Đang tải... (xem toàn văn)
Dot Blot – HPV GENOTYPING TEST HPV (Human Papilloma Virus) PGS TS Cao Minh Nga BM Vi sinh – Khoa Y – ÑHYD TP HCM Noäi dung I Môû ñaàu II Tính chaát virus III Khaû naêng gaây beänh IV Xeùt nghieäm chaå.
HPV (Human Papilloma Virus) PGS TS Cao Minh Nga BM Vi sinh – Khoa Y – ĐHYD TP HCM Nội dung I Mở đầu II Tính chất virus III Khả gây bệnh IV Xét nghiệm chẩn đoán V Dịch tễ học VI Phòng ngừa VII Điều trị I Mở ñaàu - Papillomas: u nhú (papilla = nipple, oma = tumor) - HPV, polyomavirus, virus SV 40 họ papovavirus + hình thái virion: + tổ chức gen tính kháng nguyên: - HPV: virus gây u nhú - u TB biểu mơ lành tính (mụn cóc) - Một số HPV (Vd: HPV-16) ung thư (K) biểu mơ, đặc biệt: K cổ tử cung II Tính chất virus - sợi đôi DNA, - màng bọc (-) - capsid đa diện, 2R = 55nm (72 capsomer) - có tính hướng biểu mô vảy mụn cóc & u nhú Bản đồ Gen HPV Bản đồ Gen HPV Bộ gen HPV: 8.000 cặp base, gồm vùng: - Vùng điều hòa dài (LCR): 10% chiều dài gen, vùng biến động - Vùng gen sớm: gồm gen (E1 E7) - Vùng gen muộn: gồm gen (L1 L2) Hai gen sớm E6 E7, đặc biệt gen E6 E7 týp HPV có nguy cao gen gây K II Tính chất virus (tt) Genotype HPV - > 100 genotype, - định typ dựa trình tự nucleic acid + >10%: loại (type) + – 10%: thứ type (subtype) + < 2%: biến thể (variant) - số type dựa thứ tự phát không liên quan đến phát triển chủng loại (phylogeny) II Tính chất virus (tt) Sự đề kháng - HPV bền với nhiệt nơi khô - tồn / TB biểu mô chết bong tiếp tục gây nhiễm Chu kỳ tăng trưởng: chưa rõ - Ở người: + HPV / TB vẩy biệt hóa cao, + TB ác tính: DNA-HPV tích hợp /DNA TB ký chủ thay đổi cấu trúc gen HPV gen E1 E2 khả ức chế gen E6 E7 chuyển sản TB III Khả gây bệnh Các loại HPV niêm mạc > 40 typ / ống sinh dục-hậu môn - type “nguy thấp” (NCT): / K Chỉ gây mụn cóc khối u lành tính gen chúng tồn độc lập với gen tế bào ký chủ - type “nguy cao” (NCC) : / K type / K Có khả gắn xen DNA vào gen người rối loạn phân chia TB hình thành khối u ác tính III Khả gây bệnh Các loại HPV niêm mạc - Phần lớn mụn cóc: typ NCT lành tính, khơng diễn tiến thành ác tính - Nhiễm HPV typ NCC K TB biểu mô cổ tử cung (CTC) dương vật HPV & K CTC: Nhieãm HPV typ NCC nguyên nhân gây K CTC - HPV 16 chiếm 50% số K CTC / TG - HPV 16 & HPV 18: typ gây K chủ yếu (> 70%) III Khả gây bệnh (tt) HPV & K CTC: Nhiễm HPV typ NCC nguyên nhân gây K CTC - HPV 16 chiếm 50% soá K CTC / TG - HPV 16 & HPV 18: typ gây K chủ yếu (> 70%) Gen E6 E7 mã hóa protein E6 E7 Protein E6, E7 gắn kết với protein p53 pRB (-) ức chế tăng trưởng khối u Protein E6, E7 HPV týp 16 liên kết mạnh týp 16 thường gây K K CTC (): sau sơ nhiễm HPV 1-20 năm III Khả gây bệnh (tt) III Khả gây bệnh (tt) IV Các xét nghiệm chẩn đoán Pap smear tầm soát K CTC phát 80% ca có nguy K không phân biệt typ HPV Sinh học phân tử: HPV test: sàng lọc K CTC nhạy > Pap phân biệt typ HPV IV Các xét nghiệm chẩn đoán (tt) Ýù