Mục tiêu của đề tài Nghiên cứu đặc điểm phân bố và thành phần các chủng vi nấm gây bệnh trên cây Hồ tiêu (Piper nigrum L.) tại huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam nghiên cứu thành phần và sự phân bố của một số chủng vi nấm gây bệnh chính trên cây hồ tiêu trong điều kiện sinh thái tại huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam làm sơ sở khoa học cho việc đề xuất các biện pháp phòng trừ vi nấm gây bệnh một cách hợp lý tại địa phương.
Trang 1
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG
NGUYÊN THỊ NGUYÊN
NGHIEN CUU DAC DIEM PHAN BO VA
THANH PHAN CAC CHUNG VI NAM GAY BENH TREN CAY HO TIEU (PIPER NIGRUM L.) TAI HUYEN TIEN PHUOC, TINH QUANG NAM
Chuyên ngành : Sinh thái học
Mã số: 60.42.60
LUAN VAN THAC Si KHOA HOC
Người hướng dẫn khoa học: TS ĐỖ THU HA
Đà Nẵng - Năm 2013
Trang 2Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi
Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng
được ai công bồ trong bắt kỳ công trình nào khác
Tác giả
Trang 3MO DAU 1 Lý do chọn đề tài 2 Mục đích nghiên cứu 3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 4 Phương pháp nghiên cứu
5 Cấu trúc luận văn - TH
CHƯƠNG 1 TONG QUAN TAIL Ă„ 1.1 SƠ LƯỢC ĐẶC ĐIỀM SINH HỌC CÂY HÒ TIÊU
1.1.1 Nguồn gốc và phân loại
1.1.2 Điều kiện sinh thái cây hỗ tiêu ¬ ` eRe NN Ee
1.1.3 Đặc điểm sinh học và tình hình sản xuất hồ tiêu Tiên Phước
1.2 TONG QUAN VE TINH HiNH MOT SO VI NAM CHINH GAY HAI
TRÊN CÂY HỎ TIÊU 2s-22teeereerrerrrrrrrrrrrerrrrre 8
1.2.1 Bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêt -.10
1.2.2 Bệnh chết chậm trên cây hồ tiêu " 1.3 PHÒNG TRỪ DỊCH HẠI BẰNG BIỆN PHÁP SINH HỌC ° 1.4 ĐẶC ĐIÊM TỰ NHIÊN CỦA HUYỆN TIÊN PHƯỚC [28, 22
1.4.1 Vị trí địa lý và địa hình
1.4.2 Dat dai
1.4.3 Khí hậu, thuỷ văn
CHƯƠNG 2 ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 ĐÔI TƯỢNG NGHIÊN CỨU " sen
Trang 42.3.1 Phương pháp thu mẫu ngoài thực đị 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu
CHUONG 3 KET QUA VA BIEN LUẬN
3.1 THANH PHAN VI NAM GÂY BỆNH TREN CAY HO TIEU TAI
MOT SO XA CUA HUYEN TIEN PHUGC — QUANG NAM 38
3.2 NGHIÊN CỨU SU’ PHAN BO CUA VI NAM GAY BENH TREN
CAY HO TIEU THEO THANH PHAN CO GIGI DAT "— 3.3 NGHIÊN CỨU SU PHAN BO CUA NAM BỆNH TRÊN CÂY Y HỖ TIÊU THEO PHƯƠNG THỨC CANH TÁC TẠI MỘT SÓ XÃ CỦA
HUYỆN TIÊN PHƯỚC - QUẢNG NAM -48
3.4 NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BÓ CỦA VI NÁM GÂY BỆNH TRÊN
CAY HO TIEU THEO THOI GIAN -53
3.5 NGHIÊN CỨU LÂY BỆNH NHÂN TẠO TRÊN CÂY HỒ TIÊU 59
3.5.1 Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến sự sinh trưởng của 72777 An 3.5.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự sinh trưởng của nấm Phyropliihora VTI 5 -22srerererererererereeeeev ỐP 3.5.3 Ảnh hưởng của pH môi trường đến sự sinh trưởng của nấm Phyrophihora VT1 70 3.6 THU’ NGHIEM KHA NANG ỨC “CHEN NAM BENH BANG NAM TRICHODERMA ĐÔI KHÁNG „72
3.7 THU’ NGHIEM HIEU QUA PHÒNG TRỪ BỆNH 1 CHẾT } NHANH TREN CAY HO TIEU TIEN PHUGC BANG NAM TRICHODERMA DOI
Trang 5
2 KIÊN NGHỊ
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO
QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐÈ TÀI LUẬN VĂN THẠC Si (BAN SAO)
PHỤ LỤC
Trang 6CFU CMA CT PDA TC TSVN VSV WA
Trang 7Số hiệu Tén bang Trang bang 1 Phân loại đất theo hàm lượng sét vật lý cap hat < 7 — |0/002mm
41 Thanh phan vi nắm gây bệnh trên cây hỗ tiêu ở một số 38
` |xã của huyện Tiên Phước
32 Số lượng vi nắm gây bệnh theo thành phần cơ giới đất B ở một số xã tại huyện Tiên Phước (tháng 12/2012)
33 Số lượng vi nắm gây bệnh theo thành phân cơ giới đất a
~ ở một số xã tại huyện Tiên Phước (tháng 1/2013)
3á Số lượng vi nắm gây bệnh theo thành phân cơ giới đất 4s
Tả ở một số xã tại huyện Tiên Phước (tháng 5/2013)
35 Số lượng vi nám gây bệnh theo thành phần cơ giới đất "
~ ở một số xã tại huyện Tiên Phước (tháng 8/2013)
46 Số lượng vi nắm gây bệnh theo phương thức canh tác d0 trên đất trồng hồ tiêu tập trung tại huyện Tiên Phước
Sự phân bố của các chi vi nắm gây bệnh chính trên
3.7 | cây hồ tiêu theo thời gian (tháng) ở một số xã của| S3 huyện Tiên Phước
38 Lay nhiễm các ching nam Phytophthora (VT1) và Fusarium (VT13) lên cây hồ tiêu Tiên Phước «0
Trang 8
Đặc điểm hình thai cua nam Phytophthora VT1 phan
3.10 lập từ rễ cây hồ tiêu bị bệnh chết nhanh tại một số xã |_ 65
của huyện Tiên Phước
3m Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự sinh trưởng của sợi 68
“ "| nam Phytophthora VT1 trén mdi trugng PDA
3> Ảnh hưởng của pH môi trường đến sự sinh trưởng của 70 “| soi nam Phy/ophthora VTI trên môi trường PDA
xa [Mite 46 đối khang ciia nam Trichoderma véi một số 3
nắm bệnh trên cây hỗ tiêu
` Hiệu quả phòng trừ bệnh chết nhanh bằng sinh khối Trichoderma Tr2 trong điều kiện nhà lưới 1%
Trang 9hình
21 Vị trí lấy mẫu trên vườn hồ tiêu (theo FAO) 27
7 Tỉ lệ (%) các chủng nam gây bệnh trên cây hồ tiêu tại " " 1 số xã của huyện Tiên Phước - Quảng Nam
Hình ảnh khuân lạc và cuống sinh bào tử, bào tử của 1
3.2 | số chủng nấm bệnh trên cây hồ tiêu ở huyện Tiên| 40 Phước ~ Quảng Nam
Sự phân bố nắm bệnh hại cây hồ tiêu theo phương
3.3 | thức canh tác tại xã Tiên Châu của huyện Tiên Phước |_ 49 ~ Quảng Nam
" Phân bố nắm bệnh hại hồ tiêu theo thời gian (tháng) ở SA
TỐ xã Tiên Châu, huyện Tiên Phước - Quảng Nam
3ã Phân bồ nắm bệnh hại hồ tiêu theo thời gian (tháng) ở ss
~ xã Tiên Phong, huyện Tiên Phước - Quảng Nam
36 Phân bố nắm bệnh hại hồ tiêu theo thời gian (tháng) ở "
có xã Tiên Lộc, huyện Tiên Phước - Quảng Nam
Cây hỗ tiêu được lây nhiém nam Phytophthora VT1
3.7 |và Fusarium VT13 sau 20 ngày trong điều kiện nhà |_ 61 lưới
ạg — | KÍh thước đường kính khuan lac Phytophthora VT1 trên các môi trường dinh dưỡng 63
Trang 10310 Hình ảnh tản nắm, bào tử động, bào tử và nốt sản trên 6 sợi nắm Phytophthora VT1
am Đường kính khuẩn lạc nam nam Phytophthora VT1 68
trên môi trường PDA theo các khoảng nhiệt đội
Đường kính khuẩn lac nam Phytophthora VT1 nudi
3.12 | cấy trên môi trường PDA ở các ngưỡng nhiệt độ sau 5 |_ 69 ngày nuôi cấy
‡¡a, | Đường kính khudn lac cla nim Phytophthora VT1 1 theo các ngưỡng pH khác nhau trên môi trường PDA
gia JMứS độ đối kháng chủng Trichoderma Tr2 với các 7 nam bénh: Phytophthora, Fusarium, Phythium
„ Hình thái khuẩn lạc và nắm Trichoderma Tr2 trong 1
ống nghiệm
316 Hiệu quả phòng trừ bệnh chết nhanh bằng nắm 1”
` | Trichoderma T12 trong điều kiện nhà lưới
3.17 | Chế phẩm Trichoderma Tr2 trén giá thể hạt thóc T1 Thử nghiệm hiệu quả phòng trừ bệnh chết nhanh cây
3.18 |hồ tiêu bằng chế phẩm 7ichoderma Tr2 trong điều| kiện nhà lưới 79
Trang 11Hồ tiêu (Piper nigrum L.) là cây công nghiệp có giá trị kinh tế cao đứng
đầu về sản phẩm xuất khâu của Việt Nam hiện đã có mặt trên nhiều thị trường
lớn ở các nước như: Mg, chau Au, chau A, Trung Đông Các vùng trồng hồ
tiêu của nước ta chủ yếu tập trung từ Quảng Trị đến các vùng đất đỏ cao
nguyên Trung Bộ, Đông Nam Bộ, đảo Phú Quốc [12]
Theo Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn, mục tiêu phát triển sản xuất và xuất khâu hồ tiêu Việt Nam từ năm 2011 đến 2020: sản xuất ôn định quy mô diện tích khoảng 50.000 ha, sản lượng đạt khoảng 135.000 tắn vào năm 2020 [12]
Tại tỉnh Quảng Nam, cây hồ tiêu của huyện Tiên Phước là một trong những loại cây trồng đặc sản của tỉnh và được xem là “cây xóa nghèo” cho bà con nông dân địa phương Hồ tiêu Tiên Phước có hương vị thơm cay đặc biệt,
không lẫn với hồ tiêu ở các nơi khác, chất lượng có thể sánh với hỗ tiêu Lam-
Pông và Ma-Tơ của Indonesia nỗi tiếng trên thế giới Chất lượng vượt trội của hồ tiêu Tiên Phước là do điều kiện tự nhiên và giống hồ tiêu Các giống hồ tiêu Lộc Ninh, Vĩnh Linh, Án Độ, trồng ở vùng này cho hạt không đạt
hương vị như giống hồ tiêu Tiên Phước Chính vì vậy, giá trị kinh tế của hồ
tiêu Tiên Phước cao hơn hẳn so với các loại hồ tiêu các tỉnh khác [28]
Trong khi hạt hồ tiêu đang có giá trên thị trường, mang lại hiệu quả kinh
tế cao thì diện tích các vườn hồ tiêu ở huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam
Trang 12Vì vậy, việc xác định thành phần, quy luật phát sinh, phát triển của các loại nắm bệnh phát hiện thời điểm xuất hiện và gây hại sẽ giúp cho công tác phòng bệnh và dự tính thời vụ ươm trồng có hiệu quả là một trong những vấn để có ý nghĩa thực tiễn cao hiện nay Song, cho đến nay vẫn chưa có những nghiên cứu cụ thể về thành phần vi nắm gây hại trên cây hồ tiêu cũng như quy
luật phân bố của chúng trong điều kiện sinh thái ở huyện Tiên Phước, tỉnh
Quảng Nam
Trước yêu cầu thực tế sản xuất, với mong muốn có cơ sở khoa học cho
việc hạn chế tác hại của vi nắm bệnh góp phần phục hồi và phát triển cây hồ
tiêu Tiên Phước nhằm cải thiện kinh tế cho người dân địa phương, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứ đặc điểm phân bố và thành phần các chủng vỉ nấm gây bệnh trên cây hồ tiêu (Piper nigrum L.) tại huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng INam”
2 Mục đích nghiên cứu
Nghiên cứu thành phần và sự phân bố của một số chủng vi nắm gây bệnh chính trên cây hồ tiêu trong điều kiện sinh thái tại huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng, Nam làm cơ sở khoa học cho việc đề xuất các biện pháp phòng trừ vi nắm gây bệnh một cách hợp lý tại địa phương
3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
3.1 Đối trợng nghiên cứu
- Các chủng vi nắm gây bệnh được phân lập từ đất và các mẫu rễ, thân,
Trang 13
nam gay bệnh trên cây hồ tiêu 3.2 Phạm vỉ nghiên cứu
- Thu thập mẫu bệnh từ lá, thân, rễ, quả hồ tiêu và mẫu đất được lấy tại một số xã: Tiên Châu, Tiên Lộc, Tiên Phong thuộc huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam;
- Nghiên cứu thành phần các ching vi nam gay bệnh chính trên cây hồ tiêu tại một số xã thuộc huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam;
- Nghiên cứu động thái phân bố các chủng vi nắm gây bệnh hại cây hồ
tiêu theo thành phần cơ giới đất, phương thức canh tác (chế độ tưới tiêu, phân bón) tại một số xã của huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam;
- Nghiên cứu quy luật phân bố của các chủng vi nắm gây bệnh hại cây hồ tiêu theo thời gian (từ tháng 11 năm 2012 đến tháng 9 năm 2013): thực
hiện nghiên cứu đối với các chủng vi nắm gây bệnh chết nhanh, chết chậm;
- Nghiên cứu lây bệnh nhân tạo dé xác định các chủng nắm gây bệnh chết nhanh và chết chậm trên cây hồ tiêu;
- Nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng vi nắm gây bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêu;
- Thử nghiệm khả năng đối kháng của nắm 7ichoderma với các chủng
vi nắm gây bệnh chết nhanh trên cây hỗ tiêu
4 Phương pháp nghiên cứu
~ Phương pháp thu mẫu bệnh cây và mẫu đất
- Phương pháp phân lập mẫu bệnh cây
- Phuong pháp xác định số lượng tế bào vi sinh vật
Trang 14
- Phương pháp nghiên cứu thử nghiệm hiệu quả phòng trừ bệnh chết nhanh bằng chế phẩm nắm 7zichoderma đối kháng
5 Cấu trúc luận văn
Trang 151.1 SƠ LƯỢC ĐẶC DIEM SINH HQC CAY HO TIÊU
1.1.1 Nguồn gốc và phân loại
a Nguồn gốc cây hồ tiêu
Cây hồ tiêu có nguồn gốc từ vùng Tây Ghats, Án Độ Người Hy Lạp gọi là Piperi, các nước nói tiếng La tỉnh gọi là Piper và người Anh gọi là Pepper tắt cả những tên này đều có nguồn gốc từ Sanskrit người dân bản xứ
gọi nó là Pippal Hiện nay, cây hồ tiêu được phát triển rộng khắp trong các
vùng nhiệt đới, các nước sản xuất tiêu chính là Án Độ, Malaysia, Indonesia và Việt Nam [9]
Ở Tiên Phước, hồ tiêu được trồng từ rất lâu và phát triển mạnh nhất vào
khoảng năm 1985 — 1987, thời gian này hạt hồ tiêu khô được xuất bán rộng khắp thị trường trong và ngoài nước nhờ chất lượng, giá trị của hạt tiêu rất
Trang 16
Loai: Piper nigrum
Cây hé tiéu: Piper nigrum L là một chỉ lớn có hơn 1000 loài hầu hết là
