Bài viết Hiệu quả của iodine, bột tỏi, vitamin C trong phòng trị bệnh streptococcosis ở cá rô phi quy mô phòng thí nghiệm được nghiên cứu nhằm đánh giá hiệu quả của hóa chất diệt khuẩn (Iodine), thảo dược (bột tỏi) và thuốc tăng cường miễn dịch (Vitamin C) được dùng để phòng trị bệnh do S. agalactiae gây ra ở cá rô phi nuôi tại Hải Dương trong quy mô phòng thí nghiệm ướt.
TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 EFFECTS OF IODINE, GALIC POWDER, VITAMIN C FOR PREVENTING STREPTOCOCCOSIS IN CULTURED TILAPIA IN A WET LABORATORY Pham Thi Thanh1*, Truong Thi My Hanh1, Vo Van Nha2 1Research 2Research Institute for Aquaculture number Institute for Aquaculture number ARTICLE INFO ABSTRACT Received: 15/5/2022 The use of drugs and chemicals for tilapia has emerged as a major concern in aquaculture areas The present study sought to define the effect of Iodine, galic powder and Vitamin C in preventing and treating diseases of Tilapia associated S agalactiae Data concerning Iodine, galic powder, Vitamin C were collected from 30 drug stores in previous research S agalactiae was cultured in nutrient broth media in incubator shaker at 30oC for 18 h, when the bacteria density reached 107 cfu / mL, it was used to infect fish The results showed that: Garlic powder (0.1 g/kg fish) and Vitamin C (5 g/kg fish) or Garlic powder (0.1 g/kg fish) and Iodine (0.05 mL/100 Lit) were effective in treating the Streptococcosis disease with feeding time of and days, the survival rate of tilapia infected with S agalactiae being 66.7 – 75.6% and 64.4 – 71.1% respectively compared with the positive control (19.9%) Meanwhile, Vitamin C (5g/kg fish) and Iodine (0.05mL/100 Lit) used feeding time of and days were ineffective in preventing Streptococcosis in tilapia Revised: 24/6/2022 Published: 24/6/2022 KEYWORDS Tilapia Iodine Garlic powder Vitamin C S agalactiae HIỆU QUẢ CỦA IODINE, BỘT TỎI, VITAMIN C TRONG PHÒNG TRỊ BỆNH STREPTOCOCCOSIS Ở CÁ RƠ PHI QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM Phạm Thị Thanh1*, Trương Thị Mỹ Hạnh1, Võ Văn Nha2 1Viện 2Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Việc sử dụng thuốc hóa chất để phịng trị bệnh cho cá rô phi lên mối quan tâm vùng ni trồng thủy sản Nghiên Ngày hoàn thiện: 24/6/2022 cứu xác định tác dụng Iodine, bột tỏi, Vitamin C việc ngăn ngừa điều trị bệnh cá rô phi (Oreochromis sp.) liên quan Ngày đăng: 24/6/2022 đến S agalactiae Dữ liệu liên quan đến Iodine, bột tỏi, Vitamin C thu thập từ 30 cửa hàng thuốc nghiên cứu trước S TỪ KHĨA agalactiae ni cấy lắc môi trường nutrient broth nhiệt độ Tilapia 30oC 18h, mật độ vi khuẩn đạt 107 cfu/mL tiến hành dùng để gây nhiễm vào cá Kết nghiên cứu cho thấy, bột tỏi (0,1 g bột Iodine tỏi/kg cá) Vitamin C (5 g/kg cá) có hiệu trị bệnh Streptococcosis Garlic powder cá rô phi với nhịp