Thành phần hóa học của cây cỏ mực (Eclipta prostrata) ở tỉnh Thừa Thiên Huế

Từ cao chiết etyl axetat của cây cỏ mực (Eclipta prostrata (L.) L.) ở tỉnh Thừa Thiên Huế, hợp chất luteolin đã được phân lập. Bài viết trình bày kết quả phân lập và xác định cấu trúc của hợp chất flavonoit từ cao chiết etyl axetat và thành phần hóa học các chất dễ bay hơi trong cao chiết n-hexan của cây cỏ mực.

THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA) Ở TỈNH THỪA THIÊN HUẾ TRẦN ĐỊNH - LÊ QUỐC THẮNG Trường Đại học Sư phạm - Đại học Huế Tóm tắt: Từ cao chiết etyl axetat cỏ mực (Eclipta prostrata (L.) L.) tỉnh Thừa Thiên Huế, hợp chất luteolin phân lập Cấu trúc luteolin xác định phương pháp phổ: IR, 1H-NMR, 13C-NMR so sánh với số liệu công bố Ngồi ra, thành phần hóa học chất dễ bay cao chiết nhexan cỏ mực xác định phương pháp sắc ký khí – khối phổ liên hợp (GC/MS) Từ khóa: Eclipta prostrata (L.) L., luteolin MỞ ĐẦU Cỏ mực có tên cỏ nhọ nồi, hạn liên thảo, tên khoa học Eclipta prostrata (L.) L., loài thực vật họ Cúc (Asteraceae), phân bố rộng khắp khu vực có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới Cỏ mực loài cỏ mọc thẳng đứng cao tới 80 cm, thân có lơng cứng màu lục, đơi đỏ tía Lá mọc đối có lơng hai mặt, dài – cm, rộng - 15 mm Cụm hoa hình đầu màu trắng kẽ đầu cành, bắc thon dài – mm, có lơng Quả bế cạnh, dẹt, có cánh, dài mm, rộng 1,5 mm, đầu cụt Cây hoa từ tháng – 9, tháng – 10 Mọc hoang khắp nơi nước ta [1, 4] Trong y học cổ truyền Trung Quốc, cỏ mực cho giúp mọc tóc Tồn làm chất cầm máu, trị đau mắt, ho máu, tiểu máu, đau lưng, sưng ruột, sưng gan, vàng da Lá tươi có tác dụng chống sưng nhiễm độc; Việt Nam cỏ mực sử dụng để điều trị chứng: nôn máu từ dày, chảy máu cam, tiểu tiện máu, xuất huyết tử cung, viêm gan mãn tính, viêm ruột, lỵ, viêm da, trẻ em suy dinh dưỡng, ù tai, rụng tóc đẻ non, suy nhược thần kinh, bệnh nấm da, eczema, vết loét [4] Các kết nghiên cứu trước cho thấy thành phần hóa học chủ yếu cỏ mực hợp chất coumarin [8], triterpenoit saponin [7], flavonoit, thiophen [6] steroid [3] Trong báo này, thông báo kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất flavonoit từ cao chiết etyl axetat thành phần hóa học chất dễ bay cao chiết n-hexan cỏ mực THỰC NGHIỆM 2.1 Phương pháp thiết bị nghiên cứu Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H- 13C-NMR ghi máy Bruker Avance 500 MHz đo Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam TMS làm chất nội chuẩn (cho 1H-NMR) tín hiệu dung môi CD3OD C 49,2 ppm (cho 13C-NMR) Phổ hồ ng ngoa ̣i IR (KBr) ghi máy IR PRESTIGE-21 hãng Shimadzu Trường Đại học Sư phạm – Đại học Huế Sắc ký khí - khối phổ liên hợp (GC/MS) thực máy GC/MS QP2010 Plus hãng Shimadzu Trung tâm kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm, thực phẩm Thừa Thiên Huế Kỷ yếu Hội nghị Khoa học Sau Đại học lần thứ hai Trường Đại học Sư phạm Huế, tháng 10/2014: tr 202-205 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA) 203 Sắc ký mỏng (TLC) thực mỏng silica gel Merck 60 F254 Sắc ký cột sử dụng silical gel 60 cỡ hạt 0,04 - 0,063 mm (Merck) silical gel 40 cỡ hạt 0,063 - 0,200 mm (Merck) Phát vết chất mỏng thuốc thử vanillin/H2SO4 đặc 2.2 Mẫu thực vật Mẫu cỏ mực thu hái vào tháng 11/2013 phường Hương Văn, thị xã Hương Trà, tỉnh Thừa Thiên Huế Tên khoa học Nguyễn Thế Anh (Viện Hóa học) Ngô Văn Trại (Viện Dược liệu) xác định Tiêu số NN-001 lưu giữ phòng Tổng hợp hữu – Viện Hóa học 2.3 Xác định thành phần hóa học phân lập hợp