NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT NỘI SINH CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP CHẤT ĐIỀU HOÀ SINH TRƯỞNG IAA. GAs (GIBBERELIC ACID) VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ THỬ NGHIỆM TRÊN CÂY LAN GIẢ HẠC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN NĂM 2022 NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT NỘI SINH CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP CHẤT ĐIỀU HOÀ SINH TRƯỞNG IAA (INDOLE-3-ACETIC ACID), GAs (GIBBERELIC ACID) VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ THỬ NGHIỆM TRÊN CÂY LAN GIẢ HẠC (DENDROBIUM SPP.) Thuộc nhóm ngành: Khoa học Tự nhiên LÂM ĐỒNG, THÁNG NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN NĂM 2021 NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT NỘI SINH CĨ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP CHẤT ĐIỀU HỒ SINH TRƯỞNG IAA (INDOLE-3-ACETIC ACID), GAs (GIBBERELIC ACID) VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ THỬ NGHIỆM TRÊN CÂY LAN GIẢ HẠC (DENDROBIUM SPP.) Thuộc nhóm ngành: Khoa học Tự nhiên Sinh viên thực hiện: Trương Thị Yến Nhi Nam, Nữ: Nữ Dân tộc: Kinh Lớp, khoa: Lớp CSK43, Khoa: Sinh học Năm thứ: 03/Số năm đào tạo: 04 Ngành học: Công nghệ sinh học Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Bích Liên LÂM ĐỒNG, THÁNG NĂM 2022 CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Lâm Đồng, ngày 24 tháng 05 năm 2022 BÁO CÁO KẾT QUẢ TỰ ĐÁNH GIÁ ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ SINH VIÊN 2022 I Thơng tin chung đề tài: Tên đề tài: Nghiên cứu tuyển chọn vi sinh vật nội sinh có khả tổng hợp chất điều hoà sinh trưởng IAA (indole-3-acetic acid), GAs (Gibberelic acid) bước đầu đánh giá thử nghiệm lan giả hạc (Dendrobium spp.) Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tuyển chọn vi sinh vật nội sinh có khả tổng hợp chất điều hịa sinh trưởng IAA (indole – – acetic acid), GAs (Gibberelic acid) để hỗ trợ dinh dưỡng cho phong lan nhằm hạn chế sử dụng nguồn phân bón chất kích thích sinh trưởng có nguồn gốc tổng hợp hóa học góp phần bảo vệ mơi trường Chủ nhiệm đề tài: Trương Thị Yến Nhi Giáo viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Bích Liên Tổng kinh phí thực hiện: 5.000.000 VNĐ (Bằng chữ: năm triệu đồng) Thời gian thực hiện: Bắt đầu: tháng 11 năm 2021 Kết thúc: tháng 05 năm 2022 Danh sách thành viên thực đề tài nêu gồm: STT Họ tên Mã số SV Lớp/ Khoa Trương Thị Yến Nhi 1911319 CSK 43 – Khoa Sinh học Nguyễn Đình Gia Hy 1812600 CSK 42 – Khoa Sinh học Nguyễn Khả Như 2015576 SHK44CLC – Khoa Sinh học Lê Thị Hải Yến 2012340 SHK44CLC – Khoa Sinh học II Nội dung tự đánh giá kết thực đề tài: Về sản phẩm khoa học 1.1 Danh mục sản phẩm hoàn thành STT Tên sản phẩm Số lượng Xuất sắc Đạt Khối lượng Không Xuất đạt sắc Đạt Chất lượng Không Xuất đạt sắc Đạt Không đạt Chủng giống vi sinh vật nội × × × × × × x x x sinh Chế phẩm vi sinh vật nội sinh Báo cáo kết đánh giá ảnh hưởng chủng vi sinh vật đến sinh trưởng phong lan Minh chứng: - Chế phẩm vi sinh vật nội sinh (dạng bột, dạng viên nén) - Cây phong lan Giả hạc trồng giá thể 1.2 Danh mục sản phẩm khoa học dự kiến ứng dụng, chuyển giao (nếu có): STT Tên sản phẩm Thời gian dự Cơ quan dự kiến Ghi kiến ứng dụng ứng dụng Chế phẩm vi sinh hỗ trợ Tháng năm Khoa Sinh học – sinh trưởng phát triển 2022 Trường Đại học phong lan Đà Lạt 1.3.Danh mục sản phẩm khoa học ứng dụng (nếu có): STT Tên sản phẩm Thời gian ứng Tên quan ứng dụng dụng Ghi Về đóng góp đề tài: Nghiên cứu tuyển chọn vi sinh vật nội sinh có khả tổng hợp chất điều hòa sinh trưởng IAA (indole – – acetic acid), GAs (Gibberelic acid) để hỗ trợ dinh dưỡng cho phong lan nhằm hạn chế sử dụng nguồn phân bón chất kích thích sinh trưởng có nguồn gốc tổng hợp hóa học góp phần bảo vệ mơi trường Về hiệu đề tài: 3.1 Hiệu kinh tế Bộ chủng giống vi sinh vật nội sinh rễ phong lan ứng dụng thực tiễn giúp tăng tỷ lệ sống phong lan giá thể từ mô, thúc đẩy phát triển nhanh chóng mà khơng cần sử dụng tới phân tan chậm, phân hóa học Từ đó, giảm sử dụng phân bón thuốc bảo vệ thực vật giảm chi phí đầu tư, nâng cao hiệu kinh tế cho người nông dân Sản phẩm đề tài chế phẩm vi sinh vật nội sinh rễ phong lan sản xuất dạng viên nén tan hồn tồn nước, có giá thành sản xuất thấp, dễ tiếp cận ứng dụng cho tất hệ thống tưới nay, từ tiết kiệm chi phí nhân cơng chăm sóc, ni trồng phong lan 3.2 Hiệu xã hội Sản phẩm đề tài giống vi sinh vật nội sinh phong lan có khả sinh tổng hợp IAA GAs giúp tăng tỷ lệ sống, thúc đẩy phát triển tốt giảm sử dụng loại phân bón, thuốc bảo vệ thực vật, từ giảm thiểu nhiễm mơi trường cải thiện môi trường sinh thái Bên cạnh đó, chế phẩm vi sinh sản xuất dạng viên nén tan hồn tồn nước, có khả ứng dụng cao an toàn với người sử dụng III Tự đánh giá, xếp loại kết thực đề tài Về tiến độ thực hiện: (đánh dấu  vào ô tương ứng): - Nộp hồ sơ hạn  - Nộp chậm từ 30 ngày đến 06 tháng - Nộp hồ sơ chậm 06 tháng Về kết thực đề tài: - Xuất sắc - Đạt  - Không đạt Giải thích lý do: - Đề tài thực 02 nội dung đăng ký thuyết đề tài đáp ứng mục tiêu đề tài Cam đoan nội dung Báo cáo trung thực; Chủ nhiệm thành viên tham gia thực đề tài không sử dụng kết nghiên cứu người khác trái với quy định pháp luật CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI Trương Thị Yến Nhi CHỦ TỊCH HĐ NGHIỆM THU LỜI CAM ĐOAN Chúng xin cam đoan nghiên cứu thực Phịng thí nghiệm Cơng nghệ Vi sinh, trường Đại học Đà Lạt Những hình ảnh, kết quả, số liệu chưa công bố tài liệu Chúng xin chịu trách nhiệm với lời cam đoan Đà Lạt, ngày 24 tháng 05 năm 2022 Nhóm nghiên cứu Trương Thị Yến Nhi LỜI CẢM ƠN Chúng xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Khoa Trưởng Nguyễn Thị Bích Liên, anh Phan Trung Trực, chị Lê Thị Hồng chị Mai Thị Mỹ Mỹ Lanh, người đồng hành, hỗ trợ giúp đỡ học tập, nghiên cứu, đặc biệt thời gian thực đề tài nghiên cứu khoa học “Nghiên cứu tuyển chọn vi sinh vật nội sinh có khả tổng hợp chất điều hoà sinh trưởng IAA (indole-3-acetic acid), GAs (Gibberelic acid) bước đầu đánh giá thử nghiệm lan giả hạc (Dendrobium spp.)’’ Chúng xin cảm ơn tất thầy cô giảng viên Trường Đại học Đà Lạt, người tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện để sinh viên thực đề tài nghiên cứu Cảm ơn gia đình, anh chị, bạn bè ủng hộ, động viên giúp đỡ trình nghiên cứu đề tài Trong trình nghiên cứu chúng tơi khơng thể tránh khỏi thiếu sót Vì chúng tơi mong nhận góp ý quý thầy cô định hướng phát triển đề tài Xin chân thành cảm ơn Nhóm nghiên cứu MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH I DANH MỤC CÁC BẢNG II DANH MỤC BIỂU ĐỒ III DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT IV MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY PHONG LAN 1.1.1 Vị trí hệ thống phân loại thực vật phân bố 1.1.2 Tình hình canh tác giá trị kinh tế phong