X¸c ®Þnh loμi vμ so s¸nh chuçi gen Cob hÖ gen ty thÓ cña s¸n d©y ë ng−êi ViÖt Nam pot

TCNCYH 29 (3) - 2004 24 Xác định loài và so sánh chuỗi gen Cob hệ gen ty thể của sán dây ở ngời Việt Nam Nguyễn Văn Đề 1 , Lê Thanh Hoà 2 1 Viện Sốt rét-KST-CT TƯ 2 Viện Công nghệ Sinh học Bệnh sán dây Taeniasis ở Việt Nam thờng gặp là sán dây bò và sán dây lợn phân bố rải rác ở nhiều nơi trong cả nớc. Bằng hình thái học và phơng pháp sinh học phân tử hệ gen ty thể, dựa trên phản ứng PCR, sán dây trởng thành ở ngời Việt Nam đợc xác định là loài Taenia asiatica, T. saginata và T. solium; các mẫu ấu trùng thu hồi từ ngời (bệnh nhân ấu trùng sán lợn) và từ lợn (lợn gạo) đợc xác định là ấu trùng của T. solium. Các mẫu sán dây Việt Nam có mức độ tơng đồng rất cao về thành phần nucleotit và axit amin qua phân tích gen cob thuộc hệ gen ty thể với các loài tơng ứng của Trung Quốc, Đài Loan và thế giới đợc sử dụng trong giám định. So sánh giữa 3 loài sán dây ở Việt Nam bởi gen Cob cho thấy sự sai khác ngoại loài giữa chúng. Qua phân tích phả hệ, các mẫu sán dây Việt Nam có quan hệ gần với các loài có nguồn gốc địa lý trong khu vực cùng với Việt Nam (Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Inđônêxia). I. Đặt vấn đề Bệnh sán dây (Taeniasis) ở ngời do ăn phải thịt lợn có ấu trùng sán dây lợn Cysticercus cellulosea (lợn gạo) hay thịt bò có ấu trùng sán dây bò Cysticercus bovis (bò gạo) cha đợc nấu chín, ấu trùng sán vào ruột nở ra con sán dây lợn hay sán dây bò trởng thành ký sinh và gây bệnh tại đó. Ngời bị nhiễm sán dây, đốt sán theo phân ra ngoài nh đoạn sơ mít (nên gọi là bệnh sán sơ mít). Những đốt sán ra ngoài môi trờng, bị thối rữa giải phóng trứng. Những trứng này bám vào rau cỏ, lợn hay trâu bò ăn phải, trứng vào dạ dày và ruột, nở ra ấu trùng chui qua thành ống tiêu hóa vào máu và tới các cơ vân tạo kén ở đó, ta gọi là lợn gạo hay bò gạo. Đặc biệt nếu ngời ăn phải trứng sán dây lợn sẽ bị bệnh ngời gạo còn gọi là bệnh ấu trùng sán lợn (Cysticercosis), có địa phơng còn gọi là sán cơ, sán não. Trên thế giới với hơn 100 triệu ngời mắc bệnh sán dây và ấu trùng sán lợn, bệnh phân bố rộng ở các nớc đang phát triển ở châu Phi, châu Mỹ La tinh và châu á, đặc biệt bệnh lu hành ở vùng nông thôn có vệ sinh kém, có tập quán ăn thịt cha nấu chín và lợn ăn phân ngời (Ichiro Miyazaki 1991)[5]. Tại Việt Nam, bệnh sán dây và ấu trùng sán lợn (Taeniasis/Cysticercosis) phân bố rải rác nhiều nơi trong cả nớc, có nơi tỷ lệ nhiễm sán dây 12,6%, nhiễm ấu trùng sán lợn 5,7% [1,2,4]. Từ mời năm nay trên thế giới và 4 năm nay (từ 2001) tại Việt Nam đã áp dụng phơng pháp sinh học phân tử để thẩm định và xác định thành phần loài giun sán ở Việt Nam, trong đó có sán dây Taenia, đặc biệt lần đầu tiên xác định loài sán dây châu á Taenia asiatica tại Việt Nam (Nguyễn Văn Đề, Lê Thanh Hoà 2001)[3]. Do hình thái của loài này khó phân biệt với Taenia saginata, nên việc sử dụng phơng pháp phân tử là hết sức cần thiết. Để xác định cơ cấu thành phần loài và phả hệ của sán dây ở ngời Việt Nam, chúng tôi tiến hành nghiên cứu với mục đích: - Xác định loài và so sánh chuỗi gen Cob của sán dây và ấu trùng của nó ở Việt Nam bằng phơng pháp phân tử. - Xác định vị trí của sán dây Taenia Việt Nam trong cây phả hệ. II. