Xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng và phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký của tạp a mebendazol làm nguyên liệu chất chuẩn

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRUNG NGHĨA XÂY DỰNG BỘ DỮ LIỆU NHẬN DẠNG VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT SẮC KÝ CỦA TẠP A MEBENDAZOL LÀM NGUYÊN LIỆU CHẤT CHUẨN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRUNG NGHĨA Mã sinh viên: 1701412 XÂY DỰNG BỘ DỮ LIỆU NHẬN DẠNG VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT SẮC KÝ CỦA TẠP A MEBENDAZOL LÀM NGUYÊN LIỆU CHẤT CHUẨN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Lâm Hồng Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích - Độc chất Bộ mơn Cơng nghiệp Dược HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Trước trình bày nội dung khóa luận tốt nghiệp mình, tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến người suốt thời gian qua ln bên cạnh động viên giúp đỡ tận tình để tơi hồn thành nghiên cứu cách tốt Với lòng biết ơn sâu sắc, đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Lâm Hồng - giảng viên mơn Hóa phân tích - Độc chất, trường Đại học Dược Hà Nội, người tạo điều kiện thuận lợi để giúp đỡ cho tham gia nghiên cứu khoa học, người hướng dẫn, đưa lời khuyên xác, ln động viên tơi thời điểm khó khăn Những điều mà tơi tiếp nhận từ hành trang, kinh nghiệm quý báu giúp tự tin đường tương lai phía trước Tơi vơ biết ơn xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Văn Hải quan tâm, động viên, hướng dẫn, chia sẻ cho kiến thức, kinh nghiệm, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành với Ban giám hiệu trường Đại học Dược Hà Nội, phòng Đào tạo, thầy cô giảng viên, kỹ thuật viên hết lòng truyền đạt kiến thức, giúp đỡ ân cần thời gian tơi thực khóa luận suốt năm học tập trường Cuối cùng, muốn cảm ơn gia đình, bạn bè anh, chị, em, đặc biệt người làm việc suốt thời gian làm khóa luận ln đồng hành, nhiệt tình giúp đỡ, chia sẻ buồn vui hay khó khăn suốt thời gian nghiên cứu qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 11 tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Trung Nghĩa MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ MEBENDAZOL VÀ TẠP A MEBENDAZOL 1.1.1 Tổng quan mebendazol 1.2.1 Tổng quan tạp A mebendazol 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẤT CHUẨN 1.2.1 Khái niệm chất chuẩn 1.2.2 Phân loại chất chuẩn 1.2.3 Quy trình thiết lập chất chuẩn 1.2.4 Tạp chất 10 1.3 TÍNH THIẾT YẾU CỦA ĐỀ TÀI 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 14 2.1.1 Dung mơi, hóa chất 14 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị 14 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 14 2.2.1 Thủy phân mebendazol để điều chế nguyên liệu tạp A mebendazol 14 2.2.2 Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol 14 2.2.3 Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol 14 2.2.4 Xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol số lô sản phẩm điều chế 15 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.3.1 Thủy phân mebendazol để điều chế nguyên liệu tạp A mebendazol 15 2.3.2 Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol 15 2.3.3 Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol 15 2.3.4 Xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol số lô sản phẩm điều chế 17 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 18 3.1.1 Thủy phân mebendazol để điều chế nguyên liệu tạp A mebendazol 18 3.1.2 Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol 20 3.1.3 Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol 21 3.1.4 Xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol số lô sản phẩm điều chế 30 3.2 BÀN LUẬN 31 3.2.1 Bàn luận điều chế 31 3.2.2 Bàn luận xác định cấu trúc 31 3.2.3 Bàn luận phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT ARS ASEAN Reference Standards ASEAN BP The Association of Southeast Asian Nations British Pharmacopoeia DAD Diode Array Detector DCM Dd Dicloromethan Dung dịch DĐVN V ECPRS EP Dược điển Việt Nam V European Pharmacopoeia chemical reference standards European Pharmacopoeia HMBC Heteronuclear multiple bond connectivity HPLC HR-MS HSQC ICH ICRS High performance liquid chromatography High resolution - Mass spectrometry Heteronuclear single quantum coherence spectroscopy International Council on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use International Chemical reference standards IR Infrared LOQ LC-MS MeOH Limit of quantification Liquid chromatography–mass spectrometry Methanol NIST NMR PCRS RSD SCRS USP USPRS UV WHO National Institute of Standards and Technology Nuclear magnetic resonance Primary Chemical Reference Subtances Relative standard deviation Secondary Chemical Reference Subtances The United States Pharmacopoeia The United States Pharmacopoeia reference standards Ultraviolet World Health Organisation DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các sản phẩm có chứa mebendazol có thị trường Bảng 1.2 Các tạp mebendazol theo dược điển hành Bảng 1.3 Giới hạn tạp A số dược điển hành Bảng 1.4 Giá hành số số nhà sản xuất tạp A mebendazol Bảng 1.5 Các phương pháp định lượng tạp chất liên quan số tài liệu 11 Bảng 3.1 Các thành phần môi trường thủy phân 18 Bảng 3.2 Hiệu suất trình điều chế tạp A mebendazol 20 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ 13C-NMR 1H-NMR chất tạp A 21 Bảng 3.4 Kết thẩm định độ ổn định hệ thống 25 Bảng 3.5 Kết lặp lại nồng độ LOQ 27 Bảng 3.6 Kết thẩm định khoảng tuyến tính 27 Bảng 3.7 Bảng kết thẩm định độ lặp lại độ tinh khiết sắc ký 28 Bảng 3.8 Bảng kết so sánh hai phịng thí nghiệm 29 Bảng 3.9 Độ ổn định dung dịch thử theo thời gian 29 Bảng 3.10 Kết phân tích thay đổi số điều kiện phân tích 30 Bảng 3.11 Độ tinh khiết sắc ký số lô sản phẩm điều chế 30 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo mebendazol Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo tạp A mebendazol Hình 1.3 Quá trình phân hủy từ mebendazol tạp A mebendazol Hình 1.4 Sơ đồ điều chế tạp A mebendazol theo H E Master, J R Kamath Hình 1.5 Sơ đồ điều chế tạp A mebendazol theo Bahr, F.; Usbeck, H Hình 3.1 Sơ đồ phản ứng thủy phân tạp A mebendazol môi trường base 18 Hình 3.2 Kết sắc ký lớp mỏng với sản phẩm thu 19 Hình 3.3 Sơ đồ điều chế tạp A mebendazol 19 Hình 3.4 Một số tương tác phổ HMBC tạp A mebendazol 21 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu thử 2000 ppm với gradient (1) 22 Hình 3.6 Sắc kí đồ mẫu thử 500 ppm với gradient phương pháp 22 Hình 3.7 Phổ hấp thụ UV tạp A mebendazol 23 Hình 3.8 Sắc ký đồ nồng độ 500, 800, 1000 ppm 23 Hình 3.9 Sắc ký đồ thẩm định độ đặc hiệu 26 Hình 3.10 Tỷ số S/N nồng độ LOQ 27 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích nồng độ 28 ĐẶT VẤN ĐỀ Là nước vùng nhiệt đới, khí hậu nóng ẩm, điều kiện vệ sinh nên Việt Nam có tỉ lệ nhiễm giun sán cao Ở nước ta, bệnh giun thường trầm trọng sán Các loại giun có tỉ lệ nhiễm cao Việt Nam giun đũa, giun tóc, giun kim, giun móc (mỏ) giun Thuốc chống giun sán có nhiều loại, xếp dựa hình thể chung ký sinh trùng Đa số thuốc có hiệu cao, tác dụng khơng mong muốn dễ sử dụng, điển hình thuốc chứa mebendazol [1, 2] Hiện có nhiều chế