Viện khoa học công nghệ quốc gia Viện công nghệ sinh học đề tài nckh cấp nhà nớc nghiên cứu công nghệ tế bào kỹ thuật thị phân tử phục vụ chọn tạo giống trồng (thuộc Chơng trình KC 04, mà số KC 04.08) đề tài nhánh nghiên cứu biện pháp công nghệ sinh học thực vật nhằm giảm chiều cao tăng khả chống đổ giống lúa chất lợng cao CNĐT: ThS Nguyễn văn thắng Hà Nội - 2005 Báo cáo kết đề tàI KC04-08 Nghiên cứu biện pháp công nghệ sinh học thực vật nhằm giảm chiều cao tăng khả chống đổ giống lúa chất lợng cao Mở đầu Công nghệ sinh học thực vật có nhiều đóng góp có giá trị cho sản xuất nông nghiệp, đặc biệt lĩnh vực tạo giống trồng Sự đời phát triển kỹ thuật sinh học đại nh nuôi cấy mô tế bào thực vật, chọn dòng đột biến, công nghệ gen công cụ có hiệu cao việc nghiên cứu cải tiến giống trồng có giá trị kinh tế đà thu đợc nhiều kết nhiều đối tợng trồng [1] Việt Nam công nghệ sinh học thực vật đợc nghiên cứu ứng dụng triển khai công tác giống trồng đà thu đợc kết đáng kể nh nhân giống bệnh nuôi cấy mô, nuôi cấy đơn bội, nuôi cấy dung hợp tế bào trần, chọn dòng tế bào đột biến đối tợng trồng nh lúa, khoai lang, thuốc lá, dứa sợi [9] Đặc biệt Viện Công nghệ sinh học đà chọn tạo đợc hai gièng lóa DR1 vµ DR2 b»ng kü tht chän dòng tế bào mang biến dị soma cho suất cao ổn định, có khả chịu hạn, chịu lạnh hẳn so với giống gốc [10] Lúa lơng thực quan trọng giới, 90% diện tích lúa trồng tiêu thụ chủ yếu châu Hiện lúa đợc trồng điều kiện sinh thái khí hậu khác vùng nhệt đới, nhiệt đới ôn đới châu lục [3, 8] Việt Nam nớc đứng thứ hai giới xuất gạo, nhng giá trị kinh tế không cao, chất lợng nhiều giống lúa không đáp ứng đợc nhu cầu thị trờng Trong có giống lúa chất lợng cao đặc sản quí, hạt dài, cơm dẻo thơm ngon nh Tám thơm, Dự thơm, Tẻ di hơng nhng suất thấp cao thân mềm, chống đổ kém, dài, mỏng rủ, hạt tha, thời gian sinh trởng dài, phản ứng chặt chẽ với ánh sáng ngày ngắn [2, 7, 8] Kết hợp công nghệ tế bào thực vật, đột biến thực nghiệm công nghệ gen cho phép cải biến giống lúa nói theo hớng nh gây đột biến tế bào tia gamma chọn dòng tế bào để chọn đột biến thấp cây, chống đổ sử dụng công nghệ gen để chuyển gen hạ thấp chiều cao Xuất phát từ sở trên, xây dựng đề tài: Nghiên cứu biện pháp công nghệ sinh học thực vật nhằm giảm chiều cao tăng khả chống đổ giống lúa chất lợng cao Với mục đích hạ thấp chiều cao cây, tăng cờng tính chống đổ để cải thiện suất, rút ngắn thời gian sinh trởng giống lúa Tám thơm, Dự thơm Tẻ di hơng Tổng quan tài liệu 2.1 Các giống lúa chất lợng cao miền Bắc Việt Nam nớc ta lúa giữ vị trí trọng yếu hệ thống trồng nông nghiệp Ngày mà lúa gạo đà có đủ cho nhu cầu nớc có d để xuất vị trí giống lúa chất lợng cao đặc sản ngày quan trọng Nhu cầu sử dụng giống lúa chất lợng cao đặc sản ngày gia tăng, hầu hết giống lúa tình trạng bị thoái hoá , chất lợng gieo trồng thấp, kỹ thuật canh tác cha phù hợp nên sản phẩm cha đạt yêu cầu chất lợng nh mong muốn Các giống lúa chất lợng cao nh Tám xoan, Tẻ di hơng, Dự thơm, Nàng hơng giống lúa đặc sản vùng đồng Bắc có phẩm chất gạo tốt có mùi thơm ngon, nhng suất thấp có nhiều đặc điểm yếu nh cao cây, thân yếu chống đổ kém, chịu phân, dài rủ, hạt tha, cổ dài, tính trạng cần khắc phục cao [7, 8] Các giống lúa chất lợng thuộc nhóm lúa mïa chÝnh vơ cã thêi gian sinh tr−ëng dµi 150-160 ngày, phản ứng chặt chẽ với ánh sáng ngày ngắn, biên độ thời vụ rộng Hiện có khoảng 12 giống lúa Tám đợc trồng miền Bắc nớc ta, giống chất lợng cao tiếng nh: Tám xoan Hải Hậu, Tám ấp bẹ Xuân Đài, Tám cổ ngỗng Nam định Các giống thờng đợc trồng vùng Thái Bình, Nam định, Hải Dơng, Hải Phòng Các giống lúa Dự thơm, Tẻ di hơng giống lúa đặc sản tiếng đợc trồng nhiều tỉnh ven biển đồng Bắc bộ, đợc ý khôi phục trở lại tính chất chịu mặn, chịu chua phèn, gạo dự hơng đợc coi loại gạo đặc sản dùng ngày lễ, ngày tết [8] Hầu hết giống lúa chất lợng cao trồng miền Bắc nớc ta cao cây, chống đổ đợc trồng vào vụ mùa, mùa ma nhiều Nên vào giai đoạn gần thu hoạch giống cao chống đổ nên dễ bị gặp gió ma, hạt lúa dễ bị mọc mầm, ảnh hởng đến chất lợng suất Tính trạng qui định chiều cao đa gen qui định chịu ảnh hởng điều kiện môi trờng Việc nghiên cứu biện pháp để giảm chiều cao