Thực tập ký SINH TRÙNG THÚ y

Trường Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Khoa Chăn nuôi Thú Y Thực Tập KÝ SINH TRÙNG THÚ Y TS Lê Hữu Khương Bộ môn Bệnh Lý - Ký Sinh Trùng CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM KÝ SINH TRÙNG 1.1 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM TRỨNG GIUN SÁN Các loài giun sán ký sinh đường tiêu hóa, phổi, gan thường thải trứng phân ký chủ Trên thể thú sống phương pháp chẩn đốn đơn giản xét nghiệm phân tìm diện trứng giun sán phân Căn vào hình dạng trứng để xác định lồi giun sán 1.1.1 Phương pháp lấy mẫu phân bảo quản Lấy mẫu phân tươi thú vừa thải lấy phân từ trực tràng Dùng găng tay bao nylon để bao tay Khi lấy mẫu phân xong lộn ngược găng tay bao nylon để mẫu phân nằm bên Nếu mẫu phân đưa đến phịng thí nghiệm cần giữ mẫu phân 4oC Nếu mẫu phân để lâu (1 tuần) bảo quản mẫu dung dịch formol 10% để nhiệt độ mát 4oC 1.1.2 Phương pháp phù (floatation method) Phương pháp sử dụng nước muối bão hồ có tỷ trọng lớn trứng giun sán, nỗn nang ngun bào có tỷ trọng thấp cặn bã phân, trứng nỗn nang lên cặn phân chìm Có nhiều loại muối bão hồ thường sử dụng như: NaCl, ZnSO4, MgSO4, dung dịch đường 30% 50% Phương pháp ứng dụng có hiệu với nhiều lồi giun trịn nỗn nang cầu trùng gà Cách thực hiện: - Cho 1-2 g phân vào cốc thuỷ tinh - Thêm 10-15 ml nước muối bão hoà cốc - Khấy lọc qua rây lọc (khoảng 81 lỗ/cm2) - Lấy phần nước lọc cho đầy vào ống nghiệm hay bình có miệng hẹp - Đậy phiến kính lên miệng bình (phiến kính phải tiếp xúc với dung dịch) - Để yên 20-30 phút, lấy phiến kính đậy lên kính - Xem kính với độ phóng đại 10x10 hay 40x10 1.1.3 Phương pháp lắng gạn (sedimentation method) Thường sử dụng để chẩn đốn lồi sán lá, sán gan sán cỏ loài nhai lại Vì lồi trứng có tỷ trọng cao loại nước muối bão hòa nên dùng nước để lắng gạn Cách thực hiện: - Cho 5-10 g phân vào cốc thêm nước vào 2/3 cốc - Khấy lọc qua rây (81 lỗ/cm2) - Cho phần nước lọc vào bình có đáy hẹp để yên 3-5 phút - Nhẹ nhàng đổ bỏ phần nước 2/3 bình châm nước vào - Để yên 3-5 phút lại thay nước (lập lại 3-5 lần đến nước trở nên trong) - Đổ bỏ phần nước trên, lấy cặn cho lên lame đĩa petri để xem kính 1.1.4 Phương pháp đếm trứng McMaster Phương pháp dùng để tính số trứng giun 1g phân để đánh giá cường độ nhiễm giun Để thực phương pháp cần phải có buồng đếm McMaster Buồng đếm gồm có buồng nhỏ, buồng có chiều cao 1,5 mm; chiều rộng dài 10 mm Thể tích buồng đếm 0,15 ml Cách thực hiện: − Cho phân dung dịch NaCl bão hòa vào cốc theo tỉ lệ phân + 14 NaCl − Khấy lọc bỏ cặn − Thêm NaCl bão hòa vàođúng mực nước củ (bù cho lượng cặn bã bỏ đi) − Khấy đều, hút dung dịch cho vào buồng đếm − Chờ phút, đếm kính hiển vi (10 x 10) Số trứng đêm buồng đêm x 100 se số trứng giun 1g phân 1.2 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM ẤU TRÙNG GIUN SÁN Phương pháp ứng dụng để tìm ấu trùng phân ví dụ trường hợp Dictyocaulus ký sinh đẻ trứng phế quản loài nhai lại, trứng giun qua đường tiểu hố theo phân ngồi trứng nở ấu trùng Hoặc thu nhặt mẫu phân cũ phân trứng nở trùng Cũng có trường hợp phải ủ trứng nở ấu trùng để