế lan hương in vitro bình từ thí nghiệm huấn luyện nhà lưới tuần Sau lấy khỏi bình rửa mơi trường vịi nước chảy cấy vào khay chuẩn bị giá thể có thành phần khác Đặt khay nhà lưới, trời nắng cần che 70% ánh sáng lưới đen, tưới nước - lần/ngày Thống kê tỷ lệ sống/chết đánh giá chất lượng sau tuần TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 163 Công nghệ sinh học & Giống trồng Bảng Thành phần loại môi trường nuôi cấy Quế lan hương in vitro Ký hiệu môi Giai đoạn nuôi cấy Thành phần môi trường nuôi cấy trường Nuôi cấy khởi động MTKĐ Knops bổ sung sucrose 30 g/l, agar g/l Knops bổ sung BAP 0,1 - 0,5 mg/l, Kinetin 0,1 - 0,2 mg/l, Môi trường nhân T1-8 NAA 0,1 - 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây thể chồi 100 ml/l, sucrose 30 g/l, agar g/l Knops bổ sung BAP 0,2 - 1,6 mg/l, Kinetin 0,2 - 0,4 mg/l, Nhân nhanh chồi N1-8 NAA 0,1 - 0,2 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 30 g/l, agar g/l Ra rễ tạo hoàn Knops bổ sung IBA 0,1- 0,3 mg/l, NAA 0,1 - 0,3 mg/l, R1-9 chỉnh sucrose 20 g/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, agar g/l Huấn luyện Các loại giá thể (dớn trắng, vỏ thông, xơ dừa) thời gian ngâm loại giá thể (2 - ngày) Các thí nghiệm bố trí bình thủy tinh hình trụ (5 mẫu/bình), cơng thức thí nghiệm lặp lại lần Số liệu xử lý phần mềm Excel Điều kiện nuôi cấy: Cường độ chiếu sáng 2000 lux; thời gian chiếu sáng: 14 giờ/ngày; nhiệt độ phịng ni: 25 ± 20C Các loại môi trường nuôi cấy nghiên cứu dựa môi trường dinh dưỡng Knops Các môi trường nuôi cấy chuẩn độ pH = 5,8; khử trùng 1180C, áp suất 1atm 17 phút III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo mẫu tái sinh thể chồi in vitro Hiện có nhiều cơng trình cơng bố kết nghiên cứu khử trùng mẫu giống lan Kế thừa kết đó, mẫu Quế lan hương sau thu hái rửa sạch, khử trùng bề mặt ethanol 70% phút Tiếp theo, tiến hành khử trùng mẫu HgCl2 0,1% (8 - 17 phút) Javen 6% (10 - 17 phút), cơng thức thí nghiệm thiết kế bảng Mẫu sau khử trùng nuôi cấy môi trường nuôi cấy khởi động Sau thời gian theo dõi – tuần, kết thí nghiệm khử trùng tạo mẫu cho thấy (bảng 2), sử dụng loại hóa chất khử trùng HgCl2 0,1% Javen 6%, với thời gian khử trùng – 17 phút cho tỷ lệ mẫu 60 – 100% 50,33 – 83,33% Trong đó, dùng HgCl2 0,1% khử trùng 15 phút đạt tỷ lệ mẫu 94,33% (hình 1a), tỷ lệ mẫu tái sinh thể chồi cao đạt 88,67% sau 40 ngày Tuy nhiên kéo dài thêm thời gian khử trùng đến 17 phút thu kết cao (100%), khả tái sinh thể chồi thấp (70%) Bên cạnh đó, sử dụng Javen 6% cho tỷ lệ mẫu mẫu tái sinh thấp so với HgCl2, lựa chọn chất khử trùng HgCl2 0,1%, thời gian khử trùng 15 phút hiệu để tạo mẫu tái sinh thể chồi in vitro (hình 1a-b) Bảng Ảnh hưởng loại hóa chất, thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu tái sinh thể chồi 164 Loại hóa chất Thời gian (phút) Tỷ lệ mẫu (%) Tỷ lệ mẫu tái sinh (%) Thời gian tái sinh (ngày) HgCl2 0,1% 10 12 15 17 60,00 76,67 