(LUẬN ÁN TIẾN SĨ) Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng chống oxy hóa và độc tính tế bào của cây Hồng quân (Flacourtia rukam Zoll. et Mor.)

BỘYTẾ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁI T NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐ NG OXY HĨA VÀ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA CÂY HỒN G QUÂ N (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH - Năm 2022 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com BỘYTẾ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁI TH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐ NG OXY HĨA VÀ ĐỘC TÍN H TẾ BÀO CỦA CÂY HỒN G QUÂ N (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR.) NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 62.72.04.06 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS HUỲNH NGỌC THỤY PGS.TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI TP HỒ CHÍ MINH - Năm 2022 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt ADN ALT AST BHA CCl4 COSY d d DEPT DMEM DMF DMSO dNTP DPPH EAC ESI-MS HDL HMBC HR-MS HSQC IC J LDL LOD LOQ m MIC MS NCBI NMR TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ii PBS PCR PDA Phospha Polymer Photodio PIC ppm q s SDS Polymor Parts per Quartet Singlet Sodium d SKLM t TLTK TT Triplet UPLC UV Ultra-Pe Ultraviol VLDL Very-low VS Vanilin s TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Flacourtia 1.2 Tổng quan Flacourtia rukam 26 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Phương pháp nghiên cứu 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 57 3.1 Kết khảo sát dược liệu Flacourtia rukam 57 3.2 Kết định tính nguyên liệu 70 3.3 Kết sàng lọc tác dụng sinh học 72 3.4 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 76 3.5 Xây dựng quy trình định lượng poliothrysosid thân Flacourtia rukam UPLC-PDA 112 CHƯƠNG BÀN LUẬN 127 4.1 Về mặt thực vật học 127 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com iv 4.2 Về định tính nguyên liệu 130 4.3 Sàng lọc tác dụng sinh học 131 4.4 Chiết xuất phân lập hợp chất F rukam 137 4.5 Về định lượng poliothrysosid mẫu dược liệu Hồng quân 142 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 145 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN .149 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Điểm khác biệt loài mang tên Hồng quân Việt Nam Bảng 1.2 Flavon phân lập từ loài thuộc chi Flacourtia .8 Bảng 1.3 Flavonol phân lập từ loài thuộc chi Flacourtia Bảng 1.4 Các hợp chất phenolic glycosid 12 Bảng 1.5 Các dẫn chất acid quinic 14 Bảng 1.6 IC50 dịch chiết F indica thử nghiệm DPPH NO .18 Bảng 1.7 IC50 chất phân lập từ dịch F inermis thử nghiệm DPPH 19 Bảng 1.8 Hoạt tính chống oxy hóa chi Flacourtia .19 Bảng 1.9 MIC dịch chiết từ F indica số loài vi khuẩn 20 Bảng 1.10 MIC dịch chiết từ F indica số loài nấm 21 Bảng 1.11 MIC dịch chiết MeOH từ rễ F indica số vi khuẩn 21 Bảng 1.12 % ức chế gốc tự IC50 dịch chiết F indica 23 Bảng 1.13 Các chế phẩm có Flacourtia 25 Bảng 1.14 Hoạt tính chống oxy hóa cao chiết hợp chất từ vỏ thân F rukam 29 Bảng 1.15 Hoạt tính hạ cholesterol cao chiết từ vỏ thân F rukam .30 Bảng 2.1 Ký hiệu mã hóa mẫu dùng nghiên cứu 32 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng thử nghiệm độc tính tế bào XO 36 Bảng 2.3 Trình tự cặp mồi RbcL sử dụng phản ứng PCR .38 Bảng 2.4 Thành phần thử tác dụng ức chế XO giếng đĩa 96 46 Bảng 3.1 So sánh đặc điểm hình thái F rukam F indica .59 Bảng 3.2 So sánh khác biệt trình tự gen mẫu HQ275 HQ2941 69 Bảng 3.3 Mức độ tương đồng 12 mẫu Hồng quân BLAST NCBI 69 Bảng 3.4 Xác định độ ẩm, độ tro hàm lượng chất chiết cao toàn phần 70 Bảng 3.5 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật F rukam .70 Bảng 3.6 Kết định lượng cao toàn phần thân cành F rukam .72 Bảng 3.7 Hoạt tính chống oxy hóa cao phân đoạn thử nghiệm DPPH .73 Bảng 3.8 Hoạt tính chống oxy hóa cao phân đoạn lực khử sắt 74 Bảng 3.9 % ức chế dòng tế bào MDA-MB-231 74 Bảng 3.10 % ức chế dòng tế bào HepG2 75 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 47 Phụ lục 70 Kết thử độc tính tế bào Bảng kết độc tính tế bào MDA-MB-231 MDA-MB-231 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ Cao EtOAc 100 0.132 0.14 0.124 0.132 0.008 18.59155 81.40845 MDA-MB-231 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MDA-MB-231 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MDA-MB-231 MT 0.461 FRE13 0.456 0.463 KQ TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 48 MDA-MB-231 MT 0.432 0.437 