Dâu tây là loại quả có giá trị kinh tế với hương vị thơm ngon, giá trị dinh dưỡng cao và có lợi cho sức khỏe con người. Hiện nay, phương pháp hiệu quả nhất để kiểm soát chất lượng sản phẩm sau thu hoạch là bảo quản dâu tây trong điều kiện lạnh kết hợp với sử dụng thuốc hóa học. Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc hóa học trong thời gian dài không chỉ dẫn đến khả năng kháng thuốc của mầm bệnh mà còn gây hại cho sức khỏe con người và môi trường.
Nghiên cứu khoa học Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây sau thu hoạch Nguyễn Kim Nữ Thảo1, Đinh Thị Ngọc Mai2, Võ Hoài Hiếu3, Lê Thị Hương1, Phạm Thị Huệ1, Ninh Thị Hạnh4, Lê Vinh Hoa4, Phạm Văn Quân4, Nguyễn Hồng Minh2* Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, Việt Nam Trung tâm nghiên cứu nguồn gen, Trường Đại học Phenikaa, Hà Nội, Việt Nam Trung tâm Thí nghiệm - Thực hành, Trường Đại học Yersin Đà Lạt, Việt Nam Khoa Vi sinh GMO, Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, Hà Nội, Việt Nam (Ngày đến tòa soạn: 14/01/2022; Ngày chấp nhận đăng: 01/03/2022) Tóm tắt Dâu tây loại có giá trị kinh tế với hương vị thơm ngon, giá trị dinh dưỡng cao có lợi cho sức khỏe người Hiện nay, phương pháp hiệu để kiểm soát chất lượng sản phẩm sau thu hoạch bảo quản dâu tây điều kiện lạnh kết hợp với sử dụng thuốc hóa học Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc hóa học thời gian dài không dẫn đến khả kháng thuốc mầm bệnh mà gây hại cho sức khỏe người môi trường Quản lý bệnh nấm dâu tây sau thu hoạch phương pháp kiểm soát sinh học có ý nghĩa thực tiễn lớn Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành sàng lọc hoạt tính kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây 200 chủng vi khuẩn chọn lọc chủng VK199 Chủng VK199 có khả kháng đồng thời chủng nấm bệnh Chủng định danh Bacillus siamensis dựa phân tích trình tự 16S rDNA Chủng Bacillus siamensis VK199 có khả sinh enzyme phân giải cellulase, amylase, protease chitinase Thêm vào đó, thử nghiệm in vivo cho thấy, chủng Bacillus siamensis VK199 có hiệu làm giảm triệu chứng bệnh nấm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Mucor nidicola Rhizopus delemar gây dâu tây trình bảo quản Từ khóa: vi khuẩn đối kháng, hoạt tính kháng nấm, kiểm soát sinh học, dâu tây ĐẶT VẤN ĐỀ Nhiễm nấm bệnh nguyên nhân hàng đầu dẫn đến hư hỏng trái sau thu hoạch trình phân phối bảo quản Ngồi suy giảm chất lượng thiệt hại kinh tế, trái bị nhiễm nấm gây số nguy sức khỏe người tiêu dùng số chi nấm Aspergillus, Alternaria, Fusarium, Penicillium sản sinh độc tố Điện thoại: 0919341956 * Email: minh.nguyenhong@phenikaa-uni.edu.vn Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 25 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Ví dụ, Penicillium expansum, tác nhân gây mốc xanh nhiều loại trái sau thu hoạch có khả sản sinh chất gây ung thư citrinin, patulin chaetoglobosins Các độc tố khác aflatoxin, haratoxins, alternaria fumonisin có mặt loại trái bị nhiễm nấm thuộc chi Aspergillus, Alternaria Fusarium Thông thường, chất diệt nấm hóa học sử dụng để kiểm sốt hư hỏng trái sau thu hoạch Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc diệt nấm tổng hợp bị