có ý nghĩa lớn không giống lúa chất lợng cao mà có ý nghĩa giống trồng khác nh lúa nếp, lúa tẻ, giống ngô 2.2 Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Cơ sở chọn dòng biến dị soma nuôi cấy mô tế bào thực vật Mỗi tế bào lấy từ thể sinh vật đa bào có khả tiềm tàng để phát triển thành thể hoàn chỉnh Đó tính toàn tế bào [1] Soma tên gọi tế bào sinh dỡng, khác với tế bào sinh dục Biến dị soma dùng để tất biến dị xảy trình nuôi cấy mô, tế bào Từ tế bào soma tạo nên phận hay hoàn chỉnh thông qua kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Nguyên lý chung việc chọn dòng mang biến dị soma tế bào nuôi cấy in vitro có tỷ lệ biến dị di truyền lớn (10-5-10-8), kết hợp xử lý đột biến xử lý stress tần số tăng lên gấp 10 lần, chọn đợc cá thể đột biến nhanh có hiệu so với phơng pháp chọn giống thông thờng khác áp dụng cho nguyên vẹn mức độ tế bào, tế bào đơn bội hầu nh đặc điểm đột biến đợc thể Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào cho phép giảm bớt đáng kể thời gian cần thiết để chọn đợc tính trạng theo ý muốn [1] Theo Lê Trần Bình CS (1997), chất chế biến dị soma liên quan mật thiết đến thay đổi genome tế bào nuôi cấy Do nhiều nguyên nhân nh tác ®éng cđa hocmon sinh tr−ëng thêi gian dµi vµ yếu tố khác làm cho nhiễm sắc thể tế bào nuôi cấy tăng lên tạo dạng đa bội lệch mức bội thể cao Nhiều trờng hợp các, đoạn nhiễm sắc thể đợc chuyển đổi đảo ngợc Cấu trúc phân tử DNA bị thay đổi dẫn đến đột biến kiểu hình thực Tơng tự nh vậy, nhiều công trình công bố cho biến dị soma thờng xuất tái sinh đợc sau nuôi cấy tế bào qua giai đoạn mô sĐo [14], cã nhiỊu kiĨu ®ét biÕn nh−: ®ét biÕn nhân, đột biến tế bào chất, đa bội thể bất thờng khác nhiễm sắc thể [25] Những øng dơng lín nhÊt viƯc chän dßng mang biÕn dị soma công tác giống chọn kiểu hình với kiểu gene tơng ứng, thích hợp với yêu cầu giống có suất cao, chống chịu với điều kiện ngoại cảnh bất lợi, chất lợng tốt ổn định Nhiều công trình công bố đà thành công việc chọn dòng mang biến dị soma đối tợng giống trồng, thuốc lá, nuôi cấy hạt phấn tế bào trần đà thu đợc đột biến có suất cao, thời gian sinh trởng ngắn, hàm lợng đờng alkaloid thấp [1] 2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo biến dị di tryuền Mô sẹo (callus) khối mô thực vật gồm tế bào không phân hoá, có khả phân bào liên tục Trong tự nhiên, mô sẹo thờng phát sinh vết thơng có tên gọi theo nghĩa đen mô sẹo Bởi mô sẹo khối tế bào mô mềm có mức độ cấu trúc thấp, cha phân hoá nhng phân chia cách hỗn loạn thờng có tính biến động di truyền cao Trong nuôi cấy in vitro mô sẹo đợc tạo cách nuôi cấy quan thực vật (thân, rễ, lá, hoa, ) môi trờng chứa chất điều khiển sinh trởng cần thiết (auxin, cytokinin) điều kiện nuôi cấy thích hợp Khi tái sinh từ mô sẹo đợc cấy chuyển nhiều lần, dễ mang biến động di truyền nhiễm sắc thể (dị bội, đa bội) biến đổi di truyền khác [1] Đối với việc chọn dòng biến dị soma, tái sinh từ mô sẹo với biến dị di truyền có ý nghĩa lớn, từ ta chọn đợc nhiều dòng mang đặc điểm khác so với giống ban đầu Vấn đề ®· më mét triĨn väng viƯc sư dơng công nghệ tế bào thực vật để cải tiến di truyền giống trồng có ý nghĩa kinh tế 2.2.3 Tái sinh từ mô sẹo Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, kỹ thuật tạo, nuôi tái sinh từ mô sẹo phải đợc hoàn thiện cách tối u nhất, đặc biệt vấn đề tái sinh Nhiều tác giả sau chọn đợc dòng tế bào đột biến từ nuôi cấy mô sẹo đà không tái sinh đợc lại không trì đợc tính trạng vừa chọn lọc vài loại cho hạt quan trọng, việc tái sinh chồi từ mô sẹo gặp nhiều khó khăn đối tợng thuộc họ Fabacaea việc tái sinh hoàn chỉnh thành công số trờng hợp chẳng hạn Archis hypogaea, Onobrychis viciifolia Nu«i cÊy m« sĐo cđa thc sau nhiêu lần cấy chuyển trì đợc khả tái sinh [18] Theo Amirato cs (1984) nguồn gốc mô sẹo ảnh hởng đến khả tái sinh cây, chẳng hạn ngời ta thu đợc tái sinh từ mô sẹo nuôi cấy đoạn hoa tự lúa mì Mức bội thể mô sẹo nguyên nhân gây khác trình tái sinh cây, mô sẹo đơn bội từ đoạn thân mảnh Datura innoxia tạo chồi nhanh mô sẹo loài nhị bội Theo Sharp (1984) năm 1951-Levine ngời đà thành công việc tạo mô sẹo tái sinh từ mô sẹo Nicotiana affinis Helianthus annuus, đến ngời ta đà tạo tái