Xác định cephalexin trên bề mặt và nguồn nước

LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC KIỂM NGHIỆM THUÔC ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CEPHALEXIN TRÊN BỀ MẶT VÀ TRONG NGUỒN NƯỚC THẢI CỦA NHÀ MÁY SẢN XUẤT KHÁNG SINH ß LACTAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUÉT MẪU KIỂM TRA BẰNG HPLC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HỒNG THỊNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CEPHALEXIN TRÊN BỀ MẶT VÀ TRONG NGUỒN NƯỚC THẢI CỦA NHÀ MÁY SẢN XUẤT KHÁNG SINH ß-LACTAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố HỒ CHÍ MINH – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HỒNG THỊNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CEPHALEXIN TRÊN BỀ MẶT VÀ TRONG NGUỒN NƯỚC THẢI CỦA NHÀ MÁY SẢN XUẤT KHÁNG SINH ß-LACTAM Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất Mã số : 60.72.04.10 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thầy hướng dẫn: TS HÀ DIỆU LY Thành phố HỒ CHÍ MINH – 2016 i Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2014 – 2016 Chuyên ngành: Kiểm nghiệm Thuốc & Độc chất – Mã số: 60 72 04 10 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CEPHALEXIN TRÊN BỀ MẶT VÀ TRONG NGUỒN NƢỚC THẢI CỦA NHÀ MÁY SẢN XUẤT KHÁNG SINH ß-LACTAM Trần Hoàng Thịnh Người hướng dẫn: TS Hà Diệu Ly Mở đầu: Cephalexin kháng sinh gây dị ứng cao Trong trình sản xuất phải đảm bảo vệ sinh tránh nguy nhiễm chéo Do cần có qui trình lấy mẫu, bảo quản mẫu, xử lý mẫu phân tích định lượng vết cephalexin bề mặt vật liệu thiết bị dây chuyền sản xuất để hỗ trợ cho xưởng sản xuất kháng sinh nhóm cephalosporin thực tốt việc kiểm soát cephalexin mức giới hạn cho phép đảm bảo vệ an toàn sản xuất Đối tƣợng & Phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Cephalexin bề mặt thiết bị sản xuất nguồn nước thải nhà máy sản xuất kháng sinh -lactam Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát quy định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC với đầu dò UV-Vis đầu dò khối phổ; Khảo sát độ ổn định cephalexin dung mơi hịa tan khác nhau, mẫu nước thải điều kiện bảo quản khác nhau; Xây dựng quy trình xử lý mẫu, lấy mẫu, bảo quản mẫu, xây dựng quy trình vệ sinh sau sản xuất Kết quả: Qui trình định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC với đầu dị PDA/UV-Vis đạt tính phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng với hệ số tương quan cao, LOD LOQ thấp nằm mức giới hạn cho phép cephalexin mẫu phết bề mặt (5 x cm) mẫu nước thải Qui trình định lượng cephalexin LC-MS đạt tính phù hợp hệ thống, khoảng tuyến tính mức nồng độ ppb với hệ số tương quan cao, LOD LOQ cao thay cho qui trình định lượng cephalexin HPLC-PDA/UV-Vis nồng độ cephalexin mẫu phết bề mặt mẫu nước thải ppm Cephalexin nên chiết nước, mẫu phân tích nên bảo quản 5oC nên định lượng cephalxin vòng ngày Qui trình xử lý mẫu có hiệu suất thu hồi cao, ổn định đơn giản Qui trình lấy mẫu, bảo quản mẫu qui trình dọn quang vệ sinh sau sản xuất thành phẩm cephalosporin xây dựng theo yêu cầu kỹ thuật GPM WHO, PIC/S, EU sở vật chất trạng nhà máy Kết luận: Đề tài đưa khuyến cáo dung môi chiết cephalexin, điều kiện bảo quản mẫu thời gian phân tích phù hợp Đề tài thành cơng việc xây dựng qui trình lấy mẫu, bảo quản mẫu, xử lý mẫu phân tích mẫu hai loại mẫu phết bề mặt mẫu nước thải từ nhà máy Từ khóa: sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), cephalexin, mẫu bề mặt, nước thải ii Master’s Thesis – Academic