hạn chế năm gần nhiều chủng nấm gây bệnh đề kháng với thuốc diệt nấm, dư lượng thuốc trừ nấm ngày tăng nông sản, ô nhiễm môi trường vấn đề liên quan đến sức khỏe người Do đó, xu hướng tồn cầu hướng tới sử dụng giải pháp thay an toàn để giảm thiểu hư hỏng trái sau thu hoạch [1] Trong số cách tiếp cận khác nhau, kiểm soát sinh học thông qua vi sinh vật đối kháng phương pháp đầy hứa hẹn dần trở nên phổ biến Kiểm soát sinh học ức chế phát triển, lây nhiễm sinh sản sinh vật cách sử dụng sinh vật khác Cho đến nay, số lượng lớn chủng vi sinh vật thuộc nhóm khác bao gồm nấm men, vi khuẩn, xạ khuẩn nấm sử dụng làm tác nhân kiểm sốt sinh học, vi khuẩn phổ biến chúng có số lượng lớn, sinh trưởng nhanh chất chuyển hóa đa dạng Nhiều nghiên cứu chứng minh hiệu việc sử dụng vi khuẩn quản lý bệnh nấm sau thu hoạch Trong nghiên cứu Wang cộng (2021), chủng Bacillus halotolerans có khả ức chế phát triển sợi nấm nảy mầm bào tử Botrytis cinerea gây bệnh mốc xám dâu tây Quả dâu tây sau thu hoạch xử lý với Bacillus halotolerans có biểu bệnh mốc xám thấp so với đối chứng [2] Ye cộng (2021) chứng minh chủng Bacillus amyloliquefaciens có khả kháng nhiều loại nấm gây bệnh sơn trà Quả sơn trà xử lý với chủng Bacillus amyloliquefaciens có tỷ lệ thối hỏng 62,5 % sau 20 ngày 25ºC, lơ đối chứng bị hư hỏng hồn tồn [3] Trong nghiên cứu Aiello cộng (2019), chủng Pseudomonas synxantha thể đặc tính đối kháng mạnh với hai loại nấm Monilinia fructicola Monilinia fructigena gây bệnh thối nâu đào sau thu hoạch Pseudomonas synxantha làm giảm đáng kể tỷ lệ mức độ nghiêm trọng bệnh thối nâu đào lây nhiễm Monilinia fructicola sau ngày 25ºC, 10 ngày 10ºC 20 ngày 0ºC Tương tự, đào lây nhiễm Monilinia fructigena, Pseudomonas synxantha thể hoạt tính bảo vệ tốt điều kiện bảo quản 10ºC 0ºC 25ºC [4] Như vậy, nhiều chủng vi khuẩn cơng bố tác nhân kiểm sốt sinh học hiệu nấm bệnh trái sau thu hoạch Tuy nhiên số lượng chủng nhận dạng so với lĩnh vực khác kiểm soát sinh học nông nghiệp Trong nghiên cứu này, chủng nấm gây hư hỏng dâu tây sau thu hoạch bao gồm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus 26 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 Nguyễn Kim Nữ Thảo, Đinh Thị Ngọc Mai, Võ Hoài Hiếu,… Nguyễn Hồng Minh delemar sử dụng làm đối tượng đích để sàng lọc tuyển chọn chủng vi khuẩn đối kháng hiệu Chủng vi khuẩn tiềm định tên so sánh trình tự 16S rDNA xác định khả tiết enzyme phân hủy Đây sở quan trọng để đánh giá đặc tính kháng nấm chủng vi khuẩn Ngồi ra, thử nghiệm bước đầu khả kiểm soát bệnh nấm dâu tây sau thu hoạch chủng vi khuẩn tiềm trình bày VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu Trong nghiên cứu này, chủng nấm gây bệnh cho dâu tây sau thu hoạch bao gồm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar phân lập từ dâu tây giống Mỹ Đá bị bệnh vườn trồng dâu tây địa bàn thành phố Đà Lạt Các chủng nấm nuôi cấy môi trường PDA (HiMedia, India) 200 chủng vi khuẩn sử dụng để khảo sát hoạt tính đối kháng phân lập từ bề mặt dâu tây khỏe mạnh nuôi cấy môi trường LB (g/l: cao nấm men – 5, pepton – 10, NaCl – 10, agar – 15) Hiện tại, chủng nấm vi khuẩn lưu giữ Trung tâm nghiên cứu nguồn gen, Trường Đại học Phenikaa