MÔN VI SINH y học bài báo cáo THỰC HÀNH kỹ THUẬT cấy RIA là kỹ thuật cấy VSV từ môi trường hiện tại sang môi trường khác

ĐẠI HỌC ĐÔNG Á KHOA DƯỢC MÔN VI SINH Y HỌC BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH Lớp: Nhóm II : PH20A1A Lê Thị Linh Chi Nguyễn Thị Kiều Chinh Nguyễn Thị Dung (51064) Nguyễn Thị Dung (54729) GVHD: TS Trần Khánh Linh Đà Nẵng, 06/2022 MỤC LỤC I.KỸ THUẬT CẤY RIA Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị .3 1.1.Vật liệu 1.2.Dụng cụ 1.3.Thiết bị 2.Các bước thực .3 3.Kết biện luận 3.1.Kết 3.2.Biện luận .4 II.KẾT QUẢ ĐỊNH DANH .6 1.Xác định hình thái VK dựa vào đặc tính sinh lý 1.1.Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị .6 2.Các bước thực .7 3Kết biện luận 3.1.Kết 3.2.Biện luận .8 Định danh VSV theo PP sinh hoá 2.1.Khả sử dụng URE .9 2.2 Thử nghiệm khả sử dụng acid amin lưu huỳnh sinh H2S 10 2.3.Thử nghiệm MR (Methy red) 12 2.4.Thử nghiệm khả sử dụng citrate nguồn carbon vi khuẩn .13 III.KẾT QUẢ KHÁNG SINH ĐỒ - ETEST 15 1.Phương pháp kháng sinh đồ: 15 1.1: Vật liệu - dụng cụ - thiết bị 15 1.2: Các bước thực 16 1.3: Kết biện luận 17 2.Phương pháp E-test 18 IV.PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TẾ BÀO VI KHUẨN 20 4.Mục đích thực hiện: 20 4.1 Vật liệu- Dụng cụ- Thiết bị: .20 4.2 Các bước thực hiện: 21 4.3 Kết biện luận: 21 Tài liệu tham khảo 23 BÀI BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC TẬP MÔN VI SINH I.KỸ THUẬT CẤY RIA: kỹ thuật cấy VSV từ mơi trường sang mơi trường khác Mục đích thực hiện: khảo sát hình thái, tính chất sinh lý, sinh hóa, thu hoạch số lượng lớn vi sinh, giữ giống, Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị: 1.1.Vật liệu: Vi khuẩn 0,5F 1.2.Dụng cụ: STT Tên dụng cụ Đèn cồn Bình cồn 70 độ Que cấy vịng Becher 100ml Bình tia nhựa Pipet paster Hộp rác Giấy mềm không vân Bật lửa 10 Bút lông dầu 11 Bao tay y tế 12 Đĩa thạch 1.3.Thiết bị: Tủ ấm, tủ an toàn sinh học Các bước thực hiện: Kỹ thuật cấy bề mặt đĩa thạch Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện), ngày ni cấy lên đĩa thạch Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ giấy mềm khơng vân tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị số lượng đĩa petri ( ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm) theo khối lượng môi trường đổ Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khơ tiến hành thực Bước 4: Sử dụng que cấy vịng để lấy bệnh phẩm mơi trường ni cấy tiến hành phân lập Bước 5: Hơ qua ống vi khuẩn đèn cồn ( không mở nắp ống vi khuẩn) Bước 6: Đốt que cấy vòng cho nóng, làm nguội, lấy vịng dây cấy vi khuẩn Bước 7: Hơ quanh đĩa petri Bước 8:Trải VK đường số 