cây dược liệu thân thảo, thân leo hoặc thân bụi mọc bám vào các cây khác [20] 1 Điều kiện sinh thái cây hồ tiêu a Đất đai
Hồ tiêu có thê trồng ở nhiều loại đất khác nhau: đất đỏ Bazan, đất sét pha
cát, phù sa bồi, đất xám nhưng tốt nhất là đất đỏ hoặc phù sa mới bồi, thoát nước tốt
Đắt có độ thoát nước tốt đặc biệt không ngập úng, mực nước ngầm sâu
trên Im, đất giàu mùn trên 2%, tơi xốp, thành phần cơ giới đất từ nhẹ đến
trung bình, giàu dinh dưỡng, pH dat: 5,5 — 6,5 b, Nhiệt độ
Nhiệt độ thích hợp bình quân cả năm từ 25 - 300C, nhiệt độ dưới 15°C và trên 40°C tiêu không phát triển được
e Độ ẩm
Độ ẩm thích hợp trung bình 75 - 90%, độ âm cao làm cho hạt phấn dễ dính vào núm nhụy và thời gian thụ phần kéo dài do núm nhụy trương to, tao điều kiện cho sụ hình thành quả tốt hơn
d Lugng mua
Trang 17e Ánh sáng
Cây hồ tiêu là cây ưa sáng, nhất là trong thời kỳ cho quả Tuy nhiên cần che bóng khi thời tiết nắng gắt
# Địa hình
Hồ tiêu chỉ thích hợp ở độ cao dưới 800m, càng lên cao nhiệt độ càng
thấp làm hồ tiêu kém phát triển Ở miền Nam, hiện nay có những vùng trồng
hồ tiêu đến độ cao 900m nhưng bắt buộc nhiệt độ trên 15°C [20],[21]
1.1.3 Đặc điểm sinh học và tình hình sản xuất hồ tiêu Tiên Phước a Đặc điểm sinh học cây hỗ tiêu Tiên Phước
Hồ tiêu là loại cây trồng có giá trị kinh tế cao của Tiên Phước Đặc điểm
của cây hồ tiêu: thân dây, được trồng quanh hồ (tự tạo) hoặc cọc (choái) bám
vào cây tự nhiên, độ cao từ 3—10 m là có thể cho hạt
Đất trồng thích hợp phải cao, thoáng Hồ tiêu cần choái để tạo điều kiện
cho cây leo bám dễ dàng, cần chọn những cây có da nhám, giữ được chất
nước ở vỏ và đặc biệt nhất là phải ít rễ để không ảnh hưởng nhiều đến sự phát triển của cây hồ tiêu
Giống hồ tiêu: người ta thường trồng bằng ngọn hoặc trồng bằng "lươn" tức là những cây con nức tược dưới gốc Thời vụ trồng hồ tiêu thường vào
đầu mùa mưa và thuận lợi nhất là vào khoảng 20 tháng 7 âm lịch
Hồ tiêu Tiên Phước có hai loại: tiêu sẻ lá nhỏ, thơm ngon; tiêu bộp lá to, hạt to nhưng ít thơm hơn
Giá trị hồ tiêu Tiên Phước rất cao nhờ chất lượng và giá trị thương mại
Trang 18huyện, tổng diện tích đã lên trên 300 ha, sản lượng hàng năm 200 - 400 tắn Tuy nhiên từ sau năm 2000, do nhiều nguyên nhân khách quan và chủ quan như giá cả thị trường, thời tiết, khí hậu, dịch bệnh (chủ yếu là bệnh do tuyến
trùng và vi sinh vật gây ra) đồng thời với việc thiếu sự đầu tư chăm sóc của
người dân làm cho nhiều diện tích cây hồ tiêu bị nhiễm bệnh, chết và ngày
một giảm dần
Theo thống kê, cho đến nay mỗi năm huyện Tiên Phước sản xuất gần 40 tấn hồ tiêu hạt, đã mang lại nguồn lợi từ tiêu hạt không phải là nhỏ và cây hồ
tiêu thực sự được xem là “cây xóa nghèo” cho bà con nông dân Nhằm khuyến khích phát triển lại cây hồ tiêu, huyện Tiên Phước đã có nhiều giải
pháp, gần đây nhất là “Đề án khôi phục và phát triển lại đặc sản hỗ tiêu Tiên
Phước” Theo đó, huyện sẽ hỗ trợ 20% vốn đầu tư ban đầu nếu như người dân
trồng giống hồ tiêu Tiên Phước [28]
1⁄2 TỎNG QUAN VÈ TÌNH HÌNH MỘT SÓ VI NÁM CHÍNH GÂY
HAI TREN CAY HO TIEU
Sâu bệnh gây hại trên cây hồ tiêu ở Việt Nam được ghi nhận từ những
năm đầu thế kỷ 20, diện tích trồng hồ tiêu (tính bằng số lượng trụ hồ tiêu) ở
Hà Tiên, Phú Quốc, Rạch Giá và Bà Rịa từ 930.000 trụ vào năm 1910 giảm xuống còn khoảng 540.000 trụ vào năm 1927 do bệnh thối gốc cây hồ tiêu
Công trình nghiên cứu của Barat (1952) tập trung nhiều vào biện pháp canh
tác, dù vậy ông đã tìm thấy một số loài nam bénh nhu Phytophthora sp., Pythium complectens, Fusarium solani var minus, Botryodiplodia
theobromae, Gloeosporium sp., Pestalozzia sp., va một số côn trùng hại như
Trang 19
Thành phân các loài gây hại được bổ sung thêm với 10 loài tuyến trùng theo công trình nghiên cứu của Phạm Văn Biên (1989) Theo nhận xét của Vũ Triệu Mân (2000) [17], bệnh hại hồ tiêu có xu hướng gia tăng và ngày càng trở nên nghiêm trọng hơn ở các vùng trồng hỗ tiêu trong cả nước Người sản
xuất mong đợi những giải pháp phòng trừ có hiệu quả nhưng các phương
pháp phòng trừ mới ít được phổ biến và ngày càng có nhiều vườn tiêu bị hại nặng do sâu bệnh Theo Nguyễn Tăng Tôn và etv (2005) [22] cho biết thành
phần của các loài sâu bệnh hại trên cây hồ tiêu ở nước ta tương tự như ở các
vùng trồng tiêu chính trên thế giới được mô tả trong các công trình của
Gumbek (2002) [40]; Kularatne (2002) [43]: Manohara and Rizal (2002) [44] Theo Ngô Vĩnh Viễn và ctv., (2007) [30] trên hồ tiêu có ba nhóm dịch hại ảnh hưởng trực tiếp đến năng suất hồ tiêu và cần được quan tâm nghiên
cứu giải quyết là: bệnh chết nhanh, bệnh chết chậm, bệnh virus Tác giả cho
rằng bệnh chết nhanh là nguyên nhân gây suy thoái vườn tiêu của nhiều địa phương như Cam Lộ, Quảng Trị; Chư Sê, Gia Lai; Xuân Lộc, Đồng Nai; Phú Quốc, Kiên Giang Về nguyên nhân gây bệnh chết nhanh, tác giả cho rằng do hai nhóm nắm PÖy/opthora sp và Pythium sp gây ra bao gồm P capsici, P nicotianae, P cinnamomi và Pythium sp Bệnh chết chậm do tác động cộng hưởng của nhiều tác nhân như: tuyến trùng, nắm #sarium Sp., Pythium Sp rệp sáp và mối
Theo đánh giá mới đây nhất của Cục Bảo vệ Thực vật (2007) [7], trên cây hồ tiêu có 17 loại bệnh gây hại, trong đó bệnh: thán thư, cháy đen lá, mốc
hồng, tuyến trùng, virus, chết nhanh, chết chậm gây hại nặng và khá phổ biến
Trang 20thối rễ do vi khuẩn, khô vằn là những bệnh tuy có xuất hiện nhưng tác hại không lớn
Nhìn chung, sâu bệnh hại trên cây hồ tiêu là quần thẻ không phong phú
lắm, nhưng mức độ nghiêm trọng do chúng gây nên là rất lớn, đặc biệt là
nhóm sâu bệnh hại trong đất nhu nam Phytophthora sp., tuyén tring va rép sáp Hàng năm bệnh hại thường xuất hiện khá phổ biến, chủ yếu vào giai đoạn giữa và cuối mùa mưa gây thiệt hại rất lớn cho người trồng hồ tiêu Nhiều nhà khoa học, nhiều công trình nghiên cứu đã tập trung tìm hiểu tác nhân gây hại và xây dựng các biện pháp phòng trừ, tuy nhiên trong thực tế các vườn hồ tiêu bị nhiễm bệnh và tỷ lệ cây chết vẫn không giảm [29]