course: 2014 - 2016 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 60 72 04 10 BUILDING METHODS OF DETERMINING CEPHALEXIN ON THE SURFACE AND IN WASTEWATER IN ß-LACTAM ANTIBIOTICS FACTORY Tran Hoang Thinh Supervisor: Dr Ha Dieu Ly Introduction: Cephalexin is highly allergenic antibiotic In the manufacturing process, must be ensured hygiene and avoid the risk of cross contamination Therefore, there should a process of sampling, sample preservation, sample handling and quantitative analysis of cephalexin trace on surface of materials and equipment in the production line to support factory that control cephalexin in the allowed limits and ensuring safety in the production Subjects and Methods: Research subjects: Cephalexin on surface of production equipment and in wastewater in  -lactam antibiotics factory Methods: Survey quantitative process of cephalexin by HPLC with UV-Vis and mass spectrometry detector; Survey stability of cephalexin dissolved in different solvents,in wastewater samples and in different storage conditions; Construct process of sampling, sample handling, sample preservation and hygiene process after the production Result: The quantitative process of cephalexin by HPLC techniques with PDA / UV-Vis detector achieve conformity systems, specificity, wide linear range with high correlation coefficient, low LOD and LOQ that under allowed limit of cephalexin in the surface swabs (5 x cm) and wastewater samples The quantitative process of cephalexin by LC-MS achieve conformity systems, linear range at ppb levels with high correlation coefficient, LOD and LOQ can substitute for quantitative process by HPLC-PDA / UVVis when cephalexin concentration in surface swabs and wastewater samples in less than ppm Cephalexin should be extracted with water, sample should be stored at 5°C and should quantify cephalxin within days The process of sample handling with high recovery efficiency, stability and simplicity The process of sampling, sample preservation and line clearance processes and cleaning after the production of cephalosporins have been built according to the technical requirements of GPM WHO, PIC/S, the EU and the current state of the factory facilities Conclusion: The study has made recommendations on extraction solvents for cephalexin, sample storage conditions and appropriate analysis timing The theme has been successful in building process of sampling, sample preservation, sample handling and sample analysis on two types of surface swabs and samples from factory's wastewater Keywords: high-performance liquid chromatography (HPLC), Cefalexin, surface swab, wastewater iii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực Chưa cơng bố cơng trình khác Trần Hồng Thịnh iv MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA TĨM TẮT……………………………………………………………… …… i LỜI CAM ĐOAN……………………………………………………………… iii MỤC LỤC……………………………………………………………………… iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ…………………….……… ….