BÁO cáo hết môn THỰC tập dược LIỆU 1 FLAVONOID

Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm BÁO CÁO HẾT MÔN THỰC TẬP DƯỢC LIỆU I FLAVONOID Phương pháp tiến hành 1.1 Chiết xuất: - Nguyên liệu: g dược liệu hoa Hòe (Flos Styphnolobii immaturus japonici) nụ hoa Hòe (Styphnolobium japonicum (L.) Schott = Sophora japonica L., Fabaceae) - Sơ đồ chiết xuất: 2g dược liệu hoa hòe 25ml cồn 96% Đun cách thủy phút Lọc nóng Dịch chiết hoa hịe 1.2 Định tính: Dịch chiết hoa hịe +NaOH + AlCl3 + NaOH Phản ứng tăng màu với dd NaOH 1% Phản ứng tạo phức với AlCl3 1% MeOH Dương tính Phản ứng tạo phức với dd FeCl3 1% Dương tính Tăng màu (vàng) Tăng màu +FeCl3 Dương tính Màu đen Chì acetat trung tính Phản ứng tạo phức với Phản ứng dd chì acetat trung tính diazonium Dương tính Màu cam Sơ đồ Sơ đồ phản ứng định tính dược liệu hoa Hịe Kết định tính 2.1 Phản ứng tăng màu với dd NaOH 1% Trang +diazonium pH 8-9 Dương tính Màu cam Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Nhận xét: Dược liệu hoa Hịe dương tính với phản ứng tăng màu với dd NaOH 1% (dung dịch có màu cam, đậm ống chứng-màu vàng nhạt) có thành phần flavanol có OH C3 mang tính acid nên phản ứng với NaOH tạo phenolat 2.2 Phản ứng tạo phức với AlCl3 1% MeOH Nhận xét: Dược liệu hoa Hịe dương tính với phản ứng tạo phức với AlCl3 1% MeOH (dung dịch có màu vàng, đậm ống chứng - màu vàng nhạt) tạo phức chelat với Al3+ 2.3 Phản ứng tạo phức với dd FeCl3 1% Nhận xét: Dược liệu hoa Hòe dương tính với phản ứng tạo phức với FeCl3 1% (dung dịch có màu đen, đậm ống chứng - màu vàng nhạt) tạo phức chelat với Fe3+ Trang dd Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm 2.4 Phản ứng tạo phức với dd chì acetat trung tính Nhận xét: Dược liệu hoa Hịe dương tính với phản ứng tạo phức với dd chì acetat trung tính (dung dịch có màu cam, đậm ống chứng - màu vàng nhạt) tạo phức chelat với Pb2+, có tủa màu cam 2.5 Phản ứng diazonium Nhận xét: Dược liệu hoa Hịe dương tính với phản ứng với thuốc thử diazonium (dung dịch có màu cam) tạo với diazonium sản phẩm cộng hợp azoic có màu cam, đỏ Màu sản phẩm chưa rõ, chưa đậm màu mơi trường kiềm, chưa kiềm hóa đủ để pH đạt kiềm yếu, hay cho nhiều diazonium Lưu ý làm: _ Kiềm hóa NaOH 10% tạo mơi trường kiềm yếu _ Thêm từ từ thuốc thử đến pH 8-9, không cho nhiều thuốc thử làm pH acid làm phản ứng khơng xảy Hình tổng hợp phản ứng, từ trái qua: Trang Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm 1.phản ứng với NaOH 1% 2.phản ứng với dung dịch FeCl3 3.phản ứng với dung dịch AlCl3 4.phản ứng với dung dịch chì acetat trung tính 5.phản ứng với diazonium 6.ống chứng Kết luận: Dược liệu hoa Hịe có flavonoid thuộc nhóm flavonol 2.6 Phản ứng Cyanidin: Dịch chiết hoa hòe ống nghiệm chứa sẵn Mg Thêm từ từ HCl đậm đặc Màu đỏ 2.7 Phản ứng nhóm anthocyanidin: dịch chiết đậu đen HCl 1% Kết luận: tím đỏ liệu đậu đen có chứa nhóm anthocyanidin 2.8 Phản ứng nhóm leucoanthocyanidin: Trang NaOH 1% xanh Dược Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Dịch chiết gỗ me cồn HCl đậm đặc Đun cách thủy Màu đỏ NaOH 10% Giữ nguyên Màu đỏ Màu xanh Kết luận: Dược liệu gỗ me có chứa nhóm leucoanthocyanidin II COUMARIN Phương pháp tiến hành 1.1 Chiết xuất: - Nguyên liệu: g dược liệu ba dót (Folium Eupatorii) Ba dót (Eupatorium