sinh thành công từ mô sẹo 100 loài 2.3 Đột biến thực nghiệm ứng dụng chọn tạo giống trồng Tính ổn định cấu trúc di truyền cá thể sống tuyệt đối, bị biến đổi tác động tác nhân vật lý hoá học Ngời ta gọi biến đổi nhỏ cấu trúc gen nhiễm sắc thể đột biến [11] Cùng với tác nhân gây đột biến tác nhân hoá học, tác nhân vật lý (chiếu xạ tia Rơnghen, tia Gamma, xạ Neutron ) tác nhân gây đột biến có hiệu giúp ngời tạo hàng loạt giống có thuộc tính có lợi mặt kinh tế: thấp cây, thời gian sinh trởng ngắn, suất cao, chất lợng dinh dỡng tốt, đề kháng với sâu bệnh [5] Đối với chiếu xạ tia Gamma thờng dùng nguồn Co60 Cs137 có hoạt tính phóng xạ, tuỳ đối tợng cụ thể sử dụng cách chiÕu x¹: (1) ChiÕu x¹ nhanh mét thêi gian ngắn nguồn mạnh cờng độ chiếu xạ mạnh, (2) Chiếu xạ từ từ nguồn yếu thời gian chiếu xạ kéo dài 2.3.1 Cơ chế gây đột biến chiếu xạ Dựa vào tính chất biến đổi cấu trúc di truyền mà ngời ta chia đột biến thành hai kiểu bản: Đột biến gen (còn gọi đột biến điểm) đột biến nhiễm sắc thể - Đột biến gen biến đổi cấu trúc phân tử gen, tức thay đổi trật tự nucleotid DNA thay bazơ nitơ cặp nucleotid - Đột biến NST đột biến làm đứt thay đổi cấu trúc nhiễm sắc thể, làm thay đổi nhiều dấu hiệu hay đặc tính khác thể Ngoài loại đột biến tăng giảm số lần nhiễm sắc thể, gọi đa bội thể Khi chiếu xạ tia Gamma từ nguồn Co60 lên tế bào mô phân tử sinh học chịu tác dụng trực tiếp gián tiếp xạ ion hoá - Tác dụng trực tiếp: xạ trực tiếp ion hoá kích thích phân tử sinh học làm tổn thơng phân tử đó, vật chất di truyền xảy hiệu ứng sau: (1) Thay đổi thành phần cấu tạo DNA: đứt liên kết photphodieste phân tử đờng, phá huỷ liên kết bazơ - ®−êng, thay ®ỉi cÊu - tróc bËc DNA (đứt đoạn, biến tính, kết hợp chéo) (2) ¶nh h−ëng lªn sù chÐp DNA - RNA (3) Tay đổi cấu trúc nhiễm sắc thể: đứt đoạn, đoạn, đảo đoạn, lặp đoạn, trao đổi chéo, thay đổi mức bội thể Tác dụng gián tiếp: xạ ion hoá tác dụng lên phân tử nớc với ion H+, OH-, gốc tự OH., H sản phẩm oxy hoá mạnh nh H2O2 Các sản phẩm kể trình xạ phân (Radiolyse) nớc hoạt động mặt hoá học, chúng công phá phân tử sinh học làm thay đổi cấu trúc chức chúng Bức xạ gây thay đổi hình thái nh thay đổi chức tế bào mô Nhng xạ không tạo chức tế bào mô mà làm thay đổi chức sẵn có hay làm xuất chức trớc tiềm tµng [5, 11] 2.3.2 Mét sè thµnh tùu cđa chän giống đột biến Công tác chọn giống tạo giống míi cã vai trß hÕt søc quan träng viƯc tăng suất chất lợng trồng đặc biệt lơng thực Chính công tác đà đóng vai trò định cách mạng xanh năm 1960 ấn Độ nhiều nớc khác giới [5] Một thành tựu xuất sắc kỷ 20 khám phá phơng pháp tạo giống cách gây đột biến thực nghiệm Với kết 60 nớc đà thu đợc chứng tỏ phơng pháp có hiệu để tạo giống Theo thống kê Tổ chức lơng thực Tổ chức lợng nguyên tử giới (FAO/IAEA) năm 1960 có giống trồng ®ét biÕn, 1975 cã 145 gièng, 1992 cã 1530 gièng, năm 1997 có 1870 giống Phần lớn giống tạo ngũ cốc nh: lúa, lúa mì, lúa mạch, ngô Các nớc tạo nhiều giống đột biến nh: Trung Quốc, ấn Độ, Nhật Bản, nớc Liên Xô cũ [11] Từ năm 1968, Việt Nam đà bắt đầu nghiên cứu chọn giống đột biến đà thu đợc kết đáng kể nh tạo giống lúa A-20, DT10, DT-11, DT13, giống ngô DT-6, đậu tơng DT84, DT90 (Quý1997) Gần Nguyễn Minh Công cộng đà tạo đợc giống Tám thơm đột biến không cảm quang, gieo cấy đợc hai vụ [2] Vật liệu phơng pháp nghiên cứu 3.1 Vật liệu - Các giống lúa đặc sản Việt Nam: Tám xoan, Tám ấp bẹ, Dự thơm, Tẻ di hơng, Trung tâm tài nguyên di trun thùc vËt, ViƯn Khoa häc kü tht n«ng nghiƯp Việt Nam cung cấp (bảng 1) Bảng 1: Đặc điểm nông sinh học giống lúa làm nguyên liệu [4, 7, 8] Đặc điểm Thời gian ST (ngày) Chiều cao (cm) Tổng số hạt/bông P 1000 hạt (g) Năng suất (tạ/ha) Phẩm chất gạo phẩm chất cơm Đặc tính chống chịu Tám xoan 160-165 140-145 130-135 20-21 30-32 Gạo nhỏ, trắng trong, cơm ngon Thân mềm, chống ®ỉ kÐm T¸m Êp bĐ 165-168 137-140 150 21-22 35-41 Gạo nhỏ, ngon, thơm thên mềm , chống đổ 3.2 Phơng pháp Dự thơm 155-158 140-145 100-110 24-25 35-40 Cơm mềm, dẻo, thơm ngon Chống đổ trung bình Tẻ di hơng 142-145 125-130 110-115 21,2 32-38 Cơm mềm, dẻo thơm Chống đổ trung bình Hình 1: Sơ đồ thí nghiệm tổng quát Hạt lúa chín Chọn lọc dòng u tú khảo nghiệm Tạo mô sĐo