1: trải vi khuẩn sang hai bên đường zig-zag sát vệt vi khuẩn khô Đốt dây cấy, để dây cấy nguội Xoay đĩa thạch 90 độ Bước 9: Trải VK đường số 2: trải vi khuẩn từ bước theo đường zig-zag, chạm vào đường số 1( đến lần) Xoay đĩa thạch 90 độ Bước 10: Trải VK đường số 3: trải vi khuẩn từ bước theo đường zig-zag (bản to khác với đường cấy số 1) , chạm vào đường ( đến lần) không chạm vào đường Bước 11: Đốt dây cấy Bước 12: Sau cấy xong cần giữ mơi trường nuôi cấy tủ ấm 37 độ C Theo dõi phát triển vi khuẩn sau 18 – 24h Lưu ý số lỗi thường gặp: - Vệ sinh khu vực cồn 70 độ dùng giấy mềm lau trước sau thực thao tác cấy - Khi thao tác, tay trái cầm đĩa thạch xoay để xung quanh lửa đèn cồn Tay phải cầm dây cấy hơ nóng xung quanh ( đợi – 10 giây để dây cấy nguội bớt) trước lấy vi khuẩn - Cấy mạnh rách thạch - Hơ que cấy nóng -> chết vi khuẩn - Cấy sai đường cấy Đường số chạm vào đường số Đường số chạm đường số Đường số không chạm vào - Khi trải vi khuẩn -> không khô -> chảy dịch vi khuẩn - Không hơ que cấy sau đường cấy Khi cấy đường số tiếp tục cấy đường số khơng hơ que cấy - Không làm gần khu vực đèn cồn Kết biện luận 3.1.Kết quả: Với kỹ thuật cấy ria yêu cầu kết cần đạt : đường cấy rõ ràng xuất shiện vi khuẩn lạc đơn lẽ mơi trường số 3.2.Biện luận Hình 1: Kết kỹ thuật cấy ria Quan sát hình ta thấy: - Đĩa số (BHI N2.1): Chỉ xuất vi khuẩn đường cấy số 1, khơng nhìn thấy đường cấy số số bắt đầu cấy đường cấy số không nối với đường cấy số dẫn tới không xuất vi khuẩn đường lại sau đường cấy số hơ que cấy nóng dẫn đến chết vi khuẩn nơi cấy đưòng - Đĩa số (BHI N2.2): Có xuất đường cấy thực tốt theo quy trình cấy đường Tuy nhiên đường cấy khơng không đẹp - Đĩa số (BHI N2.3): Có xuất đường cấy Ở môi trường số 3, ta thấy xuất khuẩn lạc đơn lẽ nhiên xuất khơng nhiều cấy đường qua đường ngắn - Đĩa số (BHI N2.4): Chỉ xuất đường cấy số cấy từ đường số sang đường cấy không nối liền Kết luận: Vì khuẩn lạc có bề mặt màu sắc không đồng đều, nên chứng tỏ giống phân lập không tinh khiết II KẾT QUẢ ĐỊNH DANH Mục đích thực hiện: 1.Xác định hình thái VK dựa vào đặc tính sinh lý Định danh VSV theo PP sinh hố 1.Xác định hình thái VK dựa vào đặc tính sinh lý 1.1.Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị: a.Vật liệu: - Vi khuẩn - Môi trường cấy KIA b Dụng cụ: STT Dụng cụ Que cấy tròn, que cấy thẳng Đèn cồn Bình cồn 70 độ Bật lửa Bút lơng dầu c.Thiết bị: 2.Các bước thực hiện: Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống KIA ( thạch nghiêng) ghi sẵn thông tin Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khô tiến hành thực Bước 4: Nếu ta quan sát thấy ống thạch có nước ta dùng giấy