KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 GÂY THIẾU HỤT CITRIN TRÊN MỘT SỐ TRẺ EM NGHI NGỜ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM Người hướng dẫn TS Tạ Văn Thạo Sinh viên Lê Thị Phương Chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học Khóa học 2018 2022 Nội dung báo cáo Đặt vấn đề Tổng quan Đối tượng và phương pháp nghiên cứu Kết quả và bàn luận Kết luận Đặt vấn đề Đột biến gen SLC25A13 gây thiếu hụt citrin Việt Nam là 1 trong những nước có tỷ lệ đột.
KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN TÍCH GEN SLC25A13 TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH THIẾU HỤT CITRIN TRÊN TRẺ EM Người hướng dẫn : TS Tạ Văn Thạo Sinh viên : Lê Thị Phương Chuyên ngành : Kỹ thuật xét nghiệm y học Khóa học : 2018-2022 Đặt vấn đề Tổng quan Nội dung Đối tượng phương pháp nghiên cứu báo cáo Kết bàn luận Kết luận Đột biến gen SLC25A13 gây thiếu hụt citrin Đặt vấn đề Việt Nam nước có tỷ lệ đột biến cao Phân tích gen SLC25A13 cơng cụ hữu ích giúp chẩn đoán xác định Mục tiêu nghiên cứu Phân tích gen SLC25A13 chẩn đốn bệnh thiếu hụt citrin số trẻ em Tổng quan Gen SLC25A13 2.Citrin: Chức • Có vai trị quan trọng q trình trao đổi chất: ✓ Cung cấp aspartate cho bào tương ✓ Vận chuyển NADH thoi malate-aspartate ✓ Cung cấp NADH cho ty thể ✓ Tổng hợp acid béo từ acetyl CoA ✓ Tân tạo đường từ lactate glycerol ✓ Điều hòa thụ thể alpha kích hoạt peroxisome Định nghĩa • Bệnh di truyền lặn NST thường Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em • Do đột biến gen SLC25A13 • Có kiểu hình chính: - NICCD - FTTDCD Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em: Dịch tễ học Thế giới Đông Á 80000-100000 Việt Nam 38/88 có đột biến mang đồng hợp tử gen bệnh Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em: Cơ chế bệnh sinh Sơ đồ 1: Chu trình ure thoi malate-aspartate Sơ đồ 2: Con thoi malate-citrate Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em: Điều trị Triglyceride trung bình Vitamin Khơng lactose Đối tượng phương pháp nghiên cứu 10 Địa điểm : Khoa Kỹ thuật Y học-Đại học Y Hà Nội phòng xét nghiệm Chemedic Việt Nam Thời gian: Từ 11/2021 – 05/2022 Đối tượng : bệnh nhi nghi ngờ thiếu hụt citrin Thiết kế : Mô tả cắt ngang Cỡ mẫu: gồm mẫu: mẫu máu khô mẫu máu toàn phần (M1-M4) 11 Sơ đồ nghiên cứu Nhân đoạn gen cần XĐ đột biến Thu thập mẫu nghiên cứu Giải trình tự với mồi tương ứng Tách chiết DNA Điện di sản phẩm PCR Phân tích kết 12 Kết bàn luận 13 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Đặc điểm tuổi STT Tuổi M1 tháng tuổi M2 tháng tuổi M3 tháng tuổi M4 12 tuổi Dưới tuổi Trên tuổi 14 Định lượng acid amin Định lượng aa M1 (µmol/l) M2 (µmol/l) Met 17,44 68,3 Khoảng tham chiếu (µmol/l) 10-60 Phe 193,53 57,8 24-137 Tyr 220,85 221,49 14-108 Cit 160,58 462,68 5,6-35 → Citrulline tăng 2/2 mẫu 15 Sinh hóa máu M3 Khoảng tham chiếu M4 Khoảng tham chiếu Đơn vị Chol 4,85 1,71-5,91 5,03 2,88-5,23 mmol/L Triglycerid 7,57 0,62-3,12 0,91 0,51-2,38 mmol/L GGT 59,2 6-92 24,2 5-15 U/L XN →M3: tăng Triglycerid →M4: GGT tăng nhẹ, Triglycerid Cholesterol bình thường 16 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 • Kết tách chiết DNA Mẫu Nồng độ A260 A260/280 (ng/µl) M1 18,5 0,369 1,808 M2 19,1 0,381 1,867 M3 35,9 0,719 1,892 M4 37,6 0,750 1,973 → Nồng độ đạt >10 ng/µl độ tinh cao với tỷ số A260/280 nằm khoảng 1,8-2,0 → Đủ điều kiện để tiến hành bước 17 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 • Kết điện di sản phẩm PCR 18 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 • Kết giải trình tự gen → Giải trình tự Sanger (A)Mẫu chứng (B)Mẫu bệnh chứa đột biến I-c.851delGTAT(p.Met285ProfsTer2) dạng đồng hợp → Đột biến loại I (rs80338720, I(851.delGTAT)) dạng đồng hợp tử mẫu 19 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 • Đột biến I-c.851delGTAT(p.Met285ProfsTer2) → Đột biến gây bệnh làm chức gen 20 Kết xác định đột biến gen SLC25A13 • Đột biến I-c.851delGTAT(p.Met285ProfsTer2) - Tần xuất phát hiện: + Trung Quốc (58,3-70%) + Nhật Bản (20%) + Việt Nam: Nguyễn Phạm Anh Hoa (2012)-82,9% Bùi Đình Dương (2021)-85,7% - Nghiên cứu phát 4/4 đột biến 21 Kết luận Căn vào kết trên, xin rút kết luận sau: • Nghiên cứu phát kiểu đột biến đồng hợp tử rs80338720 (I(851delGTAT)) tất 04 mẫu phương pháp giải trình tự Sanger 22 Trân trọng cảm ơn quý thầy cô lắng nghe 25 ... cơng cụ hữu ích giúp chẩn đốn xác định Mục tiêu nghi? ?n cứu Phân tích gen SLC25A13 chẩn đoán bệnh thiếu hụt citrin số trẻ em Tổng quan Gen SLC25A13 2 .Citrin: Chức • Có vai trị quan trọng q trình... dung Đối tượng phương pháp nghi? ?n cứu báo cáo Kết bàn luận Kết luận Đột biến gen SLC25A13 gây thiếu hụt citrin Đặt vấn đề Việt Nam nước có tỷ lệ đột biến cao Phân tích gen SLC25A13 cơng cụ hữu ích... • Bệnh di truyền lặn NST thường Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em • Do đột biến gen SLC25A13 • Có kiểu hình chính: - NICCD - FTTDCD Bệnh thiếu hụt citrin trẻ em: Dịch tễ học Thế giới Đơng Á 80000-100000