lan 1.1.2.1 Tình hình canh tác giá trị kinh tế giới 1.1.2.2 Tình hình canh tác giá trị kinh tế Việt Nam 1.1.2.3 Tình hình canh tác giá trị kinh tế Lâm Đồng 1.2 TỔNG QUAN VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH THỰC VẬT 1.2.1 Vi sinh vật nội sinh thực vật 1.2.2 Vi sinh vật nội sinh sản xuất chất điều hoà sinh trưởng IAA 1.2.3 Vi sinh vật nội sinh sản xuất chất điều hoà sinh trưởng GAs 1.2.4 Vi sinh vật nội sinh phong lan 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU Ở THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 ĐỐI TƯỢNG, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 11 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 11 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.2.1 Phương pháp thu mẫu rễ phong lan 11 2.2.2 Phương pháp phân lập mẫu rễ phong lan 11 2.2.2 Phương pháp định tính khả sinh tổng hợp chất kích thích sinh trưởng IAA 12 2.2.3 Phương pháp định lượng khả sinh tổng hợp chất kích thích sinh trưởng IAA 12 2.2.4 Phương pháp định lượng khả sinh tổng hợp chất kích thích sinh trưởng GAs 13 2.2.5 Nghiên cứu, xây dựng bước nhân nuôi sinh khối vi khuẩn nội sinh 13 2.5.6 Đánh giá ảnh hưởng chủng vi khuẩn nội sinh tuyển chọn đến sinh trưởng phát triển trồng 14 2.5.7 Phương pháp xử lý số liệu 14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VI SINH VẬT NỘI SINH TRONG MẪU RỄ PHONG LAN 15 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP IAA CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH 17 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG GAS 19 3.4 XÂY DỰNG CÁC BƯỚC TẠO CHẾ PHẨM VI KHUẨN NỘI SINH RỄ CÂY PHONG LAN 21 3.4.1 Nghiên cứu điều kiện lên men thu nhận sinh khối vi khuẩn nội sinh rễ phong lan có khả sinh tổng hợp IAA 21 3.4.2 Nghiên cứu điều kiện lên men thu nhận sinh khối vi khuẩn nội sinh rễ phong lan có khả sinh tổng hợp GAs 22 3.4.3 Xây dựng bước lên men thu sinh khối vi khuẩn nội sinh phong lan có khả sinh tổng hợp IAA GAs 23 3.5 ĐÁNH GIÁ SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT NỘI SINH ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN CỦA CÂY PHONG LAN CON 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 KẾT LUẬN 28 KIẾN NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC 35 Hình 3.7 So sánh khác biệt số trồng nghiệm thức Kết từ bảng 3.8 cho thấy nghiệm thức 04 bổ sung đồng thời hai chủng vi khuẩn nội sinh có khả sinh tổng hợp IAA GAs cho thấy tác dụng chúng trồng lớn so với nghiệm thức đối chứng (NT1), nghiệm thức bổ sung riêng lẽ chủng vi khuẩn sinh tổng hợp IAA GAs (NT2 NT3) với tỷ lệ sống lên đến 96% tốc độ tăng trưởng chiều cao 0,36 cm/tuần Có thể thấy kết hợp hai chủng vi khuẩn có tác dụng tăng tỷ lệ sống phong lan chậu, thúc đẩy phát triển chiều cao cải thiện tình trạng so với sử dụng riêng lẽ chủng vi khuẩn không bổ sung chủng vi khuẩn nội sinh tuyển chọn 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ 20 mẫu rễ phong lan thu thập khoa Sinh học phân lập 10 chủng vi khuẩn nội sinh ký hiệu từ PL01 đến PL10 Chủng vi khuẩn PL04 có khả sinh tổng hợp IAA cao với hàm lượng đạt 107,14 μg/mL sau ngày ni cấy Chủng vi khuẩn PL09 có khả sinh tổng hợp GAs cao chủng vi khuẩn nội sinh phân lập 0.3428 mgGAs/mL Điều kiện thích hợp để nhân sinh khối chủng vi khuẩn PL04 có khả sinh tổng hợp IAA môi trường I3, pH 7,5 nhiệt độ 37℃ vịng 36 Điều kiện thích hợp để nhân sinh khối chủng vi khuẩn PL09 có khả