mềm làm khơ phần nước đến bên ống thạch khơ hồn tồn ta tiến hành cấy Bước 5: Tay trái cầm ống nghiệm chứa dung dịch VK ống nghiệm môi trường Tay phải cầm que cấy vòng khử trùng đèn cồn Bước 6: Dùng ngón út áp út kẹp nắp ống nghiệm vào lòng bàn tay, xoay nhẹ mở nắp ống nghiệm Bước 7: Hơ nóng để khử trùng phần miệng ống Bước 8: Đợi que cấy nguội, đưa que cấy vào bên tiếp xúc với dung dịch chứa vi khuẩn Bước 9: Rút que cấy nhẹ nhàng không cho que cấy đụng vào thành ống nghiệm Bước 10: Đưa que cấy vào ống thạch nghiêng sau vi khuẩn khảo sát cấy lần: Lần 1: Dùng que cấy thẳng cấy đâm sâu vào khối thạch đường cấy thẳng rút que cấy theo hướng cấy thẳng Lần 2: Cũng que cấy thẳng đó, cấy mặt lớp thạch nghiêng theo đường zigzac Bước 11: Khử trùng que cấy Bước 12: Khử trùng phần miệng đậy nắp ống nghiệm Lưu ý: + Khi đưa que vào cấy nên nhẹ nhàng để tránh làm rách thạch + Khơng sử dụng que cấy nóng ống vi khuẩn để lấy vi khuẩn làm dẫn đến vi khuẩn chết cấy vào vi khuẩn khơng xuất phần thạch Kết biện luận: 3.1 Kết quả: - Phần thạch tròn: đọc phản ứng sử dụng glucose: (+) có màu vàng (lên men glucose) Sự sinh gas: có làm nứt thạch - Phần thạch nghiêng: đọc phản ứng sử dụng lactosec(+) có màu vàng (lactose dương tính) - Vùng tiếp giáp phần: đọc phản ứng sinh H2S, dương tính có màu đen 3.2 Biện luận: Hình 2: Kết cấy mơi trường KIA Quan sát hình ta thấy: - Ống N2.1: Xuất vi khuẩn đổi màu từ đỏ sang vàng , ta thấy đường cấy thẳng, thấy đường zig – zic mờ trình lấy sinh viên lấy vi khuẩn - Ống N2.2: Phần thạch nghiêng : phản ứng có sử dụng lactose có màu vàng (-) xuất rõ VK đường Zigzac Phần thạch trịn : có tượng nứt thạch => có sinh Gas - Ống N2.3: Phần thạch nghiêng : phản ứng có sử dụng lactose có màu vàng (-) xuất rõ VK đường Zigzac Phần thạch trịn : có tượng nứt thạch bị đẩy thạch lên => có sinh Gas - Ống N2.4: Phần thạch nghiêng thạch trịn có màu đỏ (-) thấy rõ đường cấy Không xuất vi khuẩn trình lấy vi khuẩn , hơ lửa nóng vi khuẩn bị chết nên vi khuẩn không mọc => Cả ống nghiệm có phản ứng dương (-) mơi trường khơng xuất màu đen Định danh VSV theo PP sinh hố : 2.1.Khả sử dụng URE: Mục đích: Xác định vi khuẩn có enzyme urease thủy phân ure thành NH3 CO2 2.1.1.Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị: a Vật liệu: - Vi khuẩn - Môi trường cấy Ure Broth (MIU) 2.1.2 Dụng cụ: STT Dụng cụ Que cấy thẳng Đèn cồn Cồn 70 độ Bật lửa Bút lông dầu 2.1.3.Các bước thực hiện: Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống ghi sẵn thông tin Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khô tiến hành thực Bước 4: Làm nóng đầu que cấy thẳng lửa đèn cồn, để nguội lấy lượng vi