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Mẫu nghiên cứu TCNCYH 29 (3) - 2004 25 Mẫu nghiên cứu là đốt sán dây trởng thành thu hồi từ bệnh nhân và các ấu trùng sán dây thu thập từ ngời và lợn. Mẫu sán đợc cố định trong cồn 70% và bảo quản lạnh 20C, cho đến khi sử dụng để tách chiết ADN thực hiện giám định phân tử. 2. Tách chiết ADN tổng số ADN tổng số là toàn bộ axit deoxyribonucleic thu từ tế bào bao gồm hệ gen của nhân và của ty thể, đợc tách chiết bằng bộ hoá chất DNeasy Tissue Kit (QIAGEN Inc.) theo qui trình của nhà sản xuất. 3. Phản ứng PCR và giải trình trình tự Cặp mồi (primer) dùng cho phản ứng PCR là JB3F và JB4.5R cho độ dài phân đoạn gen cob thu nhận đợc là 652 cặp nucleotit [3]. Phân đoạn gen cob đã đợc nhân bản bằng PCR tiêu chuẩn với bộ hoá chất PCR Master Mix Kit (Promega). Chu trình nhiệt của PCR trên máy Perkin-Elmer (Perkin-Elmer Inc., Mỹ) gồm các bớc nh sau: 94 0 C /5 phút, tiếp theo là 35 chu kỳ: 94 0 C /1 phút, 50 0 C /1 phút và 72 0 C /1 phút, chu kỳ cuối kéo dài 10 phút ở 72 0 C. Sản phẩm PCR đợc tinh khiết bằng bộ hoá chất QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN Inc.) và đợc dòng hoá vào vectơ pCR2.1 của bộ hoá chất TA-cloning Kit (Invitrogen Inc.), sau đó chọn lọc nh đã giới thiệu (Lê Thanh Hoà và cs, 2002). Chuỗi ADN đợc giải trình tự trên máy giải trình tự động ABI 377 PRISM (Perkin- Elmer) và thực hiện với số lợng nhiều plasmid tái tổ hợp nhằm thu đợc kết quả chính xác. 4. Xử lý số liệu, xem xét quan hệ loài và phân tích kết quả Sắp xếp, đối chiếu trình tự tơng ứng của phân đoạn gen cob với các đoạn tơng ứng bằng hệ chơng trình máy tính AsemblyLIGN 1.9 và MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Inc.). So sánh đối chiếu và xử lý số liệu của tất cả các chuỗi bằng chơng trình GENDOC2.5. Thành phần axit amin đợc thu nhận bằng cách sử dụng bộ mã của hệ gen ty thể sán dẹt (platyhelminth genetic code) trong Ngân hàng Gen (bảng mã di truyền số 14) thông qua chơng trình GENDOC 2.5. Phân tích phả hệ bằng chơng trình MEGA2.1. Bảng 1: Các chuỗi nucleotit của gen cob dùng để so sánh trong giám định phân tử và xác định phả hệ các loài Taenia gây bệnh trên ngời phân lập tại Việt Nam Loài Nguồn gốc Ký hiệu Số đăng ký NHG Tác giả và đăng ký T. asiatica Đài Loan TasTW AB066580 Nakao, M. và cs (2002) T. saginata Trung Quốc TsaCN AB066581 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Trung Quốc TsoCN1 AB066570 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Trung Quốc TsoCN2 AB066571 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Trung Quốc TsoCN3 AB086256 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Thái Lan TsoTL AB066572 Nakao, M. và cs (2002) T. solium ấn Độ TsoIND AB066574 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Camerun TsoCR AB066579 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Equađo TsoEQ AB066576 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Inđônêxia TsoINX AB066573 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Tanzania