….x MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan cephalexin 1.2 Một số cơng trình định lượng cephalexin 1.3 Tổng quan GMP 1.4 Phương pháp lấy mẫu 11 1.5 Phương pháp xử lý bảo quản mẫu 16 1.6 Cách tính LOD, LOQ phương pháp thử nghiệm 20 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu – Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Khảo sát qui trình định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC 23 2.2.2 Khảo sát độ ổn định cephalexin dung mơi hịa tan khác mẫu nước thải 25 2.2.3 Khảo sát độ ổn định cephalexin điều kiện bảo quản khác 25 2.2.4 Khảo sát tính phù hợp hệ thống, khoảng tuyến tính, LOD LOQ qui trình định lượng cephalexin LC-MS 25 2.2.5 Xây dựng qui trình xử lý mẫu 26 2.2.6 Xây dựng qui trình lấy mẫu bảo quản mẫu 27 v 2.2.7 Xây dựng qui trình vệ sinh sau sản xuất 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Khảo sát qui trình định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC 30 3.1.1 Qui trình 30 3.1.2 Qui trình 33 3.2 Khảo sát độ ổn định cephalexin dung mơi hịa tan khác mẫu nước thải 36 3.3 Khảo sát độ ổn định cephalexin điều kiện bảo quản khác 39 3.4 Khảo sát tính phù hợp hệ thống, khoảng tuyến tính, LOD LOQ qui trình định lượng cephalexin LC-MS 42 3.5 Xây dựng qui trình xử lý mẫu 45 3.5.1 Mẫu phết bề mặt 45 3.5.2 Mẫu nước thải từ nhà máy 46 3.6 Xây dựng qui trình lấy mẫu bảo quản mẫu 46 3.6.1 Mẫu bề mặt 46 3.6.2 Mẫu nước thải từ nhà máy 47 3.7 Xây dựng qui trình vệ sinh sau sản xuất 48 CHƢƠNG BÀN LUẬN CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT TỪ VIẾT TẮT TỪ NGUYÊN NGHĨA TIẾNG VIẾT ACN Acetonitrile AOAC Association of official analytical Hiệp hội nhà hóa học phân tích chemists thức Active Pharmaceutical Ingredients Ủy ban thành phần dược phẩm có Committee hoạt tính BP British Pharmacopoeia Dược điển Anh CPL Cephalexin DĐVN Dược điển Việt Nam EtOH Ethanol FDA Food and Drug Administration APIC Cơ quan Quản lý Thuốc Thực phẩm Hoa Kỳ GMP HPLC ISO ICH Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt High performance Sắc ký lỏng liquid chromatography hiệu cao International Organization for Standardization The International Conference on Tổ chức Quốc tế tiêu chuẩn hóa Hội nghị Quốc tế hài hịa Harmonisation MeOH LC-MS Methanol Liquid chromatography -Mass spectrum Sắc ký lỏng ghép đầu dò khối phổ LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantitation Giới hạn định lượng vii PIC/S Pharmaceutical Inspection Chương trình hợp tác tra Co-operation Scheme dược phẩm QCVN Qui chuẩn Việt Nam QĐ-BYT Quyết định Bộ Y tế USP United States Pharmacopeia Dược điển Mỹ UV Ultraviolet – Visible Tử ngoại – khả kiến viii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số điều kiện định lượng cephalexin HPLC Bảng 2.1 Các chất chuẩn sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Hóa chất dung mơi dùng nghiên cứu 22 Bảng 2.3 Trang thiết bị dùng nghiên cứu 23 Bảng 2.4 Tóm tắt hai qui trình định lượng cephalexin 23 Bảng 2.5 Chuẩn bị dung dịch 24 Bảng 3.1 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống qui trình 30 Bảng 3.2 Mối tương quan diện tích pic nồng độ cephalexin qui trình 32 Bảng 3.3 Kết xử lý thống kê qui trình 32 Bảng 3.4 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống qui trình 33 Bảng 3.5 Mối tương quan diện tích pic nồng độ cephalexin qui trình 35 Bảng 3.6 Kết xử lý thống kê qui trình 35 Bảng 3.7 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin ppm hòa tan nước 250C 36 Bảng 3.8 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin ppm hòa tan trong MeOH-nước (1:1) 250C 37 Bảng 3.9 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin 10 ppm hòa tan trong EtOH 70% 250C 38 Bảng 3.10 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin ppm hòa tan trong nước thải lấy nhà máy 250C 39 Bảng 3.11 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin 10 ppm nước bảo quản nhiệt độ oC 40 Bảng 3.12 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin 10 ppm nước bảo quản nhiệt độ 25 oC bình định mức màu nâu Bảng 3.13 Độ ổn định dung dịch đối chiếu cephalexin 10 ppm 40 PL-34 mau thu tren be mat nhua (2).lcd 500 mau thu tren be mat nhua (3).lcd uV 13.295 / RT13.295 13.296 / RT13.296 uV 500 500 250 250 250 0 10 20 mau thu tren be mat nhua (4).lcd uV 13.288 / RT13.288 uV 500 500 250 0 10 20 > ID#1 Compound Name: RT13.335 Title Sample Name chuan ppm tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu tren be mat kim loai (1).