Quả dâu tây sử dụng nghiên cứu thu hái vườn trồng dâu địa bàn thành phố Đà Lạt Quả khử trùng bề mặt % NaClO phút, rửa lại với nước vô trùng làm khô tự nhiên trước sử dụng 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát hoạt tính đối kháng nấm bệnh chủng vi khuẩn Khả kiểm soát nấm bệnh chủng vi khuẩn sàng lọc phương pháp nuôi cấy kép [5] Thỏi thạch (Φ = mm) chủng nấm đặt vào tâm đĩa petri chứa môi trường PDA Sau đó, thỏi thạch (Φ = mm) chủng vi khuẩn nuôi cấy môi trường LB đặt vào vị trí cách tâm đĩa cm, ủ đĩa ngày 25ºC Tỉ lệ kháng chủng vi khuẩn nấm tính theo cơng thức: S = (R-r)/R x 100 % Trong đó, S: Phần trăm ức chế, R: bán kính khuẩn lạc nấm phía đối diện vị trí đặt khoanh vi khuẩn, r: bán kính khuẩn lạc nấm phía đặt khoanh vi khuẩn Mỗi thí nghiệm lặp lại lần 2.2.2 Xác định hoạt tính enzym chủng vi khuẩn Khả sinh cellulase, amylase, protease chủng vi khuẩn kiểm tra cách bổ sung % chất: CMC, tinh bột sữa gầy vào môi trường thạch nước Sau 24 ủ 37ºC, đĩa nuôi cấy nhuộm với thuốc thử congo đỏ 0,1 % để xác định hoạt tính cellulase, lugol % để kiểm tra hoạt tính amylase đo vịng phân giải hoạt tính protease Khả phân giải chitin xác định cách cấy vạch chủng vi khuẩn môi trường chitin agar chứa chitin từ vỏ tôm nguồn (g/l: MgSO4.7H2O – 0,3; Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 27 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … (NH4)2SO4 – 3; KH2PO4 - 1; Citric acid – 1; Tween 80 – 200µl; Colloidal chitin – 4,5; Bromocresol purple – 0,15; Agar – 15; pH 4,7) Đĩa nuôi cấy ủ 37ºC ngày Chủng vi khuẩn xác định có khả sinh chitinase mơi trường ni cấy chuyển sang màu tím 2.2.3 Thử nghiệm khả ức chế nấm bệnh chủng vi khuẩn Các dâu tây khỏe mạnh đồng (14-18 g/quả) thu hái khử trùng bề mặt % NaClO Một vết thương có kích thước mm x mm tạo trung tâm Dịch vi khuẩn đối kháng nuôi cấy môi trường LB, lắc 160 rpm 37ºC 24 ly tâm loại bỏ môi trường, rửa với NaCl 0,85 % pha loãng tới nồng độ 109 CFU/ml Các bào tử nấm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar thu nhận từ đĩa nuôi cấy PDA 25ºC ngày, đếm mật độ buồng đếm Burker-Turk điều chỉnh mật độ 104-105 bào tử/mL 10 µL dịch chứa bào tử nấm bệnh tiêm vào vết thương, làm khô Sau đó, 10 µl dịch vi khuẩn đối kháng tiếp tục tiêm vào vết thương, lô đối chứng tiêm thay nước cất vô trùng Quả dâu tây sau xử lý bảo quản riêng rẽ túi polyetylene 25°C, độ ẩm tương đối 90-95 % ngày Mức độ tổn thương bề mặt nấm bệnh gây tính tỷ lệ phần trăm tổn thương diện tích bề mặt theo quy ước: (khơng có tổn thương), (< %), (6 – 10 %), (11 – 25 %), (26 – 50 %) (> 50 %) Chỉ số bệnh (DI) hiệu kiểm sốt bệnh (CE) tính theo cơng thức [6]: Chỉ số bệnh = (số bị tổn thương tất mức độ x mức độ tổn thương đại diện)/(tổng số x mức độ tổn thương cao nhất) × 100 Hiệu kiểm sốt bệnh = (chỉ số bệnh đối chứng - số bệnh thí nghiệm)/chỉ số bệnh đối chứng × 100 Thí nghiệm lặp lại 03 lần sử dụng 20 dâu tây/lơ thí nghiệm 2.2.4 Định danh dựa so sánh trình tự 16S rDNA Đoạn gen 16S rDNA khuếch đại PCR từ DNA tổng số với cặp mồi 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3) 1492R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3) Sản phẩm PCR sau kiểm tra gel % agarose