(Luận án tiến sĩ) nghiên cứu tình hình bệnh dại trên một vài loài động vật ở đồng bằng sông cửu long và xây dựng qui trình phòng chống bệnh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TRƯƠNG PHÚC VINH NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LỒI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62640102 NĂM 2022 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TRƯƠNG PHÚC VINH MÃ SỐ NCS: P1014005 NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LỒI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62640102 NGƯỜI HƯỚNG DẪN PGS TS NGUYỄN ĐỨC HIỀN NĂM 2022 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: Ban Giám hiệu Trường Đại học Cần Thơ, khoa Sau đại học, ban Chủ nhiệm Khoa Nông Nghiệp, Bộ môn Thú y, quý Thầy, Cô giảng dạy, hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Đức Hiền giảng dạy, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu, chăm bồi kiến thức hoàn thành luận án Xin chân thành cảm ơn anh, chị, em đồng nghiệp bạn ngành Thú y giúp đỡ tơi hồn thành nghiên cứu Tơi xin dành tất yêu thương lời cám ơn tới gia đình, người thân yêu ủng hộ, chia sẻ buồn vui sống để tơi an tâm có thêm nghị lực để hồn thành luận án Trương Phúc Vinh i TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com TÓM TẮT Luận án nghiên cứu bệnh dại 13 tỉnh thành đồng sông Cửu Long từ năm 2014 đến 2021 để xác định tổng đàn, tỷ lệ tiêm phịng bệnh dại chó, tình hình điều trị dự phịng bệnh dại người tình hình bệnh dại người Thực phương pháp dịch tễ học phân tích (ELISA) để xác định kháng thể kháng virus dại Tiến hành sử dụng phương pháp sinh học phân tử (RT-PCR) để xác định diện virus dại giải trình tự gen N virus dại để so sánh với kiểu gen số chủng khu vực vaccine dại sử dụng cho động vật Việt Nam Kết giai đoạn từ năm 2017 đến 2020 tổng đàn chó trung bình hàng năm 335.072 con; tỷ lệ tiêm phịng trung bình cho động vật (chó) hàng năm 41,10%; số người điều trị dự phịng trung bình hàng năm 50.913 người Từ năm 2018 đến tháng năm 2021 có tổng cộng 37 trường hợp động vật (chó) xác định dương tính với virus dại có 67 người chết bệnh dại Tỷ lệ chó có kháng thể kháng virus dại 5,94% đàn chó thả rơng khơng tiêm phịng Bến Tre, khơng có khác biệt tỷ lệ kháng thể kháng virus dại chó giống, lứa tuổi, giới tính khu vực ni Tỷ lệ chó có kháng thể kháng virus dại điểm thu gom chó TP Cần Thơ 14,13%, yếu tố lứa tuổi, giống, giới tính, khu vực nuôi không ảnh hưởng đến khả sinh kháng thể kháng virus dại Tỷ lệ chó kháng ® thể bảo hộ sau tiêm phòng vaccine Rabisin mono (Merial) tỉnh Kiên Giang 79,08%, yếu tố khu vực, lứa tuổi, giống, thời điểm lấy mẫu sau tiêm phòng vaccine dại có ảnh hưởng đến khả sinh kháng thể Chó mẹ có thời gian tiêm phịng truyền kháng thể thụ động cho chó đạt 100% Tỷ lệ có kháng thể kháng virus Dại dơi 3,33%; tỉnh Kiên Giang 10% Hậu Giang 2,5% Cả chủng 1230.2019, 20328-Ca Mau.18, 1231.2019 chủng 1229.2019 Trà Vinh có khoảng cách di truyền gần gũi tương đồng cao với chủng vaccine Pháp 93127FRA (vaccine RABISIN sử dụng rộng rãi Việt Nam) Từ khóa: Bệnh dại, vaccine, kháng thể, giải trình tự, Đồng sông Cửu Long ii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ABSTRACT The research on rabies disease was conducted in 13 provinces of the Mekong Delta from 2014 to 2021 to determine the total herd, the rate of rabies vaccination in dogs, the rabies preventive vaccination in humans, and the rabies disease in humans The epidemiological analysis (using ELISA assay) was done to identify antibodies to the rabies virus The molecular biology method (using RT-PCR) was carried out to determine the presence of rabies virus and sequencing the N gene of the rabies virus to