sinh tổng hợp GAs môi trường G3, pH 7,5 nhiệt độ 37℃ vòng 36 Sử dụng đồng thời hai chủng vi khuẩn PL04 PL09 có tác dụng tăng tỷ lệ sống, thúc đẩy phát triển chiều cao cải thiện tình trạng phong lan Kiến nghị - Tiếp tục định danh chủng vi khuẩn tuyển chọn PL04 PL09 - Tiếp tục phát huy tính đề tài, triển khai đánh giá chuyên sâu hoạt tính sinh học chủng vi khuẩn nội sinh tuyển chọn - Tiếp tục đánh giá ảnh hưởng chủng vi khuẩn nội sinh đến trình sinh trưởng, phát triển hoa phong lan trưởng thành - Xây dựng thêm nghiệm thức, bổ sung đồng thời 10 chủng vi khuẩn phân lập được, để theo dõi sinh trưởng phát triển phong lan có khác biệt so với nghiệm thức bổ sung chủng vi khuẩn sản sinh chất điều hoà sinh trưởng IAA GAs 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO Agrios, G.N., Ed., Plant Pathology, 4th ed., New York: Academic, 1997 Alibrandi, P., Lo Monaco, N., Calevo, J., Voyron, S., Puglia, A M., Cardinale, M., & Perotto, S (2020) Plant growth promoting potential of bacterial endophytes from three terrestrial Mediterranean orchid species Plant Biosystems - An International Journal Dealing with all Aspects of Plant Biology, 1-12 https://doi.org/10.1080/11263504.2020.1829731 Alibrandi, P., Schnell, S., Perotto, S., & Cardinale, M (2020) Diversity and Structure of the Endophytic Bacterial Communities Associated With Three Terrestrial Orchid Species as Revealed by 16S rRNA Gene Metabarcoding In Frontiers in Microbiology (Vol 11) Frontiers Media SA https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.604964 Belimov, A.A., Ivanchikov, A.Yu., Yudkin, L.V., Khamova, O.F., Postavskaya, S.M., Popolzukhina, P.V., Shmakova, A.A., and Kozlova, G.Ya., New Strains of Associative Growth-Stimulating Bacteria Dominating the Rhizoplane of Barley Seedlings: Characterization and Introduction, Mikrobiologiya, 1999, vol 68, no 3, pp 392–397 Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2015) TCVN 10784:2015 Vi sinh vật - Xác định khả sinh tổng hợp axit 3-indol-axetic (IAA) Truy cập http://tieuchuan.mard.gov.vn/Documents/Uploads/TCVN10784_2015_915270 pdf Bottini, R., Cassán, F & Piccoli, P Gibberellin production by bacteria and its involvement in plant growth promotion and yield increase Appl Microbiol Biotechnol 65, 497–503 (2004) Calaway H Dodson (2021) Orchid Plant Britannica Truy cập tại: https://www.britannica.com/contributor/Calaway-H-Dodson/755 Chand, K., Shah, S., Sharma, J., Paudel, M R., & Pant, B (2020) Isolation, characterization, and plant growth-promoting activities of endophytic fungi from a wild orchid Vanda cristata Plant Signaling & Behavior, 15(5) Đàm Văn Toàn, Phạm Quang Thu, Đặng Như Quỳnh, Nguyễn Minh Chí (2018) Vi sinh vật nội sinh sử dụng quản lý bệnh rụng mùa mưa cao su Đông Nam Bộ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, 22, 25-32 Đặng Thị Ngọc Thanh, Nguyễn Thị Xuân Mỵ, Cao Ngọc Điệp (2016) Sự sản xuất IAA siderophore chủng vi khuẩn liên hiệp thực vật ảnh hưởng lên tăng trưởng bắp (Zea mays L.) trồng chậu Tap cḥı́ Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 47, 59-67 Đào Ngọc Quang Đặng Như Quỳnh (2014) Ảnh hưởng vi sinh vật nội sinh thông nhựa (Pinus merkusii) đến số tập tính sâu róm thơng (Dendrolimus punctatus) Tạp chí Khoa học Lâm nghiệp, 4, 3534-3544 Đào Thanh Vân, Đặng Thị Tố Nga (2008) Giáo trình Hoa lan Nhà xuất Nông nghiệp Datta C, Basu P (2000) Indole acetic