khuẩn vừa đủ Bước 5: Dùng que cấy thẳng cấy đâm sâu vào khối thạch tròn đường cấy thẳng Hơ thành miệng bình ống vừa cấy xong lửa đèn cồn để tiệt vi khuẩn lỡ bám miệng ống sau đặp nắp lại Bước 6: Tiệt trùng que cấy lửa đèn cồn 2.1.4.Kết biện luận: a Kết - Phản ứng âm (-): mơi trường màu cam b Biện luận: Vì mơi trường có phản ứng âm nên phản ứng khơng xảy phản ứng  vi khuẩn khơng có enzyme urease thủy phân ure thành NH3 CO2 Lỗi gặp phải: Khi que cấy cịn nóng vội lấy vi khuẩn  vi khuẩn chết  khơng cịn tồn VK  phản ứng không xảy 2.2 Thử nghiệm khả sử dụng acid amin lưu huỳnh sinh H2S Mục đích: Khảo sát tính di động vi khuẩn 2.2.1.Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị a.Vật liệu: - Môi trường nuôi cấy SIM (hydrogen sulfite-indol-motility) - Vi khuẩn 10 2.2.1 Dụng cụ: STT Dụng cụ Que cấy thẳng Đèn cồn Cồn 70 độ Bật lửa Bút lông dầu 2.2.2 Các bước thực hiện: Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống ghi sẵn thông tin Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khơ tiến hành thực Bước 4: Làm nóng đầu que cấy thẳng lửa đèn cồn, để nguội lấy lượng vi khuẩn vừa đủ Bước 5: Dùng que cấy thẳng cấy đâm vào khối thạch trịn đường cấy thẳng (chỉ đâm ½ lọ tránh trường hợp chạm đáy lọ để quan sát rõ di động vi khuẩn) Hơ thành miệng bình ống vừa cấy xong lửa đèn cồn để tiệt vi khuẩn lỡ bám miệng ống sau đặp nắp lại Bước 6: Tiệt trùng que cấy lửa đèn cồn 2.2.3 Kết biện luận: a Kết quả: - Phản ứng dương (+): Vi khuẩn di động xung quanh đường cấy, xoắn ốc làm đục toàn ống thạch (N6.2) - Phản ứng âm(-): Vi khuẩn không di động mọc đường cấy (N6.5) b Biện luận: 11 - Khi cấy đâm đường ngắn, sau thời gian ủ nhiệt độ 37 độ, thấy đường cấy vi khuẩn có kéo dài xuống đáy lọ mơi trường → vi khuẩn có khả di động ( N6.2) + Vi khuẩn có khả di động vi khuẩn khảo sát vi khuẩn E.coli E.coli có tiêm mao (thành phần chủ yếu protein flagelin)  giúp vi khuẩn di chuyển - Khi cấy đâm đường ngắn, sau thời gian ủ nhiệt độ 37 độ, thấy đường cấy vi khuẩn khơng kéo dài xuống đáy lọ môi trường , vi khuẩn xuất đường cấy→vi khuẩn khơng có khả di động (N6.5) 2.3 Thử nghiệm MR (Methy red) Mục đích: Khảo sát vi khuẩn lên men tạo hỗn hợp acid 2.3.1 Vật liệu – Dụng cụ - Thiết bị a Vật liệu - Môi trường nuôi cấy MR-VP - Vi khuẩn b Dụng cụ STT Dụng cụ Que cấy thẳng Đèn cồn Cồn 70 độ Bật lửa Bút lông dầu 2.3.2 Các bước thực hiện: Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống ghi sẵn thông tin 12 Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khơ tiến hành thực Bước 4: Làm nóng đầu que cấy thẳng lửa đèn cồn, để nguội lấy lượng vi khuẩn vừa đủ Bước 5: Dùng que cấy vịng cấy vào mơi