KiĨm tra b»ng kü tht sinh häc ph©n tư Theo dõi chọn lọc đồng ruộng Xử lý đột biến Tái sinh 3.2.1 Khử trùng hạt - tạo mô sẹo Hạt lúa chín đợc bóc vỏ trấu, hạt gạo đợc đem khử trùng cách ngâm l¾c nhĐ cån 700 thêi gian phót, javen 60% thời gian 15-20 phút, sau rửa nớc cất vô trùng 4-5 lần Hạt gạo sau khử trùng đợc đặt lên môi trờng tạo mô sẹo C1 (MS + 3% saccharoza + 0,8% agaroza + 0,1 mg/l NAA + 0,2 mg/l BAP + mg/l 2,4D) vµ C2 (MS + 3% saccharoza + 0,8% agaroza + mg/l 2,4D), với số lợng 20 hạt/bình tam giác 250 ml Điều kiện nuôi cấy: Nuôi buồng tối tuần nhiệt độ 260C Sau chuyển nuôi phòng sáng với cờng độ ánh sáng 2000 lux, thời gian chiếu 16 giờ/ngày, nhiệt độ 260C Khoảng 2-3 tuần, khối mô sẹo hình thành tiến hành đánh giá khả tạo m« sĐo [5,6] 3.2.2 Xư lý m« sĐo b»ng tia gamma từ nguồn Co60 Sau đánh giá khả mô sẹo, tiến hành chọn mô sẹo đẹp (kích thức đồng màu vàng), cắt thành khối nhỏ với kích thức khoảng 2-3 mm cấy lên môi trờng nhân mô sẹo C3 (MS + 3% saccharoza + 0,8% agaroza + mg/l 2,4D) Mô sẹo đợc chiÕu x¹ b»ng tia gamma tõ ngn Co60 víi liều lợng 3Krad, 5Krad, 7Krad, 9Krad, 11Krad 13Krad 3.2.3 Tái sinh chồi tạo hoàn chỉnh Mô sẹo sau xử lý tia gamma, đợc đặt lên môi trờng tái sinh R (MS + 3% saccharoza + 0,8% agaroza + 0,2 mg/l NAA + mg/l BAP), nuôi nhiệt độ 260C 2, cờng độ ¸nh s¸ng 2000 lux vµ thêi gian chiÕu s¸ng 16 giờ/ngày Sau tuần nuôi cấy, chồi tái sinh đợc tách thành dòng cấy chuyển lên môi trờng tạo hoàn chỉnh SR (MS + 3% saccharoza + 0,8% agaroza + 0,2 mg/l NAA) [8] Tr−íc chuyển nhà lới, tiến hành cấy chuyển thêm 1-2 lần lên môi trờng MS có vitamin để khoẻ có khả thích nghi tốt với điều kiện tự nhiên 3.2.4 Phơng pháp nghiên cứu đồng ruộng - Cây từ ống nghiệm đa đồng ruộng (thế hệ R0) đợc cấy dảnh đợc gọi dòng Bông dòng thu đợc đánh dấu thu hoạch riêng để gieo trồng cho vơ tiÕp theo - Theo dâi sù ph¸t triĨn cđa dòng chọn lọc qua giai đoạn phát triển vụ gieo trồng Phân tích đột biến thu nhận dòng có đột biến có lợi, đánh giá tiêu nông sinh học dòng chọ lọc theo tiêu nông sinh học: - Chiều cao - Số khóm - Chiều dài - Số hạt - Chiều dài hạt - Chiều rộng hạt - Trọng lợng 1000 hạt - Thời gian sinh trởng - Đặc điểm hình thái đòng - Khả chống đổ - Chất lợng gạo 3.2.4 Phơng pháp đánh giá tính đa hình DNA - Tách DNA tổng số từ - Xác định hàm lợng độ DNA - So sánh RAPD phân tích số liệu RAPD 3.2.5 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu - Các máy móc, thiết bị chuyên dụng cho nuôi cấy mô nghiên cứu sinh học phân tử phòng Công nghệ tế bào thực vật Phòng máy chung thuộc Viện Công nghệ Sinh học nh máy PCR, máy điện di, máy ly tâm, máy ®o quang phỉ - Sư dơng tia gamma tõ nguồn Co 60 để chiếu xạ cho mô sẹo (tiến hành Trung tâm chiếu xạ Quốc gia Từ Liêm, Hà Nội) - Các thí nghiệm đồng ruộng đợc tiến hành Trại Thực nghiệm Sinh học, Cổ Nhuế, Từ Liêm, Hà Nội Kết thảo luận 4.1 Kết tạo mô sẹo Khi nuôi cấy phôi hạt chín giống lúa địa phơng loại môi trờng tạo mô sẹo C1 C2 (bảng 2), nhận thấy, tỷ lệ tạo mô sẹo môi trờng C1 cao hẳn so với môi trờng C2 Kết đánh giá cho thấy, mô sẹo đợc tạo môi trờng C1 phát triển đồng đều, có màu sắc vàng không bị mọng đen nh môi trờng C2 Điều giải thích kết hợp chất kích thích sinh trởng ảnh hởng trực tiếp đến mức độ phân chia hoạt động sinh hoá tế bào Tuy nhiên, hiệu suất chất lợng mô sẹo phụ thuộc vào kiểu gen giống Bảng 2: Đánh giá khả tạo mô sẹo giống lúa môi trờng C1 C2 SHĐ/MT* Tỷ lệ tạo mô sẹo (%) sau tuần nuôi cấy Tên giống Tám Xoan 200 Tám ấp Bẹ 200 Dự Thơm 200 Tẻ Di Hơng 200 (*) SHĐ/MT: số hạt đặt/môi trờng C1 95,0 93,0 90,0 93,3 C2 40,4 49,7 43,1 48,5 4.2 Tû lÖ sống sót mô sẹo sau chiếu xạ Kết bớc đầu cho thấy xử lý chiếu xạ tia gamma liều cao khả sống sót mô sẹo giảm, mẫn cảm mô sẹo phụ thuộc vào nguồn gốc giống khác cïng liỊu chiÕu tû lƯ m« sèng sãt cđa giống Tẻ Di Hơng Tám ấp Bẹ cao so với giống Dự Thơm Tám Xoan ë liỊu chiÕu 13Krad tû lƯ sèng sãt cđa m« sẹo giống Dự Thơm 2,4% giống khác khoảng 20% (bảng 3) Bảng 3: Tỷ lệ mô sống sau 30 ngày chiếu xạ (%) Tên giống Liều chiếu xạ tia gamma từ nguồn Co60 Số mô chiếu xạ/liều Tám Xoan Tám ấp Bẹ Dự Thơm Tẻ Di Hơng 250 250 250 250 Krad 100 100 100 100 Krad 45,2 85,6 70,0 94,4 