acid production by a Rhizobium species from root nodules of a leguminous shrub, Cajanus cajan Microbiological Research, 155123 Đinh Thị Dinh, Đặng Văn Đông, Trần Duy Quý (2014) Ảnh hưởng vùng sinh thái xử lý gibberellin (GA3) tới sinh trưởng hoa giống lan đai châu trắng đốm tím Tạp chí khoa học phát triển, 12, (7):1049-1057 Elena A Tsavkelova; Tatiana A Cherdyntseva; Svetlana G Botina; Alexander I Netrusov (2007) Bacteria associated with orchid roots and microbial production of auxin., Microbiological Research, 162(1), 69–76 doi:10.1016 Eline H V., & Louisa M L., (2016).Beneficial microbes affect endogenous mechanisms controlling root development, National library of medicine, 21(3): 218–229 doi: 10.1016 Gusmiaty, M Restu, B Bachtiar and SH Larekeng (2019) Gibberellin and IAA production by Rhizobacteria from Various Private forest Earth and Environmental Science doi:10.1088/1755-1315/270/1/012018 Héctor Herrera, Alejandra Fuentes, Javiera Soto, Rafael Valadares, Cesar Arriagad Orchid-Associated Bacteria and Their Plant Growth Promotion Capabilities Orchids Phytochemistry, Biology and Horticulture, 175-200 Hồng Xn Lam (2016) Tình hình sản xuất tiêu thụ lan Cattleya, Dendrobium, Oncidium giới Việt Nam http://kenhantan.com/2016/06/12/tinhhinh-san-xuat-va-tieu-thu-lan-cattleya-dendrobium-oncidium-tren-the-gioi-vao-viet-nam/ IvaKamneva, S.V and Muronets, E.M., Genetic Control of the Processes of Interaction of Bacteria with Plants in Associations, Genetika, 1999, vol 35, no 11, pp 1480–1494 Ivanova, E.G., Doronina, N.V., and Trotsenko, Yu.A (2001) Aerobic Methylobacteria Are Capable of Synthesizing Auxins Mikrobiologiya, 70,(4), pp 452–458 Jacobs, M J., Bugbee, W M and Gabrielson, D A (1985) Enumeration, location, and characterization of endophytic bacteria within sugar beet roots Revue canadienne de botanique, 63(7): 1262-1265 Keswani, C., Singh, SP, García-Estrada, C., Mezaache-Aichour, S., Glare, TR, Borriss, R., et al (2021) Biosynthesis and beneficial effects of microbial gibberellins on crops for sustainable agriculture Journal of Applied Microbiology, 132 15971615 Kuldau, G.; Bacon, C (2008) Clavicipitaceous endophytes: Their ability to enhance resistance of grasses to multiple stresses Biological Control Special Issue: Endophytes, 46 (1): 57–71 Lê Thị Xã, Đỗ Thành Luân, Nguyễn Khởi Nghĩa (2020) Khảo sát khả kích thích nảy mầm sinh trưởng rau muống số dòng vi khuẩn cố định đạm tổng hợp IAA Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 56, 37-46 Lebuhn, M., Hartmann, A., 1993 Method for the determination of indole-3-acetic acid and related compounds of L-tryptophan catabolism in soils Journal of Chromatography A 629(2): 255-266 Libbert, E and Risch, H., Interactions between Plants and Epiphytic Bacteria Regarding Their Auxin Metabolism V Isolation and Identification of the IAA-Producing and Destroying Bacteria from Pea Plants, Physiol Plant., 1969, vol 22, pp 51– 58 Lương Thị Hồng Hiệp Cao Ngọc Điệp (2011) Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh cúc Xuyến chi (Wedella trilobata (L.) Hitche.) kỹ thuật PCR Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 18a, 168-176, Malonek, S., Bömke, C., Bornberg-Bauer, E., Rojas, M C., Hedden, P., Hopkins, P., & Tudzynski, B (2005) Distribution of gibberellin biosynthetic genes and gibberellin production in the Gibberella fujikuroi species complex