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (2).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (3).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (4).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (5).lcdCefa chuan ppm tren mat nhua.lcd Cefa mau thu tren be mat nhua.lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (1).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (2).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (3).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (4).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (5).lcd Cefa 20 10 mau thu tren be mat nhua (5).lcd 750 250 10 13.286 / RT13.286 13.289 / RT13.289 mau thu tren be mat nhua (1).lcd uV Sample ID Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce 10 Ret Time 13.335 13.251 13.272 13.277 13.276 13.276 13.276 13.277 13.284 13.296 13.295 13.289 13.288 13.286 20 Area Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 16512 8737.643 1.121 0.000 15094 10150.827 1.215 0.000 14743 10340.701 1.170 0.000 14885 10320.062 1.162 0.000 15060 10201.685 1.185 0.000 14860 10275.917 1.161 0.000 15134 10292.618 1.190 0.000 15769 10283.749 1.182 0.000 14305 10195.671 1.164 0.000 14054 10369.655 1.156 0.000 14374 10171.639 1.162 0.000 14096 10327.891 1.202 0.000 14391 10219.950 1.197 0.000 14165 10084.223 1.157 0.000 PL-35 VIEN KIEM NGHIEM THUOC TP HO CHI MINH KHOA THIET LAP CHAT CHUAN VA CHAT DOI CHIEU HPLC REPORT EQ/01/TC/039 Sample Information : Cephalexin : 20 uL : Do phuc hoi mau phet o ppm : 7/31/2016 Summary(Compound) mau thu tren be mat kim loai.lcd uV 2000 1000 10 20 1000 10 20 mau thu tren be mat kim loai (3).lcd uV 2000 13.391 / RT13.391 mau thu tren be mat kim loai (2).lcd uV 2000 1000 0 1000 0 10 20 mau thu tren be mat kim loai (5).lcd uV 2000 10 20 uV 2000 1000 mau thu tren be mat nhua.lcd uV 20 mau thu tren be mat nhua (1).lcd 1000 20 2000 1000 10 20 10 mau thu tren be mat nhua (3).lcd uV 2000 1000 0 0 mau thu tren be mat nhua (2).lcd uV 13.285 / RT13.285 2000 10 13.296 / RT13.296 10 2000 1000 0 10 chuan ppm tren be mat nhua.lcd 13.366 / RT13.366 1000 13.265 / RT13.265 10 mau thu tren be mat kim loai (4).lcd uV 2000 13.372 / RT13.372 uV 1000 0 13.387 / RT13.387 1000 13.372 / RT13.372 2000 mau thu tren be mat kim loai (1).lcd uV 2000 13.284 / RT13.284 13.633 / RT13.633 uV 13.296 / RT13.296 chuan ppm tren be mat kim loai.lcd 13.395 / RT13.395 Sample Name Injection Volume Run time: 20.0 Data Filename Data Processed 0 10 20 10 PL-36 mau thu tren be mat nhua (5).lcd 13.281 / RT13.281 uV 2000 1000 13.276 / RT13.276 mau thu tren be mat nhua (4).lcd uV 2000 1000 0 10 20 > ID#1 Compound Name: RT13.633 Title Sample Name chuan ppm tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu tren be mat kim loai (1).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (2).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (3).