0.436 FRHC12 KQ MDA-MB-231 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ Bảng kết độc tính tế bào HepG2 HEPG2 MT 0.623993 0.533073 0.560012 0.572359 0.046701 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ HEPG2 MT 0.623993 0.533073 0.560012 0.572359 0.046701 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ HEPG2 MT 0.623993 0.533073 0.560012 0.572359 0.046701 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT FRC11 DMSO 0.741 0.768 0.749 KQ TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 49 MT 0.565 0.570 0.559 FRE11 KQ MT 0.741 0.768 0.749 FRE12 KQ MT 0.585 0.572 0.563 FRE13 KQ MT 0.585 0.572 0.563 FRHC12 KQ Bảng kết độc tính tế bào RD Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 50 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ 0.0069 MT 1.171 1.058 1.154 MEAN SEM 1.128 0.061 %DMSO % ỨC CHẾ KQ RD4 Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT DMSO 0.937818 1.04016 1.047865 1.008614 0.061432 RD FRE13 MT DMSO1% 0.841 0.639 0.846 0.654 0.859 0.641 MT DMSO 1% 0.841 0.639 0.846 0.654 0.859 0.641 KQ RD FRHC12 KQ TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 51 Phụ lục 71 Sắc ký đồ khảo sát dung mơi chiết xuất Dung mơi Diện tích pic MeOH (100%) MeOH (70%) MeOH (50%) Nước 100% Phụ lục 72 Sắc ký đồ khảo sát phươ Diện tích pic Thời gian (phút ) 15 30 45 60 Phụ lục 73 Sắc ký đồ khảo sát tính tương thích hệ thống TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 52 Phụ lục 74 Sắc ký đồ khảo sát độ đặc hiệu Phụ lục 75 Sắc ký đồ độ lặp lại TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 53 Poliothrysosid C (µg/ml) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 54 Phụ lục 77 Sắc ký đồ độ 80 Phụ lục 78 Sắc ký đồ độ 100 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 55 Phụ lục 79 Sắc ký đồ độ 120 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 56 Phụ lục 80 Sắc ký đồ mẫu theo dõi theo thời điểm - Mẫu Bến Tre Phụ lục 81 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Lá TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 57 Phụ lục 82 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Quả non Phụ lục 83 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Rễ TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 58 Phụ lục 84 Thông tin cấp số nhận diện ngân hàng gen (GenBank: MK088161.1) Flacourtia rukam ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit (rbcL) gene, partial cds; chloroplast GenBank: MK088161.1 FASTA Graphics Go to: LOCUS JUN-2019 DEFINITION carboxylase/oxygenase ACCESSION VERSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM Tracheophyta; REFERENCE AUTHORS TITLE rbcL JOURNAL REFERENCE AUTHORS TITLE JOURNAL Breeding, COMMENT FEATURES source TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 59 /organelle="plastid:chloroplast" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:1085434" gene 416 /gene="rbcL" CDS 416 /gene="rbcL" /codon_start=3 /transl_table=11 /product="ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit" /protein_id="QCV37245.1" /translation="AGVKDYKLTYYTPDYETKDTDILAAFRVTPQPGVPPEEAGAAVA AESSTGTWTTVWTDGLTSLDRYKGRCYDIEPVAGEENQFIAYVAYPLDLFEEGSVTNM FTSIVGNVFGFKALRALRLEDLRIPPAYSKTFQGPP" ORIGIN aggctggtgt taaagattat aaattgactt attatactcc tgactatgaa accaaagata 61 ctgatatctt ggcagcattc cgagtaactc ctcaacctgg agttccgccc gaggaagcag 121 gggccgcggt agctgctgaa tcttctactg gtacatggac aactgtgtgg accgatgggc 181 ttaccagtct tgatcgttat aaaggacgat gctacgacat cgagcccgtt gctggagaag 241 aaaatcaatt tattgcttat gtagcttacc ccttagacct ttttgaagaa ggttctgtta 301 ctaacatgtt tacttccatt gtgggtaatg tatttgggtt caaagcctta cgcgctctac 361 gtctggagga tttgcgaatc ccccctgctt attctaaaac ttttcaaggc ccacct LInk: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MK088161 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... nhóm nghiên cứu đặt vấn đề ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng chống oxy hóa độc tính tế bào Hồng quân (Flacourtia rukam Zoll Et Mor.)? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Xác định tên khoa học. .. TH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐ NG OXY HĨA VÀ ĐỘC TÍN H TẾ BÀO CỦA CÂY HỒN G QUÂ N (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR.) NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 62.72.04.06 LUẬN ÁN TIẾN... nguyên liệu nghiên cứu qua khảo sát hình thái thực vật, vi phẫu định danh mẫu giải trình tự ADN Khảo sát hóa học theo định hướng tác dụng chống oxy hóa độc tính tế bào thân Hồng quân TIEU LUAN