trường Bước 6: Tiệt trùng que cấy lửa đèn cồn 2.3.3 Kết biện luận: a Kết quả: - Phản ứng âm (-): môi trường chuyển vàng nhạt b Biện luận: Phản ứng âm mơi trường chuyển màu vàng nhạt Theo lý thuyết, E.coli có dương tính với thử nghiệm MR (môi trường đổi sang màu hồng) Tuy nhiên q trình thực hành, sử dụng que cấy cịn nóng lấy VK  VK chết  mơi trường không đổi màu ( màu vàng nhạt)  vi khuẩn không lên men tạo hỗn hợp acid 2.4 Thử nghiệm khả sử dụng citrate nguồn carbon vi khuẩn: Mục đích: Xác định khả sử dụng citrate nguồn carbon vi khuẩn 2.4.1 Vật liệu-Dụng cụ- Thiết bị: a Vật liệu: - Vi khuẩn - Môi trường Simmon citrate agar b Dụng cụ: STT Dụng cụ Que cấy thẳng Đèn cồn Cồn 70 độ 13 Bật lửa Bút lông dầu c Thiết bị: 2.4.2 Các bước tiến hành: Bước :Ghi đầy đủ thông tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống ghi sẵn thông tin Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khô tiến hành thực Bước 4: Làm nóng đầu que cấy thẳng lửa đèn cồn, để nguội lấy lượng vi khuẩn vừa đủ Bước 5: Dùng que cấy thẳng cấy vào môi trường Bước 6: Tiệt trùng que cấy lửa đèn cồn 2.4.3 Kết biện luận: a Kết quả: - Phản ứng âm (-): môi trường màu xanh rêu - Biện luận: Vì phản ứng xảy âm nên E.coli không khả sử dụng citrate nguồn carbon 14 Hình 3: Kết định danh đặc tính sinh hố BẢNG TỔNG KẾT ĐỊNH DANH MƠI TRƯỜNG CỦA VI KHUẨN Môi trường MR SIM Biện luận Phản ứng âm (-) : Mơi trường cấy có màu vàng nhạt Phản ứng dương (+): Vi khuẩn di động xung quanh đường cấy, xoắn ốc làm đục toàn ống thạch Phản ứng âm (-): vi khuẩn khơng có khả di động xung quanh đường cấy, xoắn ốc làm đục tồn ơng thạch Simmon citrate agar Urea Broth III Phản ứng âm (-): môi trường màu xanh rêu Phản ứng âm (-): Môi trường màu cam KẾT QUẢ KHÁNG SINH ĐỒ - ETEST Phương pháp kháng sinh đồ: Mục đích thực hiện: Quy trình thực kháng sinh đồ, MIC 1.1: Vật liệu - dụng cụ - thiết bị 1.1.1: Vật liệu - Vi khuẩn pha loãng 0,5 McFarland 15 - Đĩa giấy kháng sinh tẩm kháng sinh 1.1.2: Dụng cụ: STT Dụng cụ Qua tăm Đèn cồn Cồn 70 độ Nước javen 1.1.3: Thiết bị: 1.2: Các bước thực hiện: Bước :Ghi đầy đủ thơng tin bệnh phẩm ( tên mẫu, tên nhóm-người thực hiện) Bước 2: Sử dụng cồn 70 độ tiến hành làm bề mặt bàn thí nghiệm Chuẩn bị ống ghi sẵn thông tin Bước 3: Làm bao tay người làm thí nghiệm cồn để bao tay khô tiến hành thực Bước 4: Trải vi khuẩn : Dùng que vô trùng thấm dung dịch vi khuẩn pha loãng 0,5 McFarland, ép sát que vào thành ống eppendorf cho bớt lượng dịch chứa VK trải lên mặt thạch thật đều, kín khơ Khi trải ½ đĩa, xoay 60° đĩa trải lần 2, xoay đĩa petri 60° trải lần Cuối cùng, dùng que quét vòng xung quanh thành đĩa petri Bước 