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (4).lcdCefa mau thu tren be mat kim loai (5).lcdCefa chuan ppm tren be mat nhua.lcd Cefa mau thu tren be mat nhua.lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (1).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (2).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (3).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (4).lcd Cefa mau thu tren be mat nhua (5).lcd Cefa Sample ID Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce 10 Ret Time 13.633 13.395 13.387 13.391 13.372 13.372 13.366 13.265 13.284 13.285 13.296 13.296 13.281 13.276 20 Area Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 47368 10276.416 1.201 0.000 43453 8841.544 1.158 0.000 43279 8851.311 1.161 0.000 43582 8847.382 1.166 0.000 43052 8871.457 1.160 0.000 43216 8907.731 1.171 0.000 43160 8754.029 1.156 0.000 48190 10243.538 1.180 0.000 43882 10285.696 1.197 0.000 43786 10276.617 1.200 0.000 43899 10210.520 1.189 0.000 44164 10222.638 1.191 0.000 43885 10264.502 1.201 0.000 43676 10193.020 1.194 0.000 PL-37 VIEN KIEM NGHIEM THUOC TP HO CHI MINH KHOA THIET LAP CHAT CHUAN VA CHAT DOI CHIEU HPLC REPORT EQ/01/TC/039 Sample Information : Cephalexin : 20 uL : Do phuc hoi mau phet o ppm : 7/31/2016 Summary(Compound) mau thu ppm tren be mat kim loai.lcd 2500 2500 10 20 mau thu ppm tren be mat kim loai (2).lcd 2500 20 2500 mau thu ppm tren be mat kim loai (4).lcd uV 2500 10 20 mau thu ppm tren be mat kim loai (5).lcd 2500 10 20 2500 mau thu ppm tren be mat nhua.lcd uV 2500 0 10 20 mau thu ppm tren be mat nhua (1).lcd 2500 20 uV 2500 10 20 10 mau thu ppm tren be mat nhua (3).lcd uV 2500 0 mau thu ppm tren be mat nhua (2).lcd 13.289 / RT13.289 uV 10 13.282 / RT13.282 10 chuan ppm tren be mat nhua.lcd uV 13.252 / RT13.252 uV 13.265 / RT13.265 10 mau thu ppm tren be mat kim loai (3).lcd uV 13.263 / RT13.263 uV 10 13.256 / RT13.256 0 13.253 / RT13.253 13.288 / RT13.288 2500 mau thu ppm tren be mat kim loai (1).lcd uV 13.260 / RT13.260 uV 13.610 / RT13.610 uV 13.287 / RT13.287 chuan ppm tren be mat kim loai.lcd 13.279 / RT13.279 Sample Name Injection Volume Run time: 20.0 Data Filename Data Processed 0 10 20 10 PL-38 mau thu ppm tren be mat nhua (4).lcd mau thu ppm tren be mat nhua (5).lcd 2500 13.295 / RT13.295 uV 13.291 / RT13.291 uV 2500 0 10 20 > ID#1 Compound Name: RT13.610 Title Sample Name chuan ppm tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu ppm tren be mat kim loai.lcd Cefa mau thu ppm tren be mat kim loaiCefa (1).lcd mau thu ppm tren be mat kim loaiCefa (2).lcd mau thu ppm tren be mat kim loaiCefa (3).lcd mau thu ppm tren be mat kim loaiCefa (4).lcd mau thu ppm tren be mat kim loaiCefa (5).lcd chuan ppm tren be mat nhua.lcd Cefa mau thu ppm tren be mat nhua.lcdCefa mau thu ppm tren be mat nhua (1).lcd Cefa mau thu ppm tren be mat nhua (2).lcd Cefa mau thu ppm tren be mat nhua (3).lcd Cefa mau thu ppm tren be mat nhua (4).lcd Cefa mau thu ppm tren be mat nhua (5).lcd Cefa Sample ID Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce Ce 10 Ret Time 13.610 13.279 13.260 13.263 13.256 13.253 13.252 13.265 13.288 13.289 13.282 13.287 13.291 13.295 20 Area Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 78833 10240.953 1.197 0.000 71902 8794.262 1.164 0.000 71965 8758.089 1.170 0.000 71742 8762.753 1.167 0.000 71514 8762.921 1.167 0.000 71552 8802.968 1.171 0.000 71681 8710.834 1.178 0.000 80281 10159.312 1.197 0.000 72642 10100.516 1.194 0.000 72353 10131.359 1.192 0.000 72753 10127.952 1.195 0.000 72519 10124.458 1.191 