phân loại thu nhặt ấu trùng sau ni trứng dùng thí nghiệm 1.2.1 Phương pháp Baermann Dụng cụ Baermann gồm có: phễu đặt giá đứng Phễu nối với ống nghiệm qua ống cao su, miệng phễu đặt rây lọc (81 lỗ/1cm2) Cách thực hiện: − Cho gam phân hỗn dịch ni ấu trùng lên lưới lọc, dùng vải mỏng bọc phân − Đổ nước ấm 45oC cho đầy phễu − Để yên khoảng Lấy ống nghiệm ly tâm lấy cặn kiểm tra ấu trùng 1.2.2 Phương pháp Waid Phương pháp dùng chẩn đoán ấu trùng phân dê cừu Cách thực hiện: − Đổ nước ấm 45oC vào cốc sau gắp viên phân cho vào cốc − Để yên từ 30 phút đến − Gắp bỏ viên phân, lấy nước ly tâm tìm ấu trùng 1.3 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM GHẺ 1.3.1 Phương pháp tập trung Phương pháp dùng để chẩn đoán ghẻ Sarcoptes, Chorioptes, Psoroptes, Knemidocoptes, Notoedres, Demodex… Dùng dao cạo lớp vảy gia súc nơi chỗ da lành da bệnh rướm máu (vì ghẻ ngầm da) Dưới có hứng dĩa lồng Petri Chất chứa cho vào ống nghiệm sau cho thêm 10 – 20 ml dung dịch KOH 10%, để yên phòng hơ nhẹ lửa đèn cồn vòng – phút KOH làm tan nhu mô sừng da Sau ly tâm gạn nhẹ lớp nước lấy cặn kiểm tra độ phóng đại 10 x 10 tìm ghẻ 1.3.2 Phương pháp trực tiếp Dùng dao cạo lớp vảy gia súc nơi chỗ da lành da bệnh rướm máu khơng chảy máu (vì ghẻ ngầm da) Dùng phiến kính đĩa Petri hứng chất chứa Chất chứa cho lên lame sau nhỏ dung dịch lactophenol (acid lactic phần glycerin phần) Dùng đũa dàn mỏng đảo đều, đậy lamel lên đem kiểm tra độ phóng đại 10 x 10 Muốn bắt màu rõ cho thêm vào lame vài giọt dung dịch lugol 1‰ - 3‰ 1.4 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM KÝ SINH TRÙNG MÁU 1.4.1 Xem tươi: dùng kéo cắt lông tĩnh mạch tai, dùng cồn sát trùng Nên bỏ giọt máu đầu, nhỏ giọt máu sau lên lame Thêm dung dịch kháng đông lên lame, đậy lamel lên quan sát kính hiển vi 1.4.2 Nhuộm giemsa Cách nhuộm: - Phết máu lên tiêu bản, để khô - Cố định cồn tuyệt đối - Nhỏ dung dịch nhuộm lên tiêu để yên 20 phút - Rửa tiêu nước cất, hơng khơ xem kính PHƯƠNG PHÁP MỔ KHÁM Khi gia súc chết mổ tách quan riêng rẽ Chuẩn bị thau, chậu, kẹp rây lọc để tìm giun sán trưởng thành bên quan 2.1 Cơ quan tiêu hóa Tách riêng phận quan tiêu hóa cho vào xơ chậu, quan sát mặt ngồi để tìm ấu trùng, giun trưởng thành Cyst Toàn chất chứa thu giữ để làm phương pháp lắng gạn Các quan sau thu chất chứa cần vuốt niêm mạc kiểm tra toàn quan Thu lượm giun Gan: Cắt dọc theo ống dẫn mật túi mật để tìm sán giun, quan sát mặt gan, sau cắt nhỏ bóp nát ngâm nước muối sinh lý 10 – 20 phút Lắng gạn tìm ký sinh Tuyến tụy: làm giống gan Các chất chứa kiểm tra dĩa Petri xong hết toàn chất chứa để thu lượm giun 2.2 Cơ quan hô hấp Quan sát kỹ mặt phổi, phế nang, xẻ dọc khí quản phế quản để kiểm tra, thu lượm giun sán Sau kiểm tra xong xé nát phổi làm phương pháp lắng gạn 2.3 Cơ quan sinh dục tiết niệu Kiểm tra lớp mỡ xung quanh thận, ống dẫn niệu để tìm giun thận Kiểm tra bàng quang niệu đạo Chất chứa bàng quang làm phương pháp lắng gạn, nạo niêm mạc tử cung ni cấy tìm ngun bào Đối với gia cầm cần kiểm tra ống dẫn trứng, ổ nhớp, túi Fabricius tìm sán 2.4 Hệ thần kinh - tủy sống Kiểm tra dịch khớp