87,00 94,33 100 58,67 75,33 83,00 88,67 70,00 38 39 39 40 41 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 Cơng nghệ sinh học & Giống trồng Loại hóa chất Thời gian (phút) Tỷ lệ mẫu (%) Tỷ lệ mẫu tái sinh (%) Thời gian tái sinh (ngày) Javen 6% (NaClO) 10 12 15 17 50,33 60,67 66,67 83,33 46,67 56,67 63,33 60,67 39 40 41 41 3.2 Nhân nhanh thể chồi Quế lan hương điều hòa sinh trưởng thực vật với nồng độ khác Thể chồi tái sinh từ hạt lan môi trường công thức đối chứng không bổ sung nuôi cấy khởi động cấy chuyển sang mơi chất điều hịa sinh trưởng thực vật (bảng 3) trường nhân nhanh thể chồi Thí nghiệm Sau tuần theo dõi thu thập số liệu hệ số bố trí gồm cơng thức có sử dụng chất tạo thể chồi, đặc điểm thể chồi Bảng Ảnh hưởng nồng độ BAP, Kinetin, NAA đến khả nhân nhanh thể chồi Chất ĐHST (mg/l) BAP Kinetin NAA Hệ số nhân nhanh (lần) ĐC T1 T2 T3 T4 T5 T6 0,2 0,3 0,5 0,2 0,3 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,3 0,3 1,44 2,78 3,78 4,55 3,33 3,78 4,11 Thể chồi ít, màu nâu xám Thể chồi nhiều, mập, xanh nhạt Thể chồi nhiều, mập, xanh Thể chồi nhiều, mập, xanh Thể chồi nhiều, xanh nhạt Thể chồi nhiều, mập, xanh nhạt Thể chồi nhiều, mập, xanh T7 0,5 0,2 0,3 4,78 Thể chồi nhiều, mập, xanh đậm T8 0,2 0,3 3,89 Thể chồi nhiều, xanh nhạt CTTN Kết cho thấy (bảng 3), ni cấy thể chồi mơi trường Knops có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác có ảnh hưởng rõ rệt đến q trình tạo thể chồi in vitro Ở công thức đối chứng không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật, hệ số nhân thể chồi thấp (1,44 lần), chất lượng thể chồi kém, kích thước nhỏ Đặc biệt cơng thức T7 cho hệ số tạo thể chồi cao đạt 4,78 thể chồi nhiều, mập, màu xanh đậm (hình 1c) Hệ số tạo thể chồi Quế lan hương môi trường chứa BAP 0,5 mg/l, Kinetin 0,2 mg/l, NAA 0,3 mg/l cao so với báo cáo Nguyễn Thị Sơn cs (2012) nhân nhanh thể chồi Dendrobium Đặc điểm thể chồi fimbriatum Hook tuần đạt 4,63 lần 3.3 Nhân nhanh chồi Quế lan hương Nhân nhanh chồi cơng đoạn có ý nghĩa quan trọng việc tạo số lượng lớn in vitro Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin, BAP NAA thường bổ sung kết hợp để làm cho hệ số nhân chồi tăng lên rõ rệt Trong thí nghiệm này, sử dụng chất điều hòa sinh trưởng thực vật có nồng độ khác để kích thích tạo nhiều chồi nhằm đáp ứng yêu cầu tạo hệ số nhân cao, chồi sinh trưởng, phát triển tốt Các thể chồi lan tạo từ thí nghiệm cấy vào môi trường nhân nhanh để tạo cụm chồi Kết cho thấy (bảng 4), sử dụng TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 165 Công nghệ sinh học & Giống trồng cơng thức mơi trường ni cấy khác có ảnh hưởng rõ rệt đến khả nhân nhanh chồi Quế lan hương Số chồi TB/mẫu cấy ban đầu đạt 4,67 - 9,67 lần, chiều cao trung bình chồi đạt 2,2 - 2,7 cm số trung bình chồi đạt - 3,5 Bảng Ảnh hưởng nồng độ BAP, Kinetin, NAA đến khả nhân nhanh chồi Chất ĐHST (mg/l) Khả tái sinh chồi CTTN Số chồi Chiều