triplinerve Vahl., Asteraceae) - Sơ đồ chiết xuất dịch chiết ba dót: 2g dược liệu ba dót 40 ml cồn 96%, đun cách thủy 10 phút Lọc Dịch chiết ba dót Than hoạt lắc nhẹ, đun cách thủy, lọc nóng Dịch chiết ba dót loại chlorophyl Lưu ý: Dùng than hoạt để loại chlorophyl màu xanh chlorophyl làm khó quan sát màu, thêm than hoạt vừa đủ để giảm màu xanh khơng màu hồn tồn Trang Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Khơng cho nhiều than hoạt than hoạt hấp phụ coumarin gây âm tính phản ứng Nếu cho than hoạt, dịch chiết cịn màu xanh, đun thêm lúc hay cho thêm than hoạt vào 1.2 Định tính kết luận: - Phản ứng đóng mở vòng lacton 2ml dịch lọc 4ml nước cất Đục 0.5ml NaOH 10% 0.5ml NaOH 10% Đun cách thủy Đun cách thủy Bổ sung nước HCl đặm đặc, bổ sung nước Trong Đục ống Lưu ý: cần thêm nước cất coumarin đóng vịng tan nước làm dung dịch đục (ống 1), mở vòng môi trường kiềm tạo muối tan nước nên dung dịch (ống 2), đóng vịng mơi trường acid coumarin tan cồn, nên cần thêm nước cất để chứng minh acid hóa, coumarin đóng vịng tan nước (ống 3) - Sự tăng huỳnh quang môi trường kiềm tác dụng tia UV: 2ml dịch chiết 0.5ml NaOH 10% Đun cách thủy Dịch chiết mở vòng Nhỏ vài giọt lên tờ giấy, sấy khô Lặp lại lần, sấy khơ hồn tồn Che nửa miếng kim loại, soi UV 365nm, lấy miếng kim loại ra, chiếu UV tiếp Nửa không che phát quang sáng nửa bị che Sau vài phút hai nửa phát quang Trang Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm - Thử nghiệm vi thăng hoa: Bột dược liệu ba dót Đun cách cát, đảo đến khơng cịn nước bốc lên Đậy phiến kinh lên, phiến có bơng ẩm để làm lạnh Coumarin thăng hoa, bám vào mặt soi kinh hiển vi 10X có tinh thể khơng màu NaOH 5% Bơng gịn có màu vàng (dương tính) Kết khơng rõ đun lâu, đảo chưa kĩ gây cháy dược liệu Lưu ý: dược liệu phải nằm lớp cách cát nhiệt độ nồi cách cát 140-180˚C,không để nhiệt độ cao hay thấp, đảo tránh gây cháy dược liệu, đến khơng cịn nước bốc lên, khơng đuổi nước lâu gây tinh thể, thay miếng lạnh kiểm tra thường xuyên - Phản ứng với diazonium: 2ml dịch chiết Trang Dịch chiết mở vòng Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm 0.5ml NaOH 5% Đun cách thủy, để nguội Thêm từ từ diazonium đến xuất màu đỏ cam Màu đỏ Lưu ý: phản ứng xảy pH kiềm yếu, cần kiểm tra pH dịch lọc Không cho nhiều thuốc thử, làm pH acid phản ứng không xảy Cho từ từ thuốc thử, cho nhanh làm màu đỏ cam Kết luận: Dược liệu Ba dót có coumarin III ANTHRANOID Phương pháp tiến hành 1.1 Chiết xuất: - Nguyên liệu: g dược liệu đại hoàng (Rhizoma Rhei) thân rễ đại hoàng (Rheum palmatum L., Polygonaceae) - Sơ đồ chiết xuất dịch chiết đại hồng để định tính dạng aglycon: 1g dược liệu đại hoàng DCM Lắc kỹ, gạn, lọc Dịch chiết đại hoàng - Sơ đồ chiết xuất dịch chiết đại hồng để định tính dạng glycosid: 1g dược liệu dại hồng 50 ml nước sơi Lắc kỹ, để nguội, lọc Dịch chiết đại hồng 1.2 Định tính kết luận: Trang Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm - Định tính anthranoid dạng tự do: 2ml dịch chiết DCM 2ml NaOH 10% Lắc kỹ Dương tính (lớp kiềm màu đỏ) Lưu ý: cần lắc kỹ để dịch chiết chia lớp: lớp kiềm màu đỏ lớp DCM khơng màu - Định tính anthranoid dạng tự do: Dịch chiết đại hoàng 2ml dd acid sulfuric 25% Đun cách thủy 95˚C 10 phút Làm nguội Dịch thủy phân 10ml DCM Gạn lớp DCM 