3864-Bài báo-3936-1-10-20210722

Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 DOI:10.22144/ctu.jvn.2021.046 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ NUÔI CẤY in-vitro ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO RỄ CÂY DỪA SÁP (MAKAPUNO COCONUT) CẤY PHÔI Võ Minh Hải1*, Phạm Thị Phương Thuý2, Lê Vĩnh Thúc3 Nguyễn Bảo Toàn4 Nghiên cứu sinh khoa học trồng khóa 2017, Khoa Nơng nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Khoa Nông nghiệp – Thủy sản, Trường Đại học Trà Vinh Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Hội Sinh vật cảnh, Thành phố Cần Thơ *Người chịu trách nhiệm viết: Võ Minh Hải (email: haitvu@gmail.com) Thông tin chung: Ngày nhận bài: 21/10/2020 Ngày nhận sửa: 07/01/2021 Ngày duyệt đăng: 28/04/2021 Title: Studying some in-vitro culture factors affecting the rooting of coconut sap (Makapuno coconut) embryos Từ khóa: Cấy phơi, rễ dừa sáp in-vitro, yếu tố ảnh hưởng Keywords: Embryo cultured, rooting of sap coconut in-vitro, effectuation factors ABSTRACT In order to create seedlings with a perfect developed root system by the cultured embryo sap coconut micropropagation, experiments of the research were carried out basic on the factors affecting the rooting rate of embryo sap coconut The results determined that at the root stage, the modified Y3 medium was supplemented with sucrose 40 g/L and agar 5g/L was more suitable than others All germinating embryos had root length less than cm after 4-month culture, they were transplanted to the modified Y3 medium + IAA mg/L was best results For non-submerged embryos (the root out of the medium), two methods were carried out: adding modified Y3 medium supplemented with NAA mg/L or root cutting + modified Y3 medium + NAA mg/L However, the method of cutting roots takes more time for the tree to qualify It is recommended to apply the results of this research for embryo cultured Sap coconut seedling production in Vietnam TÓM TẮT Nhằm tạo có hệ thống rễ phát triển hoàn thiện phương pháp nhân giống dừa sáp từ phôi, đề tài tiến hành thí nghiệm nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ tạo rễ dừa sáp cấy phôi Kết nghiên cứu xác định giai đoạn tạo rễ, môi trường Y3 cải tiến kết hợp với 40 g/L đường sử dụng 5g agar/L thích hợp cho dừa sáp cấy phôi phát triển Đối với phôi sau tháng chiều dài rễ nhỏ cm sử dụng mơi trường Y3 cải tiến + mg/L IAA thích hợp Đối với phôi không ngập môi trường, áp dụng phương pháp: bổ sung thêm môi trường Y3 cải tiến + mg/L NAA cắt rễ + môi trường Y3 cải tiến + mg/L NAA, hai thí nghiệm cho kết tốt Tuy nhiên, phương pháp cắt rễ phải tốn nhiều thời gian để đủ tiêu chuẩn chuyển sang giai đoạn vườn ươm Khuyến nghị ứng dụng kết nghiên cứu vào quy trình sản xuất giống dừa sáp cấy phơi tại Việt Nam nhiên thường nuôi cấy thông qua nuôi cấy mô (De Guzman et al., 1964; De Guzman & Manuel, 1977) Thơng thường, có 25% khả sản ĐẶT VẤN ĐỀ Một dừa sáp (Makapuno coconut) có kiểu gen đồng hợp tư lặn (mm) thực chất không tồn tại tự 127 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 xuất trái dừa sáp trái lấy từ mẹ mang dừa sáp (Cedo et al., 1984; Islam et al., 2013;) tỉ lệ trái có sáp tăng lên 85% (dao động từ 50 đến 100%) chúng thu hoạch từ dừa sáp nhân