Krad 44,4 77,6 55,2 80,0 Krad 26,0 74,4 32,0 75,5 Krad 23,6 55,3 24,4 72,7 11 Krad 13 Krad 22,0 21,2 48,2 19,6 11,6 2,4 50,0 20.8 4.3 Kết tái sinh từ mô sẹo sống sót sau chiếu xạ Các mô sống sót đợc cấy chuyển lên môi trờng tái sinh cây, sau 60 ngày tiến hành đánh giá: kết tái sinh (bảng 4) cho thấy khả tái sinh tỷ lệ nghịch với liều chiếu xạ Liều chiếu cao tỷ lệ mô tái sinh giảm Với liều chiếu 11Krad mô sẹo giống Dự Thơm Tám Xoan không khả tái sinh, giống Tẻ Dị Hơng Tám ấp Bẹ có tỷ lệ mô tái sinh 5,3% 6,8% so với đối chøng lµ 52,4 vµ 48,5% ë liỊu chiÕu 13Krad chØ có mô sẹo giống Tẻ Di Hơng khả tái sinh với tỷ lệ thấp 3,8% Bảng 4: Tỷ lệ (%) mô sẹo tái sinh sau 60 ngày chiếu xạ Tẻ Di Hơng D Thơm T¸m Êp BĐ LiỊu chiÕu MTS* SC/ M* MTS* SC/ M* MTS* SC/ M x¹ (krad) 52,4 2,4 51,7 4,5 48,5 3,2 38,5 3,1 18,6 2,4 32,1 2,3 29,3 2,7 10,4 1,5 19,7 1,4 26,4 2,5 7,1 1,3 17,0 1,0 15,6 2,2 4,6 2,0 15,8 2,0 11 5,3 1,0 0 6,8 1,2 13 3,8 1,0 0 0 Ghi chó: (*) MTS: m« tái sinh; SC/M: số cây/mô (giá trị trung bình) Tám Xoan MTS* 47,9 40,2 35,8 22,7 18,3 0 SC/ M* 2,4 2,6 1,7 1,2 1,9 0 Tõ kÕt đánh giá khả sống sót tái sinh mô sẹo sau xử lý tia gamma thấy giới hạn giống là: Tẻ Dị Hơng 13Krad, Tám ấp Bẹ 11Krad, Dự Thơm Tám Xoan 9Krad Nếu vợt qua liều chiếu đa số mô sẹo chết, mô sống sót có khả tái sinh thấp Dựa kết thu đợc xác định liều chiếu xạ thích hợp cho mô sẹo giống lúa nghiên cứu từ 7Krad đến 9Krad Bảng 5: Số tái sinh thu đợc Tên giống Số tái sinh ë tõng liỊu chiÕu x¹ Krad Krad Krad Krad Krad 11 Krad 13 Krad Tám Xoan Tám ấp Bẹ Dự Thơm Tẻ Di Hơng Tæng 287 388 582 316 1573 120 158 78 281 637 68 54 22 158 302 18 32 124 182 21 42 62 131 10 17 0 2 Thống kê kết bảng cho thấy khả tái sinh chịu ảnh hởng tia gamma kiểu gen giống Số tái sinh giảm tỷ lệ nghịch với liều chiếu giống Mẫu đối chứng tổng số tái sinh đợc 1573 mẫu chiếu xạ 3Krad tái sinh đợc 637 liều chiếu 13Krad tái sinh đợc (Tẻ Di Hơng) Quan sát tái sinh liều chiếu 11Krad 13Krad đa số bị bạch tạng bị biến dạng (thân cong, xoán, không thoát ngọn) Các dòng lúa tạo đợc đợc chuyển sang môi trờng tạo hoàn chỉnh (SR) đợc trồng nhà lới để tiếp tục nghiên cứu đặc điểm nông sinh học làm sở để chọn lọc dòng có đặc điểm mong muốn nh (thấp cây, ngắn ngày, cảm quang) phục vụ cho công tác chọn tạo giống Kết hệ MR0 số dòng đà biểu chiều cao rõ (ảnh 4) Các dòng tiếp tục đợc theo dõi hệ A c b e d Hình (A) Mô sẹo giống Tám Xoan sau tuần môi trờng C1; (B) Mô sẹo giống Dự Thơm bị chết sau 30 ngày chiếu xạ liều 13 Krad; (C) Cây tái sinh sau 60 ngày chiếu xạ liều Krad mô trờng R; (D) Cây mạ nuôi môi trờng tạo rễ; (E) Tám Xoan đối chứng cao 142 cm (trái) Tám Xoan đột biến cao 1,05 cm (phải) ë thÕ hƯ MR0 (liỊu chiÕu x¹ Krad) 4.4 Phân tích số đặc điểm nông học đồng rng thÕ hƯ RM0 4.4.1 HiƯn t−ỵng bÊt dơc thÕ hệ MR0 Các dòng xanh đợc trồng đồng rng thÕ hƯ MR0, kÕt qu¶ cho thÊy tû lƯ bất dục hoàn toàn cao tất c¸c gièng, ë gièng T¸m Êp bĐ cã tû lƯ dòng bất dục cao (44,60%), đặc điểm phổ biến tái sinh từ mô sẹo đặc biệt trồng xử lý đột biến Bảng 6: Kết gieo trồng dòng tái sinh từ mô sẹo xử lý tia gamma hệ RM0 TT Tên giống Số dòng cấy Số dòng thu đợc hạt Tỷ lệ bất dục (%) Dự thơm 201 118 41,29 Tẻ Di Hơng 100 63 37,00 T¸m Êp bĐ 139 77 44,60 T¸m xoan 137 105 23,36 Tỉng céng 577 363 37,09 4.4.2 Sự biến động số đặc điểm n«ng häc ë thÕ hƯ RM0 Theo dâi sù sinh trởng phát triển dòng lúa hệ RM0 cho thấy mức độ biến dị tất đặc điểm nông học lớn Từ kết thu đợc bảng cho thấy dòng tái sinh tõ m« sĐo xư lý tia gamm a cã biến đổi lớn đặc tính sinh lý, di truyền dẫn đến biến động tính trạng hình thái, nguồn nguyên liệu phong phú cho chọn lọc Bảng 7: Một số đặc điểm nông sinh học dòng tái sinh tõ m« sĐo xư lý tia gamma thÕ hƯ RM0 cđa gièng lóa Dù Th¬m Gièng Dù Th¬m LiỊu chiÕu Chiều Số Chiều Số hạt cao bông/khóm dài (cm) chắc/bông X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) L0 (§C) 132,10 6,52 8,90 3,88 25,78 3,39 135,54 29,61 L7 110,74 12,15 6,74 3,74 24,68 3,25 63,14 58,61 L9 114,27 13,96 7,40 4,34 25,85 1,76 50,32 46,20 TỴ DH X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) L0 123,07 5,76 14,07 3,99 22,12 2,64 76,00 17.65 L5 109,53 12,97 7,00 4,03 21,85 2,35 