cho ăn ngày, tỷ lệ sống cá rô phi gây Vitamin C nhiễm S agalactiae tương ứng 66,7 - 75,6% 64,6 - 71,1% S agalactiae so với đối chứng dương (19,9%) Bột tỏi (0,1 g bột tỏi/kg cá) Iodine (0,05 ml/100 lít nước) có hiệu trị bệnh Streptococcosis cá rô phi với nhịp cho ăn (bột tỏi) đưa vào nước (Iodine) nhịp ngày, tỷ lệ sống cá rô phi gây nhiễm S agalactiae tương ứng 64,4 71,1% so với đối chứng dương (19,9%) Trong đó, Vitamin C (5 g/kg cá) Iodine (0,05 mL/100 lít nước) khơng có hiệu phịng bệnh Streptococcosis cá rơ phi DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.5987 Ngày nhận bài: 15/5/2022 * Corresponding author Email: ptthanh@ria1.org http://jst.tnu.edu.vn 142 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 Giới thiệu Hải Dương số tỉnh có diện tích ni thủy sản nước lớn với hai hình thức ni phổ biến nuôi ao nuôi lồng bè Năm 2021, tổng số lồng nuôi 7.040 lồng (750.000 m3 nước) tương ứng với 12.200 Các đối tượng ni bao gồm rơ phi đơn tính, cá diêu hồng, cá nheo mỹ, cá trắm cỏ, cá chép, cá chép giòn, trắm giịn, cá tầm [1] Cá rơ phi (Oreochromis sp.) lồi cá ni quan trọng, có giá trị kinh tế, thương mại dinh dưỡng, đặc biệt gần cá rô phi xem nguồn thực phẩm kỷ XXI [2], [3] Tổng sản lượng cá rô phi tăng nhanh từ 1,3 triệu năm 2000 lên 6,03 triệu năm 2018 dự kiến tăng lên 7,3 triệu năm 2030 [4]-[6] Đóng góp cho sản lượng cá rơ phi tồn cầu Trung Quốc với mức 1,62 triệu tấn, Indonesia (1,22 triệu tấn), Ai Cập (1,05 triệu tấn), Bangladesh (0,34 triệu tấn), Brazin (0,32 triệu tấn), Philippines (0,28 triệu tấn) Việt Nam (0,26 triệu tấn) [6] Tuy nhiên, q trình ni cá rơ phi thường xuất bệnh nhiễm khuẩn, đặc biệt bệnh liên cầu khuẩn (Streptococcus agalactiae) gây S agalactiae gây chết cá rô phi với tỷ lệ cao (80-100%) với biểu bệnh lý điển cá giảm ăn, bơi khơng định hướng, bơi vịng trịn, đục mắt, lồi mắt, giải phẫu nội tạng ghi nhận gan, lách sưng, bụng tích nhiều dịch lỏng [7], [8] Trong thực tế ghi nhận đợt bùng phát dịch bệnh với tỷ lệ cá rô phi chết cao S agalactiae Bắc Ninh, Bắc Giang, Hà Nội, Hải Dương năm 2009 [9], Hải Dương, Bắc Giang, Bắc Ninh, Hịa Bình, Phú Thọ, Tuyên Quang năm 2010 [10], Hải Phòng năm 2013 2015 [11] Hà Tĩnh năm 2016 [12] Để giảm thiểu thiệt hại bệnh gây ra, đặc biệt bệnh nhiễm khuẩn, có đa dạng loại thuốc, hóa chất sử dụng đưa vào nước, thức ăn cho cá ăn Mục đích nghiên cứu nhằm đánh giá hiệu hóa chất diệt khuẩn (Iodine), thảo dược (bột tỏi) thuốc tăng cường miễn dịch (Vitamin C) dùng để phòng trị bệnh S agalactiae gây cá rô phi nuôi Hải Dương quy mơ phịng thí nghiệm ướt Phương pháp nghiên cứu Thu thập số liệu: Dựa vào kết điều tra sơ cấp nghiên cứu trước 30 sở bán thuốc thú y thủy sản với câu hỏi có nội dung tập trung số liệu tên sản phẩm hóa chất xử lý nước, thuốc làm từ thảo dược, thuốc tăng cường miễn dịch, công ty sản xuất, thành