phương pháp giải cứu phôi (De Guzman et al., 1964; De Guzman & Manuel, 1977) Trái dừa sáp có giá trị dinh dưỡng kinh tế cao dừa thường 10 – 20 lần (Phạm Thị Phương Thúy ctv, 2016) Theo Balasubramanian et al (1976), hàm lượng galactomannans dừa sáp cao gấp lần so với dừa bình thường Theo Areza-Ubaldo et al (2003), chiết xuất galactomanan từ dừa sáp nguyên liệu cho nhiều ngành công nghiệp chế biến thực phẩm (màng bao thực phẩm), dược phẩm (màng bao thuốc, gạc bao vết thương, thành phần gel agarose, polyacrylamide) mỹ phẩm Công nghệ nuôi cấy phôi De Guzman phát triển thành công vào năm 1960 sau thập kỷ thử nghiệm (De Guzman et al., 1964) Công nghệ de Guzman cải tiến tại Trung tâm nghiên cứu dừa Cơ quan Dừa Philippines (De Guzman & Manuel, 1977) mở đường cho việc sản xuất thương mại giống phôi Philippines (Rillo, 1999) Tuy nhiên, đến tỷ lệ thành công thấp nguyên nhân sau: tỷ lệ phôi phát triển bất thường cao; tỷ lệ phơi phát triển thành hồn chỉnh ống nghiệm đủ tiêu chuẩn đưa vườn ươm thấp; hệ thống rễ nghèo nàn (lá nhỏ, phát triển chậm, rễ khơng có có rễ thứ cấp) khả thích nghi vườn ươm thấp Trong đó, có khoảng từ 15 – 20% phơi nẩy mầm yếu 13 -17% có rễ phát triển giai đoạn phịng thí nghiệm (Ngơ Thị Kiều Dương, 2013) Có nhiều nghiên cứu chứng minh sử dụng chất kích thích sinh trưởng thực vật (nhóm auxin, cytokinin) nồng độ khác cho hiệu khác việc kích thích rễ (Nwite et al., 2017) Vì vậy, nghiên cứu phát triển phơi có rễ phát triển nhằm nâng cao tỷ lệ thành cơng quy trình nhân giống dừa sáp phương pháp nuôi cấy phôi cần thiết sử dụng mũi khoan kính đường kính 27 mm Phơi sau lấy khỏi trái có lớp cơm dừa bao xung quanh phần gáo dừa bên cho vào beaker (cốc) thủy tinh khử trùng sạch Giai đoạn tách vỏ dừa, khoan lấy phôi thực điều kiện phịng thí nghiệm thơng thường Phơi dừa đựng beaker sau tách khỏi trái mang vào tủ cấy vô trùng Khử trùng phôi dừa cồn 70% Thời gian khử trùng 15 phút Rót phần cồn sau khử trùng vào cốc khác Dùng nhíp y tế gắp phơi dừa đĩa petri vô trùng, dùng dao mổ y tế tách bỏ phần gáo dừa cơm dừa bao quanh phơi, cho phơi cho vào ống nghiệm (kích thước: 2,5cm x 180 cm, bịt kính bọc kính tuyệt trùng) chứa môi trường cấy phôi hấp khử trùng trước Sau khoảng tháng phơi nẩy mầm chọn để tiến hành bố trí thí nghiệm  Mơi trường ni cấy phơi giai tạo rễ: Sử dụng môi trường Y3 cải tiến, bổ sung 40 g/L sucrose, 1g/l than hoạt tính, điều chỉnh pH = 5,6, chai thủy tinh cổ cao thể tích 750 ml chứa 250 ml môi trường mang hấp khử trùng nhiệt độ 121oC thời gian 20 phút 2.2 Phương pháp  Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng hàm lượng đường sucrose lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn tạo rễ in-vitro Các phôi tách cho vào môi trường Y3 cải tiến bổ sung lượng đường khác vào môi trường Y3 cải tiến Thí nghiệm bố trí thể thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm Nghiệm thức 1: 20 g đường/L môi trường Nghiệm thức 2: 40 g đường/L môi trường Nghiệm thức 3: 60 g đường/L môi trường Nghiệm thức 4: 80 g đường/L mơi trường Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng hàm lượng agar lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn tạo rễ in-vitro PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Phương tiện điều kiện thí