Phytochemistry, 66(11), 1296-1311 Mishke, I.V., Mikrobnye fitogormony v rastenievodstve (Microbial Phytohormones in Agriculture), Riga: Zinatne, 1988 Moudi Maryam, Rusea Go, Christina Yong Seok Yien, Mohd Nazre Saleh.2013 A Review on Molecular Systematic of the Genus Dendrobium Sw Acta Biologica Malaysiana (2013) 2(2): 71-78 Nguyễn Hải Vân Nguyễn Thị Minh (2017) Nghiên cứu sử dụng vi khuẩn nội sinh phân lập từ vùng sinh thái khác Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 15(5): 605-618 Nguyễn Huyền (2019) TP.HCM có tiềm lớn trồng hoa lan xuất Tạp chí Tổng cục Hải quan Truy cập tại: https://haiquanonline.com.vn/tphcm-cotiem-nang-lon-trong-trong-hoa-lan-xuat-khau-103679.htmL Nguyễn Khoa Trưởng, Trần Văn Tiến, Lê Thị Anh Tú, Phan Trung Trực, Huỳnh Dương Thị Minh Nguyệt, Mai Thị Mỹ Lanh (2021) Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật nội sinh tổng hợp INDOLE-3-ACETIC ACID (IAA) hệ rễ cà phê (Coffea) Đắk Lắk Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, 1, 38-43 Nguyễn Thị Huỳnh Như, Nguyễn Hữu Hiệp, Nguyễn Minh Đời, Trần Nguyễn Nhật Khoa, Thái Trần Phương Minh (2013) Phân lập dịng vi khuẩn nội sinh có khả tổng hợp IAA cố định đạm chuối Tạp chí Khoa học Trường đại học Cần Thơ, 27, 24-31 Nguyễn Thị Minh Đỗ Minh Thu (2017) Nghiên cứu phân lập tuyển chọn vi sinh vật nội sinh từ vùng sinh thái đất mặn huyện Giao Thuỷ, tỉnh Nam Định Tạp chí khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 15 (8): 1022-1032 Nie, S., Cui, S W., & Xie, M (2018) Glucomannans from dendrobium officinale and aloe Bioactive Polysaccharides, 295-347 Pablo, H R., Leonard, O S van; Gabriele, B., Anna, P M., Stéphane, C., Andrea, C., Matthias, D Angela, S., (2015) The Hidden World within Plants: Ecological Evolutionary Considerations for Defining Functioning of Microbial Endophytes Microbiology and Molecular Biology Reviews, 79 (3): 293–320 Pant, B., Shah, S., Shrestha, R., Pandey, S., & Joshi, P R (2017) An overview on orchid endophytes Mycorrhiza Nutrient Uptake, Biocontrol, Ecorestoration, 503–524 Shah, S., Shrestha, R., Maharjan, S., Selosse, M., & Pant, B (2018) Isolation and characterization of plant growth-pro"Gibberellin biosynthesis and metabolism" Plant Hormones: Physiology, Biomoting endophytic fungi from the roots of Dendrobium moniliforme Plants, 8(1), doi:10.3390/plants8010005 Sponsel, V M (1995) chemistry and Molecular Biology Dordrecht: Kluwer pp 6697 Suryanarayanan, T S., (2013) Endophyte research: going beyond isolation and metabolite documentation Fungal Ecology, 6(6): 561–568 Thanh Sa (2020) Để ngành hoa lan phát triển bền vững Báo Lâm Đồng http://baolamdong.vn/kinhte/202001/de-nganh-hoa-lan-phat-trien-ben-vung2984639/ Trần Hợp (1998) Phong lan Việt Nam Nhà xuất Nộng nghiệp Troots of epiphytic orchids Mikrobiologiya 73, 710–715 Trương Thị Vân Hà 2015 Ảnh hưởng số biện pháp kỹ thuật đến sinh trưởng, phát triển hoa địa lan hoàng vũ (Symbium Sinensis) Gia Lâm - Hà Nội Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tsavkelova, E., Cherdyntseva, T., Netrusov, A., 2005 Auxin production by bacteria associated with orchid roots Mikrobiologiya 74, 46–53 Tsavkelova, E.A., Cherdyntseva, T.A., Lobakova, E.S., Kolomeitseva, G., and Netrusov, A.I (2001) Microbiota of the Orchid Rhizoplane, Mikrobiologiya, 2001, vol 70, no 4, pp 567–573 Văn Việt (2020) Phát triển đa dạng lan rừng Đà Lạt Báo Lâm Đồng