1.2.1 Bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêu
Bệnh chết nhanh được ghi nhận đầu tiên ở Kampong Pempen tại Lampung (Sumatera Island), Indonesia năm 1885 Sau d6, lan rong đến Kamong Negara Agoeng, Goenoeng Sugih Ketjil, Djabung va Negara Batin (Rutgers, 1915)
Ở Án Độ, bệnh phát hiện đầu tiên năm 1902 ở vùng Wynad, kế là Madras In Sarma et al., (1991) ghi nhan bénh do Phytophthora sp 6 Kerala, Karmataka va Tamilnadu
Dịch bệnh được ghi nhận tại Palembang nam 1918, triệu chứng ban đầu quan sát được là lá rụng và cây chết ngay Triệu chứng tương tự được ghi nhận tại Aceh nam 1929 (Muller, 1936), ving phia Nam va Déng Kalimantan năm 1930, phía Tây Java năm 1931 và Central Java năm 1933 (Soepartono,
1953)
Ở Malaysia, bệnh được ghi nhận đầu tiên là “chết nhanh” 6 Sri Aman
Divsion, Sarawak Năm 1940, dịch bệnh bùng phát ở Kuching và Samarahan
Trang 21bắt đầu năm 1953, phá hủy khoảng 50% vườn tiêu ở Kuehing-Seria Dịch bệnh là nguyên nhân gây mắt 7.000 tần tiêu, ước tính khoảng 1,7 triệu USD
Năm 1957, Holiday và Mowat, (1957, 1963) tìm thấy triệu chứng tương
tự ở những vườn trồng tiêu của Sarawak., Ngày nay, bệnh chết nhanh được
tìm thấy ở hầu hết các vườn tiêu của Indonesia
Tại Việt Nam, cũng có nhiều ý kiến khác nhau về tác nhân gây bệnh
chết nhanh trên cây hỗ tiêu Kết quả nghiên cứu thành phần sâu bệnh hại hồ tiêu tại Tân Lâm, Quảng Trị của Nguyễn Ngọc Châu (1995) cho biết tác nhân
gay bénh héo chét nhanh la do nam Phytophthora palmivora vat piperis Bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêu rất nguy hiểm, nắm gây bệnh tắn công trên tắt cả các phần của cây hồ tiêu, và ở tất cả các thời kỳ sinh trưởng của cây, trường hợp nắm bệnh tắn công vào rễ hoặc cô rễ sẽ gây cây chết đột ngột (Phan Quốc Sủng, 2000) [21] Bệnh thường phát triển nhiều trong mùa mưa, những lá bên dưới sẽ dễ nhiễm nắm bệnh sau những cơn mưa lớn vào đầu mùa mưa Nắm bệnh xâm nhập vào cây trực tiếp qua biểu bì hoặc gián tiếp
qua khí khổng
Tại Ấn Độ, Anandaraj (2000) [33] thấy rằng rễ tơ của cây hỗ tiêu phát
triển nhiều nhất vào tháng 7 và tập trung ở tầng 0 ~ 40 cm từ gốc tiêu và ở độ sâu 40 em Những nghiên cứu ở Indonesia cũng cho kết quả tương tự, có
63,8% rễ tơ ở tầng 0 — 50 em Các kết quả này cho thấy, các yếu tố thời tiết
trong mùa mưa không chỉ thích hợp cho nắm bệnh phát triển mà còn giúp cây
hồ tiêu tạo ra các bộ phận non mẫn cảm với ndm Phytophthora sp va ré tiét
ra dịch rễ hấp dẫn các bào tử động nắm Phytophthora sp
Một trong những vi sinh vật sống trong đất gây hại cho cây hồ tiêu là nấm PÖy/ophthora sp gây hiện tượng chết nhanh và phân bó rộng rãi trên thế
Trang 22chết cây như #usarium sp., Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani (Barbara, 2001) [35]
Ở Việt Nam từ các mẫu rễ tiêu bị bệnh thu thập được ở Long Khánh,
Đồng Nai, Nguyễn Vĩnh Trường và ctv., (2002) [26] đã xác định được nắm
gây bệnh cây hồ tiêu tại các vùng này là P#y/ophthora capsici bằng phương, pháp sinh học phân tử Kết quả nghiên cứu của Đào Thị Lan Hoa và ctv., (2006) [13] cho thay trén cay hé tiéu tai Tay Nguyén c6 2 loai Phytophthora
sp gay hại là P capsici và P palmivora
Bệnh do nắm PÖyfophthora capsiei xuất hiện ở tất cả các bộ phận của
liêu kể cả phần trên mặt đất và dưới mặt đất Đầu tiên, có một hoặc
lốm màu tối xuất hiện ở mép lá, những đốm này sau đó kết hợp lại với
nhau dẫn đến rụng lá, thậm chí lá có thể bị rụng trước khi những vết đốm này lan rộng ra khắp phiến lá Nắm bệnh cũng có thể gây hại trên các chỗi non, cành, thân, gié hoa, gié quả Nắm sinh sản nhiều bào tử sẽ tạo thành một lớp
nấm màu trắng bao phủ lên những cành non bị thối Sự nhiễm bệnh trên
nhánh gây khô và rụng lá Thân cây hồ tiêu bị nhiễm bệnh Phytophthora sp
sẽ bị vàng, thối và cây bị chết hoàn toàn Sự nhiễm bệnh trên hoa gây hiện
tượng hoa bị đen và rụng; quả và gié quả bị đen
Các nhà nghiên cứu cũng đã nhận định nếu nấm gây hại các bộ phận
dưới đất như rễ và cổ rễ thì rất nguy hiểm Rễ bị nhiễm bệnh sẽ phát triển
kém, bị thối và thoái hóa, dẫn đến lá vàng, rụng và cây bị khô Nếu quá trình
xâm nhiễm lan từ các dây lươn hoặc các rễ gần mặt đất tới cô rễ thì cây hồ
tiêu sẽ biểu hiện triệu chứng héo Trong khi đó, nếu nắm xâm nhiễm từ hệ
Trang 23Theo Erwin và Ribeiro đất âm ướt, đất nghèo dinh dưỡng, đất có hàm
lượng canxi, magiê, kali thấp và hàm lượng đạm cao cũng tạo điều kiện cho
nam Phytophthora sp phat trién manh
Anith et aL, (2003) [34] đã thành công trong việc phân lập dòng vi khudn déi khang véi Phytophthora capsici từ vùng rễ cây hồ tiêu, đã chọn được chủng PN-026, có khả năng hạn chế Piyrophthora capsici gây héo cây
trong vườn ươm
Đối với bệnh chết nhanh gây thói rễ, cần áp dụng đồng bộ các biện pháp: thoát thủy tốt, tạo sự thơng thống cho vườn trong mùa mưa, loại bỏ chôn vùi
các tàn dư thực vật quanh gốc tiêu trong mùa mưa, vệ sinh vườn làm sạch cỏ
đại, đốt bỏ cành nhánh bị bệnh
Một số loài nắm thuộc ching Phytophthora sp gay thiét hai ngay càng
cao trên một số cây trồng ở Việt Nam, bao gồm cây ăn quả, rau, cây gia vị, và
các cây công nghiệp Mười ba loài Phy/ophrhora sp đã được định danh ở nước ta, trong đó có hai loài gây thiệt hại nặng là P infestans trén cay cd chua và P capsici trên hồ tiêu (Đặng Vũ Thị Thanh, 2004) Những công trình
nghiên cứu gần đây nhất cho thấy bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêu do loài
nam Phytophthora capsici gay nén Ở một số quốc gia khác như: Án Độ,
Malaysia, Trung Quốc, Thái Lan, Philippines còn xuất hiện thêm loài nắm nicotianae va loai nam P palmivora (Doan Nhân Ái, 2007) [I]
Kết quả nghiên cứu của Tran Thi Thu Ha (2007) [46] cho thấy bệnh
chét nhanh do nam Phytophthora capsici trên cây hồ tiêu ở Quảng Trị là cản ngại chính cho sản xuất hồ tiêu tại địa phương Xử lý hom tiêu trước khi trồng với thuốc trừ nắm có khả năng giảm thiệt hai do nam Phytophthora sp