5: Sau trải vi khuẩn, ấp khô mặt thạch 37°C trình 15 phút Bước 6: Đặt kháng sinh: Dùng kẹp tiệt trùng (đốt đèn cồn, làm nguội) kẹp khoanh giấy (kháng sinh) đặt lên mặt thạch cho tiếp xúc đều, đĩa cách tối thiếu 2,5 cm vat cách thành đĩa tối thiểu cm, không xê dịch đĩa kháng sinh sau đặt Chỉ phép đặt bề mặt thạch khô Bước 7: Tiệt trùng kẹp Bước 8: Ủ 37°C 24 16 Bảng: Tiêu chuẩn đọc kết đường kính vùng kháng khuẩn nhóm vi khuẩn Acinetobacter spp Và khoảng chấp nhận đường kính chủng E.coli ATCC 25922 STT Kháng sinh Hàm lượng kháng sinh Ceftazidine Imipenem Meropenem Tobramycin Gentamicin Ciprofloxacin CAZ IMP MEM TM GM CIP 30 10 10 10 10 Đường kính tiêu chuẩn S ≥ 18 ≥22 ≥18 ≥15 ≥15 ≥21 I 15-17 19-21 15-17 13-14 13-14 16-20 R ≤14 ≤18 ≤14 ≤12 ≤12 ≤15 E.coli ATCC 25922 25-32 26-32 28-34 18-26 19-26 30-40 1.3: Kết biện luận a Kết quả: BẢNG KẾT QUẢ KHÁNG SINH ĐỒ STT 10 11 12 Nhóm kháng sinh 1(N2.1) 2(N2.2) 3(N2.3) 4(N2.4) Kháng sinh Ertapenem Kanamycin Tobramycin Cefoxitin Colistin Imipenem Amoxicillin/Clavulanic Ciprofloxacin Gentamicin Cefuroxime Ceftazidine Meropenem Ký hiệu En Kn Tb Cn Co Im Ac Ci Ge Cu Cz Me Đường kính vi khuẩn 26 20 18 24 15 33 20 23 17 22 28 30 b Biện luận: 17 - N2.1: Tb=18 mm > 15mm (đường kính tiêu chuẩn) => nhạy(S) nằm khoảng cho phép (18-26) => đáng tin cậy - N2.2: Im= 33 mm > 22mm(đường kính tiêu chuản) => nhạy(S) chủng chuẩn E.coli ATCC nằm khoảng cho phép (26 - 32) => không đáng tin cậy - N2.3: + Ge= 17 mm > 15mm(đường kính tiêu chuẩn) => nhạy(S) chủng chuẩn E.coli ATCC nằm khoảng cho phép (19-26) => không đáng tin cậy + Ci= 23 mm > 21mm(đường kính tiêu chuẩn) => nhạy(S) chủng chuẩn E.coli ATCC nằm khoảng cho phép (30-40) => không đáng tin cậy -N2.4: + Cz = 28 mm >18mm (đường kính tiêu chuẩn) => nhạy (S) chủng chuẩn E.coli ATCC nằm khoảng cho phép (25-32) => đáng tin cậy + Me = 30 mm > 18 mm ( đường kính tiêu chuẩn) => nhạy (S) chủng chuẩn E.coli ATCC nằm khoảng cho phép (28-34) => đáng tin cậy Hình 4: Kết kháng sinh đồ MIC Phương pháp E-test: 18 - Vi khuẩn phát sinh môi trương BHA, ủ 18 -24 cho chủng vi khuẩn phát triển - Pha lỗng vi khuẩn với nước muối sinh lí đến độ chuẩn 0,5 McFarland - Trải đĩa, để khô mặt thạch 3-5 phút - Đặt que E-test lên mặt thạch trải vi khuẩn, ủ 37oC - Sau 16-18 giờ, đọc kết đường kính vịng vơ khuẩn đĩa thước đo Hình 5: Kết E-Test Kết quả: Đường kính vịng vơ khuẩn( E-test) = mm 19 IV PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TẾ BÀO VI KHUẨN Mục đích thực hiện: Xác định số lượng vi khuẩn/ vi sinh vật tổng số hay số lượng vi khuẩn/ vi sinh vật riêng biệt đơn vị vật phẩm đem nghiên cứu (trên g ml dung dịch) 4.1 Vật