compare with the genotype of some strains in the area and the rabies vaccine strains used for animals in Vietnam The results from 2017 to 2020 indicated that the annual average number of dogs was 335,072; the annual average vaccination rate (for dogs) was 41.10%; the annual average number of people got the preventive treatment was 50,913 peoples From 2018 to August 2021, a total of 37 confirmed cases of animals (dogs) were positive for rabies virus, and 67 peoples were died due to rabies disease The percentage of dogs harbored antibodies against rabies virus was 5.94% in the herd of unvaccinated free-grazing dogs in Ben Tre; there was no difference in the rate of rabies antibodies in dogs of different breeds, ages, and genders, and raising area The percentage of dogs with antibodies against rabies virus at the dog gathering places in Can Tho was 14.13%; those factors such as age, breed, gender, raising area did not affect the ability to produce antibodies against rabies virus The percentage of dogs with protective antibodies after vaccination with Rabisin®mono (Merial) in Kien Giang province was 79.08%; the regional factors, age, breed, and sampling time after rabies vaccination had an influence to the antibody production The mother dogs vaccinated previously could transmit the passive antibodies to the puppies, accounted for 100% The rate of antibodies against rabies virus in bats was 3.33%; including 10% in Kien Giang and 2.5% in Hau Giang All four strains including 1230.2019, 20328-Ca Mau.18, 1231.2019 and 1229.2019 Tra Vinh had a close genetic distance and high similarity to the French vaccine strain 93127FRA (RABISIN vaccine has been widely used in Vietnam) Keywords: Rabies, vaccine, antibodies, Sequencing, Mekong Delta iii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Lor cAM TOi rrr rur euA xin cam doan tl6y ld cdng trinh nghiCn criu cria ri6ng t6i, cric k6t qu6 nghiCn ctiu dugc trinh bdy lu4n rin ld trung thgc, kh6ch quan vd chua tung dung AC trao vg b6t kj'noiddu T6i xin cam cloan ring rrgi sr,r gifp dd cho viOc thgc hign lufln rin dd dugc cim on, c6c th6ng tin trfch d6n lu4n 6n ndy d6u dugc chi rO ngu6n g6c Cin bQ huring d6n T6c gi6 lu$n rfln PGS.TS Nguy6n Dtic Hi6n Truong Phric Vinh /w iv TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cảm tạ .i Tóm tắt ii Abstract iii Lời cam kết kết iv Mục lục .v Danh mục bảng ix Danh mục hình xi Danh mục chữ viết tắt xiii Chương 1: Giới thiệu Chương 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Virus gây bệnh dại 2.1.1 Sơ lược lịch sử phát virus gây bệnh dại 2.1.2 Phân loại virus dại 2.1.3 Đặc điểm hình thái cấu trúc virus 2.1.4 Tiểu thể Negri virus dại 2.1.5 Đặc điểm dịch tễ học 2.1.6 Tính chất kháng nguyên sinh miễn dịch 2.1.7 Sức đề kháng 10 2.1.8 Sự truyền lây chế gây bệnh virus dại 11 2.2 Cơ chế bệnh sinh virus dại 17 2.2.1 Sự xâm nhập virus vào hệ thần kinh 17 2.2.2 Sự truyền lây đến thần kinh trung ương 19 2.2.3 Sự truyền lây thần kinh trung ương 20 2.2.4 Sự truyền lây từ thần kinh trung ương 21 2.2.5 Rối loạn thần kinh động vật 21 2.2.6 Tổn thương cấu trúc nhiễm rabv thần kinh trung ương 22 2.3 Biểu lâm sàng 25 v TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 2.3.2 Dạng bại liệt (paralytic form) 2.3.3 Những biểu lâm sàng theo loài vật 2.4 Các phương pháp dùng chẩn đoán bệnh dại 2.4.1 Chẩn đoán lâm sàng 2.4.2 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 2.5 Hệ gene virus dại 2.5.1 Nucleoprotein (n) 2.5.2 Phosphoprotein (p) 2.5.3 Large protein (l) 2.5.4 Matrix protein (m) 2.5.5 Glycoprotein (g) 2.5.6 Cấu trúc RNP virus 2.6 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 2.6.