Trang 24
Nghiên cứu vé bénh théi ndn dita do nhém nam Phytophthora sp., theo Ngô Vĩnh Viễn và ctv., (2003) thấy rằng độ pH của đất có ảnh hưởng nhiều đến sự phát triển của nắm bệnh, đất có độ pH cao bệnh phát triển nặng hơn so với đất có độ pH thấp Vì vậy, việc phòng trừ bệnh trên cây hồ tiêu cần chú ý đến độ pH đất với sự phát triển của nám bệnh
Nắm bệnh tồn tại hàng năm và phát sinh phát triển mạnh trong đất ít bón phân và đất chua Bệnh thường gây hại mạnh vào thời điểm chuyển tiếp giữa mùa mưa sang mùa khô Những trận mưa đầu mùa thường gây tình
trạng úng tạm thời, làm cho hoạt động sinh lý của cây bị thay đổi đột ngột,
cây bị suy yếu tạo điều kiện cho nấm bệnh xâm nhiễm dễ dàng Chế độ
chăm sóc có quan hệ chặt chẽ đến quá trình xâm nhiễm gây hại của bệnh Nếu bón thiếu phân, bón quá sát gốc làm đứt nhiều rễ, cây sinh trưởng yếu, bệnh gây hại tăng Đắt có thành phần cơ giới nặng, độ pH quá thấp, có nhiều tuyến trùng, rệp sáp gây hại càng làm gia tăng bệnh nắm góc rễ cho cây hồ tiêu (Burgess et al., 2008) [36]
1.2.2 Bệnh chết chậm trên cây hồ tiêu
Bénh chết chậm (bệnh thối gốc rễ cây hồ tiêu hay bệnh héo vàng thông thường) được nghiên cứu đầu tiên trên đảo Bangka, sau đó, triệu chứng tương tự cũng được tìm thấy ở Thái Lan (Bridge, 1978; Sher và Polcharoen, 1969) và ở Ấn Độ (Sarma và Nambiar, 1982; Ramana et al., 1987; 'Vujanovic et al 2006)
Bridge (1978) đã phan lap duge tuyén tring Radopholus similis, Meloidogyne incognita, nam Fusarium oxysporum va nam Fusarium solani từ rễ bệnh của cây hồ tiêu Từ đó, ông cho rằng tác nhân gây bệnh chết chậm trên cây hồ tiêu không chỉ đơn thuần là do tuyến trùng hay nắm, mà là do sự
Trang 25trùng Dropkin (1980) cho rằng, tuyến trùng thường ký sinh gây thương tồn cho bộ rễ trước, sau đó một số loài thuộc chỉ Fusazim và các chỉ khác như Phytophthora và Pythium ký sinh theo là nguyên nhân gây hiện tượng chết
chậm
Fusarium là tác nhân gây bệnh ở thực vật: chỉ Fuusariưm bao gồm nhiều
loài gây bệnh cho cây như héo do tắc bó mạch, thối rễ, thân và bắp, thối cổ
rễ cây con và thối củ Ƒsarim còn gây bệnh cho nhiều loài cây trồng quan
trọng, có giá trị kinh tế như bệnh chết chậm trên cây hỗ tiêu (Dropkin,
1980), bệnh chết đột ngột ở đậu nành (Li et al., 1998); bệnh tàn lụi ngọn ngũ
cốc (Logrieco et al., 2002); bệnh đốm vòng, bệnh héo vàng trên cây cà chua
(Ngô Thị Xuyên và Nguyễn Văn Đĩnh, 2005); bệnh lúa von (Burgess et al., 2008) [36]
Bệnh chết chậm thường có triệu chứng vàng lá từ từ, nhiều khi cây hồ tiêu bị bệnh 2-3 năm mới chết Cây bị bệnh kém phát triển, năng suất thấp,
bộ rễ thường bị hủy hoại Quan sát trên rễ có nhiều mụn u sưng; gốc thân, cổ
rễ bị thâm đen, thối khô và các bó mạch trong thân bị chuyền màu thâm đen
[28] Đặc biệt, ở những vùng có mật độ mối và rệp sáp hại rễ cao sẽ làm cho triệu chứng của bệnh thêm rõ ràng và phát triển nhanh hơn (Burgess et al., 2008) [36]
Do bộ rễ bị tổn hại, quá trình thoát nước, vận chuyển muối khoáng bị gián đoạn nên cây mới bị bệnh có biểu hiện sinh trưởng kém, lá bị vàng và rụng dần dần, cây còn nhỏ có thể bị chết khô hoàn toàn Trường hợp cây hồ
tiêu bị bệnh nhẹ thì dây tiêu không chết nhưng sinh trưởng không bình thường
va cin cdi
Quá trình gây bệnh của các loài thuéc chi Fusarium: Dau tién sgi nam va
Trang 26nhiễm vào rễ con còn non và lan dần vào các mạch xylem Nắm bệnh sau đó sẽ phát triển trong mạch xylem và lan lên hệ thống mạch dẫn trong thân Quá trình này gây phản ứng của cây, tạo ra các hợp chất phenol và thẻ sằn có màu
nâu Những hợp chat này gây hiện tượng hóa nâu của mạch dẫn, một dấu hiệu
dễ nhận thấy của bệnh héo khi cắt ngang thân Hiện tượng tic mach xylem
làm giảm lượng nước di chuyền lên cây, khi
dần, các đốt cành và thân cũng rụng dần từ trên xuống Quá trình này diễn ra
tương đối chậm, bệnh lại xuất hiện ở dưới mặt đắt nên rất khó theo dõi, phát
cho lá trên cây bị vàng và rụng
hiện sớm để áp dụng các biện pháp phòng trừ kịp thời (Vujanovic et aL.,
2006) Có nhiều nam dich bénh do cac loai thuéc chi Fusarium đã gây tôn
that rat lớn đến sản xuất và đời sống người dân, đặc biệt xảy ra tại các xã Cam Thành, Cam Chính, Cam Nghĩa, Cam Tuyển của huyện Cam Lộ, Quảng Trị
Bệnh héo do các loài thuộc chỉ Zusariưm gây ra rất khó phòng trừ do bào tử hậu tồn tại rất lâu trong đất Có thẻ làm giảm nguồn bệnh bằng cách luân canh các cây trồng có khả năng kháng bệnh ít nhất hai năm trước khi trồng lại các cây trồng mẫn cảm
Tuy nhiên, loại nắm này vẫn có tt tại bằng cách xâm nhiễm vào vỏ
rễ các cây trồng không phải là ký chủ và không biểu hiện triệu chứng Việc
này nêu rõ sự cần thiết phải nghiên cứu đặc tính sinh học của loại nấm này ở
từng quốc gia nhằm xác định vai trò của những cây trồng không phải là ký
chủ và thời gian tồn tại của bào tử hậu trong đắt
Có những giống cây trồng có khả năng kháng bệnh héo do loài nắm này
gây ra Tuy nhiên, một giống kháng bệnh không có nghĩa là có khả năng
kháng với tất cả các chủng của một dạng loài nào đó Hiện nay, chưa có giống
Trang 27để phòng trừ bệnh này cần áp dụng đồng thời cả biện pháp canh tác lẫn biện pháp hoá học
Hiện nay, một số bệnh héo do các loài thuộc chỉ Fusarium đã được phòng trừ thành công bằng phương pháp sử dụng gốc ghép có khả năng kháng bệnh Phương pháp này đã được áp dụng để phòng trừ bệnh héo do một số loài thuộc chỉ Fusarium trên dưa hấu (Burgess et aL., 2008) [36]
Trên thế giới có tới hon 100 bénh héo (héo Fusarium) do cae loai thuộc chi Fusarium gây ra Ở Việt Nam, bénh héo Fusarium 1a mét trong nhing bénh quan trong, phé bién 1a do cae dang loai F oxysporum gay ra (Burgess et al., 2008) [36]
'Bệnh chết chậm là một bệnh rất khó phòng trừ do nguồn bệnh tồn tại rất
lâu trong đắt và quá trình phát sinh bệnh diễn ra tương đối chậm Bệnh này do một số loài nắm thuộc chỉ #usariưm kết hợp với tuyến trùng và các loài nắm