chất Cỏ mực sau thu hái, rửa sạch, để ráo, có khối lượng kg Sau cắt nhỏ, sấy khô xay mịn, khối lượng mẫu khô thu 250 g Ngâm chiết mẫu khô dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, clorofom, etyl axetat, metanol; loại dung môi tiến hành ngâm ba lần, thời gian lần ngâm 24 Các dịch chiết đuổi dung môi nhiệt độ thấp thu cao chiết tương ứng có khối lượng 7,82 g; 12,40g; 4,19g 19,29 g - Xác định thành phần hóa học chất dễ bay cao chiết n-hexan cỏ mực phương pháp sắc ký khí – khối phổ liên hợp (GC/MS): Từ cao chiết n-hexan, trích lượng nhỏ (100 mg) hòa tan mL n-hexan (Merck), lọc qua đầu lọc để loại hết chất bẩn Dịch chiết thu đem phân tích GC/MS, kết bảng - Phân lập chất từ cao chiết etyl axetat + Cao chiết etyl axetat (4,19 g) phân tích sắc ký cột silica gel, dung môi rửa giải hỗn hợp clorofom : metanol (9 : - : 3) thu 24 phân đoạn (E1 – E24) + Từ phân đoạn E12 (188 mg) sắc ký cột silica gel với hệ dung môi rửa giải clorofom : etyl axetat thu 9,7 mg chất sạch, ký hiệu E12.8 Phổ FT-IR (KBr) max, cm-1: 3387, 2947, 2839, 1659, 1458, 1419, 1026; số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR (bảng 2) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thành phần hóa học dễ bay cao chiết n-hexan Kết phân tích GC/MS dịch chiết n-hexan xác định cấu tử (bảng 1) Bảng Các cấu tử dễ bay cao chiết n-hexan cỏ mực STT Hợp chất Thời gian lưu RT (phút) Hàm lượng % * α-Pinene 8,646 52,39 1-Methyl-2-pyrrolidinone 12,287 20,87 δ-Guaiene trans-Caryophyllene α-Humulene 24,886 25,837 27,094 9,83 4,52 7,15 β-Farnesene 27,228 5,23 (*) Hàm lượng % tương đối chất dễ bay cao chiết n-hexan Kết phân tích GC/MS cho thấy, hợp chất dễ bay cao chiết n-hexan cỏ mực chủ yếu tecpen không chứa oxi TRẦN ĐỊNH – LÊ QUỐC THẮNG 204 3.2 Hợp chất flavonoit phân lập từ cỏ mực Từ cao chiết etyl axetat, sau tiến hành sắc ký cột nhiều lần kết tinh lại thu hợp chất sạch, ký hiệu E12.8 Cấu trúc hợp chất E12.8 xác định kết hợp phương pháp phổ: IR, 1H- 13C-NMR so sánh với số liệu công bố E12.8 tinh thể hình kim, màu vàng Phổ hồng ngoại có pic hấp thụ mạnh 3387 cm-1 cho thấy có mặt nhóm hydroxyl Pic hấp thụ 1659 cm-1 đặc trưng cho nhóm cacbonyl dạng α, β chưa bão hịa Phổ 13C-NMR chất E12.8 có tín hiệu 15 nguyên tử cacbon đặc trưng cho khung flavonoit, bao gồm: 6xCH 9xCq; có tín hiệu nhóm cacbonyl C 183,7 ppm, gợi ý cho thấy flavon Phổ 1H-NMR phía trường thấp có tín hiệu proton thơm phù hợp với phổ 13C-NMR DEPT, bao gồm: cặp doublet ở H 6,24 6,45 ppm có số tương tác J = 2,0 Hz cho thấ y vòng A có proton ở vi ̣ trí meta với nhau; tín hiê ̣u của proton ở H 6,92 ppm (d, J = 9,0 Hz; H-5’), H 7,40 ppm (dd, J = 2,0; 9,0 Hz, H-6’) và H 7,39 ppm (d, J = 2,0 Hz; H-2’), cho biế t vòng B có nhóm thế ở C-3’ C-4’ So sánh số liê ̣u phổ E12.8 với số liê ̣u đã công bố [5] (bảng 2), cấu trúc E12.8 xác định 5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavon (luteolin) Luteolin biết đến hợp chất có hoạt tính chống virus viêm gan C (HCV) [2], hoạt tính kháng viêm, chống co thắt kháng HIV [9] Luteolin tách từ cỏ mực OH Ấn Độ số loài thực vật khác [2, 5] 3' 4' 2' HO 1' O 10 OH 5' 6' C A B OH O Hình Luteolin Bảng Số liệu phổ 1H- 13C-NMR chất E12.8 (CD3OD, 500/125 MHz) luteolin (CD3OD, 500/125 MHz) [5] Vị trí 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ E12.8 δH (ppm), J (Hz) 6,55 s 6,45 d (2,0) 6,24 d (2,0) 7,39 d (2,0) 6,92 d (9,0) 7,40 dd (8,0; 2,0) δC (ppm) 166,0 103,9 183,9 166,3 100,1 163,2 95,0 159,4 105,3 123,7 