phần, hàm lượng tương ứng, mức độ tiêu thụ sản phẩm Hải Dương Nghiên cứu lựa chọn sản phẩm phổ biến, chiếm ưu vùng nghiên cứu bao gồm (01 hóa chất xử lý nước - Iodine, 01 thảo dược – bột tỏi 01 hoạt chất kích thích miễn dịch – Vitamin C) đưa vào thử nghiệm phòng trị bệnh cá rô phi S agalactiae gây cá rơ phi quy mơ phịng thí nghiệm Nghiên cứu thực phịng thí nghiệm ướt, thuộc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I, Đình Bảng, Từ Sơn, Bắc Ninh Thí nghiệm bố trí bể chứa 100 lít nước Cá Rơ phi lựa chọn có kích cỡ 35-40 gram/con, phản xạ nhanh, khỏe bắt mồi tốt Mỗi bể 30 con, thời gian thực 12-16 ngày Các yếu tố môi trường nhiệt độ 29-30oC; pH 7,5-8,0, DO >5mg/L giữ ổn định, sục khí 24/24 Thức ăn cho cá sử dụng thức ăn công nghiệp, cho ăn lần/ngày Sau thống gọi nhịp thí nghiệm 1, và nhịp thí nghiệm 2, Các thí nghiệm bố trí lặp lại lần theo dõi ghi chép số cá chết tích lũy theo thời gian Thí nghiệm mơ tả chi tiết bảng Chuẩn bị vi khuẩn để gây nhiễm cách: Chủng vi khuẩn S agalactiae thu đợt dịch cá rô phi chết hàng loạt Hà Tĩnh năm 2016, lưu giữ điều kiện -80oC mơi trường có bổ sung glycerin Chúng cấy ria hình chữ chi đĩa thạch dinh dưỡng TSA, sau 24h lấy lượng vi khuẩn khoảng khuẩn lạc nuôi cấy lắc môi trường Nutrient broth nhiệt độ 30oC 18h để thu lượng vi khuẩn đủ lớn phục vụ thí nghiệm Mật độ vi khuẩn xác định theo phương pháp đo mật độ quang (OD) bước sóng = 600 nm, kiểm tra lại phương pháp pha loãng định lượng đĩa thạch Mật độ vi khuẩn thử nghiệm 107 cfu/mL Bên cạnh đó, định lượng mật độ Streptococcus agalactiae nước gan cá rô phi lơ thí nghiệm thực theo phương pháp [13] với môi trường chọn lọc Chromogenic Strepto B http://jst.tnu.edu.vn 143 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 Công cường độc vi khuẩn S agalactaiae lên cá rô phi cách tiêm 0,1 mL dịch huyền phù vi khuẩn S agalactiae với mật độ 107 CFU/mL vào xoang bụng cá, tương tự nghiệm thức đối chứng âm tiêm 0,1 mL nước muối sinh lý thay dịch huyền phù vi khuẩn Xử lý số liệu: Số liệu thu xử lý phần mềm Excel 2011 phân tích theo phương pháp thống kê mô tả Kết bàn luận Nước (ĐC-) Nước (nhịp 5) 10 Nước (ĐC+) Cá (nhịp 5) Cá (nhịp 3) Nước (nhịp 3) 100 Tỷ lệ chết (%) Mật độ vi khuẩn (Log10) Ở lơ thí nghiệm cá ăn vitamin phòng bệnh với nhịp ngày ngày, ăn bột tỏi sau 5h gây nhiễm với nhịp 3, ngày kết cho thấy: Tỷ lệ chết có khác biệt ý nghĩa (p0,05) mật độ S agalactiae nước lô thí nghiệm Ở ngày cuối thí nghiệm cá có mật độ vi khuẩn dao động 101-102 cfu/g (Log10=1,5-1,8) nước khơng ghi nhận có mặt vi khuẩn Qua thí nghiệm nhận thấy việc sử dụng đồng thời Vitamin phòng bệnh cho cá bột tỏi trị bệnh nhịp dùng 3-5 ngày có hiệu với cá rô phi nhiễm S agalactiae 50 0 10 11 12 13 14 15 16 Ngày thí nghiệm Hình Thí nghiệm dùng bột tỏi Vitamin C phịng trị bệnh Streptococoosis cá rơ phi http://jst.tnu.edu.vn 