0.000 73034 10113.315 1.199 0.000 72574 10145.891 1.200 0.000 PL-39 Phụ lục 5: HỒ SƠ LẤY MẪU BỀ MẶT KIỂM TRA VẾT PENICILLIN / CEPHALOSPORIN Xưởng/Plant: Ngày lấy mẫu/Sampling date: Mục đích lấy mẫu/Purpose of sampling: Trang bị cho ngƣời lấy mẫu: Dụng cụ lấy mẫu : Dung môi : Protective clothing for sampler Solvent Sampling tool Số mẫu vị trí lấy mẫu/ Sampling locations Vị trí Diện tích lấy mẫu lấy mẫu Sampling location Area for sampling Ký hiệu mẫu cm2 cm2 cm2 cm2 cm2 cm2 cm2 cm2 cm2 Code of sample PL-40 Cách lấy mẫu/ Sampling method – Mỗi điểm lấy vị trí, vị trí lấy 25 cm2 Take samples from locations, at each location take sample from 25 cm2 area – Use a forceps to pick the cotton wool soaked with………………… to swab the surface – Cho vào cốc thủy tinh đậy kín Put the cotton wool into a glass beaker and close tightly – Dán nhãn (ghi tên, ngày lấy mẫu, nơi lấy mẫu) Affix a label (name, sampling date, sampling location) – Cho vào bao plastic cột kín Put them into a plastic bag and seal the bag – Sau lấy mẫu dùng bơng gịn tẩm nước tinh khiết, lau vị trí lấy mẫu After sampling, use a clean cotton wool soaked with purified water to clean the sampling location Bảo quản/ Sample storage – Chuyển mẫu phịng phân tích Deliver the samples to the laboratory immediately – Trong lúc vận chuyển mẫu phải bảo quản điều kiện khô mát, tránh sáng tránh tạp nhiễm từ bên vào During transport, samples must be stored in dry and cool condition, avoid light and contamination Ghi chú/Remarks: (các phát gây nghi ngờ chất lượng/ Any detection on quality doubt) Ngày/Date: Ngƣời xác nhận/Confirmed by: Ngày/Date: Ngƣời lấy mẫu/Sampler: PL-41 Phụ lục 6: HỒ SƠ LẤY MẪU NƢỚC THẢI KIỂM TRA VẾT PENICILLIN / CEPHALOSPORIN Xưởng/Plant: Ngày lấy mẫu/Sampling date: Mục đích lấy mẫu/Purpose: Lấy mẫu khí thải/Sampling air emission Trang bị cho ngƣời lấy mẫu: Protective clothing for sampler Clean, appropriate clothes -……………………………… Lấy mẫu nước thải/Sampling waste water Dụng cụ lấy mẫu: Sampling tool Dung môi : Solvent Tên, mã số thiết bị:………… - Nước cất Name, code Distilled water Glass bottle Số mẫu vị trí lấy mẫu/Sampling locations: Vị trí lấy mẫu/ Thể tích lấy mẫu/ Ký hiệu mẫu/ Sampling location Sampling volume Code ………… ……… lít/liter …………… ……… lít/liter …………… ……… lít/liter ………… ……… lít/liter …………… ……… lít/liter …………… ……… lít/liter …………… ……… lít/liter PL-42 Cách lấy mẫu/Sampling method: – Hút xác ……… ml dung môi cho vào ống mẫu Transfer accurately…………ml solvent to sampling tube Sampling speed – Cho vào bình nón, đậy kín Purge the air into a flask, close tightly – Đối với lấy mẫu nước thải: dùng ca múc nước thải cuối nguồn, cho vào chai thủy tinh đậy kín nút chai For waste water: use a mug to take waste water at the end of flow, then put it into glass bottle, close tightly Dán nhãn/Sample labelling (ghi tên mẫu, ngày lấy mẫu, nơi lấy mẫu/ write the sample name, sampling date, sampling location) Bảo quản/Sample storage: - Chuyển mẫu phịng phân tích Deliver the samples to the laboratory immediately - Trong lúc vận chuyển mẫu phải bảo quản điều kiện khô mát, tránh sáng tránh tạp nhiễm từ bên vào During transport, samples must be stored in dry and cool condition, avoid light and contamination Ghi chú/Remarks: (các phát gây nghi ngờ chất lượng/ Any detection of quality doubt) Ngày/Date: Ngƣời xác nhận/Confirmed by: Ngày/Date: Ngƣời lấy mẫu/Sampler: PL-43 Phụ lục 7: BÁO CÁO KẾT QUẢ KIỂM VẾT BETA-LACTAM BETA-LACTAM TRACE TESTING REPORT Ngày