VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC k k k kỶ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÈ TÀI LựACHỌN CHỦNG VI KHUẨN TẠO CHÁT HOẠT ĐỘNG BÈ MẬT SINH HỌC TRÊN NGUỒN co CHẤT HYDROCARBON NHẢM ÚNG DỰNG xử LÝ Ô NHIỄ.
VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC 'k-k-k-kỶ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÈ TÀI LựACHỌN CHỦNG VI KHUẨN TẠO CHÁT HOẠT ĐỘNG BÈ MẬT SINH HỌC TRÊN NGUỒN co CHẤT HYDROCARBON NHẢM ÚNG DỰNG xử LÝ Ô NHIỄM DẦU Giáo viên huứng dẫn : TS KIỀU THỊ QUỲNH HOA Sinh viên thục : NGUYỀN THỊ BÍCH LIÊN Lóp : 13-02 HÀ NỘI-2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC •ỉĩ Ỷ: -k * KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÈ TÀI LựA CHỌN CHỦNG VI KHUÁN TẠO CHẤT HOẠT ĐỌNG BÈ MẶT SINH HỌC TRÊN NGUÒN co CHẤT HYDROCARBON NHẦM ÚNG DỤNG xử LÝ Ơ NHIÈM DẦU Giáo viên hng dẫn : TS KIỀU THỊ QUỲNH HOA Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN Lớp : 13-02 HÀ NỘI-2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cám ơn tới thầy cô giảo Khoa Công nghệ sinh học, Viện Dại học Mở Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ chi báo em thời gian học tập trường Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Kiều Thị Quỳnh Hoa, Trướng phòng Vi sinh vật Dâu mị, Viện Cơng nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dần, dìu dắt giúp đỡ em q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cám ơn tới Ths Đặng Thị Yen tập thê cán Phòng Vi sinh vật dầu mị, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình giúp đờ em suốt thời gian thực tập phịng Cuối cùng, em xin bày tơ lịng biết ơn tới gia đình, bạn bè người thân ln ling hộ, động viên khích lệ em suốt q trình học tập đê em có kết ngày hơm Với lịng biết ơn sâu sac, em xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quỷ báu trên! Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Bích Liên NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP MỤC LỤC BÁNG CHỪ VIẾT TÁT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐÀU PHÀN I: TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.10 nhiễm dầu 1.1.1 Tình hình nhiễm dầu 1.1.2 Nguồn ô nhiễm dầu 1.1.3 Tác động cùa ô nhiễm dầu đến môi trường người 1.2 Một sốphương pháp xứ lý ô nhiễm dầu 1.2.1 Xử lý phương pháp học 1.2.2 Xứlý phương pháp hóa học 1.2.3 Xứ lý phương pháp sinh học 1.3 Chất hoạt động bề mặt sinh học 1.3.1 Khái niệm chất hoạt động bề mặt sinh học 1.3.2 Phân loại chất hoạt động bề mặt sinh học 10 1.3.3 Tính chất cúa chất hoạt dộng bề mặt sinh học 11 1.3.4 ứng dụng cúa chất hoạt động bề mặt sinh học đờisống 12 1.4 Xử lý ô nhiễm dầu chất hoạt động bề mặt sinh họcsinhtống hợp bời vi sinh vật 13 1.4.1 Vi sinh vật có khả tạo chất hoạt động bè mặt sinh học 13 1.4.2 Các yếu tố ánh hường tới tạo chất hoạt động bề mặt sinh học NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN 14 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP PHÀN II: VẬT LIỆU VÀ PHUƠNG pháp nghiên cứu 16 2.1 Vật liệu 16 2.1.1 Chúng vi sinh vật nghiên cứu 16 2.1.2 Môi trường nuôi cấy 16 2.1.3 Máy móc thiết bị 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp xác định đặc điếm hình thái chúng vi khuẩn nghiên cứu 17 2.2.2 Phương pháp đánh giá tạo chất hoạt động bề mặt sinh học chủng vi khuẩn nghiên cứu 18 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu ãnh hưởng cùa nguồn carbon đến khà tạo chất hoạt động bề mặt sinh học 18 2.2.4 Phương pháp nghiên cứu ánh hưởng cúa nguồn nitơ đến tạo chất hoạt động bề mặt sinh học 19 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng pH đến khả tạo 2.2.5 chất hoạt động be mặt sinh học chúng vi khuẩn nghiên cứu 19 Phương pháp nghiên cứu ảnh hướng nhiệt độ đến khả 2.2.6 tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học chủng vi khuân nghiên cứu 19 2.2.7 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NaCl đen khả tạo chất