2ml dịch chiết DCM 2ml NaOH 10% Dương tính (lớp kiềm màu đỏ) Lưu ý: lớp DCM có nhũ, dùng đũa phá nhũ trước gạn lớp DCM Bịt đầu ống nghiệm, lắc dọc, mạnh để dịch chiết tách lớp: lớp NaOH màu đỏ, lớp duới DCM không màu - Định tính acid chrysophanic: Dịch chiết DCM 20ml NH4OH 10%, chiết nhiều lần đến lớp amoniac có màu hồng nhạt (loại dịch amoniac sau lầnTrang chiết)9 5ml (NaOH 10%, lắc kỹ Lớp NaOH có màu hồng Dịch DCM cịndương lại tính) Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Lưu ý: thực thêm NH4OH tủ hood chiết NH4OH nhiều lần lần đến lớp amoniac có màu hồng nhạt (loại dịch amoniac sau lần chiết) trình lắc phân bố dùng đũa phá nhũ Nếu lớp DCM bị hao hụt thêm DCM So sánh DCM+NaOH lớp NaOH phải đậm màu chiết với NH4OH, lượng NaOH thêm vào phải gần với thể tích dịch DCM -Thử nghiệm vi thăng hoa: Bột dược liệu đại hoàng Nung nồi cách cát 140-180˚C, đảo đến khơng cịn nước bốc lên Đậy phiến kinh lên, phiến có bơng ẩm để làm lạnh Anthraquinon thăng hoa, bám vào mặt dướilàm phiến có màu vàng soi kinh hiển vi 10X có tinh thể hình kim màu vàng NaOH 10% Bơng gịn có màu hồng (dương tính) Trang 10 Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Lưu ý: dược liệu phải nằm lớp cách cát nhiệt độ nồi cách cát 140-180˚C,không để nhiệt độ cao hay thấp, đảo tránh gây cháy dược liệu, đến khơng cịn nước bốc lên, không đuổi nước lâu gây tinh thể, thay miếng lạnh kiểm tra thường xun Kết luận: Dược liệu Đại hồng có anthranoid dạng tự do, dạng kết hợp, có chứa acid chrysophanic IV TANNIN Định tính 1.1 Phương pháp tiến hành 1.1.1 Chiết xuất: - Nguyên liệu: 1g bột dược liệu bàng (Folium Terminaliae catappae) bàng (Terminalia catappa L., Combretaceae) - Sơ đồ chiết xuất: 1g dược liệu bàng 30ml nước sôi Đun cách thủy 10 phút Lọc nóng Dịch chiết bàng 1.2 Định tính: - Phản ứng với dung dịch protein: 2ml dịch chiết Vài giọt gelatin muối Lắc nhẹ Tủa trắng đục - Phản ứng với muối kim loại nặng 2ml dịch chiết Đồng acetat 1% Trang 11 Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Chì acetat 1% FeCl3 1% Xanh đen Cam, tủa, đục Nâu, đục mờ, tủa Kết luận: Dược liệu bàng có tannin Định lượng 2.1 Phương pháp tiến hành Nguyên liệu: Dược liệu trà (Vẽ sơ đồ tóm tắt cách thực hiện) g dược liệu X …………… …………… Sơ đồ x Sơ đồ tóm tắt bước tiến hành định lượng tannin dược liệu X 2.2 Kết định lượng Trang 12 Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Hình: chưa loại tannin + Folin-ciocalteu (FC) DC loại tannin casein + FC Dịch chiết + FC DC loại tannin casein + FC Abs (760 nm) - Kết quả: Đưa CT tính giá trị cụ thể công thức - Nhận xét: Các ý tiến hành bước định lượng  Kết luận: Dược liệu X có hàm lượng tannin Y% Trang 13 ... tính 1. 1 Phương pháp tiến hành 1. 1 .1 Chiết xuất: - Nguyên liệu: 1g bột dược liệu bàng (Folium Terminaliae catappae) bàng (Terminalia catappa L., Combretaceae) - Sơ đồ chiết xuất: 1g dược liệu. .. acetat 1% Trang 11 Họ tên sinh viên: ĐẶNG HUỲNH MINH THƯ Nhóm: Tiểu nhóm: 15 Buổi thực tập: chiều thứ năm Chì acetat 1% FeCl3 1% Xanh đen Cam, tủa, đục Nâu, đục mờ, tủa Kết luận: Dược liệu bàng... Định lượng 2 .1 Phương pháp tiến hành Nguyên liệu: Dược liệu trà (Vẽ sơ đồ tóm tắt cách thực hiện) g dược liệu X …………… …………… Sơ đồ x Sơ đồ tóm tắt bước tiến hành định lượng tannin dược liệu X 2.2