nghiệm Các phôi giai đoạn tách cho vào môi trường Y3 cải tiến bổ sung lượng agar với nồng độ khác vào môi trường Y3 cải tiến Thí nghiệm bố trí thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm, nuôi ống nghiệm  Địa điểm nghiên cứu: thí nghiệm bố trí phịng thí nghiệm với nhiệt độ phòng 28 ± 2oC Che tối cho giai đoạn phôi nẩy mầm chiếu sáng với cường độ 2.000 – 2.500 lux giai đoạn tạo rễ phát triển thân trước vườn ươm Nghiệm thức 1: g agar/L môi trường (đối chứng)  Phôi dừa sáp thí nghiệm: chọn trái dừa có độ tuổi từ 12,5 -13 tháng (tính từ lúc đậu trái đến thu hoạch), phôi lấy khỏi trái máy khoan Nghiệm thức 2: g agar/L môi trường 128 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 Nghiệm thức 3: g agar/L môi trường Nghiệm thức 1: Không cắt rễ (Đối chứng) Nghiệm thức 4: 10 g agar/L môi trường Nghiệm thức 2: Cắt rễ + mg/L NAA Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến rễ dừa sáp in-vitro Nghiệm thức 3: Cắt rễ + mg/L NAA Nghiệm thức 4: Cắt rễ + mg/L NAA Các phôi tách cho vào môi trường Y3 cải tiến, bổ sung NAA (đối chứng) nghiên cứu bổ sung thêm chất IAA với nồng độ khác vào mơi trường Y3 cải tiến Thí nghiệm bố trí khối hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm Nghiệm thức 1: mg/L NAA (đối chứng) Nghiệm thức 2: mg/L IAA Nghiệm thức 3: mg/L IAA Nghiệm thức 4: mg/L IAA Nghiệm thức 5: mg/L IAA Nghiệm thức 5: Cắt rễ + mg/L NAA 2.3 Chỉ tiêu theo dõi Các thí nghiệm lấy tiêu giống nhau: chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, rễ bên, chiều cao số sau tháng bố trí thí nghiệm 2.4 Phương pháp xử lý số liệu Các tiêu theo dõi ghi nhận tính tốn phần mềm excel phân tích thống kê phần mềm Minitab version 16 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng hàm lượng đường sucrose lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn tạo rễ in-vitro Nghiệm thức 6: mg/L IAA Thí nghiệm 4: Nghiên cứu bổ sung mơi trường kích thích rễ, tạo phôi không ngập môi trường Theo Hew and Yong (1997), đường cung cấp carbohydrate thành phần quan trọng sinh trưởng phát triển thực vật in-vitro Tuy nhiên, đường nồng độ cao, độc hại ức chế sinh trưởng phát triển (Silva, 2004) Kết thí nghiệm trình bày Bảng cho thấy sử dụng mơi trường Y3 cải tiến kết hợp với 40 g đường/lít cho hiệu tốt với chiều dài rễ 12,6 cm, có trung bình 3,5 rễ thứ cấp, 3,6 chiều cao đạt 25,1 cm sau đạt chuẩn vườn ươm (có mở; có rễ thứ cấp, theo Nguyễn Thị Bích Hồng ctv (2014) Khi tăng liều lượng đường, chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, số lá, chiều cao có xu hướng giảm phù hợp với nghiên cứu Novero et al (2010) Đối với phơi có chiều dài rễ vượt trội, khiến phôi không ngập môi trường không phát triển, phôi bổ sung thêm môi trường dạng lỏng với nồng độ NAA khác vào môi trường Y3 cải tiến Thí nghiệm bố trí thể thể thức hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm Nghiệm thức 1: Không bổ sung môi trường (Đối chứng) Nghiệm thức 2: mg/L NAA Nghiệm thức 3: mg/L NAA Nghiệm thức 4: mg/L NAA Nghiệm thức 5: mg/L NAA Đối với số lượng rễ bên, nghiệm thức (40 g đường/L môi trường) nghiệm thức (60 g đường/L mơi trường) có số lượng rễ bên đạt 100% nghiệm thức có 10 rễ (Bảng 2) So với nghiên cứu Trương Quốc Ánh ctv (2012), lượng đường sử dụng nghiên cứu 20 