liệu- Dụng cụ- Thiết bị: 4.1.1 Vật liệu: - Môi trường sử dụng: Thạch lỏng - Nước muối sinh lý 0.9% - Nước cất vô trùng 1ml 4.1.2 Dụng cụ: STT Dụng cụ Micropipet 1000 um Đèn cồn Cồn 70 độ Bật lửa Bút lông dầu Đĩa petri Ống nghiệm Gía đỡ ống nghiệm Que cấy gạt thủy tinh 10 Cốc có mỏ 4.1.3 Thiết bị: + Máy ủ nhiệt độ 4.2 Các bước thực hiện: 4.2.1 Lấy mẫu: Quy trình lấy mẫu có u cầu sau: 20 + Lấy mẫu có tính chất đại diện + Dụng cụ lấy mẫu, chứa mẫu phải vô tùng + Mẫu lấy xong, phải phân tích ngay, khơng để q 24h + Mẫu lấy phải có nhãn ghi ký hiệu đồng thời phải ghi vào sổ đặc điểm mẫu nơi thu mẫu 4.2.2 Pha loãng mẫu thực thao tác: - Pha loãng mẫu: + Ta đồng mẫu cách pha 1ml (1000 um) dung dịch nước cất vào 9ml dd nước muối sinh lý 0.9% + Lắc ống nghiệm => Ta độ pha loãng 10−1 lấy từ mẫu sang mẫu 1ml mẫu cuối 10−4  Lưu ý: Từ ống nghiệm thứ tức từ 10−2, ta phải tráng mẫu trước - Thực thao tác: + Dùng micropipet hút 0,1ml dd pha loãng (cho 2-3 đĩa vào mơi tường) vào đĩa petri có sẵn thạch + Dùng que cấy gạt thủy tinh nhúng cồ hơ qua lửa đèn cồn trải mặt thạch sau đem ủ nhiệt độ 37° C 24h + Cho số khuẩn lạc thích hợp vào đĩa ( 25-250 khuẩn lạc/ đĩa)  Lưu ý: Khi đưa khuẩn lạc vào đĩa ta phải chắn đĩa gần đèn cồn 4.3 Kết biện luận: 4.3.1 Kết quả: Ta xác định gián tiếp số lượng tế bào cách đếm số lượng khuẩn lạc mọc mơi trường thạch 4.3.1 Biện luận: Nhìn vào hình ta thấy mật độ thấp vi khuẩn xuất rõ đếm 21 - Đĩa N2.1 có lượng vi khuẩn dày đặc, nhỏ li ti, nhiều nên đếm trải bề mặt đĩa thạch - Đĩa N2.2 VK bắt đầu to hơn, thưa dần số lượng giảm so với N2.1 - Đĩa N2.3 Vi khuẩn to ra, dần ( lượng VK dần biến lượng nhỏ xuất bề mặt thạch) rời rạc dần so với đĩa N2.2 - Đĩa N2.4 Vi khuẩn dần đếm số lượng VK so với đĩa N2.3  Vì dung dịch pha lỗng từ dung dịch gốc có nồng độ giảm dần từ 10−1 −10−4 nên đưa vào đĩa lượng vi khuẩn giảm dần Hình 6: Kết phương pháp trải vi khuẩn Tài liệu tham khảo 22  Giáo trình thực tập vi sinh học GV TS Trần Khánh Linh 23 ... 23 BÀI BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC TẬP MÔN VI SINH I.KỸ THUẬT C? ?Y RIA: kỹ thuật c? ?y VSV từ mơi trường sang mơi trường khác Mục đích thực hiện: khảo sát hình thái, tính chất sinh lý, sinh hóa,... đèn cồn Tay phải cầm d? ?y c? ?y hơ nóng xung quanh ( đợi – 10 gi? ?y để d? ?y c? ?y nguội bớt) trước l? ?y vi khuẩn - C? ?y mạnh rách thạch - Hơ que c? ?y nóng -> chết vi khuẩn - C? ?y sai đường c? ?y Đường số... 3.1.Kết quả: Với kỹ thuật c? ?y ria y? ?u cầu kết cần đạt : đường c? ?y rõ ràng xuất shiện vi khuẩn lạc đơn lẽ mơi trường số 3.2.Biện luận Hình 1: Kết kỹ thuật c? ?y ria Quan sát hình ta th? ?y: - Đĩa số (BHI