TsoTZ1 AB066578 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Tanzania TsoTZ2 AY211881 Boa, M. và cs 2003GB) T. solium Mêhicô TsoMX AB066575 Nakao, M. và cs (2002) T. solium Brazil TsoBR AB066577 Nakao, M. và cs (2002) T. crassiceps Mỹ TcrUS AF216699 Lê Thanh Hoà và cs (2000) TCNCYH 29 (3) - 2004 26 Ghi chú: GB: Ngân hàng Gen (Gen Bank). III. Kết quả 1. Mẫu sán dây và ấu trùng sán lợn đợc thu thập Bảng 2: Danh sách các mẫu nghiên cứu thu nhận từ các loài Taenia sp gây bệnh tại Việt Nam sử dụng trong giám định phân tử và lập phả hệ quần thể. Loài Nguồn gốc Ký hiệu Trạng thái mẫu phân lập Thu nhận từ loài vật chủ Số đăng ký trong NHG của chuỗi gen cob Taenia sp Việt Nam (Hà Nội) TasVN1 Sán trởng thành Ngời AF429313 Taenia sp Việt Nam (Hà Tây) TspVN2 Sán trởng thành Ngời Đang đăng ký Taenia sp Việt Nam (Bắc Ninh) TspVN3 Sán trởng thành Ngời Đang đăng ký Taenia sp Việt Nam (Thanh Hoá) TspVN4 Sán trởng thành Ngời AY280802 Taenia sp Việt Nam (Thanh Hoá) TspVN5 Sán trởng thành Ngời AY280803 Taenia sp Việt Nam (Kon Tum) TspVN6 Sán trởng thành Ngời AY280804 Taenia sp Việt Nam (Bắc Kạn) TsoVN7 ấu trùng (cysticercus) Lợn AY280805 Taenia sp Việt Nam (Bắc Ninh) TsoVN8 ấu trùng (cysticercus) Ngời AY280806 Taenia sp Việt Nam (Bắc Ninh) TsoVN9 Sán trởng thành Ngời Đang đăng ký Taenia sp Việt Nam (Bắc Ninh) TsoVN10 Sán trởng thành Ngời Đang đăng ký Có tất cả 10 mẫu Taenia sp của Việt Nam bao gồm: Đốt sán dây trởng thành thu nhận từ ngời và ấu trùng sán dây lợn trên ngời, trên lợn đợc sử dụng để thu nhận phân đoạn gen cob và so sánh với các chủng/loài khác nhau của thế giới (Bảng 1 và 2). 2. Giải trình trình tự 652 nucleotit và 217 axit amin của gen Cob: TCNCYH 29 (3) - 2004 27 A. Nucleotit (cob) * 20 * 40 * 60 * 80 * 100 TasTW : ATGGGTGAGGCTTTTACTGGATATATATTACCTTGACATCAAATGTCATATTGGGCTGCTACTGTCTTGACATCTATAGTTGATAGATTGCCTATTTTTGGTAATGTTG: 109 TasVN1 : C : 109 TspVN2 : C : 109 TspVN3 : C A C : 109 TsaCN : G G T A : 109 TspVN4 : G G T A : 109 TspVN5 : G G T A : 109 TspVN6 : G G T A : 109 TsoCN1 : A A G G G T T A G A AT.A G A: 109 TsoCN2 : A A G G G T T A G A AT.A GA A: 109 TsoCN3 : A A G G G T T A G A AT.A G A: 109 TsoTL : A A G G G T T A G A AT.A GG A: 109 TsoINX : A A G G G T T A G A AT.A GG A: 109 TsoIND : A A G G T T A G A AT.A GG A: 109 TsoBR : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoEQ : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoMX : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoCR : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoTZ1 : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoTZ2 : A A G G G T T G A G A AT.A GG A: 109 TsoVN7 : A A G G G T T A G A AT.A GA A: 109 TsoVN8 : G T T A G A AT.A GG A: 109 TsoVN9 : G T T A G A AT.A GG A: 109 TsoVN10: G T T A G A AT.A GG A: 109 TcrUS : G A A T C G G G A A T A A T A CT G CC.AGAT: 109 //////// rót gän ///////////// * 560 * 580 * 600 * 620 * 640 * TasTW : TACAAATAGTGGTTCGAGTGTATATAATGTATGGCGTCAGGTTAAATTTTGATTGATTGTAAGTTTATTTTTTTCTTTAATTTATTTGGGTGGTTGCCATCCAGAAT: 652 TasVN1 : T : 652 TspVN2 : T : 652 TspVN3 : : 652 TsaCN : T G A T : 652 TspVN4 : T G A T : 652 TspVN5 : T G : 652 TspVN6 : T G C : 652 TsoCN1 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoCN2 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoCN3 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoTL : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoINX : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoIND : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoBR : GG G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoEQ : GG G G.A A AA G T A G T.C A A T T G.: 652 TsoMX : GG G A A AA G T A G T.C A A T T G.: 652 TsoCR : GG G A A AA G T A G T.C A A T T G.: 652 TsoTZ1 : GG G A A AA G T A G T.C A A T T G.: 652 TsoTZ2 : GG G A A AA G T A G T.C A A T T G.: 652 TsoVN7 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoVN8 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoVN9 : GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TsoVN10: GG A G A A AA G T A A G T.C A A T T G.: 652 TcrUS : T G.C T T GGT GTA TT T A.T A G G A G.C A A T T G.: 652 TCNCYH 29 (3) - 2004 28 B. Axit amin * 20 * 40 * 60 * 80 * 100 TasTW : MGEAFTGYILPWHQMSYWAATVLTSIVDSLPIFGNVVYKYVVGGFSVSGITLIRVLSVHICLGFVILGLMVIHMFYLHNSGSSNPLFSFNYLSDVIYFHSYFTVKDFVL: 109 TasVN1 : : 109 TspVN2 : : 109 TspVN3 : A.N G : 109 TsaCN : K : 109 TspVN4 : K : 109 TspVN5 : KG : 109 TspVN6 : KG : 109 TsoCN1 : S K G : 109 TsoCN2 : S K G : 109 TsoCN3 : S K G : 109 TsoTL : S K G : 109 TsoINX : S K G : 109 TsoIND : S K G : 109 TsoBR : S K G : 109 TsoEQ : S K G : 109 TsoMX : S K G : 109 TsoCR : S K G : 109 TsoTZ1 : S K G : 109 TsoTZ2 : S K G : 109 TsoVN7 : S K G : 109 TsoVN8 : S K G : 109 TsoVN9 : S K G : 109 TsoVN10: S K G : 109 TcrUS : E FV.PS S W KK Y.SG F.: 109 * 120 * 140 * 160 * 180 * 200 * TasTW : FMIVVMFVVFWLFVSPDALVDIEAYLEADSLNTPVSIKPEWYFLSFYAILRCIGSKIGGLVLIVAFLFFLWVPTNSGSSVYNVWRQVNFWLIVSLFFSLIYLGGCHPE: 217 TasVN1 : V: 217 TspVN2 : V: 217 TspVN3 : F V : 217 TsaCN : A S : 217 TspVN4 : A S : 217 TspVN5 : A S : 217 TspVN6 : A S P : 217 TsoCN1 : TS G S P S F N F : 217 TsoCN2 : TS G S P S F N F : 217 TsoCN3 : TS G S P S F N F : 217 TsoTL : TS G S P S F N F : 217 TsoINX : TS G S P S F N F : 217 TsoIND : TS G S P S F N F : 217 TsoBR : TS G S P S F N F : 217 TsoEQ : L TS G S P S S F N F : 217 TsoMX : TS G S P S F N F : 217 TsoCR : TS G S P S F N F : 217 TsoTZ1 : TS G S P S F N F : 217 TsoTZ2 : TS G S P S F N F : 217 TsoVN7 : TS G S P S F N F : 217 TsoVN8 : TS G S P S F N F : 217 TsoVN9 : TS G S P S F N F : 217 TsoVN10: TS G S P S F N F : 217 TcrUS : FGS V N L S P.S A T S G S.V I F V T : 217 Hình 1: So sánh trình tự 652 nucleotit (A) và 217 axit amin (B) của đoạn gen cob của tất cả các mẫu Taenia sp thu nhận tại Việt Nam (TspVN) với Taenia asiatica (Đài Loan), T. saginata (Trung Quốc), T. crassiceps (Mỹ) và các chủng khác nhau trên thế giới của loài T. solium. Ghi chú: Dấu (.) biểu thị giống với trình tự Taenia asiatica (chủng Đài Loan); sai khác về nucleotit hoặc axit amin đợc thể hiện bằng các chữ cái ký hiệu của chúng. Ký hiệu của các chủng/loài đợc trình bày ở Bảng 1 và 2. 