g/L mơi trường Ngoài ra, Trương Quốc Ánh ctv (2012) cho sử dụng lượng đường 60 g/L giai đoạn tạo rễ chiều cao đạt 9,57 cm Thí nghiệm 5: Nghiên cứu cắt rễ cấy lại cho mơi trường ngập rễ để kích thích rễ, phôi không ngập môi trường Đối với phơi giai đoạn có chiều dài rễ vượt trội, phôi không ngập môi trường không phát triển, lấy khỏi chai cắt rễ cấy vào mơi trường thí nghiệm Thí nghiệm bố trí thể thể thức hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm 129 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 Bảng Ảnh hưởng hàm lượng đường lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn in-vitro giai đoạn tạo rễ Nghiệm thức Y3 cải tiến + 20 g đường/L môi trường Y3 cải tiến + 40 g đường/L môi trường Y3 cải tiến + 60 g đường/L môi trường Y3 cải tiến + 80 g đường/L môi trườn CV (%) Chiều dài rễ (cm) 5,1c ± 0,7 12,6a ± 1,6 12,3a ± 1,5 8,2b ± 0,8 20,8 Số lượng rễ thứ cấp 0,1c ± 0,3 3,5a ± 1,1 3,1a ± 0,9 1,3b ± 0,6 16,0 Số lá 2,0b ± 0,4 3,6a ± 0,7 3,3a ±0,7 1,4c ± 0,5 36,0 Chiều cao (cm) 7,7c ± 0,8 25,1a ± 7,0 23,6a ± 5,0 19,8b ± 4,5 38,2 Ghi chú: - ký tự a, b, c d để so sánh thống kê nghiệm thức, hai giá trị có ít ký tự giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa P=0.05 Bảng Ảnh hưởng hàm lượng đường sucrose lên số lượng rễ bên dừa Sáp in-vitro môi trường Y3 cải tiến Phần trăm rễ bên (%) Dưới rễ Từ – 10 rễ Trên 10 rễ 86,7 13,3 0 100 0 100 73,3 20 6,7 3.2 Ảnh hưởng hàm lượng agar lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn tạo rễ in-vitro Nghiệm thức Y3 cải tiến + 20 g đường/L Y3 cải tiến + 40 g đường/L Y3 cải tiến + 60 g đường/L Y3 cải tiến + 80 g đường/L A môi trường môi trường môi trường môi trường B Đối với nuôi cấy tĩnh, sử dụng mơi trường lỏng, mơ bị chìm chết thiếu ơxy, rễ phát triển không cố định môi trường xung quanh rễ khơng ổn định Để tránh tình trạng này, mơi trường nuôi cấy làm đặc lại agar mô cấy bề mặt môi trường Agar thường sử dụng nồng độ g đến 10 g (Trần Văn Minh, 2017) Bảng cho thấy lượng agar thích hợp cho dừa Sáp cấy phơi giai đoạn tạo rễ g/L môi trường cho chiều dài rễ 13 cm, số lượng rễ thứ cấp 3,7 rễ, số trung bình 2,9 lá, chiều cao trung bình 27,5 cm Hình Cây dừa môi trường Y3 cải tiến: 40 g đường/L (A) so với 60 g đường/L (B) Bảng Ảnh hưởng hàm lượng agar lên khả phát triển phôi dừa sáp giai đoạn in-vitro Nghiệm thức Y3 cải tiến (0 g agar/L môi trường, Đối chứng) Y3 cải tiến + g agar/L môi trường Y3 cải tiến + g agar/L môi trường Y3 cải tiến + 10 g agar/L môi trường CV (%) Chiều dài rễ Số lượng rễ (cm) thứ cấp 5,5d ± 1,1 1,4b ± 0,6 13,0a ± 1,2 3,7a ± 0,9 10,5b ± 1,1 1,5b ± 0,6 6,9b ± 1,0 1,2b ± 0,6 34,4 30,0 Số lá 1,3c ± 0,5 2,9a ± 0,6 2,1ab ± 0,6 1,5c ± 0,5 20,0 Chiều cao (cm) 11,4b ± 2,5 27,5a ± 5,7 26,0a ± 6,7 24,0a ± 6,9 30,4 Ghi chú: - ký tự a, b, c d để so sánh thống kê nghiệm thức, hai giá trị có ít ký tự giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa P=0.05 tiêu chuẩn vườn ươm Trong đó, Muhammed et al (2013) sử dụng g/L agar cho giai đoạn Bảng cho thấy nghiệm thức (5 g agar/L mơi trường) đạt 100% số có rễ bên 10 rễ đạt 130 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 Bảng Ảnh hưởng hàm lượng agar lên khả tạo rễ phôi dừa sáp giai đoạn in-vitro Dưới rễ Từ – 10 rễ Trên 10 rễ 80 20 0 