32,74 34,60 L7 120,58 7,45 7,08 4,29 23,83 3,83 46,83 45,89 L9 115,61 8,32 12,26 6,45 23,84 2,71 12,94 18,41 L11 117.39 6,88 9,86 5,42 25,35 2,39 64,90 42,57 T¸m AB X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) L0 142,14 6,92 9,04 2,73 27,48 2,24 188,25 34,90 L5 122,42 10,76 10,29 4,28 25,79 2,08 21,78 23,35 L7 117,32 17,89 10,66 5,13 24,49 2,12 35,07 39,62 L9 108,20 19,67 10,73 5,76 25,57 2,38 36,09 43,40 L11 122,67 6,90 17,40 7,23 24,18 2,05 47,18 47,97 T¸m Xoan X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) X Cv(%) L0 143,27 6,99 9,00 2,61 28,16 2,70 177,73 21,93 L7 129,05 13,44 7,47 5,17 24,82 2,73 54,63 63,97 L9 120,02 27,91 5,76 3,36 26,03 2,65 27,61 65,24 Ghi chú: X: giá trị trung bình tiêu, Cv%: hệ số biến động tiêu Nhận xét: Nhìn chung đặc điểm nông sinh học dòng tái sinh tõ m« sĐo xư lý tia gamma thÕ hƯ RM0 giống có đặc điểm sau: - Chiều cao cây: thấp đối chứng, có hệ số biến động lớn đối chứng nhiều - Số bông/khóm biến động lớn giống liều chiếu khác - Chiều dài bông: tiêu tơng đối ổn định, có hệ số biến động không chênh lệch nhiều so với giống đối chứng - Số hạt chắc/bông: số có hệ số biến động lớn, nhìn chung dòng tõ nu«i cÊy m« th«ng qua xư lý trång đồng ruộng có tỷ lệ hạt tơng đối thấp, tỷ lệ dòng bất dục hoàn toàn tơng đối cao - Đà thu đợc số dòng có chiều cao thấp, chín sớm, tỷ lệ hạt cao 4.4.3 Sự phân ly số đặc điểm nông học hệ RM1 Các dòng thu đợc hạt hệ MR0 tiếp tục đợc gieo cấy vụ tiếo theo để đánh giá phân ly tính trạng chọn lọc dòng mong muốn Quan sát quần thể MR1 dòng cho thấy có nhiều tính trạng thay đổi khác hẳn so với đối chứng, nh chiều cao cây, dạng cây, dạng đòng đặc biệt dòng có nguồn gốc từ giống lúa Tám Xoan Tám ấp bẹ có biến dị rõ mà sắc, hình dạng kích thớc hạt, phân ly màu sắc hạt có dòng hạt màu vàng sáng, nâu sáng, nâu đen phân ly dạng hạt có dạng hạt bầu, dạng hạt tròn, hạt có râu Kết bảng thu đợc số dòng quan tâm RM1 giống Tám Xoan Tám ấp Bẹ cho thấy hầu hết dòng dạng khóm gọn, đòng vừa phải, góc đòng đứng, thấp cây, chín sớm so với đối chứng 15 ngày Tuy nhiên đặc điểm số bông/khóm, số hạt chắc/bông dòng thay đổi nhiều so với đối chứng 4.4.4 Một số dòng không cảm quang trổ đợc vụ Xuân Trong số dòng thu đợc hệ RM1 đợc gieo cấy vào vụ Xuân (gieo cấy trái vụ), kết thu đợc số dòng tính cảm quang với ánh sáng ngày dài trổ đợc vụ Xuân (bảng 9) Đáng ý dòng lúa Tám xoan TXL7-01-1 có độ cao, trổ đồng đều, chiều cao 100,5cm, thời gian sinh trởng 116 ngày, màu sắc hạt nâu sáng nh giống gốc, hình dạng hạt bầu Kết thu đợc số dòng lúa Tám xoan TXL9-29-3(1-15) không cảm quang, nhiên dòng có phân ly hình thái mạnh, số có dòng TXL9-29-3-1, TXL9-29-3-2 TXL9-29-3-3 giữ đợc màu sắc hình dạng hạt so với giống gốc Theo đánh giá cảm quan ban đầu giống giữ đợc mùi thơm cđa gièng gèc Hai dßng lóa cã ngn gèc tõ giống Dự Thơm (DTL7-01-08) Tẻ Di Hơng (TDHL9-8-5) không cảm quang Dòng DTL7-01-08 có thời gian sinh trởng dài, cao, hạt có râu, tỷ lệ lép cao Dòng TDHL9-8-5 phân ly mạnh đặc điểm hình thái, số khóm không trổ bông, tỷ lệ lép cao Đồng thời với nghiên cứu này, chúng tiến hành chọn lọc số dòng lúa Tám đột biến Viện Kỹ thuật hạt nhân TP HCM cung cấp, kết thu đợc dòng lúa Tám hạt nhỏ trổ đợc vụ, có độ cao, thấp cây, chín sớm, hạt gạo thon dài Bảng : Một số đặc điểm nông học dòng lúa Tám Xoan Tám ấp Bẹ quan t©m thu vơ mïa 2003 – thÕ hƯ RM1 Sè Tỷ lệ Dài Rộng Dài Tên dòng C.Cao Số bông/ TL Thời hạt lép hạt/bông khóm TT 1000 gian h¹t (%) (mm) (mm) (cm) (cm) h¹t ST (g) (ngày) TX ĐC 140,7 4,67 24,87 120,3 6,03 7,91 2,61 140 22 TXL7-01-1 130,5 6,4 22,60 140,3 21,45 7,23 3,12 120 23 TXL7-01-2 127,3 7,8 24,70 116,3 26,87 7,11 2,89 120 22 TXL7-01-3 125,0 7,5 26,50 134,5 22,18 7,41 2,90 130 23 TXL7-01-4 130,4 8,3 24,60 145,6 19,23 7,21 3,08 130 23 TXL7-27-2 127,5 4,6 27,21 206,0 32,57 7,26 2,26 125 20 TXL7-27-4 125,8 7,2 27,21 206,0 17,57 7,26 2,57 125 21 TXL7-30-2 141,5 6,5 22,65 103,2 31,7 7,43 2,58 125 22 TXL7-34-2 127,3 11,0 23,89 129,9 23,7 7,54 2,60 125 21 TXL9-41-3 139,2 8,0 24,40 156,0 14,87 7,23 2,38 130 21 10 TXL7-46-1 130,1 10,2 23,38 147,20 19,60 7,56 2,46 130 22 11 TXL7-47-13 141,2 11,0 21,77 90,10 18,7 7,71 2,53 125 21 12 TXL7-48-1 