tinh PCR Purification Kit (Bioneer, Hàn Quốc) đọc trình tự Kết giải trình tự gen xử lý phần mềm MEGA7 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu xử lý phầm mềm Excel Các nghiệm thức lặp lại ba lần để tính giá trị trung bình, độ lệch chuẩn Sự khác biệt có ý nghĩa mẫu thí nghiệm xác định phương pháp thống kê ANOVA Giá trị p < 0,05 xem sai khác có ý nghĩa 28 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 Nguyễn Kim Nữ Thảo, Đinh Thị Ngọc Mai, Võ Hoài Hiếu,… Nguyễn Hồng Minh KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hoạt tính kháng nấm bệnh 200 chủng vi khuẩn Trong nghiên cứu này, 200 chủng vi khuẩn phân lập từ dâu tây tươi sàng lọc khả đối kháng với 05 chủng nấm gây thối hỏng bao gồm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar Kết thí nghiệm Hình cho thấy, vi khuẩn có hoạt tính kháng Botrytis cinerea chiếm tỷ lệ cao (95 %), vi khuẩn kháng Rhizopus delemar có tỷ lệ thấp (1,5 %) Tỷ lệ vi khuẩn kháng Mucor nidicola, Fusarium proliferatum, Colletotrichum gloeosporioides 7,5 %, 10 % 30 % Số lượng chủng vi khuẩn có khả đối kháng nấm thể Hình Trong đó, 192 chủng có khả kháng loại nấm, 50 chủng kháng 02 loại nấm, 20 chủng kháng 03 loại nấm, 05 chủng kháng loại nấm đặc biệt, 03 chủng kháng 05 loại nấm Ba chủng vi khuẩn kháng đồng thời 05 loại nấm gây thối hỏng dâu tây chủng VK180, VK195 VK199 Hình Tỷ lệ vi khuẩn khảo sát có hoạt tính đối kháng với chủng nấm gây bệnh Số chủng vi khuẩn 200 150 100 50 Số chủng nấm bị ức chế Hình Khả kháng chủng nấm gây bệnh 200 chủng vi khuẩn Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 29 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Trong số chủng vi khuẩn xác định có khả đối kháng đồng thời chủng nấm bệnh, chủng vi khuẩn VK199 có khả kháng mạnh ổn định Tỷ lệ ức chế Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar chủng VK199 đạt 75 %, 84 %, 52 %, 45 % 53 % (Hình 3) Hình Khả ức chế chủng VK199 Botrytis cinerea (A), Colletotrichum gloeosporioides (B), Fusarium proliferatum (C), Mucor nidicola (D) Rhizopus delemar (E) Vi khuẩn đối kháng tồn tự nhiên bề mặt trái việc phân lập, sử dụng chủng đối kháng để kiểm soát nấm bệnh trái sau thu hoạch gọi đối kháng tự nhiên Trong nghiên cứu Chalutz Wilson (1990), nước rửa bề mặt trái họ cam quýt cấy trải môi trường thạch có vi khuẩn nấm men xuất Khi pha lỗng nước rửa quan sát thấy xuất nấm Điều cho thấy, nấm men vi khuẩn ngăn chặn phát triển nấm [7] 200 chủng vi khuẩn sử dụng cho thí nghiệm sàng lọc có tỷ lệ đối kháng nấm bệnh cao Điều cho thấy, việc phân lập vi khuẩn đối kháng từ bề mặt dâu tây khỏe mạnh làm tăng đáng kể hội tìm kiếm chủng đối kháng hiệu 3.2 Khả sinh enzyme phân giải chủng vi khuẩn VK199 Vi khuẩn thể chế kháng đa dạng nấm bệnh cạnh tranh không gian, chất dinh dưỡng, tiết enzyme thủy phân, sản xuất kháng sinh tạo biofilm [1] Các enzyme thủy phân kể đến chitinase, protease, cellulase, phá hủy cấu trúc hợp chất cao phân tử chitin, protein, cellulose, hemicellulose, từ ngăn chặn phát triển hoạt động nấm bệnh Kết khảo sát khả sinh cellulase, amylase, protease, chitinase Hình 30 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 Nguyễn Kim Nữ Thảo, Đinh Thị Ngọc Mai, Võ Hoài Hiếu,… Nguyễn Hồng Minh A B D C Hình Hoạt tính cellulase (A), amylase (B), protease (C) chitinase (D) chủng VK199 Vòng phân giải CMC, tinh bột, sữa gầy chủng VK199 đạt 20, 11 11 mm Môi trường nuôi cấy VK199 với chitin nguồn cacbon chuyển sang màu tím sau ngày ủ 37℃ chứng tỏ chủng VK199 có khả sinh chitinase Khả sinh enzyme phân giải cellulose, amylase, protease, chitinase đặc tính quan trọng để xác định chế kháng nấm chủng vi khuẩn VK199 3.3 Kết thử nghiệm khả ức chế nấm bệnh chủng vi khuẩn VK199 dâu tây sau thu hoạch Hiệu kiểm soát sinh học chủng VK199 dâu tây sau thu hoạch kiểm tra với 05 loại nấm bệnh Kết thí nghiệm Hình 5, Đối chứng VK199 A B C Đối chứng VK199 D E Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 31 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Hình Mức độ tổn thương dâu tây bị lây nhiễm nấm Botrytis cinerea (A), Colletotrichum gloeosporioides (B), Fusarium proliferatum(C), Mucor nidicola (D) Rhizopus delemar (E) lô đối chứng lô xử lý với VK199 Chủng VK199 có khả làm giảm số bệnh dâu tây bị nhiễm nấm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Mucor nidicola Rhizopus delemar Trong đó, nghiệm thức lây nhiễm Mucor nidicola có số bệnh giảm mạnh nhất, từ 82,22 % lô đối chứng xuống cịn 42,22 % lơ thí nghiệm (Hình 6) Theo đó, hiệu kiểm sốt nấm Mucor nidicola chủng VK199 đạt cao 43,24 %, nấm Rhizopus delemar đạt 22,62 %, Colletotrichum gloeosporioides đạt 15,22 % Botrytis cinerea đạt 12,92 % (Hình 7) Riêng nghiệm thức lây nhiễm Fusarium proliferatum, số bệnh dâu tây xử lý với VK199 giảm không đáng kể so với lô đối chứng khác biệt số bệnh lô đối chứng thí nghiệm khơng có ý nghĩa thống kê Mặc dù, chủng VK199 có khả đối kháng nấm Fusarium proliferatum đĩa PDA với tỷ lệ ức chế 52 % (Hình 3) xử lý với dâu tây chủng thể khả đối kháng Việc sàng lọc chủng vi khuẩn đối kháng nấm bệnh đĩa thạch nhanh chóng thu chủng kháng tốt Tuy nhiên, chủng có hoạt tính ức chế điều kiện in vitro khơng có hoạt tính ức chế tương tự thử nghiệm in vivo Do đó, việc kết hợp phương pháp in vitro in vivo cần thiết để chọn lọc chủng đối kháng hiệu 32 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 Nguyễn Kim Nữ Thảo, Đinh Thị Ngọc Mai, Võ Hoài Hiếu,… Nguyễn Hồng Minh Hình Chỉ số bệnh nấm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar gây dâu tây lô đối chứng lô xử lý với vi khuẩn VK199 (*: p < 0,05) Hình Hiệu kiểm sốt nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây sau thu hoạch chủng VK199 3.3 Định danh chủng vi khuẩn VK199 phân tích trình tự gen 16S rDNA Trình tự nucleotit thu chủng VK199 đăng ký ngân hàng liệu DNA Nhật Bản (www.ddjb.nig.ac.jp) với mã số đăng ký LC669913 so sánh với 31 trình tự gen 16S rDNA loài Bacillus EZBiocloud (https://www.ezbiocloud.net/) Kết cho thấy chủng VK199 có độ tương đồng cao với Bacillus siamensis KCTC 13613 với hệ số tương đồng 100 %, tiếp Bacillus velezensii CR-502 với hệ số tương đồng 99,63 % (kết chi tiết không đây) Dựa vào khoảng cách di truyền đoạn gen 16S rDNA loài Bacillus khác chương trình MEGA 7, phát sinh chủng loại lồi Bacillus xây dựng (Hình 8) Có thể thấy rằng, VK199 nằm cạnh loài Bacillus siemensis Như vậy, dựa vào bảng hệ số