hoạt động bề mặt sinh học cùa chủng vi khuẩn nghiên 19 cứu 2.2.8 Phương pháp phân loại chủng vi khuẩn nghiên cứu phân tích trinh tự gen 16S rRNA .20 PHÀN III: KÉT QUÁ 21 3.1 Lựa chọn chủng vi sinh vật có khả tạo chất hoạt động bề mặt sinh nguồn chất dầu thô 21 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP 3.2 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc tế bào chủng CKB28 RC6-4 22 3.3 Phân loại chúng vi khuẩn nghiên cứu phân tích trinh tự gen 16S rRNA 22 3.4 Ánh hướng cúa ngồn carbon tới tạo chất hoạt động bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 23 3.5 Ành hưởng nồng độ dầu thô tới khả tạo CHĐBMSH cúa chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 24 3.6 Ánh hướng cứa nguồn nitơ tới tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 26 3.7 Ảnh hưởng nồng độ K.NO3 đến khả tạo CHĐBMSH chùng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 27 3.8 Anh hướng cùa pH đến tạo CHĐBMSH cùa chúng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 28 3.9 Ánh hưởng nhiệt độ đến khả tạo CHĐBMSH chùng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 .29 3.10 Ành hướng cùa nồng độ NaCl đến khả tạo CHĐBMSH cùa chúng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 31 KẾT LUẬN 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BẢNG CHỮ VIẾT TẮT CHĐBMSH Chất hoạt động bề mặt sinh học DO Dầu Diesel (Diesel oil) IEA Tồ chức lượng the giới (International Energy Agency) mN/m Đon vị đo sức căng bề mặt (Mill newton/metter) HK.TS Hiếu khí tổng số EDTA Ethylcncdiaminetetraacctic acid E24 chì số nhũ hóa sau 24 VK Vi khuấn vsv Vi sinh vật NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các vụ tràn dầu giới Bàng Phân loại chất hoạt động bề mặt sinh học 10 Bảng Máy móc thiết bị 17 Báng Khã tạo CHĐBMSH cùa số chủng vi khuẩn phân lập từ giếng khoan dầu khí Vùng Tàu 21 NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Hình thái khuẩn lạc mơi trường HKTS chừng CK.B28 RC6-4 22 Hình Anh hướng cua nguồn carbon khác đến khà tạo CHĐBMSH cùa chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 23 Hình 3 CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nguồn carbon khác 24 Hình Ành hưởng nồng độ dầu thô khác đến khà tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 25 Hình CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nồng độ dầu thô khác 25 Hình Ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 26 Hình CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 tạo nguồn nitơ khác 27 Hình Ảnh hướng cùa nồng độ KNƠ3 đến khả tạo CHĐBMSH cùa chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 .28 Hình CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nồng độ KNCỊị khác 28 Hình 10 Ánh hưởng cùa pH đen khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 29 Hình 11 CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo pH khác 29 Hình 12 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả tạo CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 30 Hình I3.CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 tạo nhiệt độ khác 30 Hình 14 Ánh hưởng cúa nồng độ NaCl đến khả tạo CHĐBMSH cùa chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 .31 Hình 15 CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nồng độ muối khác 31 NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP MỞ ĐÀU Dầu mỏ sản phàm từ dầu mỏ nguồn nguyên liệu quý đời sống cùa người, đem lại nguồn lợi kinh tế không nhỏ cho xã hội Theo thống kê tố chức lượng quốc tế (IEA), năm 2015 nhu cầu tiêu thụ dầu thô giới khống 84 triệu thùng/ngày, nhiên liệu hóa lóng 93,3triệu thùng/ngày Dự báo đến năm 2030 tổng cung dầu thô giới khoảng 94 triệu thùng/ngày, nhiên liệu lỏng 112 triệu thùng/ngày Hoạt động khai thác dầu mỏ mang lại lợi ích kinh tế to lớn cho quốc gia giá trị úng dụng cao dầu mỏ đời sống nhiều ngành công nghiệp khác Bên cạnh lợi ích