nghóa HPV DNA(+)/ sàng lọc: - HPV DNA genotyp NCC (+) / PN > 30t nhiễm tiềm ẩn + nguy K CTC - Nếu bất thường /TB học: HPV DNA test/ 6-12 tháng (-) viêm nhiễm - HPV DNA genotyp NCC (+) (-) Test lại theo chương trình sàng lọc chung/3-5 năm IV Các xét nghiệm chẩn đoán (tt) Ứng dụng HPV test: - Phát high risk - Định genotype: + nghiên cứu dịch tễ học + thử nghiệm vaccin + test để điều trị + theo dõi diễn tiến - Xác định hiệu giá virus - Khẳng định cho ASCUS/hc2 * Reverse Dot-Blot xác định genotype HPV Nguyên lý: - PCR phát HPV: dùng cặp primer có kích thước 181 bp gen L1 / HPV genome(trình tự đích) - Lai phân tử sản phẩm PCR đánh dấu với mẫu dò đặc hiệu cho 24 typ HPV cố định sẵn / màng lai nylon + typ Low-risk : 6, 11, 42, 43, 61, 70, 71 & 81 + 16 typ High-risk: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 82 - Phản ứng tạo màu: dương tính * Reverse Dot-Blot xác định genotype HPV (2) Nguyên tắc phương pháp lai Reverse Dot blot * Reverse Dot-Blot xác định genotype HPV (3) Đọc kết PCR: Định tính HPV Sản phẩm PCR HPV có kích thước 190 bp T 10 Giếng T: Thang chuẩn 100bp Giếng 1-8: Mẫu HPV (+) Giếng 9-10: Mẫu HPV (-) * Reverse Dot-Blot xác định genotype HPV (4) Đọc kết màng lai: Định genotype HPV Từ sơ đồ typ màng lai hộp RDB biết => Đọc kết quả: định genotype HPV Ví dụ: Chứng +: Dương tính Mẫu đồng nhiễm type 6, 11, 81, 16, 18, 33, 58, 66, 68 V Dòch tễ học HPV lây truyền: - chủ yếu: tiếp xúc qua da qua đường sinh dục mụn cóc sinh dục, mụn cóc da, u nhú quản, hầu họng / trẻ sinh từ mẹ nhiễm HPV - () dùng chung quần áo bị lây nhiễm, dụng cụ cắt móng tay, … - (-) HPV từ ĐV người V Dịch tễ học (tt) K cổ tử cung (CTC): K đứng hàng thứ hai / phụ nữ TG - 500.000 ca & 230.000 ca tử vong / năm - 80% số ca/ nước phát triển - 1/5 số ca / Ấn độ châu u: đứng hàng thứ hai / phụ nữ < 50t Hoa kỳ: 12.800 ca K CTC xâm lấn +4.600 tử vong/năm Châu Á: số trường hợp K CTC ½ ca / TG VI Phòng ngừa Vaccin ngừa nhiễm HPV: từ tháng 6/2006 Tại VN: lưu hành từ 24/7/2008 Vaccin sản xuất từ protein capsid L1 HPV týp 16, 18 (và thêm týp 6, 11) tần suất nhiễm Nên chích ngừa sớm K CTC bệnh lý ác tính phòng ngừa thành công châu u VII Điều trị -interferon: hiệu phịng ngừa tái nhiễm Mụn cóc bàn chân cắt bỏ ngoại khoa xử lý đốt acid salicylic Cắt bỏ tử cung có chẩn đốn ung thư ... nhân gây K CTC - HPV 16 chiếm 50% số K CTC / TG - HPV 16 & HPV 18: laø typ gây K chủ yếu (> 70%) III Khả gây bệnh (tt) HPV & K CTC: Nhiễm HPV typ NCC nguyên nhân gây K CTC - HPV 16 chiếm 50%... 1-8: Mẫu HPV (+) Giếng 9-10: Mẫu HPV (-) * Reverse Dot-Blot xác định genotype HPV (4) Đọc kết màng lai: Định genotype HPV Từ sơ đồ typ màng lai hộp RDB biết => Đọc kết quả: định genotype HPV Ví... Các loại HPV niêm mạc - Phần lớn mụn cóc: typ NCT lành tính, khơng diễn tiến thành ác tính - Nhiễm HPV typ NCC K TB biểu mô cổ tử cung (CTC) dương vật HPV & K CTC: Nhiễm HPV typ NCC nguyên