http://baolamdong.vn/kinhte/202007/phat-trien-da-dang-lan-rung-da-lat3013378/index.htm Wilkinson, K G., Dixon, K W., Sivasithamparam, K., & Ghisalberti, E L (1994) Effect of IAA on symbiotic germination of an Australian orchid and its production by orchid-associated bacteria Plant and soil, 159(2), 291-295 Yuan, Z., Chen, Y., & Yang, Y (2008) Diverse non-mycorrhizal fungal endophytes inhabiting an epiphytic, medicinal orchid (Dendrobium Nobile): Estimation and characterization World Journal of Microbiology and Biotechnology, 25(2), 295303 Zhao Y Auxin biosynthesis and its role in plant development Annual Review of Plant Biology, 61 (2010) 49 Zhu, G.S., Yu, Z.N., Gui, Y and Liu, Z.Y (2008) A novel technique for isolating orchid mycorrhizal fungi Fungal Diversity, 33, 123-137.1 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hình ảnh đặc điểm khuẩn lạc hình thái tế bào chủng vi sinh vật phân lập từ rễ phong lan Hình 3.1 Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 01 Hình 3.2 Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 02 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 03 Hình 3.3 Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 04 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 05 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 06 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 07 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 08 Hình Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 09 Hình 3.4 Hình thái ria khuẩn lạc hình thái tế bào chủng PL 10 Phụ lục Môi trường nhân nuôi sinh khối vi khuẩn nội sinh sinh tổng hợp IAA GAs Môi trường nhân nuôi sinh khối vi khuẩn nội sinh PL04 có khả sinh tổng hợp IAA Tên môi trường Thành phần I1 I2 I3 Nước giá: 250mL Peptone: 5g Glucose: 10g Peptone:10g Yeast extract: 2,5g Nước giá: 500 mL Yeast extract:5g Glucose: 20g Amoni citrat 1,7g Glucose: 20g Cao thịt: 5g Mật rỉ: 7,2g Cao thịt: 10g KH2PO4: 2g Pepton từ thịt: 11,13g KH2PO4: 2g MgSO4: 0,38g MnCl2: 16,58 mM CH3COONa: 5g CH3COONa: 3g K2HPO4: 5g MnSO4: vết Nước giá: 250 mL CaCl2 0,01g Trytophan: 0.1% Trytophan: 0.1% NaCl: 4,04 Nước vừa đủ lít Nước vừa đủ lít FeSO4.7H2O: 1µM MgSO4.7H2O: 0,38g Trytophan: 0.1% Nước vừa đủ lít Mơi trường nhân ni sinh khối vi khuẩn nội sinh PL09 có khả sinh tổng hợp GAs Môi trường G1 Thành phần Glucose: 10g Peptone: 5g Nước giá: 500 mL Amoni citrat 1,7g Yeast extract: 2,5g Nước thịt: 100 mL Mật rỉ: 7,2g Glucose: 20g Glucose: 20g Pepton từ thịt:11,13g Cao thịt: 5g K2HPO4: 5g MnCl2: 16,58 mM KH2PO4: 2g CH3COONa: 5g K2HPO4: 5g MgSO4: 0,38g CaCl2: 0,01 g CaCl2: 0,01g CH3COONa: 3g MgSO4: 0,38g NaCl: 4,04 Nước giá: 250 mL MnSO4: 0,01g FeSO4.7H2O: 1µM Nước vừa đủ lít Amoni citrat: 1,7g G2 G3 MgSO4.7H2O: 0,38g Mật rỉ đường: 7,2 g Nước vừa đủ: lít Nước vừa đủ lít Phụ luc Hình ảnh thực nghiệm thức Hình 10 Giá thể trồng lan thử nghiệm (Dớn sợi) Hình 11 Chậu trồng lan thử nghiệm Hình 12 Quá trình theo dõi, đo chiều cao phong lan Hình 13: Một số phong lan trước đưa vào nghiệm thức Hình 14 Cây phong lan nghiệm thức sau tháng Hình 15 Cây phong lan nghiệm thức sau tháng bổ sung vi sinh vật Hình 16 Cây phong lan nghiệm thức sau tháng bổ sung vi sinh vật Hình 17 Cây phong lan nghiệm thức sau tháng bổ sung vi sinh vật Hình 18 Hình ảnh nghiệm thức Hình 3.7 So sánh khác biệt số trồng nghiệm thức Hình 19 Chế phẩm vi sinh vật nội sinh (Dạng bột, dạng viên nén)