100 73,3 26,7 53,3 40 6,7 3.3 Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến rễ dừa sáp in-vitro Nghiệm thức Y3 cải tiến + g agar/L môi trường Y3 cải tiến + g agar/L môi trường Y3 cải tiến + g agar/L môi trường Y3 cải tiến + 10 g agar/L môi trường A B Nghiên cứu Nwite et al (2017) dừa thường, bổ sung NAA 1,0 -1,5 mg/L mơi trường tạo rễ thích hợp Trong đó, nghiên cứu nhóm tác giả sau tháng chiều dài rễ nhỏ cm sử dụng Y3 cải tiến + mg/L IAA (Nghiệm thức 4: mg/L IAA) thích hợp với chiều dài rễ 13.6 cm, số lượng rễ thứ cấp 3,3 rễ, có 2.6 chiều cao 22,7 cm cao khác biệt với nhiệm thức lại (Bảng 5) Nguyên nhân nhóm nghiên cứu thực dừa sáp Nwite et al (2017) nghiên cứu dừa thường Hình Cây dừa in-vitro phát triển môi trường Y3 cải tiến g agar/L (A) 10 g agar/L (B) Bảng Nghiên cứu nồng độ chất điều hịa sinh trưởng kích thích rễ đối với các phôi sau tháng chiều dài rễ nhỏ cm Nghiệm thức Y3 cải tiến + mg/L NAA (đối chứng) Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA CV (%) Chiều dài rễ Số lượng rễ thứ (cm) cấp d c 4,5 ± 0,6 1,0 ± 0,0 5,4cd ± 1,4 1,0c ± 0,0 c 6,1 ± 1,3 1,3c ± 0,6 b 13,6 ± 1,7 3,3c ± 1,0 b 12,7 ± 1,3 2,3c ±0,7 b 12,3 ± 2,1 2,2b ± 0,9 28,6 25,7 Số lá 1,5c ± 0,5 1,5c ± 0,5 1,6c ± 0,5 2,6a ± 0,5 2,3ab ± 0,6 2,1b ± 0,7 17,4 Chiều cao (cm) d 14,5 ± 2,5 16,4c ± 2,1 19,8b ± 1,9 22,7a ± 2,7 20,12b ± 2,8 16,8c ± 1,4 26,5 Ghi chú: - ký tự a, b, c d để so sánh thống kê nghiệm thức, hai giá trị có ít ký tự giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa P=0.05 thức với 73,3% có rễ bên 10 rễ nghiệm thức có số lượng rễ bên thấp nghiệm thức với 73,3% có rễ bên thấp có 26,7% có rễ bên từ đến 10 Bảng cho thấy nghiệm thức có số lượng rễ bên cao với 86,7% có số lượng rễ bên 10 13,3% có từ đến 10 rễ, nghiệm Bảng Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ bên dừa sáp in-vitro Nghiệm thức Y3 cải tiến + mg/L NAA (đối chứng) Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Y3 cải tiến + mg/L IAA Dưới rễ 73,3 60 53,3 0 20 131 Từ – 10 rễ 26,7 26,7 33,4 13,3 26,7 60 Trên 10 rễ 13,3 13,3 86,7 73,3 20 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ A Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 3.4 Nghiên cứu bổ sung mơi trường kích thích rễ, tạo lá phơi khơng ngập môi trường B Bảng cho thấy phôi khơng ngập mơi trường phát triển chậm, nhiều trường hợp không phát triển Cụ thể, nghiệm thức không bổ sung môi trường chiều dài rễ không thay đổi từ trước đến sau thí nghiệm 10,4 cm, số lượng rễ thứ cấp thấp khoảng 1,4 rễ, gần không tạo chiều cao thấp 6,5 cm Ở nghiệm thức tối ưu mg/L NAA, có chiều dài rễ 14,7 cm, số lượng rễ thứ cấp nhiều 4,7 rễ, tạo gần lá, chiều cao đạt 28,9 cm Hình Cây nghiệm thức đối chứng (A) nghiệm thức Y3 cải tiến + mg/L IAA (B) Bảng Kết bổ sung mơi trường kích thích rễ, tạo lá phôi không ngập môi trường ảnh hưởng đến rễ, lá cao dừa Sáp in-vitro Nghiệm thức Y3 cải tiến (không bổ sung môi trường, đối chứng) Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA CV (%) Chiều dài rễ Số lượng rễ Chiều cao Số lá (cm) thứ cấp (cm) c d c d 10,4 ± 1,1 1,4 ± 0,7 0,3 ± 0,5 6,5 ± 1,0 12,7b ± 1,1 3,7b ± 0,9 2,3b ± 0,6 25,1c ± 3,9 14,7a ± 1,1 4,7a ± 1,2 2,9a ± 0,6 28,9a ± 3,1 b c b 13,6 ± 1,0 2,8 ± 1,0 2,5 ± 0,6 27,4ab ± 1,9 b c b 12,9 ± 