3. So sánh gen Cob của các loài sán dây: 29 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Tr×nh tù Tas TW Tas VN1 Tas VN2 Tas VN3 Tsa CN Tsp VN4 Tsp VN5 Tsp VN6 Tso CN1 Tso CN2 Tso CN3 Tso TL Tso INX Tso IND Tso BR Tso EQ Tso MX Tso CR Tso TZ1 Tso TZ2 Tso VN7 Tso VN8 Tso VN9 Tso VN10 Tsrcob 1 TasTW 100 2 TasVN1 99 100 3 TspVN2 99 100 100 4 TspVN3 98 98 98 100 5 TsaCN 96 96 96 94 100 6 TspVN4 96 95 95 94 99 100 7 TspVN5 96 96 96 94 99 99 100 8 TspVN6 96 96 96 94 99 99 99 100 9 TsoCN1 83 83 83 82 84 84 84 83 100 10 TsoCN2 83 83 83 82 84 84 83 83 99 100 11 TsoCN3 83 83 83 82 84 84 84 83 100 99 100 12 TsoTL 83 83 83 82 84 84 83 83 99 99 99 100 13 TsoINX 83 83 83 82 84 84 83 83 99 99 99 99 100 14 TsoIND 83 83 83 82 84 84 83 83 99 99 99 99 99 100 15 TsoBR 83 83 83 82 84 84 84 84 98 98 98 98 98 98 100 16 TsoEQ 83 83 83 82 84 84 84 84 98 98 98 98 98 98 99 100 17 TsoMX 83 83 83 82 84 84 84 84 98 98 98 98 98 98 99 99 100 18 TsoCR 83 83 83 82 84 84 84 84 98 98 98 98 98 98 99 99 100 100 19 TsoTZ1 83 83 83 82 85 84 84 84 97 97 97 98 98 98 99 99 99 99 100 20 TsoTZ2 83 83 83 82 85 84 84 84 97 97 97 98 98 98 99 99 99 99 100 100 21 TsoVN7 83 83 83 82 84 84 83 83 99 100 99 99 99 99 98 98 98 98 97 97 100 22 TsoVN8 84 83 83 82 84 84 84 84 99 99 99 99 99 99 98 97 97 97 97 97 99 100 23 TsoVN9 84 83 83 82 84 84 84 84 99 99 99 99 99 99 98 97 97 97 97 97 99 100 100 24 TsoVN10 84 83 83 82 84 84 84 84 99 99 99 99 99 99 98 97 97 97 97 97 99 100 100 100 25 Tcrcob 77 77 77 77 78 78 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 100 TCNCYH 29 (3) - 2004 B¶ng 3: KÕt qu¶ so s¸nh tr×nh tù nucleotit cña c¸c loµi Taenia ViÖt Nam víi c¸c loµi t−¬ng øng cña thÕ giíi TCNCYH 29 (3) - 2004 30 So sánh giải trình trình tự nucleotis trong bảng 3 cho thấy mức độ tơng đồng của T.asiatica Việt Nam so với T. asiatica Đài Loan có mức độ tơng đồng 98-99%. T. saginata Việt Nam có mức độ tơng đồng với T. saginata Trung Quốc 99%. T. solium Việt Nam có mức độ tơng đồng 99-100% với T. solium Trung Quốc và 97-99% so với các loài T.solium của các nớc khác trên thế giới đợc so sánh. Sự sai khác giữa T. saginata VN và T. solium VN là 16%; giữa T. saginata VN với T. asiatica VN là 4-5%; giữa T. asiatica VN với T. solium VN là 17%. 4. Vị trí của sán dây Việt Nam trong hệ thống phả hệ TsoCN1 TsoCN3 TsoCN2 TsoVN7 TsoIND TsoTL TsoINX T soVN8 TsoVN9 TsoVN10 TsoTZ1 TsoTZ2 TsoBR TsoEQ TsoMX TsoCR TasVN1 TspVN2 TspVN3 TasTW TsaCN TspVN4 TspVN5 TspVN6 TcrUS 0.02 NUCLEOTIT B A Hình 2: Phân tích phả hệ và xem xét mối quan hệ họ hàng của các mẫu Taenia sp của Việt Nam và các chủng/loài thế giới liệt kê ở Bảng 1 và 2 Qua phân tích thành phần nucleotit bằng chơng trình MEGA2.1; phân thành 2 nhóm chính: nhóm A bao gồm các chủng Taenia solium; nhóm B bao gồm các chủng/loài T. asiatica và T. saginata; T. crassiceps (TcrUS) tách riêng thành nhóm ngoại hợp. Ghi chú: Các mẫu Taenia sp của Việt Nam (TspVN) thuộc các loài khác nhau đợc bôi đậm; các chủng T. solium khác nhau của thế giới ký hiệu theo Bảng 1 và 2. TasTW: T. asiatica Đài Loan; TasTW: T. asiatica Việt Nam; TsaCN: T. saginata Trung Quốc. Hệ số tiến hoá đợc tính là 0,02 trong phân tích phả hệ (Kumar và cs, 2001). TCNCYH 29 (3) - 2004 31 Các mẫu sán dây Việt Nam có