VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÈ TÀI THIẾT KÉ VÀ BIÊU HIỆN GEN doxAV TRONG CHỦNG XẠ KHUẨN STREPTOMYCES L1VỈDANS HÀ NỘI 2017 Sinh viên Đỗ Thị Phuong Thảo Lóp KSCNS.
VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÈ TÀI: THIẾT KÉ VÀ BIÊU HIỆN GEN doxAV TRONG CHỦNG XẠ KHUẨN STREPTOMYCES L1VỈDANS Giáo viên hưóng dẫn: TS Tạ Thị Thu Thủy Sinh viên: Đỗ Thị Phuong Thảo Lóp: KSCNSH -1302 Khoa: Cơng Nghệ Sinh Học HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo công tác khoa Công Nghệ Sinh Học - Viện Đại Học Mờ Hà Nội tạo điều kiện cho chúng em học tập mơi trường khoa học hồn thiện Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến cô giáo TS Tạ Thị Thu Thúy Người dành nhiều thời gian tâm huyết đinh hướng nghiên cứu, giúp đỡ em suốt trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn chị Nguyễn Thị Phương Thào - Kỹ sư công nghệ sinh học nhiệt tình hướng dần, giúp đỡ em suốt q trình thực tập hồn thành đề tài nghiên cứu cùa Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, người thân, tồn bạn phịng thí nghiệm Sinh Học Phân Tử động viên, giúp đỡ em suốt thời giạn học tập nghiên cứu Trong trình nghiên cứu đề tài, thân em có nhiều cố gắng, khơng tránh khói thiếu sót, hạn chế nên em mong nhận góp ý cùa quý thầy - cồ đế khóa luận em đầy đù hoàn chinh Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2017 Sinh viên Đồ Thị Phương Tháo MỤC LỤC MỞ ĐẦU PHẦN TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan kháng sinh 1.1.1 Định nghĩa kháng sinh 1.1.2 Lịch sử kháng sinh 1.1.3 Phân loại kháng sinh 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh 1.2 Đại cuông xạ khuẩn 1.2.1 Đặc điểm chung xạ khuẩn 1.2.2 Sự hình thành chất kháng sinh xạ khuẩn 10 1.3 Tổng quan kháng sinh Doxorubicin 11 1.3.1 Giới thiệu chung kháng sinh Doxorubicin 11 1.3.2 Cấu trúc Doxorubin 12 1.3.3 Con đựờng sinh tphg.hợp 13 1.3.4 Cơ chế hoạt động hoạt tính sinh học cùa Doxorubicin 14 1.4 Các nghiên cứu ứng dụng kháng sinh Doxorubicin toàn giới 16 1.4.1 Lịch sử nghiên cứu Doxorubicin 16 1.4.2 ứng dụng cuà Doxorubicin 17 1.4.3 Thành tựu nghiên cứu 18 1.5 Giói thiệu chung gen dox\, dnrN 20 1.5.1 Genr/oxA 20 1.5.2 Gen dnrV 22 1.5.3 Vai trò liên kết hỗ trợ cùa dox\ dnrN 23 1.6 Vector tách dòng pGEM-T vector biểu pIBR25 23 1.6.1 Vector tách dòng pGEM-T Easy 23 1.6.2 Vector biểu plBR25 24 1.7 Mục tiêu nội dung đề tài 25 1.7.1 Mục tiêu đề tài 25 1.7.2 Nội dung đề tài 26 PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 28 2.1 Vật liệu, hóa chất, mơi trng thiết bị 28 2.1.1 Vật liệu 28 2.1.2 Môi trường 28 2.1.3 Hóa chất 30 2.1.4 Thiết bị 33 2.2 Các phương pháp nghiên cún 34 2.2.1 Phương pháp thiết kế mồi 34 2.2.2 Phương pháp PCR 35 2.2.3 Phương pháp tách chiết ADN tổng sổ củaxạ khuẩn 35 2.2.4 Phương pháp điện di gel agarose 37 2.2.5 Phương pháp tinh ADN từ gel agarose 37 2.2.6 Phương pháp tách ẠẸỊN plạsrpỉặlừ tế bào vi khuẩn 38 2.2.7 Phương pháp nối DNA 38 2.2.8 Phương pháp cắt DNA bàng enzyme giới hạn 39 2.2.9 Phương pháp chuyền gen bang sốc nhiệt 39 2.2.10 Phương pháp chuyền gen vào Streptomyces lividans TK24 41 PHẦN 3: KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 3.1 Tách dòng gen doxÁN 43 3.1.1 Tách chiết ADN tổng số từ xạ khuẩn S.peucetius ATCC27952 43 3.1.2 Nhân gen doxhN bàng phàn ứng PCR 44 3.1.3 Tạo vector tái tổ hợp pGEM-T-í/ơxAV 46 3.2 Thiết kế vector tái tổ họp pIBR25^ZoxAV 48 3.3 Chuyển vector pIBR25-