thuộc các chỉ khác như #hizocfonia, Sclerotium, Pythium gây ra
Các lồi thuộc chỉ Zusarim khơng những là một trong những nguyên nhân gây bệnh chết chậm trên hồ tiêu mà còn là tác nhân của nhiều bệnh nguy hiểm trên nhiều đối tượng cây trồng có tầm quan trọng và giá trị kinh tế cao Chúng có khả năng tạo bào tử hậu (dạng bào tử chứa nhiều chất dự trữ và tồn
tại rất lâu trong đất) để có thể chịu đựng những điều kiện bất lợi trong thời
gian dài Một số loài thuộc chỉ Zusarim không có khả năng sản sinh bào tử
hậu sẽ tiếp tục tồn tại trong đất bằng cách làm chậm lại các hoạt động hoại
sinh hay ky sinh trong cơ thể vật chủ Do vay, cae bénh do nam Fusarium sp gây ra rất khó phòng trừ và tiêu diệt triệt đẻ
Tuy nhiên, để nhận dạng loài nấm này nếu chỉ dựa vào đặc điểm hình
Trang 28cùng với kỹ thuật đọc trình tự gen và kỹ thuật DNA tái tổ hợp được dùng để phát hiện và nhận dạng các loài đang được phát triển theo hướng đáng tin cậy và chính xác hơn Trình tự DNA được sử dụng đẻ nhận dạng và nghiên cứu phát sinh loài của nấm là đoạn ITS (intemal transcribed spacers) của ribosomal DNA
1.2.3 Tình hình sâu bệnh hại trên cây hồ tiêu Tiên Phước
Những năm gần đây, diện tích tiêu ở Tiên Phước dần thu hẹp lại, từ 300
ha (trước năm 2000) chỉ còn khoảng 100ha Tình trạng cây chết, rụng lá do
nam hai cé tén Phytophthora sp hoanh hanh dit doi khién it nhất 1⁄3 diện tích tiêu bị chết hàng loạt Khi nắm gây bệnh xâm nhập vào cây tiêu, các tế bào ở rễ, cành lập tức bị phá hủy dẫn đến vườn tiêu héo rũ cành, gốc và phần thân gần mặt đất thối đen Cho đến nay, sâu bệnh đã hoành hành trên 70ha tiêu, nếu không có biện pháp mạnh thì có lẽ con số sâu bệnh sẽ tăng lên, vườn tiêu
giảm năng suất, có vườn tiêu thiệt hại từ 40 - 60%, thậm chí có vườn tiêu bị
mắt trắng
1.3 PHÒNG TRỪ DỊCH HẠI BẢNG BIỆN PHÁP SINH HỌC Biện pháp sinh học có thể nói đơn giản là sử dụng các sinh vật đẻ
chế sinh vật hại và rộng hơn là dùng các sinh vật và các sản phẩm của chúng
để kìm ham sinh vat gay hai
Trong những năm giữa thập kỷ 80, đã sử dụng chế phẩm Trichoderma trên 3.000ha Ché pham tir nam Trichoderma lignorum trên cây bông vải làm giảm 15-20% bénh héo do nam Verticillium và làm tăng năng suất lên 3-9 tạ bông/ha Sử dụng ché pham Trichoderma cing lam giảm 2,5-3 lần bệnh thối rễ cây con ở cây thuốc lá và rau màu
Những năm gần đây, khi cây hồ tiêu được trồng tập trung và phát triển
Trang 29nhanh (Phytophthora capsici), bénh tuyén tring nét san ré (Meloidogyne sp.), bệnh chết chậm (Fusarium sp., Pythium sp., Rhizoctonia sp.) (Dao Thi Lan Hoa và ctv., 2006) [13]; (Nguyễn Vĩnh Trường, 2002; 2004)[26], [27]
'Việc nghiên cứu và sản xuất những chế phẩm sinh học dùng phòng chữa bệnh cho cây trồng đem lại hiệu quả khả quan về mặt kinh tế, thân thiện với môi trường đang ngày càng phát triển Đây chính là một trong những phương pháp phòng trừ sâu bệnh tổng hợp kết hợp các biện pháp kỹ thuật canh tác hợp
lý đem lại hiệu quả kinh tế cao, bền vững cho việc duy trì, mở rộng, tăng diện
tích và năng suất cây trồng nói chung, cây hồ tiêu nói riêng
Mỗi chủng loại vi sinh vật có chức năng sinh học, có phương thức tắn công và có tác dụng khác nhau đối với tác nhân gây bệnh trên những vùng sinh thái riêng biệt
Trichoderma sp là một loại vì nắm được phân lập từ đất, thường hiện
diện ở vùng xung quanh hệ thông của rễ cây Đây là loại nám hoại sinh có khả năng ký sinh và đối kháng trên nhiều loại nắm bệnh cây trồng Nhờ vậy, nhiều loài 7ziehoderma sp đã được nghiên cứu như là một tác nhân phòng trừ sinh học và đã được thương mại hóa thành thuốc trừ bệnh sinh học, phân sinh
học và chat cai tao dat (Harman et al., 2004)
Theo Harman (2004) cho rằng, tùy theo dòng nắm Trichoderma sp viée
sử dụng trong nông nghiệp đã tỏ ra có nhiều thuận lợi nhờ: tập đoàn khuẩn lạc nắm sẽ phát triển nhanh và tạo thành cộng đồng vi sinh vật xung quanh vùng, rễ cây; có khả năng phòng trị, cạnh tranh hoặc tiêu diệt các tác nhân gây bệnh giúp cải thiện sức khỏe của cây; kích thích sự phát triển của rễ nhờ tiết ra các
chất điều hòa sinh trưởng Tính đối kháng với các nắm hại này bằng cách cạnh tranh dinh dưỡng, ký sinh với nắm hại hoặc tiết kháng sinh, enzym phân
Trang 30hóa thứ cấp dễ bay hơi và không bay hơi, một vài chất loại này ức chế vi sinh
vật khác mà không có sự tương tác vật lý Chất ức chế gọi là chất kháng sinh;
ký sinh và cuộn quanh sợi nắm vật chủ thông qua hình thành các dạng móc hay dạng giác bám, tiết enzym hay tiết ra những loại kháng sinh gây thủng sợi nắm vật chủ, cạnh tranh khai thác với nắm gây bệnh cây trồng làm suy kiệt chúng bằng cách hút hết dưỡng chất một cách thụ động và dai dẳng bằng những bào tử chống chịu (chlamydospores)
Cơ chế tác động chính của nam Trichoderma sp 1a ky sinh (Harman va Kubicek, 1998) va tiét ra các kháng sinh (Sivasithamparam và Ghisalberti, 1998) trên các loài nắm gây bệnh Ngoài hiệu quả trực tiếp trên các tác nhân gây bệnh cây, nhiều loài 7ichoderma sp còn định cư ở bề mặt rễ cây giúp thay đổi khả năng biến dưỡng của cây, nhiều dòng nắm đã kích thích sự tăng
trưởng của cây, gia tăng khả năng hấp thụ dinh dưỡng, cải thiện năng suất cây
và giúp cây kháng được bệnh (Harman et al., 2004) Tác động sinh học của môi trường đất cũng ảnh hưởng đến khả năng phòng trừ sinh học của nắm
Trichoderma sp (Bae va Knudsen, 2005) [7]
Khi ứng dụng vào phòng trừ sinh học, nắm 7zichoderma sp có khả năng xâm nhiễm vào vỏ rễ, nhưng liền sau đó đã bị chất callose tiết ra từ rễ ức chế ngay lập tức Đặc tính này khác hăn sự ký sinh giữa nắm bệnh và cây trồng và giúp nắm cộng sinh bảo vệ bộ rễ cây, kích thích cây phát triển đồng thời còn giúp cây tăng khả năng hấp thụ dinh dưỡng (Yedidia et aL 2003; Harman et
al., 2004) Harman et al., (2004) cho biết có nhiều loại cây trồng, cả đơn và
