KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM MẪU BỆNH PHẨM COVID-19

PowerPoint Template KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM MẪU BỆNH PHẨM COVID 19 www qcc edu vn www qcc edu vn www qcc edu vn CHIẾN LƯỢC XÉT NGHIỆM TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM www qcc edu vn Khuyến cáo về •Thu thập, bảo quả[.]

www.qcc.edu.vn KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM MẪU BỆNH PHẨM COVID-19 www.qcc.edu.vn www.qcc.edu.vn CHIẾN LƯỢC XÉT NGHIỆM TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM www.qcc.edu.vn Liên tục cập nhật Hướng dẫn Tạm thời WHO Xét nghiệm Phịng thí nghiệm Khuyến cáo về: •Thu thập, bảo quản vận chuyển bệnh phẩm •Nguyên lý xét nghiệm: Khuếch đại axit nucleic, huyết học, phân lập, giải trình tự •Các thực hành An tồn sinh học •Đảm bảo chất lượng https://www.who.int/publications/i/item/diagnostic-testing-forsars-cov-2 www.qcc.edu.vn Chiến lược xét nghiệm: tương lai Ngăn chặn lây truyền COVID-19 Giảm nhẹ tác động lây nhiễm cộng đồng Hạn chế lây nhiễm từ người sang người Giảm gánh nặng y tế, xử lý ca nặng, theo dõi phát tán đặc điểm vi rút Xét nghiệm Mục đích Tương lai tiềm tàng Trọng tâm Hiện Xét nghiệm tất trường hợp nghi ngờ •Lấy mẫu nhanh chóng xét nghiệm tất trường hợp nghi ngờ •Xây dựng lực xét nghiệm phạm vi quốc gia •Kết nối với mạng lưới tham chiếu quốc tế https://www.who.int/publications-detail/laboratory-testingstrategy-recommendations-for-covid-19-interim-guidance Điều chỉnh chiến lược phù hợp, không xét nghiệm tất bệnh nhân •Xét nghiệm để theo dõi cường độ lây nhiễm •Xét nghiệm cho bệnh nhân nguy kịch, trường hợp có biểu bất thường, nhóm nhỏ •Theo dõi đặc điểm vi rút học www.qcc.edu.vn CÁC XÉT NGHIỆM PHÁT HIỆN VÀ CHẨN ĐOÁN SARS-CoV-2 HIỆN CĨ www.qcc.edu.vn Các phương pháp xét nghiệm COVID-19 Ni cấy vi rút • • • Sequencing Phát vi rút sống Được dùng nghiên cứu Phòng xét nghiệm tham chiếu, An toàn sinh học cấp Xét nghiệm RT-PCR • Phát vật chất di truyền vi rút • Có thể sàng lọc khẳng định nhiễm COVID-19 Xét nghiệm huyết học Giải trình tự • Phát kháng thể kháng vi rút kháng nguyên vi rút • Xét nghiệm kháng thể khơng dùng quản lý bệnh nhân • Xét nghiệm kháng ngun sử dụng số trường hợp định • Xác định trình tự gen vi rút • Có thể dùng để khẳng định mơ tả đặc điểm vi rút • Phịng xét nghiệm nghiên cứu/ tham chiếu www.qcc.edu.vn Ni cấy virus • Khơng khuyến cáo cho xét nghiệm chẩn đoán thường quy; dùng cho nghiên cứu 7• Các phịng xét nghiệm tham chiếu chun biệt, có mức An tồn sinh học cấp trở lên www.qcc.edu.vn Xét nghiệm Real-time RT PCR Realtime RT-PCR = Realtime Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction Phát vật liệu di truyền SARS-CoV-2 mẫu bệnh phẩm cho thấy người bị nhiễm virus www.qcc.edu.vn Chuỗi trình tự đích RNA chép www.qcc.edu.vn Xét nghiệm Real-time RT PCR Hệ thống xét nghiệm Real-time RT PCR Hệ thống đóng Hệ thống mở Tách chiết Tách chiết khuếch đại PCR Khuếch đại PCR 10 www.qcc.edu.vn Xét nghiệm RT-PCR Khẳng định COVID-19  Xét nghiệm RT-PCR khuyến cáo sử dụng để khẳng định COVID19: o Phát có mặt RNA virus o Độ nhạy độ đặc hiệu cao  Kết xét nghiệm cần phiên giải kết hợp với đặc điểm lâm sàng dịch tễ học  Các kết bất thường/ ngồi mong đợi cần kiểm tra phịng xét nghiệm tham chiếu  Cần theo dõi mồi chứng dương phản ứng với đột biến virus  Giới hạn – Cần phòng xét nghiệm chuyên biệt – Mẫu thường xét nghiệm theo lơ – Có thể 6-8 tiếng để thực xét nghiệm; kết bị chậm trình vận chuyển việc xét nghiệm theo lơ www.qcc.edu.vn Giải trình tự gen Xác định trình tự gen virus •Khẳng định xác định đặc điểm virus •Giám sát mặt virus học, theo dõi/ phát đột biến trình tiến hóa virus •Truy vết ổ dịch, khu vực có dịch để áp dụng biện pháp can thiệp, đánh giá test chẩn đốn WHO khuyến khích chia sẻ thơng tin trình tự gen cộng đồng 12 quốc tế báo cáo Biến thể đáng quan tâm/ biến thể đáng lo ngại (VOI/ VOC) www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch COVID-19  Hạn chế Hai loại xét nghiệm miễn dịch; Phát kháng thể virus Phát kháng nguyên virus – Có thể có độ nhạy độ đặc hiệu thấp; kết dương tính âm tính giả – Khơng thể