145,5 5,8 25,13 146,25 25,6 7,57 2,32 140 22 13 TXL7-52-7 124,8 5,8 24,50 139,6 29,7 7,69 2,64 120 21 14 TXL9-8-18 125,2 8,0 23,54 132,6 16,5 7,32 2,24 125 21 15 TXL9-10-13 127,9 5,7 27,77 124,3 25,1 7,7 25,5 130 22 16 TXL9-29-1 124,3 6,7 22,32 126,4 26,7 7,87 2,59 125 22 17 TXL9-47-2 120,0 9,1 28,96 161,5 26,8 7,71 2,50 125 21 TAB §C 135,2 4,59 25.84 143,9 13,99 7,72 2,67 143 22 19 TABL9-10-6 110,4 6,8 22,45 75,4 15,5 7,57 2,76 135 21 20 TABL7-32-1 130,2 12,3 25,3 97,6 24,4 7,84 2,85 125 21 21 TABL7-34-29 132,0 6,6 25,5 118,9 102 7,35 2,52 125 22 22 TABL7-53-2 143,3 8,4 26,1 190,8 29,7 7,54 2,42 125 21 10 23 TABL7-53-3 138,5 10,6 25,7 154,4 19,8 7,61 2,54 120 Bảng: Đặc điểm nông học dòng không cảm quang trổ vụ Xuân 2004 hệ RM2 TT Tên dòng Số Tỷ lệ Dài hạt Rộng Màu sắc, C.Cao Số Dài bông/ hạt/bông lép (%) (mm) hạt dạng hạt (mm) (cm) khãm (cm) Thêi TL gian 1000 ST h¹t (ngµy) 116 23,8 TXL7-01-1 100,5 9,2 21,95 93,90 12,14 7,48 TXL7-01-2 124,8 8,6 22,35 107,7 8,54 7,26 TXL7-01-3 112,1 7,2 22,30 89,60 17,07 7,50 TXL9-29-3-1 130,3 7,4 23,53 118,21 34,52 7,92 TXL9-29-3-2 127,5 7,1 22,96 105,65 36,45 7,87 TXL9-29-3-3 124,2 7,0 20,27 86,80 47,60 7,68 TXL9-29-3-4 122,7 9,3 19,31 80,23 94,30 7,72 TXL9-29-3-5 115,4 6,8 18,60 96,75 24,82 8,31 TXL9-29-3-6 150,3 7,5 22,71 76,12 10,52 8,42 10 TXL9-29-3-7 130,6 5,6 22,56 75.51 31,86 7,25 11 TXL9-29-3-8 115,9 3,9 19,63 86,72 26,34 7,49 12 TXL9-29-3-9 130,2 6,4 21,12 90,74 25,60 8,15 13 TXL9-29-3-10 135,4 4,5 22,24 81,15 30,23 8,27 14 TXL9-29-3-11 117,5 5,7 21,15 76,88 26,78 8,21 15 TXL9-29-3-12 142,0 3,6 19,27 84,86 22,71 7,41 16 TXL9-29-3-13 150,4 2,6 18,38 83,45 24,51 7,71 17 TXL9-29-3-14 120,4 6,4 87,42 28,56 7,78 18 TXL9-29-3-15 118,5 8,4 19,54 75,65 100,00 - 3,03 Nâu sáng Bầu tròn 3,06 Nâu sáng Vàng sáng Bầu tròn 3,36 Nâu sáng Vàng sáng Bầu tròn, có râu 2,62 Nâu sáng Nhỏ thon 2,61 Nâu sáng Nhỏ thon 2,59 Nâu sáng Nhỏ thon 2,64 Nâu sáng Nhỏ thon 2,97 Vàng sáng, râu dài, hạt to dài 3,54 Vàng sáng Hạt to 2,46 Vàng sáng, nhỏ 2,73 Vàng sáng, nhỏ 2,89 Vàng sáng Dài 3,32 Vàng sáng Dài-to 3,29 Vàng sáng Dài-to 2,56 Vàng sáng nhỏ 2,64 Vàng sáng nhỏ 2,68 Vàng sáng nhỏ Nâu - lép 19 DTL7-01-8 145,6 6,2 16,70 67,50 72,30 7,43 2,62 Vàng sáng 140 20,5 20 TDHL9-8-5 130,3 7,4 18,50 72,70 60,70 7,50 2,91 Vµng s¸ng 130 21,8 11 120 23,6 120 23,0 115 22,2 115 22,1 124 21,8 124 20,5 124 23,5 124 27,6 124 19,6 124 20,2 124 21,1 124 23,4 124 22,7 124 20,3 124 19,8 124 19,4 - - 23 21 Tám Hạt nhỏ 96,3 9,0 23,80 149,10 8,11 8,66 2,48 Nâu sáng Nhỏ thon A 110 19,2 B Hình 3: B: Dòng lúa TXL7-01-01 không cảm quang A: Tám Xoan đối chứng - không trổ Hình 4: Hình dạng màu sắc hạt lúa gạo dòng TXL7-01-01 - Bên trái hình: hạt Tám Xoan đối chứng - Bên phải hình: hạt dòng TXL7-01-01 Kết luận đề nghị Kết luận Các giống lúa Dự Thơm, Tẻ Di Hơng, Tám Xoan Tám ấp Bẹ có khả tạo mô sẹo tốt môi trờng MS có bổ sung 0.1mg/l NAA + 0.2mg/l BAP + 2mg/l 2,4-D với tỷ lệ tạo mô sẹo tơng ứng là: 90%; 93.3%; 93% 95% Xác định liều chiếu xạ thích hợp cho mô sẹo giống lúa nghiên cứu từ Krad đến krad Đà trồng đợc 577 dòng đồng ruộng hệ RMo thu đợc 363 dòng có hạt Bớc đầu đà chọn lọc đợc 38 dòng giống cần quan tâm theo dõi hệ (Tám Xoan 17 dòng, Tám ấp bẹ dòng, Dự Thơm dòng, Tẻ Di Hơng dòng) Đà thu đợc 20 dòng không cảm quang với ánh sáng ngày dài (trổ đợc vụ), có dòng Tám Xoan TXL7-01-01 có độ cao, thấp chín sớm Đề nghị Cần tiến hành chọn lọc dòng thu đợc hệ phân tích đặc điểm sinh lý, sinh hoá sinh học phân tử chúng để làm nguyên liệu chọn lọc giống 12 Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997) Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng (giáo trình cao học nông nghiệp), NXB Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Minh Công, Đỗ Hữu ất, Bùi Huy Thuỷ, (1999) Nghiên cứu chọn tạo giống lúa tám thơm đột biến Nông nghiệp Công nghiệp thực phẩm, số 5/1999, 212-213 Bùi Huy Đáp, (1999) Một số vấn đề lúa NXB Nông nghiệp - Hà nội, 154tr Trơng Đích, (1999) 265 giống trồng NXB Nông nghiệp - Hà nội, 323tr Phan Văn Duyệt, (1998) Phơng pháp vật lý lý sinh phóng xạ dùng nông nghiệp, sinh học y học NXB Khoa häc vµ kü thuËt - Hµ néi, 177tr Hệ thống tiêu chuẩn đánh giá