cao TB Số BAP Kinetin NAA TB/mẫu chồi (cm) TB/chồi ĐC 2,67 1,7 1,6 N1 0,2 0,4 0,1 5,33 2,2 2,0 N2 0,4 0,4 0,1 6,00 2,4 2,1 N3 0,6 0,4 0,1 6,67 2,6 2,2 N4 0,8 0,4 0,1 9,67 2,7 3,5 N5 1,0 0,2 0,2 6,33 2,5 2,5 N6 1,2 0,2 0,2 5,67 2,4 2,4 N7 1,4 0,2 0,2 5,00 2,6 2,6 N8 1,6 0,2 0,2 4,67 2,3 2,4 Ở công thức N1-4 nồng độ BAP tăng (0,2 0,8 mg/l), Kinetin 0,4mg/l NAA 0,1 mg/l dẫn đến số chồi TB/mẫu tăng 5,33 - 9,67 tăng nồng độ chất ĐHST số chồi TB/mẫu lại giảm xuống Kết nghiên cứu cho thấy, cơng thức mơi trường N4 (mơi trường khống Knops bổ sung BAP 0,8 mg/l Kinetin 0,4 mg/l, NAA 0,1 mg/l) cho kết tốt nhất, với giá trị trung bình: số chồi đạt 9,67 chồi/mẫu cấy ban đầu, chiều cao đạt 2,7 cm số 3,5 (hình 1d) 3.4 Kích thích rễ tạo hoàn chỉnh Tạo hoàn chỉnh giai đoạn cuối trình nhân giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào Môi trường nuôi cấy có bổ sung chất ĐHST thực vật với nồng độ khác cho kết thu bảng Kết thí nghiệm cho thấy (bảng 5) công thức đối chứng đạt tỷ lệ chồi rễ 53,33% số rễ trung bình 0,98 chiều dài CTTN ĐC R1 R2 R3 R4 166 trung bình rễ đạt 1,73 cm, số rễ 1,70 với chất lượng rễ ngắn, xấu Các cơng thức R1-3 có nồng độ IBA 0,1 - 0,3 mg/l tỷ lệ chồi rễ thấp 56,67 - 70%, cơng thức R4-6 có nồng độ NAA 0,1 - 0,3 mg/l tỷ lệ chồi rễ cao 80 96,67%, phối hợp nồng độ NAA IBA công thức R7- tỷ lệ rễ giảm (83,33 - 70%) Do lựa chọn cơng thức R6 với thành phần mơi trường khống knops bổ sung NAA 0,3 mg/l cho tỷ lệ chồi rễ cao đạt 96,67%, số rễ TB/cây 3,46 chiều dài TB/rễ đạt 3,83 cm, số rễ 13,25 (hình 1e) Kết đạt tương tự báo cáo Huidrom S Devi et al (2013) cho mơi trường ½ MS bổ sung NAA 0,5 mg/l thích hợp để kích thích rễ tạo hoàn chỉnh loài Aerides odorata Lour Hongthongkham J et al (2014) báo cáo môi trường chứa BA mg/l cho tỷ lệ rễ cao đạt 96% Bảng Ảnh hưởng nồng độ IBA NAA đến khả rễ Chất ĐHST (mg/l) Tỷ lệ chồi rễ Số rễ Chiều dài Chỉ số rễ (%) TB/cây TB/rễ (cm) IBA NAA 0,1 0,2 0,3 - 0,1 53,33 56,67 60,00 70,00 80,00 0,98 1,08 1,10 1,28 2,67 1,73 1,83 2,47 2,93 3,13 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 1,70 1,98 2,72 3,75 8,36 Công nghệ sinh học & Giống trồng Chất ĐHST (mg/l) CTTN IBA 0,1 0,2 0,3 R5 R6 R7 R8 R9 NAA 0,2 0,3 0,3 0,2 0,1 Tỷ lệ chồi rễ (%) 93,33 96,67 83,33 80,00 70,00 3.5 Huấn luyện ngơi Các bình đủ tiêu chuẩn chiều cao  2,5 cm, có - rễ – huấn luyện thời gian tuần nhà lưới có mái che (cần che thêm lưới đen để tránh ánh sáng trực xạ) Sau lấy khỏi bình, rửa mơi trường ni cấy vòi nước máy, Số rễ TB/cây 2,73 3,46 2,51 2,29 2,02 Chiều dài TB/rễ (cm) 3,63 3,83 3,40 2,97 2,83 Chỉ số rễ 9,91 13,25 8,53 6,80 5,72 tiếp tục trồng vào khay với giá thể khác Thí nghiệm bố trí với cơng thức, gồm loại giá thể (xơ dừa, dớn trắng, vỏ thông) xử lý cách ngâm nước với thời gian khác nhau, tưới nước lần/ngày đảm bảo vừa đủ độ ẩm, tiêu theo dõi tỷ lệ sống (%) tuần Bảng Ảnh hưởng loại giá thể thời gian xử lý đến tỷ lệ sống