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 2.6.2 Tình hình nghiên cứu nước Chương 3: Nội dung, vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.1 Nội dung nghiên cứu 3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 3.2.1 Thời gian 3.2.2 Địa điểm 3.3 Vật liệu nghiên cứu 3.3.1 Mẫu vật dùng nghiên cứu 3.3.2 Hóa chất sinh phẩm sử dụng nghiên cứu 3.3.3 Trang thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 3.3.4 Biểu mẫu thu thập thông tin 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Phương pháp điều tra tình hình tiêm phịng bệnh dại ch phòng bệnh dại người từ 2017 đến 2020 3.4.2 Phương pháp khảo sát nhận thức cộng đồng bệnh dại vi TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 3.4.3 Khảo sát diện kháng thể kháng virus dại đ điểm giết mổ 3.4.4 Phương pháp khảo sát đáp ứng miễn dịch chó sau rabisin miễn dịch thụ động chó 3.4.5 Phương pháp đánh giá khả tồn trữ mầm bệnh dại ngo biện pháp phòng chống 3.4.6 Phương pháp khảo sát mối tương quan di truyền c địa với chủng vaccine sử dụng chủng virus dại khu vực Chương 4: Kết thảo luận 4.1 Kết điều tra tình hình tiêm phịng bệnh dại chó tình hình tiêm phịng bệnh dại người từ 2017 đến 2020 4.1.1 Tổng đàn chó tỷ lệ tiêm phịng chó 13 tỉnh/thàn 2017-2020 4.1.2 Tình hình tiêm phòng vaccine dại người từ năm 2017-2 4.1.3 Kết điều tra bệnh dại động vật từ năm 2017 đến thá 4.1.4 Kết điều tra số người chết bệnh dại từ năm 2014 đế 4.2 Khảo sát cộng đồng tình hình bệnh dại 4.2.1 Khảo sát cộng đồng tiêm phịng dại cho chó nhận thứ Đồng Tháp 4.2.2 Khảo sát nhận thức chủ vật nuôi bệnh dại 4.3 Kết khảo sát kháng thể kháng virus dại đàn chó, mèo thả rơng điểm giết mổ Bến Tre TP Cần Thơ 4.3.1 Khảo sát kháng thể kháng virus dại chó ni thả rơng c tỉnh Bến Tre 4.3.2 Khảo sát kháng thể kháng virus dại chó nơi thu gom chó TP Cần Thơ 4.3.3 Khảo sát kháng thể kháng virus dại mèo nơi thu gom 4.4 Kết khảo sát đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm vaccine dại Rabisin Kiên Giang 4.4.1 Kết khảo sát đáp ứng miễn dịch sau tiêm vaccine chó Kiên Giang 4.4.2 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo khu vực nuôi vii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 4.4.3 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo nhóm tuổi 89 4.4.4 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giống 90 4.4.5 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giới tính 91 4.4.6 Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo thời gian sau tiêm phòng 91 4.4.7 Kết khảo sát miễn dịch thụ động chó từ chó mẹ tiêm phịng vaccine dại 92 4.5 Kết đánh giá khả tồn trữ mầm bệnh dại tự nhiên 95 4.5.1 Khảo sát kháng thể kháng virus dại động vật hoang dã tỉnh Kiên Giang, Hậu Giang Vĩnh Long 95 4.5.2 Khảo sát kháng thể kháng virus dại dơi tỉnh Kiên Giang, Hậu Giang Vĩnh Long 97 4.6 Khảo sát mối tương quan di truyền chủng virus dại thực địa với chủng vaccine sử dụng với chủng virus dại khu vực đề xuất biện pháp phòng chống 98 4.6.1 Kết thực phản ứng rt-pcr đăng ký genbank (ncbi) 98 4.6.2 Phân tích phát sinh lồi 103 4.6.3 Khoảng cách di truyền phân tích trình tự 105 4.6.4 Đề xuất biện pháp phòng chống 107 Chương 5: Kết luận đề nghị 111 5.1 Kết luận 111 5.2 Đề nghị 111 Tài liệu tham khảo 112 Phụ lục .127 viii TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 135 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Trị Số Lý Thuyết Trường Hợp Trường Hợp Tổng cột m= Trịsố ChiBình Phương Độ Tự P (Ho) = n= 0.542394831 NS Bảng: So sánh kháng thểkháng virus dại theo giới tính Giới tính Đực Cái Tổng Chi-Square Test: ÂM TÍNH, DƯƠNG TÍNH Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts MS-Âm tính 85.01 0.000 72.99 0.000 Total Chi-Sq = 