quan hệ họ hàng gần với các loài của giống Taenia có nguồn gốc địa lý trong khu vực cùng với Việt Nam (Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Inđônêxia). IV. Bàn luận So sánh trình tự nucleotit và axit amin của phân đoạn gen cob của tất cả các mẫu Taenia sp Việt Nam và thế giới đợc giới thiệu ở bảng 1 và 2. Kết quả cho thấy, TspVN2 và TspVN3 có mức độ tơng đồng cao với T. asiatica của Đài Loan (TasTW) và TasVN1, trớc đây đ giám định là sán dây châu á (Nguyễn Văn Đề và cs, 2001; Lê Thanh Hoà và cs, 2002) là 98-99%. TspVN4, TspVN5, phân lập trên ngời tại Thanh Hoá và TspVN6 thu nhận từ bệnh nhân là ngời dân tộc tại Kon Tum, cho mức độ tơng đồng rất cao về nucleotit và axit amin với sán dây bò Trung Quốc (TsaCN) là 99%, từ đó có cơ sở kết luận chúng là T. saginata. Các mẫu còn lại phân lập trên lợn và ngời bao gồm ấu trùng sán dây lợn trên lợn (TspVN7), ấu trùng sán dây lợn trên ngời (TspVN8) và 2 mẫu sán trởng thành thu nhận từ ngời ở Bắc Ninh đợc xác định là T. solium do chúng có mức độ tơng đồng cao về thành phần nucleotit và axit amin với các chủng/loài T. solium của Trung Quốc là 99-100% và thế giới là 97-99% (Bảng 3). Nh vậy, bằng phơng pháp phân tử đã xác định các loài sán dây gây bệnh trên ngời tại Việt Nam, bao gồm T. asiatica, T. saginata và T. solium từ tất cả các dạng mẫu vật thu nhận khác nhau. Giữa 3 loài sán dây Việt Nam cũng có sự sai khác nhau ngoại loài. Bằng chơng trình MEGA2.1, với thông số tiến hoá thấp (minimum evolution; ME), các mẫu sán dây Taenia sp Việt Nam và các chủng/loài của thế giới liệt kê ở Bảng 1 và 2 đợc so sánh về thành phần nucleotit và xem xét quan hệ phả hệ. Sơ đồ mối quan hệ của các chủng/loài đợc thể hiện ở Hình 1 và bảng 3. Có 2 nhóm chính đợc hình thành: nhóm A bao gồm các chủng/mẫu nghiên cứu thuộc sán dây lợn (T. solium) trong đó có 4 mẫu của Việt Nam (TspVN7-10); nhóm B bao gồm 2 nhóm phụ gồm các chủng/loài/mẫu thuộc T. asiatica và chủng/loài/mẫu thuộc T. saginata. Loài T. crassiceps có nguồn gốc từ Mỹ (TcrUS) đ ợc sử dụng nh là một thành phần ngoại hợp (out-group) trong phân tích phả hệ. Trong nhóm A, các mẫu T. solium của Việt Nam (TspVN7-10) hoàn toàn đứng gần với các chủng có nguồn gốc châu á, đặc biệt là Trung Quốc (TsoCN1; TsoCN2; TsoCN3); Thái Lan (TsoTL); Inđônêxia (TsoINX) và ấn Độ (TsoIND). Hiện nay, về đặc tính di truyền, T. solium châu á khác với châu âu, Phi và Mỹ (Nakao và cs, 2002). Qua phân tích phả hệ chúng ta thấy các mẫu T. solium của Việt Nam hoàn toàn thuộc nhóm châu á. Trong nhóm B, các mẫu TspVN1-3 của Việt Nam là T. asiatica nên cùng nhóm với T. asiatica của Đài Loan (TasTW); các mẫu TspVN4-6 đợc giám định là T. saginata thuộc nhóm phụ cùng với T. saginata của Trung Quốc (TsaCN). Do có cùng quan hệ tiến hoá, trớc đây 2 loài T. asiatica và T. saginata đợc ghi nhận là một loài có tên gọi là T. saginata asiatica. Ngày nay, chúng thuộc 2 loài riêng biệt nhng có quan hệ họ hàng gần nhau (Loos-Frank, 2001). VI. Kết luận Đốt sán dây ở ngời Việt Nam đợc xác định là Taenia saginata, Taenia solium, Taenia asiatica (bằng hình thái học và bằng sinh học phân tử với hệ gen ty thể). ấu