1,8 2,7 ± 0,9 2,3 ± 0,5 25,8 bc ± 2,9 13,9 24,7 13,5 29,6 Ghi chú: - ký tự a, b, c d để so sánh thống kê nghiệm thức, hai giá trị có ít ký tự giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa P=0.05 Bảng cho thấy nghiệm thức có số rễ bên 10 100%, kế đén nghiệm thức 4, với tỷ lệ lần lược 66,6%, 60% 53,3% Trong nghiệm thức số có rễ bên chiếm 86,7% Qua đó, chứng minh hiệu phương pháp bổ sung môi trường cho dừa sáp in-vitro rễ không gập môi trường Tuy nhiên, cần bổ sung môi trường sớm để phát triển tốt Bảng Kết bổ sung mơi trường kích thích rễ, tạo lá phôi không ngập môi trường ảnh hưởng đến rễ bên dừa Sáp in-vitro Dưới rễ Từ – 10 rễ Trên 10 rễ 86,7 13,3 0 46,7 53,3 0 100 6,7 26,7 66,6 40 60 3.5 Nghiên cứu cắt rễ để kích thích rễ, lá đối với các phôi không ngập môi trường Nghiệm thức Y3 cải tiến (đối chứng) Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA Y3 cải tiến + mg/L NAA A B Như nói trên, phơi khơng ngập mơi trường phát triển chậm Nghiên cứu cho thấy phôi không cịn ngập mơi trường, tiến hành lấy khỏi mơi trường, cắt rễ sau cấy lại vào môi trường Y3 cải tiến kết hợp mg/L NAA cho kết tốt khác biệt với nghiệm thức cịn lại với chiều dài rễ 13,6 cm, số lượng rễ thứ cấp 3,7 rễ, đạt khoảng lá, chiều cao đạt 28,2 cm (Bảng 10) Hình Cây dừa bổ sung mơi trường Y3 cải tiến + mg/L NAA (B) phát triển tốt hẳn so với nghiệm thức đối chứng (A) 132 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 Bảng 10 Kết cắt rễ cấy lại cho môi trường ngập rễ ảnh hưởng đến rễ, lá cao dừa sáp in-vitro Chiều dài rễ Số lượng rễ thứ (cm) cấp 10,1d ± 1,0 1,2c ± 0,6 11,6c ± 0,9 2,7b ± 0,7 a 14,4 ± 1,3 3,7a ± 1,2 b 12,8 ± 1,6 3,2bc ± 1,0 c 11,8 ± 1,1 3,1bc ± 0,9 16,7 18,9 Nghiệm thức Không cắt rễ ( Đối chứng) Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA CV (%) Số lá 0,5c ± 0,5 2,2b ± 1,4 3,3a ± 0,7 2,4b ± 0,6 2,1b ± 0,7 17,3 Chiều cao (cm) 5,9d ± 0,7 22,3c ± 2,9 28,2a ± 2,6 27,4ab ± 1,9 26,3 b ± 2,1 26,3 Ghi chú: - ký tự a, b, c d để so sánh thống kê nghiệm thức, hai giá trị có ít ký tự giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa P=0.05 Trong đó, nhiệm thức không tác động (đối chứng), chiều cao thấp khoảng cm không tạo Bảng 11 cho thấy 100% số có số lượng rễ bên 10 rễ đủ tiêu chuẩn vườn ươm Bảng 11 Kết cắt rễ cấy lại cho môi trường ngập rễ ảnh hưởng đến số lượng rễ bên dừa sáp in-vitro Nghiệm thức Không cắt rễ ( Đối chứng) Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA Cắt rễ + mg/L NAA A B Dưới rễ Từ – 10 rễ Trên 10 rễ 86,7 13,3 0 13,3 86,7 0 100 6,7 93,3 20 80 trường Y3 cải tiến + mg/L NAA đến ngập cổ rễ cắt rễ + môi trường Y3 cải tiến + mg/L NAA Tuy nhiên phương pháp cắt rễ kéo dài thời gian để đủ tiêu chuẩn 4.2 Kiến nghị Tiếp tục theo dõi sinh trưởng phát triển giống dừa sáp cấy phơi giai đoạn dưỡng nhằm hồn thiện quy trình nhân giống dừa sáp phương pháp cấy phơi TÀI LIỆU THAM KHẢO Hình Cây nghiệm thức Cắt rễ cấy vào môi trường Y3 cải tiến + mg/L NAA (A) so với nghiệm thức đối chứng (B) Areza-Ubaldo, M B B., Rillo, E P., Cueto, C A., & Banao, G (2003) Application of the improved embryo culture protocol of commercial production of Makapuno seedlings Philippine Journal of Science, 132(1), 1-12 Balasubramanian, K., Sothary, R D., & Hoover, A A (1976) Polysaccharide