kinh tế, ô nhiễm dầu trình khai thác vận chuyển dầu mỏ gây họa cho người hệ sinh thái, mối lo ngại nhiều quốc gia trơn giới có Việt Nam Do đặc điếm cấu tạo cúa dầu mỏ hợp chất cao phân tử phức tạp nên xảy cố dầu mỏ làm ảnh hưởng đến môi trường thời gian dài khó xử lý Đe khắc phục nhiễm dầu nói chung vụ tràn dầu nói riêng, ngồi phương pháp vật lý, hóa học, học, phương pháp sinh học ứng dụng ưu điềm an tồn thân thiện mơi trường Trong sổ phương pháp sinh học xử lý ô nhiễm dầu, phương pháp ứng dụng chất hoạt động bề mặt sinh học (CHĐBMSH) sinh tông hợp từ vi sinh vật (VSV) để xử lý (thu hồi, phân hủy sinh học) ô nhiễm dầu quan tâm nghiên cứu bới ưu điếm vượt trội xử lý hiệu quả, triệt đế, giá thành thấp, an toàn thân thiện với môi trường Xuất phát từ trạng ô nhiễm dầu Việt Nam, với nhu cầu tìm kiếm chủng vi sinh vật tạo CHĐBMSH cao nguồn chất hydrocarbon nhằm ứng dụng xử lý ô nhiễm dầu, đề tài luận văn: “Lựa chọn chủng vi khuẩn tạo chất hoạt động mặt sinh học nguồn chat hydrocarbon nhắm ứng dụng xử lý ô nhiễm dầu ” thực NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN Page VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP thấy, trình tự 16S rDNA chúng CK.B28 RC6-4 tương đồng 99% với loài Pseudomonas aeruginosaNậy chúng vi khuẩn CKB28 RC6-4 ký hiệu lại Pseudomonas aeruginosa CK.B28 RC6-4 3.4 Ảnh hưỏìig ngồn carbon tói khả tạo chất hoạt động bề mặt sinh học chùng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Đe tìm nguồn carbon thích hợp cho q trình tạo CHĐBMSH, chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 ni lắc (180vịng/phút) mơi trường khống Gost có bổ sung nguồn carbon khác nhau: DO, dầu thô, glycerol, dầu đậu nành, dầu Olive, glucose Đây nguồn carbon phố biến sử dụng để nghiên cứu khả tạo CHĐBMSH vsv giới Hình Ảnh hưởng nguồn carbon khác đến khà tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 23 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP Hình 3.3 CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nguồn carbon khác Kết Hình 3.2 3.3 cho thấy chùng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH nguồn carbon DO, dầu thô, glycerol, dầu Olive với chi số nhũ hóa E24 57%, 57%, 52% 57% sau 14 ngày nuôi cấy Đe hướng tới ứng dụng chúng xử lý ô nhiễm dầu thô, lựa chọn nguồn carbon dầu thô cho nghiên cứu 3.5 Ảnh hưỏng nồng độ dầu thơ tói khả tạo chất hoạt động bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Nồng độ carbon có vai trị quan trọng trình tạo CHĐBMSH, nồng độ carbon thấp, nguồn carbon không đủ cho vi sinh vật sinh trướng phát triền làm hạn chế khă tạo CHĐBMSH cúa chúng, ngược lại nồng độ carbon cao ức chế trình tạo CHĐBMSH Vì vậy, sau chọn nguồn carbon thích họp dầu thô, tiến hành nghiên cứu tạo CHĐBMSH cúa chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 môi trường khống Gost có bổ sung nồng độ dầu thơ khác (w/v); 1%, 2%, 3%, 4%, 5% 7% NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 24 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI 1% 2% LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP 3% 4% 5% 7% °/o Dầu thơ Hình Ảnh hưởng nồng độ dầu thô khác đến khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Hình CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nồng độ dầu thơ khác Kết Hình 3.4 3.5 cho thấy chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH dái nồng độ dầu thô rộng từ đến 7% sau 14 ngày nuôi cấy Tuy nhiên, nồng độ dầu thơ 3% chúng NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 25 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP sinh tổng hợp CHĐBMSH cao ồn định với số nhũ hóa E24 đạt 59% Chỉ số E24 giám dần nồng độ dầu thơ tăng từ 4% đến 7% Do dó, chọn nồng độ dầu thô 3% cho nghiên cứu 3.6 Ảnh hưởng cua nguồn nitơ tói khả tạo chất hoạt đơng bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Đe tìm nguồn nitơ thích