144 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 Bảng1 Thí nghiệm đánh giá hiệu phịng trị bệnh S agalactiae gây cá rô phi Iodine, bột tỏi vitamin C Công thức Thí nghiệm Chất bổ sung Liều sử dụng Cách dùng Thí nghiệm Bột tỏi Vitamin C 0,1g bột tỏi/kg cá 5g Vitamin C/kg cá Bổ sung Bổ sung Vitamin C Vitamin C ngày liên tục ngày liên tục (từ ngày thứ 5- (từ ngày thứ 7) - 7) Bổ sung bột Bổ sung bột tỏi cho cá ăn tỏi cho cá ăn từ ngày thứ từ ngày thứ đến ngày 10 đến ngày 12 Thời gian công cường độc S agalactiae Mật độ S agalactiae công cường độc Công thức Đối chứng dương - Thức ăn thường Khơng có chất bổ sung Thí nghiệm Thí nghiệm Bột tỏi Iodine 0,1g bột tỏi/kg cá 0,05mL/100 lít nước Bổ sung bột tỏi cho cá ăn, từ ngày thứ đến ngày 10 Bổ sung Iodine vào nước từ ngày 8-10 Bổ sung bột tỏi cho cá ăn từ ngày thứ đến ngày 12 Bổ sung Iodine vào nước từ ngày 8-12 Công thức Đối chứng dương - Thức ăn thường Khơng có chất bổ sung Thí nghiệm Thí nghiệm Vitamin C Iodine 5g Vitamin C/kg cá 0,05mL/100 lít nước Bổ sung Bổ sung Vitamin C Vitamin C ngày liên tục (từ ngày liên tục ngày thứ 3-7) (từ ngày thứ 5- Bổ sung Iodine vào 7) nước từ ngày 8-12 Bổ sung Iodine vào nước từ ngày 8-10 Đối chứng dương - Thức ăn thường Khơng có chất bổ sung Đối chứng âm Thức ăn thường Khơng có chất bổ sung Khơng công cường độc vi khuẩn Ngày thứ Ngày thứ Ngày thứ - 107(cfu/ml) Tiêm 0,1mL 107(cfu/ml) Tiêm 0,1mL 107(cfu/ml) Tiêm 0,1mL - Ghi chú: “cfu/ml” khuẩn lạc/ml http://jst.tnu.edu.vn 145 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 Ở lơ thí nghiệm sử dụng bột tỏi Iodine phòng trị bệnh Streptococcosis cá rơ phi Kết cho thấy có khác biệt ý nghĩa (p0,05) với mật độ vi khuẩn dao động (1-1,7x101 cfu/g tương ứng Log10=1-1,2), khoảng thời gian thí nghiệm ghi nhận cá khơng có biểu bất thường, cá bắt mồi tốt, phản xạ nhanh Bên cạnh đó, kết phân tích mật độ S agalactiae nước cho thấy, ngày có bổ sung Iodine vào nước mật độ S agalactiae đạt giá trị cfu/mL, ngày không bổ sung Iodine mật độ S agalactiae đạt cao 1,7x103cfu/mL tương ứng Log10=3,2 (nhịp ngày) 8,0 x 102 cfu/mL (Log10=2,9) (nhịp ngày) (Hình 2) Trong đó, lơ đối chứng (khơng bổ sung Iodine) có mật độ vi khuẩn S agalactiae 1,7x102 cfu/mL (Log10=2,3) sau 24h gây nhiễm tiếp tục tăng đến ngày thứ lên 9,8x103-1,0x104 cfu/mL (Log10=2,3-3,9) (Hình 2) Kết phân tích rõ mật độ S agalactiae nước có khác biệt ý nghĩa lơ thí nghiệm (p0,05) lơ thí nghiệm, tỷ lệ chết tăng dần tỷ lệ thuận với thời gian từ ngày thứ (sau gây nhiễm) đến ngày thứ 7, đặc biệt số cá chết nhiều vào ngày thứ Tỷ lệ tích lũy đến cuối thí nghiệm dao động 78,9-81,1% (Hình 3) Tương tự khơng có khác biệt ý nghĩa (p>0,05) mật độ S agalactiae cá lô gây nhiễm đối chứng dương lô sử dụng Vitanmin C Iodine nhịp nhịp 5, mật độ cao đạt 1,0-1,5x109 cfu/g tương ứng Log10=8,0-8,2 vào ngày thứ http://jst.tnu.edu.vn 146 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 sau gây nhiễm, ngày mật độ giảm, nhiên mức 106-107 cfu/g tương ứng Log10=5,4-6,1 thấp vào ngày 8-9 thí nghiệm với mật độ S agalactiae đạt 1,1-1,7x102 cfu/g tương ứng Log10=2,0-2,4 (Hình 3) Đối với mật độ S agalactiae nước, kết rõ lô đối chứng dương mật độ S agalactiae đạt 1,0-1,1x104 cfu/mL (tương ứng Log10=4) sau ngày gây nhiễm tiếp tục trì mức cao 103 cfu/mL đến ngày thứ Từ ngày thứ đến cuối thí nghiệm, mật độ S agalactiae giảm xuống mức 1,1-1,5x102 cfu/mL (Log10 khoảng 2), kết tương tự với lô sử dụng Vitamin C Iodine nhịp nhịp (Hình 3) Kết cho thấy việc sử dụng Vitamin C Iodine nhịp khơng có hiệu phịng trị bệnh trường hợp cá nhiễm tác nhân S agalactiae với mật độ 107 cfu/g Nước (ĐC-) Cá (nhịp 5) Tỷ lệ chết Nhịp Cá (nhịp 3) Cá (ĐC +) Tỷ lệ chết ĐC- Nước (nhịp 5) Tỷ lệ chết Nhịp 100 Tỷ lệ chết (%) Mật độ vi khuẩn (Log10) 10 Nước (ĐC+) Nước (nhịp 3) Tỷ lệ chết ĐC + 80 60 40 20 0 10 11 12 Ngày thí nghiệm Hình Thí nghiệm dùng Vitamin Iodine phịng trị bệnh Streptococoosis cá rô phi Kết luận Bột tỏi (0,1 g bột tỏi/kg cá) Vitamin C (5g/kg cá) có hiệu trị bệnh Streptococcosis cá rô phi với nhịp cho ăn ngày, tỷ lệ sống cá rô phi gây nhiễm S agalactiae tương ứng 66,7 75,6% so với đối chứng dương (19,9%) Bột tỏi (0,1 g bột tỏi/kg cá) Iodine (0,05 ml/100 lít nước) có hiệu trị bệnh Streptococcosis cá rô phi với nhịp cho ăn (bột tỏi) đưa Iodine vào nước nhịp ngày, tỷ lệ sống cá rô phi gây nhiễm S agalactiae tương ứng 64,4 71,1% so với đối chứng dương (19,9%) Trong đó, Vitamin C (5 g/kg cá) Iodine (0,05 mL/100 lít nước) dùng nhịp ngày đợt trước cá nhiễm bệnh khơng có hiệu phịng bệnh Streptococcosis cá rô phi TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES [1] H D Nguyen, “The results of aquaculture in Hai Duong province in 2021 and implementation plan in 2022,” (in Vietnamese), Annual report, Department of Fisheries - Department of Agriculture and Rural Development, Hai Duong province, pp 1-6, January 2022 [2] D M Fracalossi, M E Allen, L K Yuyama, and O T Oftedal, “Ascorbic acid biosynthesis in Amazonian fishes,” Aquaculture, vol 192, no 2-4, pp 321-332, 2001, doi: 10.1016/S00448486(00)00455-5 [3] G Merchie, P Lavens, J Radull, H Nelis, A De Leenheer, and P Sorgeloos, “Evaluation of vitamin C-enriched Artemia nauplii for larvae of the giant freshwater prawn,” Aquac Int., vol 3, no 4, pp 355-363, 1995, doi: 10.1007/BF00121623 [4] Q Ai et al., “Effects of dietary vitamin C on growth and immune response of Japanese seabass, http://jst.tnu.edu.vn 147 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 227(10): 142 - 148 Lateolabrax japonicus,” Aquaculture, vol 242, no 1-4, pp 489-500, 2004, doi: 10.1016/j.aquaculture.2004.08.016 [5] J.