trùng sán dây lợn trên ngời và lợn đợc xác định là loài Taenia solium Hiện nay mới xác định loài T. solium gây bệnh ấu trùng sán ở ngời Việt Nam. So sánh giữa 3 loài sán dây ở Việt Nam, chúng có sự sai khác ngoại loài với nhau. TCNCYH 29 (3) - 2004 32 Các mẫu sán dây Việt Nam có quan hệ họ hàng gần với các loài của giống Taenia có nguồn gốc địa lý trong khu vực cùng với Việt Nam (Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Inđônêxia). tài liệu tham khảo chính 1. Nguyễn Văn Đề, Kiều Tùng Lâm, Lê Văn Châu, Lê Đình Công, Đặng Thanh Sơn, Hà Viết Viên, Nguyễn Thị Tân (1998). Nghiên cứu bệnh sán lá, sán dây. Thông tin phòng chống sốt rét và các bệnh ký sinh trùng. 2: 29-32. 2. Nguyễn Văn Đề, Đặng Cẩm Thạch, Annete Eharte, Hà Viết Viên, Đoàn Hạnh Nguyên, Lê Văn Châu, Lê Đình Công, Jozef Brant (2001). Nghiên cứu dịch tễ, chẩn đoán và điều trị bệnh ấu trùng sán lợn tại Bắc ninh. Tạp chí phòng chống sốt rét và các bệnh ký sinh trùng. 3: 87-93 3. Nguyễn Văn Đề, Lê Thanh Hoà, Nguyễn Quốc Doanh, Nguyễn Bích Nga (2001). Thông báo loài sán dây mới (Taenia asiatica) ký sinh ở ngời Hà Nội, Việt Nam. Tạp chí phòng chống sốt rét và các bệnh ký sinh trùng. 3: 80-85 4. AL.Willingham III, Nguyen Van De, Nguyen Quoc Doanh, Le Dinh Cong, Tran Van Dung, P. Dorny, Phung Dac Cam & A. Dalsgaard (2003). Current stutus of Cysticercosis in Vietnam. The current stutus of parasitic deaseases in Vietnam. Southeast asian Journal of Tropical Medicine and Public Health. Volume 34 Supplement 1, 5. Ichiro Miyazaki (1991). Taeniasis/ Helminthic Zoonoses. International Medical Foundation of Japan. Tokyo. Summary Identification and comparison of mitochondrial-encoded cob gene in Human Taeniasis in Vietnam Most of human Taeniasis in Vietnam caused by Taenia saginata, Taenia solium and Taenia asiatica. These diseases are spread and common in the country. A portion of 652 bp of the mitochondrial-encoded cob gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from different Taenia sp samples of different forms of adult and Cysticercus isolated in Vietnam. The nucleotide and amino acid sequences of the Vietnamese Taenia sp samples were comparatively aligned with the known corresponding sequences of Taenia asiatica (geographical origin: Taiwan); Taenia saginata (China); Taenia solium (China and global strains), and other related Taenia species (GenBank and published data) using special programs. Molecular-based analysis revealed that Taenia asiatica, Taenia saginata and Taenia solium was identified (from tapeworm patients) and Taenia solium (from Cysticercosis patients and pork). Phylogenetic analysis indicated that the Vietnamese T. solium is clustered with the Asian T. solium species; while the Vietnamese T. asiatica with Taiwanese and T. saginata together with the Chinese T. saginata isolate. . Tsp VN4 Tsp VN5 Tsp VN6 Tso CN1 Tso CN2 Tso CN3 Tso TL Tso INX Tso IND Tso BR Tso EQ Tso MX Tso CR Tso TZ1 Tso TZ2 Tso VN7 Tso VN8 Tso VN9 Tso VN10 Tsrcob 1 TasTW. TsoCN1 TsoCN3 TsoCN2 TsoVN7 TsoIND TsoTL TsoINX T soVN8 TsoVN9 TsoVN10 TsoTZ1 TsoTZ2 TsoBR TsoEQ TsoMX TsoCR TasVN1 TspVN2 TspVN3