hợp, chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 ni lắc mơi trường khống Gost (3% dầu thơ) bơ sung nguồn nitơ khác (0,3%, w/v): KNO3, NaNO3 (NH4)2HPO4 Ure, NH4NO3 (NH4)2SO4 Hỉnh 3.6 Ảnh hường cùa nguồn nitơ đến tạo CHĐBMSH cúa chùng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 26 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP Hình 3.7 CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nguồn nitơ khác Kct Hình 3.6 3.7 cho thấy, chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH cao on định nguồn nitơ KNO3, chì số nhũ hóa E24 đạt 60% Trên nguồn nitơ khác NaNƠ3 (NH4)2HPO4 ure, khả tạo CHĐBMSH cũa chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 cao với chì số nhũ hóa E24 57%, 52% 48% Đối với nguồn nitơ NH4NO3, CHĐBMSH tạo thấp với chi số nhũ hóa E24 đạt 9% Do đó, K.NO3 lựa chọn làm nguồn nitơ cho thí nghiệm 3.7 Ảnh hưòng nồng độ KNO3 đến khả tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Đế xác định nồng độ K.NO3 phù hợp cho trình sinh tổng hợp CHĐBMSH, chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 tiến hành nuôi lắc mơi trường khống 3% (w/v) dầu thơ nồng độ KNO3 khác (w/v): 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 0,5 Kết Hình 3.8 3.9 cho thấy, chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 có tạo CHĐBMSH nồng độ KNO3 từ 0,1% đến 0,3% với chi số E24 56,3%, 61% 59% Chủng tạo CHĐBMSH yếu nồng độ KNO3 0,4% 0,5% (w/v) Như vậy, nồng độ 0,2% (w/v) KNO3 phù hợp cho trinh tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 27 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP Hình 3.8 Anh hưởng cúa nồng độ KNO3 đến khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Hình 3.9 CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 tạo nồng độ K.NO3 khác 3.8 Ảnh hưỏng cua pH đến khả tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Đế nghiên cứu ảnh hướng pH đến khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4, tiến hành thí nghiệm dãi pH từ đến 14 ngày nuôi cấy trôn môi trường khống Gost có bồ sung 3%(w/v) dầu thơ 0,2 % (w/v) K.NO3 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 28 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP Hình 3.10 Ảnh hường pH đến khã tạo CHĐBMSH cùa chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 ìÍIISb Hình 3.11 CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo pH khác Kết cho thấy chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH tốt on định dái pH rộng từ đến 7, với chì số nhũ hóa E24 50,5%; 63% 62% Chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH tốt pH pH nhân tố thuận lợi đe ứng dụng chủng xứ lý ô nhiễm dầu môi trường biến Việt Nam Từ kết trên, chọn pH cho thí nghiệm 3.9 Ảnh hưỏng cua nhiệt độ đến khả tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Nhiệt độ ảnh hưởng đến khả sinh tổng họp CHĐBMSH vi sinh vật Chúng tiến hành nuôi lắc chủng mơi trường khống NGUN THỊ BÍCH LIÊN Page 29 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP bồ sung 3% (w/v) dầu thơ, 0,2% (w/v) K.NCL, pH với nhiệt độ khác nhau: 25°c, 30°C, 37°c 55°c Hình 3.12 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả tạo CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 Hình 3.13.CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo nhiệt độ khác Từ kết cho thấy chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 có khả tạo CHĐBMSH cao nhiệt độ 25°c 30°C, với chi số nhũ hóa E24 56% 64% sau 14 ngày nuôi cấy Chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH yếu 37°c không tạo CHĐBMSH 55°c Do đó, chúng tơi chọn 30°C nhiệt độ thích hợp cho thí nghiệm NGUN THỊ BÍCH LIÊN Page 30 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP 3.10 Ảnh huởng nồng độ NaCl đến khả tạo chất hoạt đông bề mặt sinh học cua chung p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Đe xác định ảnh hưởng nồng độ muối NaCI tới khả tạo CHĐBMSH