0.000, DF = 1, P-Value = 0.996 85 73 15 136 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Bảng: So sánh kháng thểkháng virus dại theo tuổi Tuổi năm 1-2 năm năm Tổng ÂM TÍNH Dưới năm 1-2năm Trên năm DƯƠ 86 11 Trường Hợp Trường Hợp Trường Hợp Tổng cột Trị Số Lý Thuyết Trường Hợp Trường Hợp Trường Hợp Tổng cột m= Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = n= 3.78871826 NS 137 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com BI Kết khảo sát đáp ứng miễn dịch sau tiêm vaccine Rabisin phịng dại chó Kiên Giang Bảng: Tỷ lệ đáp ứng miễn dịch chó sau tiêm phịng vaccine dại Số mẫu khảo sátCó đáp ứng miễn dịch Variable KQ (+) Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo khu vực ni Khu vực Nội thành Ngoại thành Tổng Chi-Square Test: Nội thành, Ngoại thành Total Chi-Sq = 4.094, DF = 1, P-Value = 0.043 Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo nhóm tuổi Tuổi < tuổi – tuổi > tuổi Tổng TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Chi-Square Test: < Tuổi, 1-3 Tuổi, >3 Tuổi Total Chi-Sq = 12.359, DF = 2, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: < Tuổi, 1-3 Tuổi Total Chi-Sq = 11.550, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: < Tuổi, >3 Tuổi Total Chi-Sq = 4.590, DF = 1, P-Value = 0.032 Chi-Square Test: 1-3 Tuổi, >3 Tuổi Total TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Chi-Sq = 1.935, DF = 1, P-Value = 0.164 Descriptive Statistics: < Tuổi, 1-3 Tuổi, > Tuổi Variable < Tuổi 1-3 Tuổi > Tuổi Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giống Giống chó Giống nội Giống ngoại Tổng Chi-Square Test: Giống nội, Giống ngoại Total Chi-Sq = 4.364, DF = 1, P-Value = 0.037 Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo độ dài thời gian Độ dài gian tiêm phòng < tháng – 12 tháng >12 tháng Tổng sau TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Chi-Square Test: 12 Tháng Total Chi-Sq = 14.775, DF = 2, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: 12 Tháng TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Total 52 Chi-Sq = 3.873, DF = 1, P-Value = 0.049 Descriptive Statistics: < Tháng, 6-12 Tháng, > 12 Tháng Variable < Tháng 6-12 Tháng > 12 Tháng Bảng: Tỷ lệ chó có kháng thể bảo hộ theo giới tính Giới tính Đực Cái Tổng Chi-Square Test: Đực, Cái Total Chi-Sq = 0.544, DF = 1, P-Value = 0.461 142 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Lấy mẫu máu dơi Lấy mẫu máu chuột cóng 143 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Lấy huyết sau ly tâm Ly tâm mẫu huyết trước chạy ELISA 144 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Vô hoạt mẫu huyết máy điều nhiệt 56 C/30 phút Phủ film sau cho huyết vào giếng Pha loãng mẫu đối chứng 145 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Thêm chất peroxidase PS Thêm dung dịch dừng phản ứng Máy ELISA Epoch 146 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Hệ thống máy ELISA phịng Chẩn đốn bệnh động vật - Chi Cục Chăn nuôi - Thú y Thành phố Cần Thơ Đọc kết hệ thống ELISA 147 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TRƯƠNG PHÚC VINH MÃ SỐ NCS: P1014005 NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH BỆNH DẠI TRÊN MỘT VÀI LỒI ĐỘNG VẬT Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHỊNG CHỐNG BỆNH... tài: ? ?Nghiên cứu tình hình bệnh dại vài lồi động vật Đồng sông Cửu Long xây dựng qui trình phịng chống bệnh? ?? thực Mục tiêu nghiên cứu: - Xác định tổng đàn tỉ lệ tiêm phịng bệnh dại chó từ năm... 2.6 Tình hình nghiên cứu nước 2.6.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 2.6.2 Tình hình nghiên cứu nước Chương 3: Nội dung, vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.1 Nội dung nghiên cứu