-Y Lee and Y Gao, “Review of the Application of Garlic, Allium sativum, in Aquaculture,” J World Aquac Soc., vol 43, Aug 2012, doi: 10.1111/j.1749-7345.2012.00581.x [6] T H Nguyen, T V Phan, T Y Pham, T M Le, and T M H Truong “Antibacterial ability and prevention of acute hepatopancreatic necrosis disease in white leg shrimp (Penaeus vannamei) of fermented garlic (Allum sativum),” Vietnam Sci Technol Mag., vol 63, no 2, pp 49-54, 2021 [7] Y Feng et al., “Effects of immune stress on performance parameters, intestinal enzyme activity and mRNA expression of intestinal transporters in broiler chickens,” Asian-Australasian J Anim Sci., vol 25, no 5, pp 701-707, May 2012, doi: 10.5713/ajas.2011.11377 [8] A Mustafa, S Hayat, and P Quarrar, “Stress Modulated Physiological Responses in Nile Tilapia, Oreochromisniloticus, Treated with Non-Ascorbic Acid Supplemented Feed,” Adv Zool Bot., vol 1, pp 39-45, Sep 2013, doi: 10.13189/azb.2013.010204 [9] T T Mai and H B T Bui “Effect of adding garlic (Allium sativum) to feed on some immune parameters and antibacterial ability of red tilapia (Oreochromis sp.),” (in Vietnamese), Can Tho University - Journal of Science., vol 54, no 2, Special issue: Fisheries, pp 168-176, 2018 [10] M A O Dawood, S Koshio, and M Á Esteban, “Beneficial roles of feed additives as immunostimulants in aquaculture: a review,” Rev Aquac., vol 10, no 4, pp 950-974, 2018, doi: 10.1111/raq.12209 [11] X P Liang, Y Li, Y M Hou, H Qiu, and Q C Zhou, “Effect of dietary vitamin C on the growth performance, antioxidant ability and innate immunity of juvenile yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco Richardson),” Aquaculture Research, vol 48, no pp 149-160, doi: 10.1111/are.12869 [12] Q T Nguyen, M Masashi, and M P Tran, “Disease situation and use of drugs and chemicals in snakehead fish (Channa striata) farming model in An Giang and Tra Vinh,” (in Vietnamese), Can Tho University - Journal of Science, vol 56, Special issue: Fisheries, pp 179-184, 2020 [13] N B Buller, "Bacteria from Fish and Other Aquatic Animals: A Practical Identification Manual," Aquaculture, vol 240, pp 626-627, Oct 2004, doi: 10.1016/j.aquaculture.2004.07.005 http://jst.tnu.edu.vn 148 Email: jst@tnu.edu.vn ... giá hiệu phòng trị bệnh S agalactiae gây c? ? rô phi Iodine, bột tỏi vitamin C Cơng th? ?c Thí nghiệm Chất bổ sung Liều sử dụng C? ?ch dùng Thí nghiệm Bột tỏi Vitamin C 0,1g bột tỏi/kg c? ? 5g Vitamin C/ kg... m3 nư? ?c) tương ứng với 12.200 C? ?c đối tượng ni bao gồm rơ phi đơn tính, c? ? diêu hồng, c? ? nheo mỹ, c? ? trắm c? ??, c? ? chép, c? ? chép giòn, trắm giòn, c? ? tầm [1] C? ? rô phi (Oreochromis sp.) lồi c? ? ni... thích miễn dịch – Vitamin C) đưa vào thử nghiệm phòng trị bệnh c? ? rô phi S agalactiae gây c? ? rô phi quy mơ phịng thí nghiệm Nghiên c? ??u th? ?c phịng thí nghiệm ướt, thu? ?c Viện Nghiên c? ??u Ni trồng