xương, tủy xương để tìm ấu trùng trùng Kiểm tra não tìm ấu trùng sán dây 2.5 Hệ tuần hoàn Quan sát mặt tim để quan sát gạo Bổ đôi tim quan sát nội tâm mạc để tìm giun Quan sát kỷ động mạch có nốt kết hạt hay khối u Kiểm tra tìm giun sán máng lấy máu làm phương pháp lắng gạn tìm sáng máng microfilaria Cần kiểm tra thêm xoang bụng, xoang phế mạc nốt hay tổ chức xơ xung quanh động mạch, phổi ruột để tìm giun ký sinh xoang tổ chức 2.6 Hệ da Quan sát tổ chức da, có hạt hay khối u cần cắt để kiểm tra ấu trùng số giun bên Quan sát vân, trơn mắt thường để tìm Cysticercus Sarcocyst hay dạng nang nguyên bào Đối với ấu trùng Trichinella spiralis phải kiểm tra phương pháp ép tiêu PHƯƠNG PHÁP BẢO QUẢN MẪU VẬT Ký sinh trùng để chết tự nhiên nước thường sau bảo quản dung dịch sau: - Đối với giun trịn ngâm vào lọ có chứa dung dịch Barbagallo gồm: NaCl (8,5 g) + Nước cất (970 ml) + formol (30 ml) - Đối với sán sán dây ngâm vào lọ có chứa cồn 70o sau dán nhãn - Đối với trùng: Ruồi mịng dùng kim gút ghim xuyên qua phần ngực ghim xuống miếng xốp đáy ống nghiệm Đậy nắp cho thêm vài giọt formol - Đối với lớp hình nhện giữ cồn 70o, việc giữ cồn làm màu tiết túc, cần cho vào dung dịch 0,1% eosine tạo màu thay cồn dung dịch glucose 10% HÌNH THÁI VÀ CẤU TẠO CỦA KÝ SINH TRÙNG 4.1 Sán Quan sát đại thể: xem hình dạng, kích thước Quan sát câu tạo: - Giác miệng, giác bụng, giác sinh dục (nếu có), ruột - Cơ quan sinh dục: tinh hoàn, túi sinh dục, lỗ sinh dục, ống dẫn tinh - Cơ quan sinh dục cái: Buồng trứng, tử cung, tuyến nỗn hồng, túi chứa tinh, tuyến mehlis 7.2 Sán dây Quan sát đại thể: xem chiều dài, đốt đầu, cổ, trưởng thành chửa Quan sát cấu tạo: - Đốt đầu: Giác bám / rãnh bám, móc đỉnh đầu - Đốt trưởng thành: tinh hoàn, túi sinh dục, lỗ sinh dục, ống dẫn tinh Buồng trứng, tử cung, tuyến nỗn hồng, âm đạo, ông tiết - Đốt chửa: tử cung phân nhánh/ túi trứng 7.3 Giun tròn Quan sát đại thể: hình thái kích thước Quan sát cấu tạo: - Đầu: Môi, miệng, cánh đầu, cánh cổ, gai cổ, răng, thực quản - Đuôi: túi đuôi, sườn đuôi, gai giao hợp (đực); lỗ hậu môn, lỗ sinh dục (cái) 7.4 Nguyên bào: quan sát hình dạng trưởng thành noãn nang 7.5 Động vật chân đốt Quan sát đại thể: hình thái kích thước Quan sát cấu tạo: - Đầu: gốc đâu, xúc biện (palp), kìm (chelicera), miệng (hypostome) - Ngực, bụng: chân, cánh, thở, lỗ thở, lỗ sinh dục, lỗ hậu môn, mai lưng, mai bụng, rua (festoon) TREMATODA (SÁN LÁ) Clonorchis sinensis Dicrocoelium CESTODA (SÁN DÂY) 10 11 12 13 14 15 16 ... 1.1.1 Phương pháp l? ?y mẫu phân bảo quản L? ?y mẫu phân tươi thú vừa thải l? ?y phân từ trực tràng Dùng găng tay bao nylon để bao tay Khi l? ?y mẫu phân xong lộn ngược găng tay bao nylon để mẫu phân nằm... đặt r? ?y lọc (81 lỗ/1cm2) Cách thực hiện: − Cho gam phân hỗn dịch nuôi ấu trùng lên lưới lọc, dùng vải mỏng bọc phân − Đổ nước ấm 45oC cho đ? ?y phễu − Để y? ?n khoảng L? ?y ống nghiệm ly tâm l? ?y cặn... giun ký sinh xoang tổ chức 2.6 Hệ da Quan sát tổ chức da, có hạt hay khối u cần cắt để kiểm tra ấu trùng số giun bên Quan sát vân, trơn mắt thường để tìm Cysticercus Sarcocyst hay dạng nang nguyên