dùng để xác định liệu bệnh nhân có miễn nhiễm với tái nhiễm bệnh hay không – Xét nghiệm kháng thể không dùng để đưa định lâm sàng (chẩn đoán, điều trị), dùng nghiên cứu | www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng thể 14 Test nhanh (Rapid test) ELISA (Miễn dịch huỳnh quang) CMIA /ECLIA (Điện hóa phát quang) Kết quả: vịng 15 phút Kết quả: - 4h Kết quả: 15-60 phút www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng thể Mẫu bệnh phẩm: Mẫu máu ngoại vi Phiên giải kết Dương tính Phát kháng thể: Đã nhiễm SARS-CoV-2 trước hệ thống miễn dịch thể đáp ứng với virus Lưu ý: nguy xảy phản ứng chéo, dẫn tới kết dưỡng tính giả Âm tính Khơng phát kháng thể: Đang không bị nhiễm Đã nhiễm trước chưa đủ thời gian để tạo kháng thể sau bị phơi nhiễm (mới nhiễm) Đã nhiễm trước đó, đáp ứng miễn dịch yếu, chưa đủ mạnh để tạo đủ lượng kháng thể để phát 15 Tỷ lệ mắc bệnh yếu tố quan trọng cần xem xét phiên giải kết www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng thể Phát kháng thể người •Khơng có nhiễm SARS-CoV-2 khơng •Phần lớn bệnh nhân có đáp ứng kháng thể vào tuần thứ sau khởi phát •Nhiều bệnh nhân đáp ứng kháng thể yếu •XN huyết học khơng thể chẩn đốn nhanh tình trạng nhiễm trùng cấp để thông tin cho việc điều trị/ đáp ứng dịch Khuyến cáo WHO •Khơng khuyến cáo sử dụng xét nghiệm huyết học để xử trí lâm sàng •Khuyến khích dùng cho nghiên cứu dịch tễ học: xác định tỷ lệ lây nhiễm, tỷ lệ tử vong, hay câu hỏi | nghiên cứu khác  Hạn chế – Có thể có độ nhạy độ đặc hiệu thấp; Kết dương tính giả âm tính giả – Khơng thể dùng để xác định liệu bệnh nhân có miễn nhiễm với tái nhiễm bệnh hay không – Không dùng việc định lâm sàng; dùng nghiên cứu www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng nguyên Test nhanh (Rapid test) Mẫu bệnh phẩm: Dịch tỵ hầu/dịch hầu họng Phiên giải kết Dương tính: Phát kháng ngun Đang nhiễm SARS-CoV-2 Âm tính: Khơng phát kháng nguyên Đang không nhiễm SARS-CoV-2 Lưu ý: kết dương tính giả âm tính giả 17 www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng nguyên Phát kháng ngun virus •Phát có mặt protein virus SARSCoV-2 (kháng ngun) •Kháng ngun có mặt virus nhân lên •Có thể xác định tình trạng nhiễm trùng cấp tính nhiễm trùng giai đoạn sớm •Đã bắt đầu có test có chất lượng tốt hơn, nay, chưa bị ảnh hưởng (các) đột biến virus Khuyến cáo WHO • Test kháng ngun để chấn đốn SARS-CoV2 sử dụng số sở mà khơng có test PCR việc chờ kết PCR lâu | • Test kháng nguyên phải đáp ứng yêu cầu chất lượng tối thiểu có độ nhạy ≥80% có độ đặc hiệu ≥97%  Hạn chế – Có thể có độ nhạy độ đặc hiệu thấp; kết dương tính âm tính giả – Khơng có đồng chất lượng, kết – Không thể thay test PCR; khơng phát trường hợp nhiễm bệnh có tải lượng virus thấp www.qcc.edu.vn Xét nghiệm miễn dịch: Kháng ngun Khi nào? • Khơng có test PCR kết PCR lâu, chậm đáp ứng nhu cầu lâm sàng • Trong vịng 5-7 ngày sau khởi phát • Tests có độ nhạy ≥80% độ đặc hiệu ≥97% | Cho mục đích gì? • Ứng phó với ổ dịch nghi ngờ, sàng lọc người có nguy nhiễm bệnh • Hỗ trợ điều tra ổ dịch, mơi trường khép kín, có lây truyền COVID19 khẳng định PCR • XN khu vực có lây truyền rộng rãi để phát sớm áp dụng cách ly Tỷ lệ mắc bệnh yếu tố quan trọng cần xem xét phiên giải kết www.qcc.edu.vn Các yếu tố ảnh hưởng đến kết XN Khả phát virus tùy thuộc vào nhiều yếu tố: Thời điểm lấy mẫu Vị trí lấy mẫu (đường hơ hấp >< dưới) Chất lượng mẫu Loại XN chẩn đoán thực Điều kiện bảo quản vận chuyển mẫu Các yếu tố thể vật chủ Do đó, cho kết dương tính giả âm tính giả  Các kết XN phịng thí nghiệm cần ln ln phiên giải với dấu hiệu, triệu chứng lâm sàng tình hình dịch tễ www.qcc.edu.vn Lưu Ý quan trọng lựa chọn test Lựa chọn test Chất lượng số liệu dùng để thẩm định Chất lượng test ghi nhận Tình trạng đánh giá, thẩm định  WHO EUL: 20 kit RT-PCR, test nhanh kháng nguyên  US-FDA Năng lực sản xuất chứng chất lượng Khả phân bố hỗ trợ kỹ thuật Điều kiện vận chuyển, bảo quản; thời hạn sử dụng thành phần kit Dễ sử dụng Giá thành Áp dụng •Tập huấn • Lấy mẫu • Thực XN • Phiên giải kết XN • Quản lý chất thải • An tồn sinh học •Đánh giá sau sử dụng • Kiểm tra theo dõi • Phản hồi