Trang 31Theo Anandaraj (2000) [33] khả năng đối kháng của nắm Trichoderma sp., Glioeladium và các vi sinh vật sống trong đất với P eapsici rất thấp Vì thế, biện pháp bổ sung chất hữu cơ có nhiều vi sinh vật đối kháng hay sử
dụng các chế phẩm sinh học từ các vi sinh vật này sẽ hạn chế sự phát triển của
nam P capsici trong dat C6 thé tréng cac loai Allium như 4 fistulosum, A ascalonicum, A shoenorapsum, A sativum xung quanh cây hồ tiêu vì rễ các cây này tiết ra các chất ngăn cản sự nảy mầm của bào tử động, đồng thời kích
thích sự phát triển của các vi sinh vật có lợi trong đất như các loài
Trichoderma sp va vi khuẩn Trichoderma harzianum nếu được sử dụng phối
hợp phân hữu cơ có thể hạn chế sự phát triển của bệnh héo chết nhanh trên cây hỗ tiêu (Kredics, L.,(2003))[42]
Đối với nắm đối kháng trong phòng trừ sinh học, cần quan tâm đến các
thông số môi trường có khả năng ảnh hưởng đến tác nhân phòng trừ sinh học
này trong đất Các thông số có thể kề là nhiệt độ đất, âm độ đắt, pH đất, thuốc
trừ sâu, các ion kim loại và các vi khuẩn đối kháng của nắm trong đất, kể cả
kỹ thuật canh tác Nhiệt độ thấp cũng có thể làm giảm hoạt tính của nấm
Kredics et al., 2003) [43]
Hướng phòng trừ bệnh sinh học đã và đang được nhiều nhà khoa học trên thế giới nghiên cứu và tạo ra các chế phẩm sinh học có nhiều triển vọng Đối với tuyến trùng có nhiều loài nắm có khả năng tiêu diét nhu: Dactylella
oviparasitica, Arthrobotrys oligospore, Verticillium chỉamydosporium,
Aonacrosporium gepgyropagum đã được thử nghiệm Đặc biệt, khi phối hợp giữa nấm với vi khuan Pasteuria penetrans hiéu qua phong trir Meloidogyne incognita tang lên rõ rệt (Ngô Thị Xuyên, 2002) [31]
Các kết quả nghiên cứu đã khảo sát mối tương tác 3 chiều giữa cây trồng
Trang 32
thống gene biểu hiện khác nhau ở các tương tác Kết quả cho thấy sự hiện diện của nắm đối kháng giúp các PR-protein trong cây có tương tác 3 chiều với các tác nhân gây bệnh khác, thay đổi cả về chất và lượng khi cây trồng bị
nắm bệnh tắn công
Ở nước ta, trong những năm gần đây đã có một số công trình nghiên cứu
sản xuất ché pham Trichoderma Mét sé san phẩm của Viện Sinh Học Nhiệt
Đới đưa vào thử nghiệm trên cây rau ở Củ Chi, Thành phó Hồ Chí Minh; chế
phẩm của bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, Trường Đại Học Cần Thơ thử nghiệm
trên cây xà lách xoong ở Vĩnh Long, đều cho những kết quả rất khả quan Theo tài liệu được công bố của Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn số 49/2004/QĐ-BNN ngày 13/10/2004, mới có duy nhất một sản phẩm với tên thương mại TriB1, hàm lượng 7riehoderma 3.2 x 109 bào từ/gram, được đăng
ký trừ bệnh do nắm Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., Fusarium sp hại cà chua,
khoai tây, đậu đỗ, thuốc lá và hồ tiêu ở Việt Nam [29]
Tại Việt Nam, (Trần Kim Loang và etv., 2007) [5] đã chọn lọc được 5 chủng nấm ?7ichoderma sp từ rễ và đất trồng tiêu tại Tây Nguyên có khả năng đối kháng cao với nắm Phytophthora sp gay hai trén cay hé tiéu tai day Chế phẩm Tricô-VTN của các tác giả khi được sử dụng với nồng độ 0,3-0,4%, có thể hạn chế sự gây hại của nắm Phy/ophrhora sp trên cây hồ tiêu và cây ca cao trong nhà lưới Bên cạnh đó, chế phẩm này cũng cho thấy có hiệu lực cao
trên đồng ruộng khi được sử dụng với lượng 40g/gốc tiêu/năm
1.4 DAC DIEM TỰ NHIÊN CỦA HUYỆN TIÊN PHƯỚC
1.4.1 Vị trí địa lý và địa hình
Trang 33Bình, phía Nam giáp với huyện Bắc Trà My, phía Đông giáp huyện Phú Ninh, phía Tây giáp huyện Hiệp Đức Huyện Tiên Phước có độ dốc theo hai hướng Tây Bắc xuống Đông Nam và hướng Bắc xuống hướng Nam
Tiên Phước là huyện có địa hình bị chia cắt bởi nhiều đồi, núi, sông,
suối Nhiều xã trong huyện nằm xa trung tâm, hệ thống giao thông khó khăn Điều này dẫn đến nhiều địa phương trong huyện gặp khó khăn trong quá trình phát triển kinh tế, giao lưu trao đổi mua bán hàng hoá cũng như phát triển các lĩnh vực xã hội [28] 1.4.2 Dit dai Xét về tính chất đất: Tiên Phước có 09 loại đất chính, đó là: - Đất đỏ vàng phát triển trên đá phiến - Đất vàng đỏ trên đá A xít - Đất nâu vàng trên đất phù sa cổ - Đất đỏ vàng biến đôi do trồng lúa
~ Đất xám hoặc bạc màu phát triển trên sản phẩm hồng tích - Đất phù sa ven sông được bồi và ít bồi
~ Đất phù sa ngòi suối
- Đất đốc tụ
- Đất vàng nhẹ trên đá cát
Đất từ chua đến rất chua có độ pH phô biến từ 4,5 - 5,5 và độ mùn từ
trung bình đến khá, giàu lân [28]
Trang 34Tiên Phước nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới âm gió mùa, nhiệt độ trung
bình là 25°C, sự ảnh hưởng của yếu tố khí hậu trên địa bàn huyện Tiên Phước
khá đồng nhất
Lượng mưa trung bình năm khoảng 2.200-2.600mm nhưng phân bố không đều, mưa nhiều từ tháng 9 đến tháng 12, chiếm 80% tổng lượng mưa cả năm Độ Âm trung bình năm là 84 - 86%, sự chênh lệch giữa các tháng khá lớn, tháng cao nhất (tháng 12) là 90% và tháng thấp nhất (tháng 6) là 77%
Hệ thống sông ngòi huyện Tiên Phước phân bố không đồng đều, địa hình dốc, lưu lượng nước thay đôi lớn theo mùa nên rất khó khăn trong việc cung cấp nước cho sản xuất nông nghiệp cũng như phục vụ cho các hoạt động
dân sinh của các xã nằm dọc theo bờ sông
Điều kiện khí hậu, thuỷ văn, sông ngòi đã tạo cho Tiên Phước những thuận lợi trong phát triển nông nghiệp, đa dạng hoá các loại vật nuôi, cây
Trang 35
CHƯƠNG 2
ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 ĐÓI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
~ Các chủng vi nắm gây bệnh được phân lập từ đất và các mẫu rễ, thân,
lá, quả hỗ tiêu tại một số xã của huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam;
~ Một số chủng nắm 7?iehoderma được phân lập từ đất trồng hồ tiêu tại các xã nghiên cứu ở huyện Tiên Phước đối kháng với vi nắm gây bệnh trên cây hồ tiêu
2.2 ĐỊA ĐIỂM, PHẠM VI VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
2.2.1 Địa điểm nghiên cứu
* Địa điểm thu mẫu ngoài thực địa
Mẫu bệnh từ lá, thân, rễ, quả hồ tiêu và mẫu đất được lấy tại một số xã