tương đồng phát sinh chủng loại, chủng VK199 định danh lồi Bacillus siamensis Bacillus siamensis nhóm tác giả You cộng (2021) chứng minh có hiệu làm giảm khả nhiễm bệnh số hoa nhiệt đới xồi, vải q trình bảo quản [8] Trong nghiên cứu chúng tôi, chủng Bacillus siamensis VK199 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 33 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … có vai trị kiểm sốt bệnh dâu tây sau thu hoạch Những kết cho thấy rằng, Bacillus siamensis tác nhân kiểm soát sinh học tiềm ứng dụng để kiểm sốt mầm bệnh trái sau thu hoạch Hình Cây phát sinh chủng loại dựa so sánh vùng trình tự 16S rDNA Giá trị bootstrap xuất nhánh thiết lập từ sau 1000 lần lặp lại KẾT LUẬN Từ 200 chủng vi khuẩn phân lập trái dâu tây khỏe mạnh, chọn lọc chủng vi khuẩn VK199 có khả kháng đồng thời 05 chủng nấm bệnh gây hư hỏng Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium proliferatum, Mucor nidicola Rhizopus delemar Chủng VK199 định danh Bacillus siamensis Chúng có khả tiết enzyme phân giải cellulase, amylase, protease chitinase Đây chế kháng nấm quan trọng vi khuẩn Các thử nghiệm kiểm tra khả 34 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 Nguyễn Kim Nữ Thảo, Đinh Thị Ngọc Mai, Võ Hoài Hiếu,… Nguyễn Hồng Minh kiểm soát nấm bệnh dâu tây sau thu hoạch cho thấy, chủng VK199 có khả giảm bệnh nấm Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Mucor nidicola Rhizopus delemar, hiệu với nấm Mucor nidicola LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu tài trợ Quỹ phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 106-NN.04-2016.44 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] A S Dukare, S Paul, V E Nambi, R K Gupta, R Singh, K Sharma, and R K Vishwakarma, “Exploitation of microbial antagonists for the control of postharvest diseases of fruits: a review,” Critical Reviews in Food Science and Nutrition, vol 59, no 9, pp 1-16, 2018 [2] F Wang, J Xiao, Y Zhang, R Li, L Liu, and J Deng, “Biocontrol ability and action mechanism of Bacillus halotolerans against Botrytis cinerea causing grey mould in postharvest strawberry fruit,” Postharvest Biology and Technology, vol 174, 111456, 2021 [3] W Q Ye, Y F Sun, Y J Tang, and W W Zhou, “Biocontrol potential of a broad spectrum atifungal strain Bacillus amyloliquefaciens B4 for postharvest loquat fruit storage,” Postharvest Biology and Technology, vol 174, 111439, 2021 [4] D Aiello, C Restuccia, E Stefani, A Vitale, and G Cirvilleri, “Postharvest biocontrol ability of Pseudomonas synxantha against Monillinia fructicola and Monillinia fructigena on stone fruit,” Postharvest Biology and Technology, vol 149, pp 83-89, 2021 [5] D Romero, A Pérez-García, M E Rivera, F M Cazorla, and A De Vicente, “Isolation and evaluation of antagonistic bacteria towards the cucurbit powdery mildew fungus Podosphaera fusca,” Applied Microbiology and Biotechnology, vol 64, no 2, pp 263-269, 2004 [6] J F Shi and C Q Sun, “Isolation, identification, and biocontrol of antagonistic bacterium against Botrytis cinerea after tomato harvest.” Brazilian Journal of Microbiology, vol 48, no.4, pp 706-714, 2017 [7] E Chalutz and C L Wilson, “Postharvest biocontrol