Chất lượng Thời gian xử lý Tỷ lệ sống Loại giá thể giá thể (ngày) (%) Xơ dừa Dớn trắng Vỏ thông 30,00 Kém 6 36,66 60,00 93,33 83,67 73,33 43,33 46,66 80,00 Kém Trung bình Tốt Tốt Trung bình Kém Kém Trung bình Kết thí nghiệm cho thấy (bảng 6), dùng dớn trắng xử lý ngày nước làm giá thể trồng Quế lan hương cho tỷ lệ sống cao đạt tới 93,33% sau tuần theo dõi Vào thời điểm Quế lan hương bắt đầu hình thành rễ tiếp tục kéo dài (hình 1f) Như vậy, với thời gian xử lý ngày giá thể dớn đủ mềm có khả giữ nước tốt, đủ độ xốp, giúp rễ giữ ẩm tốt, phù hợp với việc nuôi trồng Quế lan hương IV KẾT LUẬN Mẫu Quế lan hương sát khuẩn bề mặt ethanol 70% phút, khử trùng HgCl2 0,1% 15 phút Cấy hạt mơi trường khống Knops bổ sung sucrose 30 g/l, agar g/l, tỷ lệ mẫu đạt 94,33% mẫu tái sinh thể chồi 88,67% Nhân nhanh thể chồi Quế lan hương môi trường Knops bổ sung BAP 0,5 mg/l, Kinetin 0,2 mg/l, NAA 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 30 g/l, agar g/l cho hệ số nhân thể chồi đạt 4,78 lần Nhân nhanh chồi Quế lan hương môi trường Knops bổ sung BAP 0,8 mg/l, Kinetin 0,4 mg/l, NAA 0,1 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 30 g/l agar g/l TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 167 Công nghệ sinh học & Giống trồng đạt kết 9,67 chồi TB/mẫu, chiều cao TB/chồi 2,7 cm, số TB/chồi 3,5 chồi phát triển tốt Tạo Quế lan hương hoàn chỉnh môi trường Knops bổ sung NAA 0,3 mg/l, nước dừa 100 ml/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 20 g/l agar g/l đạt tỷ lệ rễ 96,67%, số rễ TB/cây 3,46 chiều dài TB/rễ 3,83 cm, số rễ 13,25 Cây Quế lan hương hoàn chỉnh huấn luyện tuần nhà lưới trồng vào khay có giá thể dớn trắng xử lý ngày nước, tỷ lệ sống đạt 93,33% a b c d e f Hình Các giai đoạn quy trình nhân giống lan Quế lan hương Ghi chú: a) Mẫu sạch; b) Mẫu tái sinh; c) Tạo thể chồi; d) Nhân nhanh chồi; e) Cây hoàn chỉnh; f) Cây trồng dớn trắng TÀI LIỆU THAM KHẢO Hongthongkham J., Bunnag S (2014) In vitro propagation and cryopreservation of Aerides odorata Lour (Orchidaceae) Pakistan journal of biological sciences, 17(5): 608 – 618 Huidrom S Devi, Sanglakpam I Devi, Thingbaijam D Singh (2013) High frequency plant regeneration system of Aerides odorata Lour through foliar and shoot tip culture Not Bot Horti Agrobo, 41(1):169 – 176 Nguyễn Quỳnh Trang, Vũ Thị Huệ, Khuất Thị Hải Ninh, Nguyễn Thị Thơ (2013) Nhân giống in vitro lan Phi điệp tím Tạp chí Khoa học Công nghệ Lâm nghiệp, 3(1): 16 – 21 Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Lý Anh, Vũ Ngọc 168 Lan, Trần Thế Mai (2011) Nhân giống in vitro loài lan Dendrobium fimbriatum Hook (Hoàng thảo long nhãn) Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(2): 263 – 271 Nguyễn Văn Song (2011) Nhân giống in vitro lan Kim điệp (Dendrobium chrysotoxuom) lồi lan rừng có nguy tuyệt chủng Tạp chí Khoa học Đại học Huế, 64: 127 – 136 Phạm Hoàng Hộ (2003) Cây cỏ Việt Nam – Quyển III NXB Trẻ Trần Hợp (1989) Phong lan Việt Nam NXB Nông nghiệp Trần Văn Minh, Nguyễn Văn Uyển (2001) Vi nhân giống Phong lan nhóm Dendrobium quy mơ cơng nghiệp Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 1: – TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 Công nghệ sinh học & Giống trồng USING IN VITRO CULTURE TECHNIQUE FOR PROPAGATION OF AERIDES ODORATA LOUR Nguyen Van Viet1, Nguyen Thi Huong2, Bui Van Thang3, Nguyen Thị Thu Hang4 1,2,3 Vietnam National University of Forestry Forestry Development Center in Hanoi SUMMARY Micropropagation of Aerides odorata Lour by in vitro cultural technique has been successfully studied The results showed that the optimal method for bud sterilization was soaked in 70% ethanol for minutes, in HgCl2 0.1% for 15 minutes and then culturing the samples with Knops medium, provided the proportion of purified samples was 94.33% and the regeneration rate was 88.67% The most knops basal medium supplemented with 6-benzylaminopurine (BAP) 0.5 mg/l, Kinetin (Ki) 0.2 mg/l, α-naphthalene acetic acid (NAA) 0.3 mg/l, the protocorm were big, plump, dark green and the coefficient of formed protocorm reached 4.78 Propagating the buds in Knops with BAP 0.8, Kinetin 0.4 mg/l, NAA 0.1 mg/l, coconut water 100 ml/l, potatoes extract 100ml/l, sucrose 30 g/l, agar g/l, the buds developed rapidly and were dark green, the coefficient of formed buds was 9.67 The rooted shoots 96.67%, the average number of roots was 3.46 per individual and the average length of roots was 3.83 cm when cultured after weeks in Knops medium supplemented with NAA 0.3 mg/l, coconut water 100 ml/l, potatoes extract 100 ml/l, sucrose 20 g/l, agar g/l The completed nurslings were trained and planted on the sphagnum moss immersed in days got the rate of living was 93.33% The plantlets were perfectly acclimatized under greenhouse condition with high humidity before transferred to field This procedure can be applied for mass production of Aerides odorata Lour to meet the commercial demand Keywords: Aerides odorata Lour., in vitro, Knops, propagation, protocorm, rooting Người phản biện : PGS.TS Hà Văn Huân Ngày nhận : 10/9/2016 Ngày phản biện : 05/10/2016 Ngày định đăng : 25/10/2016 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 6-2016 169 ... in vitro hoa lan từ phôi hạt ống nghiệm hoàn hảo thường sử dụng nhân giống lan Dendrobium Bài báo thông báo kết nghiên cứu nhân giống thành công Quế lan hương kỹ thuật nuôi cấy in vitro đạt hiệu... 163 Công nghệ sinh học & Giống trồng Bảng Thành phần loại môi trường nuôi cấy Quế lan hương in vitro Ký hiệu môi Giai đoạn nuôi cấy Thành phần môi trường nuôi cấy trường Nuôi cấy khởi động MTKĐ... (Aerides odorata Lour.) từ mảnh lá, nhiên quy trình thường kéo dài phải tạo chồi thông qua giai đoạn tạo callus Hiện nay, kỹ thuật nhân giống in vitro với hệ số nhân từ lan lớn Do đó, nhân giống in vitro