phẩm có chứa mebendazol sản xuất nước lưu hành thị trường Để kiểm soát chất lượng nguyên liệu đầu vào thành phẩm có chứa mebendazol, ngồi việc phải sử dụng chất chuẩn mebendazol, số Dược điển hành yêu cầu thử tạp chất liên quan, phương pháp cần sử dụng hỗn hợp chất chuẩn đánh giá độ phù hợp hệ thống (mebendazole for system suitability CRS) bao gồm tạp liên quan mebendazol, có chứa tạp chất A mebendazol có tên khoa học methyl (5-benzoyl-1H-benzimidazol-2-yl)carbamate) giới hạn tạp A dược điển ≤ 0,25% [3, 8, 17, 18] Tuy nhiên, hỗn hợp chất chuẩn tạp chưa sản xuất Việt Nam Khi muốn sử dụng, phải nhập từ nước ngồi với giá thành cao Vì vậy, để sử dụng hỗn hợp chất chuẩn cần có nguyên liệu chất chuẩn tạp A mebendazol với độ tinh khiết ≥ 95 % Khóa luận tốt nghiệp “Xây dựng liệu nhận dạng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol làm nguyên liệu chất chuẩn” thực với mục tiêu sau: - Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol - Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ MEBENDAZOL VÀ TẠP A MEBENDAZOL 1.1.1 Tổng quan mebendazol 1.1.1.1.Thông tin chung mebendazol Công thức phân tử: C16H13N3O3 Cơng thức cấu tạo: Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo mebendazol Phân tử lượng: 295,3 đvC Tên khoa học: Methyl (5-benzoyl-1H-benzimidazol-2-yl)carbamate Tính chất vật lý: Bột màu trắng gần trắng, đa hình Thực tế khơng tan nước, methylen clorid ethanol 96% [3] 1.1.1.2 Tác dụng dược lý định Cơ chế Mebendazol giun sán chưa biết đầy đủ, thuốc tỏ ức chế chọn lọc không hồi phục hấp thu glucose chất dinh dưỡng phân tử lượng thấp giun nhạy cảm với thuốc, dẫn đến cạn kiệt glycogen, làm tan rã vi quản bào chất tế bào ruột hấp thu giun sán, cuối làm giun sán chết Mebendazol không ảnh hưởng tới nồng độ glucose máu người Mebendazol dẫn chất benzimidazol carbamat có phổ chống giun sán rộng Mebendazol lựa chọn để điều trị nhiễm nhiều loại giun đường ruột giun đũa, giun kim, giun móc, giun tóc Nhiễm giun ngồi ruột giun xoắn, giun (Mansonella perstans, Onchocerca volvulus), Toxocara canis, T cati, Trichinella spiralis, Trichostrongylus, Dracunculus medinensis Capillaria philippinensis 1.1.1.3 Tác dụng khơng mong muốn Ít gặp, 1/1000 < ADR < 1/100 - Rối loạn tiêu hóa: Đau bụng thống qua, nơn, buồn nơn, tiêu chảy - Tồn thân: Đau đầu, chóng mặt, ù tai, tê cóng Liều cao để điều trị nang sán: Có thể gặp dị ứng (sốt, ban đỏ, mày đay, phù mạch, ngứa), tăng enzym gan, rụng tóc, suy tủy, giảm bạch cầu trung tính - Có trường hợp giun đũa bị mồm mũi Sắc ký đồ thẩm định độ đặc hiệu (UV / 24 giờ) Phụ lục 2c Sắc ký đồ thẩm định giới hạn định lượng Phụ lục 2d Sắc ký đồ thẩm định khoảng tuyến tính (0,1 ppm) Phụ lục 2e Sắc ký đồ thẩm định độ lặp lại Phụ lục 2f Phiếu kiểm nghiệm Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Phụ lục 2g Sắc ký đồ thẩm định độ ổn định phương pháp (20 ngày) Phụ lục 3: Sắc ký đồ xác định độ tinh khiết lô Sắc ký đồ xác định độ tinh khiết sắc ký lô Sắc ký đồ xác định độ tinh khiết sắc ký lô ... mebendazol 15 2.3.2 Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol 15 2.3.3 Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol 15 2.3.4 Xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol. .. liệu tạp A mebendazol 18 3.1.2 Xây dựng liệu nhận dạng tạp A mebendazol 20 3.1.3 Xây dựng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol 21 3.1.4 Xác định độ tinh khiết sắc. .. hợp chất chuẩn cần có nguyên liệu chất chuẩn tạp A mebendazol với độ tinh khiết ≥ 95 % Kh? ?a luận tốt nghiệp ? ?Xây dựng liệu nhận dạng phương pháp xác định độ tinh khiết sắc ký tạp A mebendazol làm