of green and blue mold and sour rot of citrus fruit by Debaryomyces hansenii,” Plant disease, vol 74, no.2, pp 134-137, 1990 [8] W You, C Ge, Z Jiang, M Chen, W Li, and Y Shao, “Screening of a broadspectrum antagonist Bacillus siamensis, and its possible mechanisms to control postharvest disease in tropical fruits,” Biological Control, vol 157, 104584, 2021 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 35 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Selection and identification of potential bacteria against postharvest fungal pathogens on strawberry fruit Nguyen Kim Nu Thao1, Dinh Thi Ngoc Mai2, Vo Hoai Hieu3, Le Thi Huong1, Pham Thi Hue1, Ninh Thi Hanh4, Le Vinh Hoa4, Pham Van Quan4, Nguyen Hong Minh2 Falcuty of Biology, Hanoi University of Science, VNU, Hanoi, Vietnam Bioresource Research Center, Phenikaa University, Hanoi, Vietnam Experiment Center-Practice, Yersin University, Lam Dong, Vietnam Laboratory of food microbiology and genetically modified food, National Institute for Food Control, Hanoi, Vietnam Abstract Strawberries are economically important owing to their unique flavour, health benefits, and nutritional aspects Decay after harvest is a major issue in the development of strawberry industry Currently, the most effective method for controlling decay after harvest is storage of strawberries at low temperature combined with usage of chemical fungicides However, long-term usage of chemical fungicides not only causes pathogen resistance but also is harmful for human health and environment Biocontrol method for the management of disease after strawberry harvest has great practical significance In this study, totally 200 bacterial strains isolated from the surface of healthy strawberry fruit were tested for antagonistic activity against five fungal pathogens Among them, VK199 strain was potent against all five postharvest spoilage fungi on strawberry fruit and then utilized for further study This strain was identified as Bacillus siamensis based on sequence analysis of 16S rDNA The extracellular lytic enzymes, including cellulase, amylase, protease and chitinase released by B siamensis VK199 were detected Furthemore, in vivo, the results of biological control efficacy test showed that B siamensis VK199 suppressed the occurrence of diseases caused by Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Mucor nidicola and Rhizopus delemar of strawberry during storage Keywords: Antagonistic bacterium, antifugal activity, biological control, strawberry 36 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - tập 5, số 1, 2022 .. .Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Ví dụ, Penicillium expansum, tác nhân gây mốc xanh nhiều loại trái sau thu hoạch có khả sản sinh chất gây ung thư citrinin,... chủng nấm bị ức chế Hình Khả kháng chủng nấm gây bệnh 200 chủng vi khuẩn Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 29 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu. .. An tồn thực phẩm - Tập 5, Số 1, 2022 31 Chọn lọc nhận diện vi khuẩn đối kháng nấm bệnh gây hư hỏng dâu tây … Hình Mức độ tổn thương dâu tây bị lây nhiễm nấm Botrytis cinerea (A), Colletotrichum