of the kernel of maturing and matured coconut J Food Sci., 41, 1370-73 Cedo, M L O., de Guzman, E V., & Rimando, T G (1984) Controlled pollination of embryocultured makapuno coconut (Cocos nucifera L.) Philippine Agriculture, 67, 100-104 De Guzman, E.V & Manuel, G C (1977) Improved root growth in embryo and seedlings culture of coconut ‘Makapuno’ by the KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Kết nghiên cứu cho thấy giai đoạn tạo rễ, môi trường Y3 cải tiến kết hợp với 40 g/L đường g/L agar thích hợp cho dừa sáp cấy phôi phát triển Đối với phôi tháng tuổi có chiều dài rễ nhỏ cm tiếp tục cấy chuyền vào môi trường Y3 cải tiến với nồng độ mg/L IAA thích hợp Đối với phơi có gốc rễ nhơ cao mơi trường có phương pháp: bổ sung thêm môi 133 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số 2B (2021): 127-134 incorporation of charcoal in the growth medium PJCS, 11, 35–39 De Guzman, E.V., and Del Rosario, A G (1964) The growth and development in soil of makapuno seedlings cultured in-vitro National Research Council of the Philippines, Research Bulletin, 29, 1-16 Hew, C S., and Yong, J W H (1997) The physiology of tropical orchids in relation to the industry World Scientific, Singapore Islam, M N., Azad, A K., Namuco, L O., Borromeo, T H., Cedo, M L O., & Aguilar, E A (2013) Morphometric characterization and diversity analysis of a makapuno coconut population in U.P Los Banos, Pakistan Journal of Agricultural Research, 26, 254-264 Muhammed, N., Nyamota, R., Hashim, S., & Malinga, J N (2013) Zygotic embryo in vitro culture of Cocos nucifera L.(sv East African Tall variety) in the coastal lowlands of Kenya African Journal of Biotechnology, 12(22), 3435-3440 Ngô Thị Kiều Dương (2013) Báo cáo kết thực Nhiệm vụ “Khai thác phát triển nguồn gen dừa” Bộ Cơng Thương, Việt Nam Nguyễn Thị Bích Hồng, Ngơ Thị Kiều Dương, Nguyễn Thị Mai Phương & Phạm Phú Thịnh (2014) Nhân giống dừa sáp kỹ thuật nuôi cấy phôi http://hiephoiduabentre.com.vn/index.php?Modu le=Content&Action=view&id=4633&Itemid=2 Novero, A., Delima, A G., Acaso, J., & Baltores, L M (2010) The Influence of Osmotic Concentration of Media on the Growth of Sago Palm ('Metroxylon sagu'Rottb.)'in vitro' Australian Journal of Crop Science, 4(6), 453-456 Nwite, P A., Ikhajiagbe, B., & Owoicho, I (2017) Germination response of coconut (Cocos nucifera L.) zygotic embryo Journal of Applied Sciences and Environmental Management, 21(6), 1019-1021 Phạm Thị Phương Thúy, Lê Trúc Linh, Đoàn Văn Hậu & Nguyễn Ngọc Trai (2016) Báo cáo tổng kết đề tài “Nhân giống dừa sáp phương pháp nuôi cấy phôi tại tỉnh Trà Vinh” Rillo, E P (1999) Coconut embryo culture In Oropeza, C., Verdeil, J.L., Ashburner, G.R., Carda, R., & Santamaría, J.M., (Eds.), Current Advances in Coconut Biotechnology (pp 279288) Springer, Dordrecht Silva, J A (2004) The effect of carbon source on in vitro organogenesis of chrysanthemum thin cell layers Bragantia, 63(2), 165-177 Trần Văn Minh (2017) Giáo trình Ni cấy mơ tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn Trương Quốc Ánh, Lương Thế Minh, Trương Thị Tú Anh & Trương Vĩnh Hải (2012) Nhân giống Invitro dừa sáp (Makapuno coconut) Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 20, 12-18 134