(Tiên Châu, Tiên Lộc, Tiên Phong) trồng hồ tiêu tại huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam
* Địa điểm nghiên cứu trong phòng thí nghiệm
- Phòng thí nghiệm Công nghệ vi sinh, Trường Cao đăng Lương thực -
Thực phẩm, Đà Nẵng
~ Phòng thí nghiệm Đài Khí tượng thủy văn khu vực Trung Trung Bộ
2.2.2 Phạm vi nghiên cứu
- Thu thập mẫu bệnh từ lá, thân, rễ, quả hồ tiêu và mẫu đất được lấy tại
một số xã thuộc huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam (giới hạn các xã: Tiên
Châu, Tiên Lộc, Tiên Phong)
- Nghiên cứu thành phần các chủng vi nắm gây bệnh chính trên cây hồ
Trang 36- Nghiên cứu động thái phân bố các chủng vi nắm gây bệnh trên cây hồ tiêu theo thành phần cơ giới đất, phương thức canh tác (chế độ tưới tiêu, phân bón) tại một số xã của huyện Tiên Phước, tỉnh Quảng Nam;
- Nghiên cứu quy luật phân bố của các chủng vi nắm gây bệnh hại cây hồ tiêu theo thời gian (theo tháng): thực hiện nghiên cứu đối với các chủng
gây bệnh chết nhanh và chết chậm trên cây hồ tiêu;
~ Nghiên cứu lây bệnh nhân tạo trên cây hồ tiêu: thực hiện đối với bệnh
thối rễ, thân và vàng lá;
~ Nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng vi nắm gây bệnh chết nhanh
trên cây hồ tiêu;
~ Thử nghiệm khả năng đối kháng của nắm 7ziehoderma với các chủng vi nắm gây bệnh chết nhanh trên cây hồ tiêu
2.2.3 Thời gian nghiên cứu
Đề tài được tiến hành nghiên cứu từ tháng 11 năm 2012 đến tháng 10 năm 2013
2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1 Phương pháp thu mẫu ngoài thực địa a Phương pháp thu mẫu bệnh cây
Chúng tôi thu mẫu theo quy trình lấy mẫu rau, quả tại ruộng sản xuất của FAO (2002) [39] dùng trong kiểm nghiệm dư lượng thuốc bảo vệ thực vật và vi sinh vật đối với rau quả trên đồng ruộng hoặc vườn sản xuất
~ Dụng cụ lấy mẫu:
+ Túi giấy tiệt trùng để đựng mẫu phân tích vi sinh
Trang 37+ Máy đo pH và nhiệt độ đất
- Mẫu được lấy tại 12 vị trí trải đều trên ruộng một cách hệ thống theo
hình chữ W Mỗi vị trí lấy 2 - 3 mẫu ở các cây khác nhau Mỗi tháng lấy mẫu 2 lần vào đầu tháng và giữa tháng
Mẫu sau khi thu nhận được bảo quản trong các túi giấy đã tiệt trùng Đóng gói mẫu cẩn thận để tránh va đập và hơi nước ngưng tụ Xếp các túi đựng mẫu vào thùng xốp có đá đẻ giữ lạnh
- Ghi phiếu điều tra mẫu: + Địa điểm nơi lấy mẫu
+ Nhiệt độ và độ ẩm không khí nơi lấy mẫu
+ Nhiệt độ và pH của đất tại khu vực lấy mẫu
+ Ngày lấy mẫu, đánh sé mau
Mẫu thân, lá, rễ và quả hồ tiêu đem về phân lập ngay hoặc bảo quản trong tủ lạnh ở 2 - S°C, thời gian bảo quản tối da là 48 gid
Hình 2.1 Vị trí lấy mẫu bệnh trên vườn hồ tiêu (theo F.4O)
b Phương pháp thu mẫu dét [6]
Nguyên tắc: Đề đảm bảo mẫu đại diện, các điểm lấy mẫu phải được phân
Trang 38ấy ở tầng canh tác bề mặt từ 5 - 20cm ở
Mẫu đất được lấy xa đường đi,
các vị trí khác nhau (4 - 5 vi tri) trong một vùng 100m” Sau đó các mẫu đất đem trộn đều đựng trong túi giấy đã khử trùng, ghi ngày lấy mẫu, tên địa
phương, loại đất, thảm thực vật Đánh dấu địa điểm để tháng sau lấy tại những
địa điểm này
Thời gian lấy mẫu: tháng 11 năm 2012, tháng 1, tháng 3, tháng 5, tháng 7, thang 8 và tháng 9 năm 2013
Mẫu đất sau khi lấy về được phân lập ngay hoặc bảo quản trong tủ lạnh ở 4C, sau đó phân tích càng sớm càng tốt
2.3.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm a Phương pháp phân lập mẫu bệnh cây [6] [16], [34] * Phân lập từ thân, lá
Rửa mẫu thân, lá trong nước để loại bỏ đất bụi và các tạp chất khác
Khử trùng bề mặt mô lá hoặc thân bằng cách dùng bông đã khử trùng thấm
cồn 70% lau bề mặt thân, lá hoặc nhúng nhanh vào cồn 70% trong 5 giây, rửa
lại trong nước cất vô trùng và để khô trên giấy thấm vô trùng Sau đó dùng kéo cắt thành từng đoạn nhỏ 2 x 2 mm từ phần ranh giới giữa mô khỏe và mô bệnh, tiến hành cấy mẫu trên môi trường WA Đặt các đĩa petri đã cấy mẫu bệnh trong tủ ấm ở nhiệt độ 28°C trong 2 - 3 ngay đẻ cho sợi nắm phát triển trên môi trường Khi nắm bệnh đã mọc, tiến hành cấy chuyền sang môi trường PDA
* Phân lập từ rễ
Trang 39những miếng mô mỏng và cấy lên môi trường WA, khi nắm mọc tiến hành cấy chuyền sang môi trường PDA
* Phân lập nắm bệnh cây từ đắt
Cân 10g đắt cho vào bình tam giác chứa 90ml dung dịch nước muối sinh lý vô trùng, lắc mẫu trên máy lắc ngang với tốc độ 100 vòng/phút trong thời gian 15 phút Dịch mẫu thu được có độ pha lỗng 10”
Dùng pipet vơ trùng hút ImI dung dịch trên cho sang ống nghiệm chứa 9ml nước cất vô trùng lắc đều, ta được dung dịch có độ pha loãng là 10? Tiếp
tục pha loãng mẫu đến độ pha loãng 10, 10', Lấy 0,Iml dịch mẫu cho vào
các đĩa peti có chứa môi trường WA vô trùng Sau đó dùng que trang đều giọt dịch trên mặt thạch Nuôi cấy trong tủ ấm ở nhiệt độ 28 - 30°C trong 3 - 5
ngày để tạo thành các khuẩn lạc riêng rẽ Chọn các khuẩn lạc điển hình cấy
chuyền sang môi trường PDA đến khi thuần chủng Bảo quản giống ở nhiệt độ 4 - 6C,
b Phương pháp xác định số lượng tế bào vi sinh vật [5]
Trang 40n: số giọt dung dịch trung bình trong 1ml dịch pha loãng Df: Độ pha lỗng
'W: Trọng lượng khơ của 1g mau
e Phương pháp phân loại sơ bộ các chủng nắm mốc gây bệnh
- Sử dụng các khóa phân loại của Keith Seifert (1996), S B Marthu Olga Kongsdal (2000) [6]; khóa phân loại nắm mốc của Bùi Xuân Đồng
(1984) [8] và hệ thống phân loại nấm bệnh hại cây trồng của Vũ Triệu Man (2007) [11], [17] ~ Quan sát đặc điểm hình thái khuẩn lạc trên thạch đĩa + Hình dạng + Dạng mặt (nhung mượt, mịn, len xóp, dạng hạt, không )
+ Màu sắc khuân lạc mặt trên và mặt dưới
+ Dạng mép khuẩn lạc (mỏng, dày, phẳng, nhăn nheo )
+ Giọt tiết nếu có (nhiều, ít, màu sắc) + Mùi khuẩn lạc (có, không mùi)
+ Sắc tố hồ tan (màu của mơi trường xung quanh khuẩn lạc) nếu có
- Quan sát các đặc điểm vi học dưới kính hiển vi quang học
+ Sợi nắm: (hyphae) có vách ngăn, không có vách ngăn, có mẫu
+ Bào tử trần (conidia)
+ Bộ máy mang bào tử (spore apparatus)