chúng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4, tiến hành nuôi lắc chủng mơi trường khống bổ sung 3% (w/v) dầu thơ, 0,2% (w/v) KN, pH 6, nhiệt độ 30°C nồng độ NaCl khác (w/v): 1%, 2%, 3%, 4%, 5% Hình 3.14 Ánh hưởng nồng độ NaCl đến khả tạo CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 Hình 3.15 CHĐBMSH chủng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 tạo nồng độ NaCl khác NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 31 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TỊT NGHIỆP Theo Hình 3.14 3.15 cho thấy, chùng p.aeruginosa CK.B28 RC6-4 sinh tổng hợp CHĐBMSH cao nồng độ NaCI 1% 2%, với chi số E24 68% 43% Ở nồng độ 3% 4%, chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH chúng không tạo CHĐBMSH nồng độ NaCl 5% Vì vậy, nồng độ NaCl phù hợp cho chủng p.aeruginosa CKB28 RC6-4 tạo CHĐBMSH 1% NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 32 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP KÉT LUẬN Từ 15 chừng vi khuân phân lập giếng khoan dầu khí Vũng Tàu, phân lập chùng CK.B28 RC6-4 có khả tạo CHĐBMSH cao nguồn chất khó phân húy dầu thơ Dựa vào đặc diem hình thái phân tích trình tự gcnlóS rRNA chúng CKB28 RC6-4, xác định chúng CK.B28 RC6-4 thuộc loài Pseudomonas aeruginosa với độ tương đồng 99 % Điều kiện môi trường thích hợp cho trinh sinh tong hợp CHĐBMSH chủng Pseudomonas aeruginosa CK.B28 RC6-4 3% (w/v) dầu thô, 0,2% ( w/v) KNO3, pH=6, nhiệt độ 30°C 1% (w/v) NaCl Ớ điều kiện phù hợp này, CHDBMSH chủng tạo cao với chi số nhũ hóa (E24) đạt 68% NGUN THỊ BÍCH LIÊN Page 33 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Lại Thúy Hiền, Dỗn Thái Hịa, Trần Đỉnh Man, Phan Văn Lập, Nguyễn Đình Việt (2003), “Nghiên cứu ảnh hường cùa CHĐBMSH tạo từ chủng vi khuân Pseudomonas aeruginosa A SB lên tính lưu biển dầu thò Bạch Hổ” Lại Thúy Hiền, Đồ Phương Thu, Hoàng Hái, Phạm Thị Hằng, Lê Phi Nga, Lê Thị Nhi Công, Kiều Hữu Ảnh (2003), “ Chọn chùng vi sinh vật tạo CHĐBMSH cao ứng dụng công nghiệp dầu xử lý ô nhiễm môi trường”, Hội nghị khoa học cơng nghệ tồn quốc 5: 297-305 Lại Thúy Hiền, Nguyễn Thị Yên, Vương Thị Nga (2013) “Vi khuân tạo chất hoạt hóa bề mặt sinh học Rhodococcus ruber TD2 phân lập từ nước ô nhiễm dầu ven biên Vũng Tàu”, Tạp chí sinh học, 35(4): 454-460 Trần Kim Quy (1989), “Tong hợp chất hoạt động bề mặt”, NXB TPHCM Tài liệu tiếng Anh: Abu- Ruwaida A.S., Banat I.M., Haditirto s., Salem s., Kadri M., (1991), “Isolation of biosurfactant production bacteria - product characterization and evaluation”, Acts Biotcchnol, 11: 315-324 Abdullah Nurullah, (2017), "Chennai oil spill: As it happened Times of India", Retrieved Aslam A., (2003), “Stricken tanker, Tasman Spirit, spill 33.000 tons of crude oil into the sea off the Karachi coast”, World Wildlife Fund, July 28, 2003 Banat M L, Rahaman M s K., Rahaman T J., (2008), “Bioremediation of hydrocarbon Pollution using Biosurfactants NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 34 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI producing oil LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP degrading bacteria", Third international conference on oil and hydrocarbon spill, modeling, analysis and control (OIL SPILL), Rhodes, Green, September 17-19, in Brebbia Belsky J., Gutnick D L., Rosenberg E., (1979), "Emulsifier of Athrobacter RAG - I isolation and emulsifying properties", Applied and Environmental Microbiology 37: 402-408 10 Campbell Robertson, Clifford Krauss ( 2/8/2010), “ Gulfspill is the largest of its Kind, Scientists say ” ll Chamanrkh p., Assadi Mazaheri M., Noohi A., Yahyyai s., (2008), "Emulsan analysic produced by locally isolated bacteria and Acinetobacter calcoaceticus RAG-1", Iran J Environ Heath Sei Eng., 5(2): 101-108 12 Cooper D G., Goldenberg B G., (1987), "Surface-active agents from two bacillus species", Appl Environ Microbiol 53(2): 