nguồn gen lúa, IRRI, INGRE-1996 Nguyễn Văn Hiển, Trần Thị Nhàn, (1982) Giống lúa miền Bắc Việt nam NXB Nông nghiệp - Hà nội, 203tr Nguyễn Văn Hoan, (1997) Hớng dẫn kỹ thuật tâm canh giống lúa chuyên mùa chất lợng cao NXB Nông nghiệp - Hà nội, 87tr Nguyễn Hoàng Lộc (1992) Chọn dòng chịu muối NaCl chịu nớc thuốc (Nicotiana tabacum L.) (luận án Phó tiến sĩ sinh học), Hà nội 10 Đinh Thị Phòng, Nguyễn Văn Tĩnh, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998) Kết chọn tạo triển khai sản xuất hai giống lúa DR1 DR2 công nghệ tế bào thực vật Tạp chí Khoa Học Công Nghệ, Trung Tâm Khoa Học Tự Nhiên Công NghƯ Qc Gia, tËp XXXVI, sè 11 TrÇn Duy Quý, (1997) Các phơng pháp chọn tạo giống trồng NXB Nông nghiệp - Hà nội, 348tr 12 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (1997) Sinh lý häc thùc vËt NXB Gi¸o dơc, 251 tr Tµi liƯu tiÕng n−íc ngoµi 13 Amirato P.V., Evans D.A., Sharp W.R and Yamada Y (1984) Handbook of plant cell culture Crop Species, New York, Macmilan.Vol 14 Bartels D., Singh M., Salamini F (1988) Onset of desiccation tolerance during development of the barley embryo Planta Mol Biol 11, 277-291 15 Brown et al (1994) Development of simple bombardment device for gene transfer into plant cells Plant Cell Tissue Organ Cul., 37, 47-53 16 Casas, A.M et al (1995) Cereal transformation through particle bombardment Plant Breed Rev., 13, 235-264 17 Claes B., Dekeyser R., Villarroel R., Bulcke V.D.M., Baum G., Montagu M.V (1990) Characterization of a rice gene showing organ-specific expression in response to salt stress and drought Plant Cell 2, 19-27 18 Dix P.J (ed) (1990) Plant cell line selection (Procedures and applications) VCH Verlagsgellschft MBH 19 Droste A., Pasquali G., Zanettini M.H.B (2000) Intergratd bombardment and Agrobacterium transformation system: an alternatve method for Soybean transformation Plant molecular biology reporter 18: 51-59 20 Goodman, H M http://crstel.nal.usda.gov:8080 21 Hadi MZ, McMullen MD and Finer JJ (1996) Transformation of 12 different plasmids into soybean via particle bombardment Plant Cell Rep 15: 500-505 22 Hahn J.H., Yoon U.H, Lee K.S., Kim U.W., Yun C.H., Kim Y.K (2000) Plant & animal Genome VIII Conferenc, Ton & Country Hotel, San Diego, 12/2000 23 Hiei et al, (1994) Breeding Sci Suppl 1: 52 24 Kaeppler, H.; Akula C.; Akula, A Kaeppler, S.M.; Chandler V.; Sidorenko, L.; Napoli, C and Jorgensen R (2001) Agrobacterium-mediated transformation of maize: optimization of parameters for utilization of nonsuperbinary vectors In: Plant & animal genome IX conference 13 25 McHughen A., Swartz M (1984) A tissue culture derived salt tolerant line of flax (Linum usitassimum) J Plant Physiol 117, 109-117 26 Meier C., Bouquin T., Nielsen M.E (2001) Gibberellin response mutants identified by luciferase imaging The plant journal 25(5), 509-519 27 Sanford, J.C (1990) Biolistic plant transformation Physiol.Planta., 79, 206-209 28 Sharp W.R., Evans D.A., Anmirato P.V and Yamada Y (1984) Handbook of plant cell culture Volume Crop species, New york : Macmillan 29 Sonewald U (2000) Abteilung molekulare zellbiologie Jahresforschungsbericht 2000, 87-88 30 Tinland B and Hohn B (1995) Recombination between prokaryotic and eukaryotic DNA: integration of A tumefaciens T-DNA into the plant genome, 209-229 In: Setlow JK (ed), Genetic 31 Craterostigma plantagineum Hochst In: Planta 202 (4), 459-71 32 Yamaguchi, S., Sun, T.P., Kawaide, H and Kamiya, Y (1998) The GA2 locus of Arabidopsi thaliana encodes ent-kaurene synthase of gibberellin biosynthesis Plant Physiol 116, 1271 - 1278 14 ... xây dựng đề tài: Nghiên cứu biện pháp công nghệ sinh học thực vật nhằm giảm chiều cao tăng khả chống đổ giống lúa chất lợng cao Với mục đích hạ thấp chiều cao cây, tăng cờng tính chống đổ để cải...Báo cáo kết đề tàI KC04-08 Nghiên cứu biện pháp công nghệ sinh học thực vật nhằm giảm chiều cao tăng khả chống đổ giống lúa chất lợng cao Mở đầu Công nghệ sinh häc thùc vËt ®ang cã... Hầu hết giống lúa chất lợng cao trồng miền Bắc nớc ta cao cây, chống đổ đợc trồng vào vụ mùa, mùa ma nhiều Nên vào giai đoạn gần thu hoạch giống cao chống đổ nên dễ bị gặp gió ma, hạt lúa dễ bị