114,2 147,0 150,9 116,8 120,3 Luteolin [5] δH (ppm), J (Hz) δC (ppm) 164,3 6,67 s 103,2 182,0 164,5 6,45 d (2,1) 99,2 161,9 6,20 d (2,1) 94,3 157,7 104,1 121,9 7,40 d (2,3) 113,8 146,1 150,1 6,90 d (8,1) 116,4 7,2 dd (8,3; 2,3) 119,3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA) 205 KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy cỏ mực (Eclipta prostrata (L.) L.) tỉnh Thừa Thiên Huế có thành phần hóa học chất dễ bay chủ yếu monotecpen secquitecpen khơng chứa oxi Bên cạnh đó, việc phát hoạt chất luteolin mẫu nghiên cứu góp phần tạo sở khoa học cho việc sử dụng loài việc điều trị chứng viêm nhiễm TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] Võ Văn Chi (1998) Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, 279 Dinesh Manvar, Mahesh Mishra, Suriender Kumar, Virendra N Pandey (2012) “Identification and evaluation of anti Hepatitis C virus phytochemicals from Eclipta alba”, Journal of Ethnopharmacology, 144, 545-554 Han Y, Xia C, Cheng XY, Xiang RD, Liu H, Yan Q, Xu DY (1998) “Preliminary studies on chemical constituents and pharmacological action of Eclipta prostrata L.”, China J Mater Med, 23(11), 680 – 683 Đỗ Tất Lợi (2005) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 325 - 326 Tae Joung Ha, Jin Hwan Lee, Myoung-Hee Lee, Byeong Won Lee, Hyun Sook Kwon, Chang-Hwan Park, Kang-Bo Shim, Hyun-Tae Kim, In-Youl Baek, Dae Sik Jang (2012) “Isolation and identification of phenolic compounds from the seeds of Perilla frutescens (L.) and their inhibitory activities against α-glucosidase and aldose reductase”, Food chemistry, 135, 1397-1403 Wu J, Hou WB, Zhang TJ, Han YM (2008) “Chemical constituents of Eclipta prostrata”, Chin Tradit Herb Drugs, 39(6), 814 – 816 Yahara S, Ding N, Nohara T (1994) “Oleanane glycosides from Eclipta alba”, Chem Pharm Bull, 42(6), 1336 – 1338 Zhang JS, Guo QM (2001) “Studies on the chemical constituents of Eclipta prostrata”, Acta Pharm Sin, 36(1), 34 – 37 Từ điển Hợp chất thiên nhiên (Dictionary of Natural Products, DVD, Copyright©1982-2012 Chapman & Hall/CRC 2009) Title: CHEMICAL CONSTITUENTS OF ECLIPTA PROSTRATA IN THUA THIEN HUE PROVINCE Abstract: From the ethyl acetate extract of Eclipta prostrata (L.) L growing in Thua Thien Hue province, a flavone named luteolin was isolated Its structure was identified on the basis of spectral data including IR, 1H- and 13C-NMR and was compared with reported data Besides, volatile constituents of the n-hexane extract of this plant were identified by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) Keywords: Eclipta prostrata (L.) L., luteolin TRẦN ĐỊNH Học viên Cao học, chuyên ngành Hóa, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Huế ĐT: 0168 239 4490, Email: trandinhsp@gmail.com TS LÊ QUỐC THẮNG Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Huế ĐT: 0914 202 111, Email: lequocthang3112@gmail.com ... (8,3; 2,3) 119,3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA) 205 KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy cỏ mực (Eclipta prostrata (L.) L.) tỉnh Thừa Thiên Huế có thành phần hóa học chất dễ bay...THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA) 203 Sắc ký mỏng (TLC) thực mỏng silica gel Merck 60 F254 Sắc ký... TRẦN ĐỊNH Học viên Cao học, chuyên ngành Hóa, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Huế ĐT: 0168 239 4490, Email: trandinhsp@gmail.com TS LÊ QUỐC THẮNG Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Huế ĐT: 0914