lấy mẫu/ Sampling date:………………………………………… Mục đích lấy mẫu/Sampling for:…………………………………… Lấy mẫu bề mặt Lấy mẫu khí thải Lấy mẫu nước thải Surface sampling Air emission sampling Waste water sampling STT Vị trí Nr Location Kết tìm vết/ Trace testing result Cephalosporin (a) (b) , Penicillin (c) Ghi Remark (d) Ghi chú: (a), (b), (c), (d): hoạt chất đƣợc sản xuất trình lấy mẫu Remark: (a), (b), (c), (d): the active pharmaceutical ingredients to be detected Ngày/Date: Ngày/Date: Giám đốc QC/QC Manager: Giám đốc QA/QA Manager: Nơi nhận/Distribution: QC (gốc/original) QA Engineering Production PL-44 Phụ lục 8: Qui trình lấy mẫu, bảo quản mẫu, xử lý mẫu phân tích mẫu hai loại mẫu phết bề mặt mẫu nước thải từ nhà máy Đối tƣợng áp dụng: Qui trình áp dụng để định lượng cephalexin bề mặt nguồn nước thải phân xưởng sản xuất kháng sinh beta-lactam cơng ty Imexpharm Qui trình lấy mẫu bảo quản mẫu 1.1 - Mẫu bề mặt Dùng tăm bơng, gạc tẩm nước phết diện tích chọn lấy mẫu (5 x cm 2), phết mẫu từ trái sang phải, từ xuống theo đường chéo từ hướng - Cho vào bình thủy tinh sạch, đậy kín nắp - Dán nhãn (ghi tên, ngày lấy mẫu, nơi lấy mẫu) - Cho vào bao plastic cột kín (nếu cần: vận chuyển mơi trường ẩm, bụi…) - Bảo quản mẫu : Mẫu phải chuyển đến phịng phân tích, mẫu phải bảo quản điều kiện tránh sáng tránh tạp nhiễm từ bên vào Tiến hành phân tích khơng phân tích bảo quản mẫu điều kiện 50C mẫu phải phân tích vịng ngày 1.2 Mẫu nước thải – Dụng cụ lấy mẫu: làm vật liệu trơ, khơng gây ảnh hưởng đến phân tích sau Trước lấy mẫu, thiết bị phải làm chất tẩy rửa nước, theo hướng dẫn hãng sản xuất, cuối tráng nước – Vị trí lấy mẫu: vị trí xả nước thải xưởng sản xuất sau xử lý trực tiếp mơi trường (vị trí cuối đường ống qui trình xử lý nước thải sản xuất) – Lấy mẫu xét nghiệm: tráng thiết bị lấy mẫu nước thải lần lấy mẫu nước thải vào thiết bị lấy mẫu Đậy kín nắp Dán nhãn (ghi tên, ngày lấy mẫu, nơi lấy mẫu) – Dung tích mẫu: khoảng lít – Bảo quản mẫu : Mẫu phải chuyển đến phịng thí nghiệm để tránh phản ứng sinh hóa xảy làm sai lệch kết Tiến hành phân tích khơng phân tích bảo quản mẫu điều kiện 50C mẫu phải phân tích vịng ngày PL-45 Qui trình xử lý mẫu 2.1 Mẫu phết bề mặt - Thêm lượng thể tích xác dung mơi thích hợp - Siêu âm lọ đựng mẫu phân tích vịng 30 phút - Lọc mẫu qua màng lọc millipore 0,22 0,45µm - Cho vào vial thể tích vừa đủ tiến hành phân tích định lượng 2.2 Mẫu nước thải - Lọc mẫu qua màng lọc milipore 0,22 0,45µm - Tiến hành pha lỗng cần thiết - Cho vào vial thê tích vừa đủ tiến hành phân tích định lượng Qui trình phân tích mẫu 3.1 Định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC/PDA HPLC/UV-Vis 3.1.1 Thiết bị - Máy HPLC đầu dò PDA UV-vis (máy phải hiệu chuẩn định kỳ) 3.1.2 Chất chuẩn, hóa chất, dung mơi - Chất chuẩn Cephalexin monohydrate có nguồn gốc rõ ràng, đảm bảo độ tin cậy - Hóa chất, dung mơi: Methanol, Acetonitril, Kali dihydrophosphat (KH2PO4) có nguồn gốc xuất xứ rõ ràng, đảm bảo độ tin cậy 3.1.3 Điều kiện sắc ký - Pha động: Methanol - acetonitril - dung dịch kali dihydrophosphat 0,136% - nước (2 : : 10 : 83) - Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C18 (5 m) - Detector tử ngoại đặt bước sóng 254 nm - Thể tích tiêm: 20 l - Tốc độ dịng 1,5 ml/phút 3.1.4 Chuẩn bị mẫu - Dung dịch thử: mẫu phết mẫu nước thải xử lý - Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 20,0 mg cephalexin monohydrat chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 200,0 ml với dung môi PL-46 - Dung dịch phân giải: Hòa tan 20 mg cefradin chuẩn (ĐC) 20 ml dung dịch đối chiếu pha loãng thành 100 ml nước 3.1.5 Tiến hành - Tiêm dung dịch phân giải, dung dịch thử dung dịch đối chiếu Phép thử có giá trị độ phân giải hai pic tương ứng với cephalexin cefradin sắc ký đồ dung dịch phân giải phải 4,0 - Tính nồng độ cephalexin mẫu dựa vào diện tích pic đáp ứng dung dịch thử dung dịch đối chiếu 3.1.6 Tính kết Nồng độ (ppm) Cephalexin mẫu thử tính theo cơng thức: Trong đó: St: Diện tích pic hoạt chất mẫu thử Sc: Diện tích pic hoạt chất mẫu đối chiếu Ft: Độ pha loãng mẫu thử (nếu có) C%: Nồng độ chất mẫu đối chiếu (100 ppm) 3.2 Định lượng cephalexin kỹ thuật LC-MS 3.2.1 Thiết bị - Máy LC-MS (máy phải hiệu chuẩn định kỳ) 3.2.2 Chất chuẩn, hóa chất, dung mơi - Chất chuẩn Cephalexin monohydrate có nguồn gốc rõ ràng, đảm bảo độ tin cậy - Hóa chất, dung mơi: Acetonitril, Acid Fomic (HCOOH) có nguồn gốc xuất xứ rõ ràng, đảm bảo độ tin cậy 3.2.3 Điều kiện sắc ký - Pha động: HCOOH 0,1% - ACN (50:50) - Cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C18 (5 m) - Thể tích tiêm: 20 l - Tốc độ dòng 0.6 ml/ phút PL-47 - Detector MS với điều kiện  Tốc độ dòng khí phun: 3.0 lít/phút  Tốc độ dịng khí bay hơi: 15.0 lít/phút  Giao diện: ESI  Thế giao diện: 3.5 kV  Nhiệt độ khí bay hơi: 250 oC  Nhiệt độ buồng ion hóa: 400 oC  Ion ban đầu: m/z 348  Ion tạo thành: m/z 158 3.2.4 Chuẩn bị mẫu - Dung dịch thử: mẫu phết mẫu nước thải xử lý - Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 20,0 mg cephalexin monohydrat chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 200,0 ml với dung mơi Sau pha lỗng 100 lần với dung môi 3.2.5 Tiến hành - Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu - Tính nồng độ cephalexin mẫu dựa vào diện tích pic đáp ứng dung dịch thử dung dịch đối chiếu 3.2.6 Tính kết Nồng độ (ppb) Cephalexin mẫu thử tính theo cơng thức: Trong đó: St: Diện tích pic hoạt chất mẫu thử Sc: Diện tích pic hoạt chất mẫu đối chiếu Ft: Độ pha lỗng mẫu thử (nếu có) C%: Nồng độ chất mẫu đối chiếu (1000 ppb) BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc GIẤY XÁC NHẬN ĐÃ BỔ SUNG, SỬA CHỮA LUẬN VĂN THEO Ý KIẾN ĐÓNG GÓP CỦA HỘI ĐỒNG CHẤM LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Trần Hoàng Thịnh Tên đề tài luận văn: Xây dựng phương pháp xác định Cephalexin bề mặt nguồn nước thải nhà máy sản xuất kháng sinh -lactam Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc- Độc chất mã số: 60.72.04.10 Người hướng dẫn khoa học: TS Hà Diệu Ly Luận văn bổ sung sửa chữa điểm sau: Định dạng, sửa lỗi tả theo góp ý hội đồng Sửa lại cách hành văn cho phù hợp Bổ sung, giải thích cách tính LOD, LOQ Bổ sung số liệu thô Điều chỉnh hệ số bất đối từ số lẻ thập phân thành số lẻ thập phân TP Hồ Chí Minh, ngày 03 tháng 10 năm 2016 Thư ký hội đồng TS Ngô Thị Thanh Diệp Chủ tịch Hội đồng PGS.TS: Võ Thị Bạch Huệ Họ tên học viên Trần Hoàng Thịnh ... khác để xác định dư lượng bề mặt Ưu điểm: + Thích nghi với nhiều loại bề mặt + Kinh tế phổ biến + Cho phép lấy mẫu khu vực xác định + Áp dụng xác định vi khuẩn, hoạt chất dư chất bề mặt Nhược...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN HỒNG THỊNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CEPHALEXIN TRÊN BỀ MẶT VÀ TRONG NGUỒN NƯỚC THẢI CỦA NHÀ MÁY SẢN... sát qui trình định lượng cephalexin kỹ thuật HPLC Để xây dựng qui trình định lượng cephalexin bề mặt nguồn nước thải nhà máy sản xuất kháng sinh -lactam, qui trình định lượng cephalexin theo