224-9 13 Desai J D., Banat I M., (1997), "Microbial production of surfactants and their commercial potential" Microbiology and Molecular Biology Reviews 61: 47-64 14 Duvnjak z., Cooper D G., Kosaric N., (1982), "Production of surfactant by Arthrobacter parafftneus ATCC19558”, Biotechnology & Bioengineering 24: 165-175 15 Fogt J M., Westlake F., Johnson w M., Ridgway H F., (1996), "Environmental gasoline-utilizing isolates and clinical isolates of Pseudomonas indistinguishable by aeruginosa chemotaxonomic are and taxonomically molercular techniques", Microbiol., 142: 2333-1340 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 35 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP ló.Gobbcrt u., Lang s., Wagner F., (1984), “Sophorose lipids formation by resting of Torulopsis cells bombicola”, Biotechnology Letters 6: 225-230 17 Guerra - Santos L., Kappeli o., Feichter A., (1986), ''‘'Dependence of Pseudomonas aeruginosa continuous culture biosurfactant production on nutritional and environmental factors”, Applied microbiology and Biotechnology 24: 443-448 18 Karanth N.G.K., Deo P.G., Vccnanadig N.K., (1999), “Microbial production of biosurfactants and their importance” Current science 77: 116-126 19 Laith Al-Araji, Raja Noor Zaliha Raja Adb, Rahman, Mahiran Basri and Abu Baker Salleh, (2007), “Microbial Surfactant”, Asia Pacific Journal of Molecular Biology and Biotechnology, 99-105 20 Masaaki M., Shigcnori K., (2003), “Production and characterization of biosurfactants from Baccillus licheniformis F2.2”, Biosci Biotechnol Biochem, 67 (6): 1239-1244 21 Mukherjee s., Das p., Sen R., (2006), “ Towards commercial production of microbial surfactants ” , Trends in Biotechnol., 24: 509 -515 22 Robert M., Mercade M E., Bosch M p., Parra J L., Espuny M J., Manrcsa M A., Guinesa J., (1989), “Effect of the carbon source on biosurfactant production by Pseudomonas aeruginosa 44T”, Biotechnology Letters 11: 871-874 23 Sheppard J D„ Cooper D G„ ( 1990) “ The effect of abiosurfactant on oxygen transfer in a cyclone columnreactor” , Journal of Chemical Technology and Biotechnology 48: 325- 336 NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 36 VIỆN ĐẠI HỌC MỚ HÀ NỘI LUẬN VĂN TÒT NGHIỆP 24 Stuwcr o., Hommcl R., Hafcrbug D., Kieber., (1987), “ Production of crystalline surface active glycolipids by strainof Torulopsis apicola”, Journal of Biotechnology 6: 259-269 25 Yakimov M., Tinnis K N., Wray V., Fredrickson H J.,(1995), ''''Characterization of new lipopeptide surfactant produced by thermotolerant and halotolerant subsurface Bacillus licheniformis ABS50”, App Mocrobiol Biotechnol 61: 17061713 Tài liệu internet: 26 Báo điện từ : www.vetnamnet.com 27 Báo điện tứ ngày nay, “ố thăm họa kinh hồng giới”, ngày 05/12/2014 28 Viện Cơng nghệ sinh học : www.vast.ac.vn 29 www.baobinhdinh.com.vn “Xử lý thăm họa dầu tràn ô nhiễm: thừa nghiên cứu, thiếu kết luận” 30 www.bbc.com “Torrey Canyou oil spill: the day the sea turned black” by Bethan Bell and Mario Cacciottolo BBC News 31 www.itaexprcss.com.vn 32 www.Thiennhien.net ngày 14/12/2007 33 www.vietnamplus.vn 34 www.xangdau.net ngày 02/01/2009 35 www.baomoi.com Bài dự thi biến đáo Việt Nam thám họa môi trường biến từ tràn dầu NGUYÊN THỊ BÍCH LIÊN Page 37 ... bề mặt sinh học 10 1.3.3 Tính chất cúa chất hoạt dộng bề mặt sinh học 11 1.3.4 ứng dụng cúa chất hoạt động bề mặt sinh học đờisống 12 1.4 Xử lý ô nhiễm dầu chất hoạt động bề mặt sinh họcsinhtống... chất hydrocarbon nhằm ứng dụng xử lý ô nhiễm dầu, đề tài luận văn: ? ?Lựa chọn chủng vi khuẩn tạo chất hoạt động mặt sinh học nguồn chat hydrocarbon nhắm ứng dụng xử lý ô nhiễm dầu ” thực NGUYỄN... ô nhiễm dầu, ô nhiễm kim loại nặng 1.4 Xử lý ô nhiễm dầu chất hoạt động bề mặt sinh học sinh tống họp vi sinh vật 1.4.1 Vi sinh vật có khả tạo chất hoạt động bề mặt sinh học Sự tạo thành CHĐBMSH